用单克隆抗体作为放射性药物供人类异种移植物结肠癌的定位:一种新的螯合物配体与其它有效方法在用~(111)In标记B_(72·3)IgG中的比较

为了追踪世界上的新技术,了解当前单克隆抗体杂交瘤研究的新动态,兹由第四军医大学微生物学和免疫学研究生同志们将第五届杂交瘤研究年会(1986年1月26～29日Baltimore,Maryland,U.S.A)文摘(Hybridoma,1986,5(1):53)全部翻译出来,共计68篇,以飧读者。     

小鼠杂交瘤在一种低蛋白培养基中长期产生抗体

为了追踪世界上的新技术,了解当前单克隆抗体杂交瘤研究的新动态,兹由第四军医大学微生物学和免疫学研究生同志们将第五届杂交瘤研究年会(1986年1月26～29日 Baltimore,Maryland,U.S.A)文摘(Hybridoma,1986,5(1):53)全部翻译出来,共计68篇,以飧读者。     

人博卡病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备

目的 表达纯化人博卡病毒( human Bocavirus,HBoV) VP2蛋白,采用杂交瘤方法制备抗HBoV VP2蛋白的单克隆抗体.方法 应用原核表达载体pET-30a和大肠埃希菌表达VP2蛋白,并用固定化金属亲和层析,纯化后的蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术和间接ELASA方法筛选阳性的杂交瘤细胞,并对单克隆抗体进行分型检测和滴度测定.结果 表达并纯化获得了重组HBoV VP2蛋白,利用杂交瘤技术得到单克隆IgG抗体,抗体效价达到1∶4×105.结论 利用HBoV VP2蛋白免疫制备了单克隆抗体,并具有较高的效价.本研究为快速诊断和研究HBoV打下基础.     

用一种新而快速固相放射免疫法检测小鼠的Ig类和亚类的单克隆抗体

用常规平板法分析杂交瘤上清液既浪费时间,又需要大量的材料,而且在使用原始上清液前还需要浓缩.K?ohler(1980年)的夹心法要求待测定的杂交瘤上清液必须浓缩,相关的抗原一定是有效力的,并且能粘着于聚合物的表面,其他方法也很浪费时间.本文所介绍的固相放射免疫试验,在不浓缩、不纯化的杂交瘤上清液中能检测出免疫球蛋白的类和亚类,而且不用抗原.本法是一种免疫夹心法,其要点是:(1)用免疫蛋白类或亚类特异性抗血清IgG包被微量板孔聚合物表面,(2)加不纯化、不浓缩的杂交瘤上清液,(3)再加~(125)Ⅰ标记的兔抗小鼠IgG的抗体,(4)最后计数cpm.     

人—人杂交瘤免疫球蛋白分泌稳定性的研究

对三株人—人杂交瘤细胞株的免疫球蛋白分泌稳定性作了研究。研究中注意到用有限稀释法多次克隆的杂交瘤细胞(C_(10),13H_2)与未经克隆的细胞株(F_3)在体外培养和扩增中,其细胞形态大小,染色体数和抗体分泌能力有不同程度的变化。研究证实杂交瘤球蛋白分泌稳定性与染色体丢失或不分泌群体的过度生长有关。我们用HAT筛选培养液进行再处理,注意到C_(10)这一株细胞的四倍体细胞数明显增加,抗体分泌量也有所增加。结果提示对杂交瘤细胞及早克隆,或适时用HAT进行重筛选,对稳定分泌群体可能有一定的效果。     

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备抗人绒毛膜促性腺激素(HCG)的单克隆抗体(mAb).方法:利用从人工流产刮宫物中提取的HCG免疫BALB/c小鼠, 取其脾细胞同NS-1小鼠骨髓瘤细胞融合, 采用有限稀释法筛选杂交瘤细胞株, 并对mAb的亚型、亲和力及特异性进行鉴定.结果:共获得26株能稳定分泌抗HCG特异性mAb的杂交瘤细胞株.mAb的亚类均为IgG1, 亲和力介于1.14×108～2.0×108 mol/L之间, 其中4株mAb与HCG的β亚基有较强的反应, 而与黄体激素(LH)、促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)均无交叉反应.结论:成功获得4株鼠抗人HCG mAb的杂交瘤细胞株, 其分泌的mAb能特异识别人HCG的β亚基, 可用于早孕、肿瘤等诊断的进一步研究.     

