人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体的研制及鉴定

以人心肌肌钙蛋白Ｔ（ｃＴｎＴ）为抗原，采用脾内免疫法，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾淋巴细胞与小鼠Ｓｐ２／０细胞融合，经间接ＥＬＩＳＡ法筛选，三次克隆化后获得５株能稳定分泌抗ｃＴｎＴ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞Ｇ３、Ｇ８、Ｇ１０、Ａ５和Ａ７。免疫球蛋白亚类鉴定其中１株为ＩｇＧ２ａ，４株为ＩｇＭ。染色体数目９２～１１０条。将Ｇ３、Ｇ８、Ｇ１０、Ａ５的单克隆抗体腹水做１：１００稀释与ＬＤＨ、ＣＫ、ＣＫＭＢ和ＧＯＴ等心肌酶均无交叉反应。５株ＭｃＡｂ的腹水效价为３．２×１０－６～１．６×１０－７。ＭｃＡｂ相加试验表明，Ａ５和Ｇ３可识别不同的抗原表位。     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ，ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０＾－５～１０＾－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳ     

分泌抗rHuIL—6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究

应用常规方法建立了４株稳定分泌抗重组人ＩＬ－６（ｒＨｕＩＬ－６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）小鼠杂交瘤细胞系１Ｈ３、２Ａ１０、３Ａ３和４Ｂ１。其中，１Ｈ３为ＩｇＧ２ｂ（Ｋ），２Ａ１０为ＩｇＧ１（Ｋ），３Ａ３和４Ｂ１为ＩｇＧ２ａ（Ｋ）。４株ＭｃＡｂ特异性强，与细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＳＣＦ、ＩＣＡＭ－１，以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水ＭｃＡ     

重组人红细胞生成素单克隆抗体的制备

本文应用常规淋巴细胞杂交瘤技术制备了４株能稳定分泌抗人重组红细胞生成素（ｒＨｕＥＰＯ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系ＢⅡ１Ｂ５、ＤⅡ６Ｂ９、ＭⅡ１Ｈ４和ＧＩ３Ｅ７。用鼠单克隆抗体分型试剂盒鉴定，其分泌的ＭｃＡｂ的类分别是ＩｇＭ、ＩｇＭ、ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ。间接ＥＬＩＳＡ法测定细胞上清的效价为１×１０－２～１．２５×１０－４，腹水效价为１×１０－２～１×１０－８。培养上清经ＥＬＩＳＡ鉴定，与ＩＬ－２、ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－α等细胞因子均无交叉反应，只与ｒＨｕＥＰＯ特异性结合。     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ、ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０－５～１０－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＳＥＣ１，敏感性可达１ｎｇ／ｍｌ。     

抗D型葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的研制及其初步应用

应用小鼠杂交瘤技术获得了５株分泌抗Ｄ型葡萄球菌肠毒素（ＳＥＤ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞（ＤＣ３、ＤＣ４、ＤＢ１１、４Ｄ３和４Ｄ５）。其中４Ｄ３为ＩｇＭ（λ），其余为ＩｇＧ１（ｋ）。这组ＭｃＡｂ除ＤＣ３外，其它４株ＭｃＡｂ识别的抗原构象表位相同，其相亲和力依次为４Ｄ５〉ＤＣ３〉ＤＣ４〉４Ｄ３〉ＤＢ１１。利用抗ＳＥＤ多克隆抗体ＨＲＰ标记的ＤＣ３和４Ｄ３（针对不同表位）混合ＭｃＡｂ建立了夹心ＥＬＩＳＡ法，并     

用一种新的免疫方法制备抗NPY单克隆抗体

本文报道了在８淋巴细胞杂交瘤技术中采用脾内微量免疫及腹腔植入联合免疫方法获得了两株分泌抗神经肽Ｙ（ＮＰＹ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞系，用ＥＬＩＳＡ法测定腹水ＭｃＡｂ的效价为１０￣（－３）～１０￣（－５）。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与ＡＣＴＨ反应，两种ＭｃＡｂ的亲和常数（Ｋａ）各为１×１０￣９Ｍ￣（－１）和５×１０￣７ｍｏｌ／Ｌ￣（－１），抗原决定簇分析结果表明此两种ＭｃＡｂ针对不同抗原决定簇。     

