鲨肝细胞再生刺激因子的分离纯化和特性

目的　从鲨鱼肝脏中分离纯化肝细胞再生刺激因子 ,并研究其分子特点和活性。方法和结果　健康鲨鱼肝脏经匀浆、冻融、热提、离心和超滤 ,在分子量小于 3万的组分中检出肝细胞再生刺激因子 (HRSF)的活性。此样品经DEAE Sepharosefastflow柱层析 ,FPLCResource 30Q、ResourceQ及MonoQ色谱 ,得到鲨肝细胞再生刺激因子 (sHRSF)纯品。SDS PAGE测定sHRSF的分子量为 14 6 0 0Da ,紫外扫描显示其特征吸收峰为 2 76nm ,等电点约为 5 1,含有 18种氨基酸 ,N端氨基酸序列为LVGPIGAVGPAGKDG。具有显著刺激肝再生生物活性。结论　获得了一种未知的新的活性蛋白 ,即鲨肝细胞再生刺激因子(sHRSF)     

鲨鱼肝刺激物质的分离纯化及其理化性质(英文)

从鲨鱼肝中分离纯化了鲨鱼肝刺激物质(sHSS),并对其理化性质进行了研究。纯化过程包括匀浆、离心、超滤、DEAE-sephadex A25 层析、FPLC mono Q 层析。经此过程, sHSS 活性可提高到9000IU/mg,纯化倍数可达750倍。经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和高效凝胶过滤检测分别只出现一条带和一个洗脱峰。用质谱法测其分子量为16973Da。用PE-ABD491A蛋白质N-末端测序仪测定其N-末端氨基酸排列顺序是N-Met-Arg-Thr-Gln-Glu-His-Thr- Lys-Ser-Val。sHSS具有热稳定性和耐酸碱性。     

Purification and Physicochemical Characteristics of Shark HepaticStimulator Substance

A hepatic stimulator substance from Shark liver (sHSS) was purified and characterized. Thepurification procedure included homogenization, centrifugation, ultrafiltration, DEAE-sephadex A25 chromatographyand FPLC mono Q chromatography. By the procedure, the stimulatory specific activity of sHSS could be increased to9000IU/mg, and was 750 times more than the crude extract. The purity of the final purified fraction FTo whichretained the maximal activity of sHSS was checked by polyacrylamide gel electrophoresis in the presence of sodiumdodecyl sulfate (SDS-PAGE) and High Performance Gel Filtration respectively, and showed only one band or onepeak. Its molecular weight was measured to be 16973Da by mass spectrometry. Its N-terminal sequence wasdetermined to be N-Met-Arg-Thr-Gln-Glu-His-Thr-Lys-Ser-Val by PE-ABD 491A Protein N-Terminal SequencingMeter. It was stable over a wide range of pH and temperature.     

鲨鱼肝再生因子对肝细胞再生的作用

通过给切除部分肝脏大鼠注射鲨鱼肝再生因子，观察其对肝脏细胞再生的促进作用，为临床用药提供依据。按Higgins和Anderson方法对大鼠行肝切除术，分别尾静脉注射鲨鱼肝再生因子（SHRF）12，6，3mg／kg，促肝细胞生长素（HGF6mg／kg），生理盐水（0．3ml／100g）术后10d取肝脏称重及记录。并对各时相点大鼠取血和肝细胞培养。比较各组大鼠血清甲胎蛋白（AFP）和肝细胞中一氧化氮（NO）含量的变化。结果给药组与模型组肝脏重量比较有极显著差异，给药组和阳性药组血清中AFP及肝细胞中N0含量与模型组相比均呈升高趋势，因此SHRF在短期内对大鼠肝脏部分切除术后再生有明显的促进作用。     

一种鲨肝再生因子类似物的克隆表达及纯化

获得可溶性表达的鲨肝再生因子类似物，初步研究性质与活性。构建含有鲨肝再生因子类似物片段的原核表达载体pET32a-S；转化BL21，IPTG诱导表达融合蛋白，表达产物经过分离纯化-FXa酶切-分离纯化，得到鲨肝再生因子类似物；利用MTT比色法研究该重组产物对肝癌细胞株SMMC-7721的增殖活性。结果 原核表达的融合蛋白在大肠杆菌中以可溶的形式存在，表达量为40％，分子质量为30ku，去除融合子后的鲨肝再生因子类似物分子质量为12ku，PI=4．7。活性研究显示在6．25-50μg／ml浓度范围内，类似物与天然产物均有相似的刺激SMMC-7721细胞株增殖的活性，但是在高浓度下却表现出了抑制活性。     