杂交瘤的制备

二次杂交瘤(hybrid-bybridoma)是由两种细胞融合而成的瘤细胞,可分泌双功能单克隆抗体(bsMcAb)。制备二次杂交瘤的方法主要有两种,一种是杂交瘤细胞与特异抗原免疫的脾细胞融合,另一种是可分泌单克隆抗体的两种杂交瘤细胞融合。本文就目前为止所采用的各种制备二次杂交瘤的方法做一综合性介绍。     

酶免疫和放射免疫技术在检测单克隆抗体中的应用

随着淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术的迅速发展和应用,越来越需要有微量、快速、简易、敏感、特异并适于大规模筛选检测单克隆抗体(单抗)的技术方法.放射免疫测定法(RIA)和酶免疫测定法(EIA)是目前免疫学中符合上述要求的两种技术.本文就这两种技术在单抗筛选检测方面的应用加以综述,并讨论其优缺点.一、应用(一)RIA淋巴细胞杂交瘤问世不久,Gerhard等就将碘标记(Fab)RIA用于定量分析产生抗流感病毒单抗的杂交瘤上清液,并结     

国外有关克隆抗体期刊介绍

1.《单克隆抗体新闻》(Monoclonal Antibody Neias 631B69)1982年创刊,美国Mary Ann Lielert公司出版。简要报道新杂交瘤细胞株及其产物和特性方面的资料。 2.《杂交瘤》(Hybridonma 631B89)美国Mary Ann Liebert公司出版。刊登有     

用无血清培基培养杂交瘤细胞的初步报告

在杂交瘤细胞的研究中,培养基中的血清常会干扰单克隆抗体(McAb)的测定,由于血清所含成份复杂,动物个体差异较大,故使用前还须进行严格的筛选。血清还经常是污染的来源。为避免这些缺点,很多学者致力于研究用无血清培养基(serum free medium SFM)取代含血清的完全培养基(complete medium CM)进行细胞特别是杂交瘤细胞的培养。     

截短型鸭乙型肝炎病毒核心蛋白单克隆抗体的制备及初步应用

目的: 制备能与鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg)特异性结合的单克隆抗体(mAb),使之能特异性地对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)进行检测.方法: 以原核表达的截短型鸭乙型肝炎病毒核心抗原(DHBcAg1-214)免疫BALB/c小鼠后常规杂交瘤技术进行细胞融合,有限稀释法克隆化,间接酶联免疫吸附试验( ELISA)和免疫组织化学( IHC)筛选、鉴定.结果: 筛选出3株(3H4、 4A11、 5A12)能有效分泌抗鸭乙肝病毒核心抗原的杂交瘤细胞株.该mAb可用于ELISA、 IHC和Western blot研究.结论: 获得了3株有效分泌抗核心抗原的mAb,可用于鸭乙肝病毒相关肝病组织与血清的检测.     

抗KDR胞内区(KDR-CD)单克隆抗体的制备和鉴定

目的:研制特异性针对肿瘤新生血管内皮细胞生长因子受体(或含激酶插入区受体)胞内区(KDR-CD)的特异性单克隆抗体(mAb).方法:以谷胱甘肽转硫酶耦联的KDR-CD(GST-KDR-CD)可溶性融合蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备分泌抗KDR-CD mAb的杂交瘤细胞;用间接ELISA法测定其亲和力、亚类,Western blot检测其特异性.结果:获得1株稳定分泌抗KDR-CD mAb的杂交瘤细胞株,命名为2B8H2A5;它分泌的抗体亚类为IgG1,к型轻链,而且亲和力强、特异性高.结论:成功获得能分泌抗KDR-CD mAb杂交瘤细胞,为以后将该mAb改造成小分子酪氨酸激酶抑制剂,使其能进入细胞内与受体KDR-CD特异性结合并阻断血管内皮细胞生长因子强大的生物学功能奠定了重要的基础.     