人Ⅳ型胶原蛋白提取及其单克隆抗体的制备与鉴定

从人胎盘提取Ⅳ型胶原（ＣＯＬⅣ）为抗原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，获得３株分泌抗ＣＯＬⅣ单克隆抗体的杂交瘤细胞。间接ＥＬＩＳＡ测定表明，３株ＭｃＡｂ与ＣＯＬⅣ有较强的反应，而与其它３种胶原及４种测试蛋白均无交叉反应。其中２株ＭｃＡｂ的亲和力都在１０（１１）以上。关键词     

肿瘤碱性蛋白单克隆抗体免疫学特性的研究及其应用

应用淋巴细胞杂交瘤技术，建立了４株抗人血清肿瘤碱性蛋白（Ｔｕｍｏｕｒｂａｓｉｃｐｒｏ－ｔｅｉｎ，ＴＢＰ）杂交瘤细胞株（１Ｃ３、４Ｆ４、５Ｆ４、３Ｇ９），并以制备的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）对其抗原决定簇及免疫学特性进行了分析。Ｉｇ亚类测定：均为ＩｇＧ２ａ，腹水效价为１×１０－６～１×１０－８。特异性测定：ＴＢＰＭｃＡｂ与ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ和Ａｌｂ无交叉反应。单抗相加试验证实：５Ｆ４、４Ｆ４和１Ｃ３为识别ＴＢＰ上同一抗原决定簇，３Ｇ９则为识别ＴＢＰ上另一抗原决定簇。分别利用单株和混合株ＭｃＡｂ标酶建立了可应用于人血清ＴＢＰ含量测定的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法，并用于人血清ＴＢＰ含量测定。     

抗淋球菌PIA单克隆抗体的制备和应用分析

用淋球菌全菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，以纯化ＰＩＡ做ＥＬＩＳＡ间接法筛选，获得５株稳定分泌抗ＰＩＡ的ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株。５株ＭｃＡｂ中３株为ＩｇＭ类（２Ｈ１１，４Ｈ８，４Ｅ１０），另２株分别为ＩｇＧ１（１Ｃ２）和ＩｇＧ２ｂ（５Ａ５）亚类。２Ｈ１１和１Ｃ２为高亲和力抗体，１Ｃ２与５Ａ５识别的抗原表位相同。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，５株ＭｃＡｂ均能从复杂的淋球菌菌体崩解物中特异地识别分子量为３５ＫＤａ的ＰＩＡ抗原，与淋球菌ＰＩＢ无交叉反应。     

抗D型葡萄球菌肠毒素单克隆抗体的研制及其初步应用

应用小鼠杂交瘤技术获得５株分泌抗Ｄ型葡萄球菌肠毒素（ＳＥＤ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞（ＤＣ３、ＤＣ４、ＤＢ１１、４Ｄ３和４Ｄ５）。其中４Ｄ３为ＩｇＭ（λ），其余为ＩｇＧ１（ｋ）。这组ＭｃＡｂ除ＤＣ３外，其它４株ＭｃＡｂ识别的抗原构象表位相同，其相对亲和力依次为４Ｄ５＞ＤＣ３＞ＤＣ４＞４Ｄ３＞ＤＢｌｌ。利用抗ＳＥＤ多克隆抗体与ＨＲＰ标记的ＤＣ３和４Ｄ３（针对不同表位）混合ＭｃＡｂ建立了夹心ＥＬＩＳＡ法，并以该法检测了自临床标本中分离的８０林金葡萄菌所产生的ＳＥＤ，其产毒率为４１．３％。     

高效凝胶色谱一步法制备级纯化单克隆抗体

作者采用Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－３００凝胶色谱柱，建立了ＩｇＧ类ＭｃＡｂ的一步法制备级纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ腹水直接上样，用ｐＨ７．４１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳ洗脱（流速０．５ｍｌ／ｍｉｎ），即得到纯化的ＭｃＡｂ。一次上样量４０￣５０ｍｌ腹水，回收率为８５％￣９０％。整个纯化周期４ｈ。纯化的ＭｃＡｂ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定，纯度〉９０％，免疫组化ＡＢＣ法测定活性为１：８００００     

