胃癌单抗MGb2-天花粉蛋白交联物的杀伤机理探讨

天花粉毒蛋白(TCS)作为一种免疫毒素的新型效应分子近年来已用于肿瘤的导向治疗研究,并显露出可喜的苗头。但迄今为止有关TCS免疫毒素的靶细胞杀伤机理研究仍缺乏报道。本研究将TCS交联至胃癌单抗MGb2分子上,制得胃癌特异性免疫TCS(I-TCS),然后以临床胃癌实体瘤细胞为靶细胞,对I-TCS的内化及其所致的靶细胞死亡模式等涉猎I-TCS杀伤机理方面的基本问题进行了探讨,同时观察了ras癌基因的表达与I-TCS杀伤效果之间的关系。     

免疫毒素进入靶细胞的途径及其作用环节

免疫毒素是具有酶活性的毒素与抗靶细胞表面抗原的抗体偶联物,用于破坏靶细胞。免疫毒素与靶细胞表面抗原结合后,发生内化,形成胞内小体,部分免疫毒素在胞内小体被运送到运输高尔基网,发生跨膜易位。进入胞液,灭活胞液中蛋白质合成的某些成分,从而杀伤靶细胞;部分免疫毒素被运送到溶酶体而降解,尚有部分免疫毒素在胞内小体中,经胞吐作用再返回细胞外,两者均可失去作用。本文主要讨论免疫毒素进入胞液的途径及其作用环节,将为免疫毒素的体内应用提供可靠的理论依据。     

天花粉毒蛋白免疫毒素对黑色素瘤细胞的体外抑制

用单链致核糖体失活蛋白天花粉蛋白(TCS)和抗人黑色素瘤单抗(Ng76)构建了免疫毒素(Ng76—TCS),它对体外培养的人黑色素瘤细胞M21具有强烈的抑制活性,IC_(50)为5.6×10~(-10)mol/L,其毒性比游离的TCS 和Ng76的混合物高2000倍,比TCS 与正常小鼠免疫球蛋白的复合物(NIgG—TCS)高160倍,而它对非靶细胞HeLa 的IC_(50)为7.0×10~(-?)mol/L,毒性较靶细胞低125倍。结果表明,免疫毒素TCS—Ng76对体外培养的黑色素瘤细胞有很强的选择性杀伤作用.     

天花粉蛋白对HepA-H细胞和HeLa细胞抑癌活性研究

目的：比较分析商品天花粉蛋白(TCS1) 和从鲜药材中提取分离出的天花粉蛋白粗品（TCS2），对HepA-H细胞（腹水型肝癌高转移株细胞）和HeLa细胞（人宫颈癌肿瘤细胞）的杀伤作用，并进一步探讨其抑癌作用机理。方法： MTT法检测药物的细胞毒作用，电镜观察细胞超微结构改变，电泳检测细胞DNA生物化学特征改变。结果： TCS1和TCS2对HepA-H细胞作用不明显（P>0.05），而对HeLa细胞具有显著性作用，呈明显时效、量效关系（r>0.864, P<0.05或P<0.01）。在相同作用时间内，TCS2作用组对细胞生长抑制率均高于TCS1组（P<0.01）。进一步研究发现，HeLa细胞经TCS2作用后，细胞表面微绒毛消失，胞膜发泡，核染色质浓缩边集，并出现凋亡小体，细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳呈典型的梯形带。结论： HepA-H细胞对天花粉蛋白不敏感，而HeLa细胞对TCS1和TCS2敏感，其中TCS2抑癌活性明显强于TCS1，细胞生长受抑制作用显著，作用机制与诱导细胞凋亡相关。     

多发性骨髓瘤相关染色体和基因研究进展

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)细胞染色体14q32位点IgH基因常发生断裂易位。与14q32IgH基因位点发生高频易位的三个位点，分别为11q13(cyclinD1)、4p16．3(FGFR3 and MM SET)和16q32(c—maf)。6p21(cyclin D3)、ras癌基因、c—mys癌基因、Rb抑癌基因与MM的发生和发展也相关。     