注射用鲨鱼肝再生因子对小鼠免疫性肝损伤的影响

观察鲨鱼肝再生因子 (sHRF)对小鼠免疫性肝损伤的影响。小鼠注射BCG后再注射低剂量LPS ,造成免疫性肝损伤模型。测定血清中ALT、AST、NO的含量及对肝组织进行病理组织学检查。sHRF能显著降低BCG和LPS诱导的免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST和NO含量的升高 (P <0 .0 5 ) ;并减轻对肝脏细胞的病理性损伤。实验表明sHRF对小鼠免疫性肝损伤有保护作用。     

促肝细胞生长素肠溶胶囊与其注射剂对大鼠肝切除后肝再生影响的对照实验研究

目的通过应用不同剂量的促肝细胞生长素(HGF)肠溶胶囊剂与注射剂,来判断两种给药方式和不同剂量对肝再生的影响。方法本试验采用雄性SD大鼠144只,随机分为4组,分别于肝部分切除术后12,24,48,72,120,168 h麻醉后,腹主动脉取血提取血清测量ALT、AST、ALB和TB IL,完整取出大鼠肝脏并称量残肝重量,并计算肝再生率(HRR),切取新鲜肝组织应用流式细胞分析技术测量细胞周期,其余组织以10%中性福尔马林固定后行HE染色观察标本大体形态,并行免疫组化观察增殖细胞核抗原(PCNA)。结果当静脉组和口服组应用相同剂量的HGF时,口服组与静脉组的促进肝再生效果相似。当口服应用HGF剂量是静脉剂量的3倍时,口服应用HGF促进肝再生效果优于静脉应用,尤其以术后24 h更明显。用药途径同为口服时,3倍剂量组的促进肝再生效果优于1倍剂量组,其中以术后24 h和48 h最明显。结论HGF肠溶胶囊避免了胃酸对本品的破坏,综合疗效优于静脉注射HGF。     

注射用鲨鱼肝再生因子对小鼠急性化学性肝损伤的影响

观察鲨鱼肝再生因子(sHRF)对小鼠急性化学性肝损伤的影响。采用化学药物引起小鼠急性肝损伤，测定血清中ALT、AST的含量以及对肝组织进行病理组织学检查。sHRF能显著降低四氯化碳、硫代乙酰胺及D-半乳糖胺所致的急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST含量的升高；减轻对肝脏细胞的病理性损伤。实验表明sHRF对小鼠急性化学性肝损伤有保护作用。     

Contribution of Parenchymal and Non-Parenchymal Liver Cells to the Clearance of Hepatocyte Growth Factor From the Circulation in Rats

Purpose. The distribution of ¹²⁵I-hepatocyte growth factor (HGF) to either liver parenchymal cells (PC) or non-parenchymal cells (NPC) was investigated in rats. Methods. After injection of a trace amount of ¹²⁵I-HGF, the distribution of radioactivity determined by microautoradiography closely resembled that of ¹²⁵I-epidermal growth factor which distributes mainly to PC. Results. The uptake clearance of ¹²⁵I-HGF estimated by determining the radioactivity of isolated liver cells was three times higher for PC than for NPC. This suggests that HGF distributes mainly to PC at relatively low doses. On the other hand, the uptake clearance by PC fell on coadministering an excess (80 µg/kg) of unlabeled HGF, while no change was observed for NPC, indicating that a saturable process for the hepatic handling of HGF exists only in PC where the HGF receptor is expressed. Conclusions. At such a dose the uptake clearance was comparable for both PC and NPC showing that HGF distributes to both cell types although NPC have few HGF receptors. Since the distribution to NPC was relatively non-specific and heparin-sensitive, it may be that heparin-like substances, which are believed to exist on PC and/ or the extracellular matrix, also exist on NPC.     

大鼠再生肝中肝细胞生长因子的纯化和生物活性的研究

用大鼠的再生肝经过匀浆、加热、高速离心和酒精沉淀获得粗制的肝细胞生长因子（RHGF－1），可检测出肝细胞生长因子的活性。RHGF－1再经DEAE离子交换层析，Sephacryls-300凝胶柱层析及FPLCMonoQ色谱，纯化为单体（RHGF－4），经SDS－PAGE证实为单一成份，分子量为18KD。此纯化的RHGF－4相对活性比RHGF－1提高884倍。     