用杂交瘤技术生产小鸡单克隆抗体的一种新细胞系

从小鸡获取的免疫球蛋白G(IgG)具有一定的共同特性,有利于免疫化学研究和临床应用,但由于生产这种单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系尚未建立,因此未能广泛应用。作者曾试图建立适合于生产McAb的小鸡B细胞系。但以往所选B细胞融合的杂交瘤细胞系在培养过程中很快便丧失分泌抗体的活性。本文报道一种新的杂交克隆(R27H4)可融合成稳定的杂交瘤细胞系,培养数月仍能持续分泌IgG抗体。     

抗体基因工程——重组抗体

七十年代中杂交瘤单克隆抗体问世以来,在医学和生物学的研究及临床应用中,单克隆抗体己越来越显示它的重要性。但是,目前能应用的单克隆抗体(McAb)大多是鼠-鼠杂交瘤,抗体是属鼠的免疫球蛋白(Ig),在进入人体后能激发抗异种蛋白的反应。为此,人们试着获得人型免疫球蛋白(Ig)的McAb。目前除了人-人杂交瘤外,用抗体基因工程方     

森林脑炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及实验研究

应用淋巴细胞杂交瘤技术制备高纯度抗体国内外已有不少报道、在病毒学方面的应用更为普遍。但是,有关森林脑炎病毒(简称TBEV)的的单克隆抗体目前国内尚未见有报道,国外仅见M.Novak(1982)建立了一株分泌IgM的S—16杂交瘤细胞系。本文建立了一株稳定分泌抗TBEV杂交瘤细胞系。经辣根过氧化物酶和异硫氰酸荧光素标记初步证实可供TBEV的实验诊断,经小鼠实验性治疗证实有一定效果。     

放射免疫显像

为了追踪世界上的新技术,了解当前单克隆抗体杂交瘤研究的新动态,兹由第四军医大学84年级试点班学员利用课余时间,将杂交瘤研究年会部分论文报告(Hybridoma,1987)翻译出来,并经微生物学教研室同志们审校,以飨读者。     

传统的ELISA方法不宜于用来筛选杂交瘤培养上清液中的小鼠单克隆抗体

最常用来筛选分泌特异性McAb杂交瘤的方法是将抗原固定在塑料板表面,加入杂交瘤培养上清与之反应,而后用标记同位素或标记酶(ELISA)的抗小鼠Ig来检测与固相抗原结合的McAbs.作者用此种ELISA方法筛选,制备了抗人肌酸激酶(CK)和抗人乳酸脱氢酶(LDH)的McAbs.当用液相RIA(~(125)I标记抗原与待测McAbs共育,用偶联有羊     

鼠源性JEV-McAh用于快速诊断及免疫治疗的实验研究

本文综合报道了本室近年来在鼠源性JEV-McAb用于快速诊断及免疫治疗方面的研究结果。(1)应用淋巴细胞杂交瘤技术建立了6株稳定分泌JEV-McAb杂交瘤细胞系,并鉴定了它们的生物学和免疫学特性;(2)建立了用单抗快速检出JEV抗原、抗体及免疫复合物的方法;(3)对3株有中和活性     

大鼠抗胃癌杂交瘤株的建立及特性的分析

大鼠杂交瘤技术至少有三大优点:(1)单克隆抗体产量可高于小鼠的10倍;(2)大鼠的免疫反应性与小鼠不同;(3)县有特异有效的、快速、简便易行的抗体纯化方法。所谓小鼠杂交瘤体系的良好补充。本文报道利用大鼠杂交瘤技术制备大鼠抗胃癌单克隆抗体(RAG     

PD-L1 mAb的制备、鉴定及其特性的研究

目的制备抗程序化死亡配体-1(Programmed Death-Ligand 1,PD-L1)的mAb杂交瘤细胞系并对其分泌的抗体特性进行研究。方法用我室纯化的PD-L1／IgG4 Fc融合蛋白免疫Balb／c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0进行融合,经筛选和克隆化后,建立杂交瘤细胞系。以Western-blot等方法研究抗体特性。结果得到3株能够稳定分泌抗体,效价高的杂交瘤细胞系2D10、1C3和1A6,Western-blot显示2D10、1C3和1A6能与PD-L1(Mr为5800)结合。结论得到杂交瘤细胞系稳定分泌的mAb,在抗病毒免疫、抗肿瘤反应和自身免疫性疾病的免疫诊断和／或治疗方面可能有广阔的应用前景。