癌基因研究新发现与进展（二）

五.ras族癌基因 ras癌基因已成为ras族癌基因,除Ha-ras,Ki-ras,N-ras,还有酵母的Ras-1,Ras-2。ras样蛋白的特点为具有高度保守性,如人的c-Ha-ras蛋白(p21~(Ha—ras)),小鼠肉瘤病毒的Ha-ras蛋白,和酵母的Ha-ras蛋白的氨基酸顺序有36％相同。 ras癌基因在许多肿瘤中都已被检定,被认为它与信号传导关系密切,因为牵连到磷酸肌醇和鸟苷三磷酸活化蛋白(GAP)的体系,所以ras基因的研究除了解肿瘤的发病机制外,还有可能解决细胞     

Ha-ras基因表达产物P~(21)单克隆抗体的研制

ras基因表达产物单克隆抗体是研究ras癌基因在人体肿瘤发生过程中必需的免疫学探针。本文报道我们从美国国立癌症研究所引进其构建好的P~(21)高表达质粒PJCL-E_(30)和PJCL-E_(33)转入大肠杆菌HB101中,并得到表达;然后分离提取表达产物P~(21)蛋白,用此蛋     

抗胃癌单克隆抗体的吸附内化与液相胞饮之间的关系研究

本文以人胃癌SGC-7901细胞为实验模型,应用胶体金示踪技术,对鼠抗人胃癌单克隆抗体KGb_2的吸附内化与液相胞饮之间的关素进行了探讨。电镜观察发现:(1)液相胞饮的入胞途径有被覆小凹、微胞饮凹陷及大胞饮凹陷3种。抗体的吸附内化入胞途径与之一致;(2)凡是抑制液相胞饮活动的因素均能抑制MGb_2抗体的吸附内化。根据本研究结果及对相关文献材料的分析,本文提出抗肿瘤抗体的吸附内化依赖于膜胞饮功能区这一内化细胞生物学理论的新观点。     

抗胃癌单克隆抗体MG7的内化超微形态学研究

应用胶体金技术,对抗人胃癌单克隆抗体MG7在KATOⅢ人胃癌细胞系中的内化途径、过程进行了超微形态学观察。4℃时MG7与靶细胞只有结合但无内化。在37℃条件下,见细胞表面结合的MG7主要以下述几种方式进入细胞内:(1)吸附微胞饮;(2)被覆小凹;(3)吸附大胞饮;(4)吸附吞噬;(5)直接穿膜。入胞后MG7通过管泡结构送入多泡小体及溶酶体。本研究结果表明,MG7是一具有强内化能力的抗体,可作为免疫导向诊治的载体;另一方面则表明,MG7内化后几乎均被溶酶体降解。提示,如能采取某种人为因素干预MG7的细胞内分布过程,将有可能提高MG7的导向诊治效率。     

多发性骨髓瘤相关染色体和基因研究进展

多发性骨髓瘤 (m ultiple myelom a,MM)细胞染色体 14 q32位点 Ig H基因常发生断裂易位。与 14 q32 Ig H基因位点发生高频易位的三个位点 ,分别为 11q13(cyclin D1 )、4 p16 .3(FGFR3and MM SET)和 16 q32 (c- maf)。6 p2 1(cyclin D3)、ras癌基因、c- m ys癌基因、Rb抑癌基因与 MM的发生和发展也相关     