促肝细胞生长素对CCl4肝损伤小鼠的保护作用和机制研究

目的 研究促肝细胞生长素（PHGF）对CCl4肝损伤小鼠的保护作用和机制,为其临床应用提供理论依据。方法 小鼠灌胃CCl4的植物油溶液80 mg·kg^-1建立肝损伤模型,连续尾静脉注射3个剂量的PHGF（12.5,25,50 mg·kg^-1）7 d后,取血清测定各组小鼠ALT和AST,T-SOD和MDA的值;取肝脏进行病理组织学检查;用Western blot法检测肝组织中Bcl-2与Bax蛋白的表达。结果 PHGF各给药组ALT与AST的值要明显低于模型组（P〈0.05）,T-SOD和MDA值与肝损伤模型组比较差异不具有统计学意义;病理切片观察显示,各给药组的肝组织细胞坏死情况明显好于模型组;Western blot结果表明,PHGF各给药组的Bcl-2与Bax表达量的比值均明显高于模型组（P〈0.01）,且具有一定的剂量依赖性。结论 PHGF对CCl4所致的小鼠肝损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与抗氧化作用无关,与其上调Bcl-2蛋白的表达并下调Bax蛋白的表达有关。     

肝细胞生长因子对周围神经再生的作用研究

目的：研究肝细胞生长因子（HGF）对周围神经再生的影响。方法：查阅有关献，综述HGF的结构以及在周围神经系统发育、损伤修复中的作用，并提出临床应用中的问题。结果：HGF在周围神经系统再生方面有一定的作用，但其作用机制、给药方式及途径有待进一步研究。结论：随着医学研究的进步，会增加HGF用于周围神经再生的临床治疗可能性。     

条纹斑竹鲨鱼DNA结合抑制因子cDNA的克隆、序列特征及其在肝再生过程中的表达分析

DNA结合抑制因子(Inhibitor of DNA binding,Id)又称分化抑制因子(Inhibitors of Differentiation,Id),属于负调控因子HLH家族的成员,其功能是与DNA结合并抑制细胞的分化和促进细胞的增殖。为揭示Id蛋白在鲨鱼肝脏再生过程中的作用,作者从前期构建的条纹斑竹鲨鱼肝脏cDNA文库中克隆到编码Id蛋白的cDNA全序列并预测了其编码产物(CpId)的结构,探讨了该基因在鲨鱼体内的时空表达方式,结果表明:CpId cDNA全长为1 074 bp,编码一个由135个氨基酸残基组成的无跨膜区的胞内蛋白,理论分子质量(Mr)为14 857.2,理论等电点(pI)为5.35。CpId蛋白序列与其他生物来源的Id蛋白的同源性介于42%～62%之间,其N端第31～87 aa组成一个相对保守的Myc型helix-loop-helix结构域。CpId基因在鲨鱼各种组织中均有表达,但以在肝脏、脑和生殖腺中的表达最高;肝部分切除后,CpId基因的表达迅速上调,在切除1 h后到达最高值(为正常肝组织的18倍左右),其后逐渐下降,并在24 h时恢复至正常肝组织中的水平;CpId基因的表达在肝部分切除后的第48 h出现第2个相对较高的表达峰。上述结果表明CpId基因参与了肝脏再生调控的过程,其作用可能与促进肝细胞的增殖再生过程有关。     

肝细胞生长因子在急性大鼠肺栓塞中的表达

目的:研究大鼠急性肺栓塞时肝细胞生长因子(HGF)的表达情况,评价HGF在急性肺栓塞中的诊断价值,并探讨其机制.方法:采用自体血栓回输法制作急性大鼠肺栓塞动物模型,分别设血浆实验组、组织实验组及其相应对照组,观察急性肺栓塞不同时间点血浆HGF水平和造模后12 h组织HGF mRNA的表达.结果:血浆实验组在不同时间点1、7、12和24 h HGF(μg/L)的表达(1.47±0.32、2.16±0.06、2.84±1.25和2.03±0.80)明显高于对照组的0.35± 0.07、0.38±0.09和0.37±0.07,差异有统计学意义(t分别为9.687 6,8.328 9,5.546 5和5.875 3,P ＜ 0.01),组织实验组在肺栓塞12 h时为(3.42±0.56)×10~(-2),与对照组(1.32±0.34)×10~(-2)相比,HGF mRNA表达差异有统计学意义(t ＝ 3.731 7, P ＜ 0.01).结论:HGF在急性肺栓塞时表达升高,可以作为诊断急性肺栓塞的一项指标.     

Characterization of the Enhancing Effect of Protamine on the Proliferative Activity of Hepatocyte Growth Factor in Rat Hepatocytes

Purpose  The aim of the present study was to characterize the mechanism of the stimulatory effect of protamine on HGF activity. Methods  The enhancing effects of protamine on the proliferative activity of HGF were investigated in vivo, in primary cultured rat hepatocytes, and in perfused rat liver. Results  In α-naphthylisothiocyanate-intoxicated rats, pretreatment with protamine increased HGF-induced autophosphorylation of the HGF receptor in liver. The maximum enhancing effect of protamine on HGF-induced DNA synthesis of hepatocytes required a 10 min-pretreatment period both in vivo and in vitro, and the stimulatory effect of protamine was not observed when it was administered simultaneously with HGF. Preperfusion of the liver with protamine for 10 min decreased the non-saturable portion of hepatic clearance for ¹²⁵I-HGF, which is mainly mediated by cell-surface heparan-sulfate proteoglycan (HSPG). Inhibition of HGF binding to heparin by protamine was confirmed using heparin-coated sepharose. This inhibition also required 10 min of pretreatment, for protamine to bind heparin. Conclusion  The enhancing effect of protamine on the mitogenic activity of HGF on hepatocytes requires pretreatment with protamine for a short period presumably required for its binding to cell-surface heparin, implying possible regulation of c-met autophosphorylation by HSPG.     

还原型谷胱甘肽联合促肝细胞生长素治疗慢性重型肝炎的疗效研究

目的 探讨还原型谷胱甘肽联合促肝细胞生长素治疗慢性重型肝炎的疗效.方法 选择简阳市人民医院2010年1月-2012年1月间收治的100例慢性重型肝炎患者为研究对象,随机将其分为对照组和观察组,两组患者均接受综合性治疗,观察组在此基础上接受还原型谷胱甘肽联合促肝细胞生长素治疗,对比分析两组患者临床疗效.结果 观察组患者临床治疗后PT、TBiL、AST和ALT生化指标均低于对照组,观察组患者临床治疗后的总有效率（74%）高于对照组（54%）,且差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 慢性重型肝炎患者在常规临床治疗措施的基础上配伍还原型谷胱甘肽联合促肝细胞生长素治疗,有助于患者临床治疗效果的改善,值得临床应用与推广.     

复方甘草酸苷(美能)联合促肝细胞生长素治疗重型肝炎

目的 :观察复方甘草酸苷联合促肝细胞生长素治疗重型肝炎的疗效。方法 :126例重型肝炎患者随机分为治疗组和对照组 ,比较两组的临床疗效。结果 :有效率治疗组为87 2 % ,对照组为70 0 % (P<0 05) ;治疗组经治疗后 ,肝功能明显改善 (P<0 05) ,且改善幅度明显高于对照组 (P<0 05) ;早期应用复方甘草酸苷及促肝细胞生长素可提高有效率。结论 :复方甘草酸苷联合促肝细胞生长素治疗重型肝炎效果显著     

胎牛肝再生因子(HPF)的研制

本文对胎牛肝细胞再生因子(HPF)的制备及其某些理化性质进行了探讨.HPF的制备参照Labreque DR等人的方法加以改进.采用反复加热、酸碱沉淀除去大分子蛋白而获得.工艺简单易行,提取率高.本法制备的胎牛HPF含有27种游离氨基酸,其生物活性测定结果表明可使~3H-胸腺嘧啶掺入升高3～18倍,且无剂量效应关系.低浓度时刺激活性增强,高浓度时则抑制细胞生长.采用肝癌细胞检测~3H-胸腺嘧啶放射性dpm,结果与对照组相同,表明该HPF不刺激肝癌细胞生长.目前尚未见文献报道.     

鲨鱼肝再生因子(SHRF)半抗原偶联与多抗制备

探讨鲨鱼肝细胞再生因子(Shark Hepatic Regenerative Factor,SHRF)完全抗原的偶联方法和兔抗体的制备。分别考察了戊二醛(GA)一步法,戊二醛二步法和1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳化二亚胺(EDC)法3 种偶联方法对SHRF与BSA的偶联效果,并将制备的完全抗原免疫新西兰白兔。实验表明碳化二亚胺法具有反应条件温和,偶联效率高等优点,并得到了高效价的兔抗体,为SHRF的ELISA方法的建立奠定了基础。     

尖吻蝮蛇毒中一种新抗凝血因子的纯化及特性研究

应用阴离子交换色谱和凝胶过滤色谱,从尖吻蝮蛇毒中分离出一个新的抗凝血因子.经Superdex 75 HR 10/30预装柱检测,纯度达99.9%.SDS-PAGE检测为单一条带,相对分子量52.2k.该因子有显著的抗凝血活性,延长白陶土部分激血活酶时间的临界浓度为0.2mg/ml,无纤溶活性、磷脂酶A2活性和出血活性.