胃癌单抗-RTA结合物的制备及其细胞毒特性研究

本文报道鼠抗人胃癌单克隆抗体-蓖麻毒素A链结合物的制备及其对肿瘤靶细胞的杀伤作用。抗体与3-(2-吡啶二巯基)丙酸-N-琥珀酰亚胺酯(SPDP)反应引入2-吡啶二硫化物,然后与巯基暴露的A链反应,得到抗体-A链结合物。ELISA结果表明,抗体与毒素A链连接是成功的,结合物中抗体保存较好的与靶细胞结合活性。结合物对靶细胞具有较强的选择性杀伤作用,在1×10~(-9)M水平,对人胃癌细胞KATO Ⅲ蛋白质合成抑制率为71％,而对非靶细胞作用很弱。结果表明,该单抗具有较好毒素A链导向作用。     

应用新型交联技术制备胃癌单抗－丝裂霉素C结合物

建立一种新型交联方法，使抗癌药物丝裂霉素Ｃ通过中介体定量地、选择性地引入胃癌单抗Ｆｃ段。首先制备丝裂霉素Ｃ活性酯，后者与引入了碘乙酰基团葡聚糖胺反应，得到碘乙酰葡聚糖胺－药物。继而用此物与在Ｆｃ段引入了－ＳＨ的胃癌单抗ＭＧｂ２作用将药物引入抗体Ｆｃ段。获得的免疫结合物抗体结合活性保存９０％以上，在体外对肿瘤靶细胞显示较强的选择性杀伤作用。在体内，免疫结合物能显著抑制人胃癌移植瘤的生长，以ＭＧｂ２（Ｆｃ）－Ｓ－葡聚糖胺－丝裂霉素Ｃ为例，在１ｍｇ／ｋｇ剂量水平，对裸小鼠双侧肾包膜下接种人胃癌移植瘤（ＳＧＣ－７９０１）生长抑制率达７５．８５％，明显强于游离丝裂霉素Ｃ，优于既往报道的结果。     

胃癌干细胞抗原负载树突细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞

BACKGROUND:As the existence of tumor stem cells, it is difficult to completely eliminate tumors in clinic. OBJECTIVE:To explore the tumor-killing effect of gastric cancer stem cells as antigen to stimulate dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells. METHODS:Side population cells from human gastric cancer cell lines were isolated, and tumor antigen was prepared by freeze thawing method. After coculture with dendritic cells, dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells, gastric cancer cell antigen, and gastric cancer stem cell antigen, killing rates of gastric cancer cells were detected using MTT assay. Expression rate of CD83, a mature dendritic cell surface marker, was also detected. RESULTS AND CONCLUSION:The CD83 expression level and killing rate of gastric cancer cells were both significantly lower in the gastric cancer stem cell antigen group than the other groups (both P < 0.05). These results indicate that gastric cancer stem cells as antigen to stimulate dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells can promote the proliferation of gastric cancer cells and elevate the ability to killing gastric cancer cells.     

蛋白激酶B在佛波酯诱导人胃癌细胞系凋亡中的作用

目的探讨佛波酯(TPA)诱导胃癌细胞系凋亡过程中蛋白激酶B(PKB)的作用。方法通过BrdU处理,流式细胞术检测以及DAPI染色,荧光显微镜观察分析TPA对胃癌BGC-823细胞的影响;免疫印迹法检测TPA对PKB蛋白表达水平、磷酸化的影响;核浆分离获得核浆蛋白,用于免疫印迹法检测TPA对胃癌细胞内PKB和其Ser 473位点磷酸化的核浆表达影响,以及激光扫描共焦显微镜观察TPA是否改变胃癌细胞内PKB的分布。结果TPA诱导BGC-823细胞凋亡;TPA下调BGC-823细胞内PKB蛋白表达,并且与TPA作用时间和TPA浓度呈正相关,与PP2A降解作用无关;TPA抑制PKB的Ser 473位点磷酸化,而对其Thr 308位点磷酸化没有明显影响;TPA下调细胞核内PKB的表达以及Ser 473位点的磷酸化;TPA并不改变PKB在胃癌细胞内的分布。结论PKB的抑制作用可能参与TPA诱导胃癌细胞凋亡过程;由TPA诱导的胃癌细胞凋亡可能部分是由于细胞核内PKB蛋白表达和Ser 473位点磷酸化下降所致。     

Apoptosis in chronic gastritis and its correlation with antigastric autoantibodies

 In the course of time, chronic gastritis may result in gastric atrophy, as in type A gastritis, where autoimmune reactions against parietal cells result in a loss of corpus glands. Two antigastric autoantibodies have been detected in Helicobacter pylori gastritis and are described as anti-luminal and anti-canalicular autoantibodies. The aim of this study was to determine whether increased apoptosis may be responsible for the loss of gastric epithelium and whether this apoptosis is correlated with antigastric autoimmunity. Gastric biopsies from normal mucosa and Helicobacter pylori gastritis were analysed for the presence of apoptosis using the TUNEL method. Helicobacter pylori gastritis was divided into cases (1) without autoantibodies, (2) with anti-luminal, and (3) with anti-canalicular autoantibodies. Apoptotic cells of the foveolar and of the glandular epithelium in the antrum and corpus were counted. The number of apoptotic cells in the gastric mucosa was significantly increased in all cases of gastritis. The highest number of apoptotic cells was observed in the gastric glands of the corpus mucosa in Helicobacter pylori gastritis with anti-canalicular autoantibodies. Apoptosis contributes to the development of gastric atrophy and there are various types of Helicobacter pylori gastritis. The positive correlation between apoptotic cell loss in the glandular zone of the corpus mucosa and the presence of anti-canalicular autoantibodies indicates a possible link between antigastric autoimmunity and atrophy in this type of Helicobacter pylori gastritis – similar to that in classic type A gastritis. Received: 19 November 1997 / Accepted: 24 March 1998     

Expression of ras oncogene p21 in prostate cancer

The major neoplastic transformation-inducing genes of human solid tumors are members of the ras oncogene family. We used an immunohistochemical assay to assess expression of both the unaltered and the mutated ras oncogene protein (p21) in normal and neoplastic prostatic cells. With the concentration of monoclonal antibody used in this study, epithelial and stromal cells from subjects with normal prostates and from 19 patients with benign prostatic hyperplasia were negative for p21 antigen. This antigen was detected in 2 of 6 prostates with Grade I carcinoma, 4 of 6 with Grade II, and all of 17 with higher grades. A semiquantitative immunohistochemical method demonstrated that expression of the p21 antigen in a carcinoma strongly correlated with nuclear anaplasia and was inversely related to the degree of glandular differentiation. However, markedly anaplastic tumors were often more heterogeneous in expression of p21 and contained areas of low staining for the antigen. Comparison of p21 antigen with tumor carcinoembryonic antigen and prostate-specific antigen demonstrated that ras p21 was the only phenotypic marker that correlated with histologic tumor grade. Thus, ras oncogene p21 may represent a new class of biologically relevant tumor markers and may be a useful adjunct to histopathologic examination in determining the prognosis of patients with prostate cancer.     

蝌蚪提取液对HL—60细胞相关癌基因表达的影响

目的：研究蝌蚪提取液（T871－3）对白血病细胞的作用机制。方法：利用细胞形态学观察,细胞化学、TUNEL法等技术,并采用原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术,观察T871－3诱导HL－60细胞分化和凋亡过程中c-myc,c-myb,bcl-2癌基因表达的变化。结果：1．T871－3能抑制TH－60细胞分裂增殖。2．T871－3在低浓度时诱导HL－60细胞向单核／巨噬样细胞方向分化,高浓度时诱导细胞凋亡。3．T871－3诱导HL－60细胞分化的过程中伴随着c-myc,c-myb癌基因表达的下调,诱导HL－60细胞凋亡的过程伴随着c-myc,bcl-2癌基因的表达的下调,结论：T871－3可能通过调节癌基因的表达发挥其诱导HL－60细胞分化和调亡的作用。