人醛缩酶A单克隆抗体的制备及应用

纯化并鉴定了人醛缩酶Ａ、Ｂ、Ｃ（ｈＡＬＤ－Ａ、Ｂ、Ｃ）。用ｈＡＬＤ－Ａ免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠，将免疫的脾细胞和Ｐ＿３－Ｘ＿（６３）－Ａｇ８．６５３骨髓瘤细胞用ＰＥＧ进行融合，用ＥＬＩＳＡ法筛选，ｈＡＬＤ－Ｂ、Ｃ作阴性对照，将阳性反应的杂交瘤细胞进行克隆，获得３株杂交瘤细胞株。其ＭｃＡｂ的亚类分别为ＩｇＧ２ｂ，ＩｇＧ１、ＩｇＭ，亲合常数分别为７．５×１０￣（１０）、３．５×１０￣９、２．３×１０￣９。３株细胞株分泌的单抗通过Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ得到证实。用亲合层析法从人肝癌细胞中提纯了ＡＬＤ－Ａ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为单一区带，但其电泳迁移率较ｈＡＬＤ－Ａ滞后。     

分泌抗rHuIL－6McAb杂交瘤细胞系的建立及其应用研究

应用常规方法建立了４株稳定分泌抗重组人ＩＬ－６（ｒＨｕＩＬ－６）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系１Ｈ３、２Ａ１０、３Ａ３和４Ｂ１。其中，１Ｈ３为ＩｇＧ２ｂ（ｋ），２Ａ１０为ＩｇＧ１（ｋ），３Ａ３和４Ｂ１为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。４株ＭｃＡｂ特异性强，与细胞因子ＩＬ－１β、ＩＬ－３、ＩＬ－８、ＴＮＦ－α、ＧＭ－ＳＣＦ、ＩＣＡＭ－１，以及受体菌菌体蛋白成分均无交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水ＭｃＡｂ效价为１０（－６）～１０（－８）。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＩＬ－６，敏感性为１００ｐｇ／ｍｌ。初步应用表明可用于临床标本的检测。     

抗桥粒斑蛋白II单克隆抗体的研制及鉴定

本文用改良枸椽酸－枸椽酸钠法，从新鲜牛鼻表皮制备的ＤｅｓｍｏｐｌａｋｉｎⅡ（ＤＰⅡ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾淋巴细胞在ＰＥＧ介导下与Ｓｐ２／０细胞融合，经筛选、克隆化获得４株能稳定分泌ＤＰⅡＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系（分别命名为ＤＰｙ－１，２，３，４）。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧｌ，染色体数目为９３￣１０５。免疫组化分析表明，４株ＤＰⅡＭｃＡｂ具有很高的上皮组织特异性和敏感性，并提示ＤＰⅡ可能不存在于     

抗凝血酶受体单克隆抗体的制备与鉴定

采用杂交瘤技术，获得了４株稳定分泌抗凝血酶受体单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１κ链。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与人凝血酶、凝血酶原和ＨＣＶ多肽反应。４株杂交瘤细胞培养上清液效价为３．２×１０－２～１．２８×１０－３，腹水效价为１．６×１０－６～５．１２×１０－７。     

抗远缘链或菌OMZ176表面蛋白抗原（220kD）单克隆抗体的制备

采用远缘链球菌ＯＭＺ１７６（ｄ血清型）全菌细胞作抗原，通过免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选及亚克隆，最终获得抗远缘链球菌ＯＭＺ１７６表面蛋白抗原（２２０ｋＤ）的单克隆抗体（ＷＣ３Ａ６）。结果表明：ＭｃＡｂ的Ｉｇ及亚类鉴定为ＪｇＧ２ａ，ＥＬＩＳＡ效价１：８０００，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ鉴定可见ＭｃＡｂ与２２０ｋＤ蛋白抗原发生特异性结合。与变形链球菌ＭＴ６Ｒ（Ｃ血清型）有弱的交叉反应（ＯＤ值＝０．２３）。     

LEAKAGE TESTING OF ENDOSCOPE

ＬＥＡＫＡＧＥＴＥＳＴＩＮＧＯＦＥＮＤＯＳＣＯＰＥＬＥＡＫＡＧＥＴＥＳＴＩＮＧＯＦＥＮＤＯＳＣＯＰＥＷａｎｇＲｏｎｇｃｈａｎｇ；ＹｕＭｉｎｇｔａｏ（ＣｈｉｎｅｓｅＰＬＡＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ１００８５３，Ｂｅｔｉｍ，Ｃｈｉｎａ）LEAKAGE TESTIN...     

MHC－I类分子在诱导肿瘤浸润淋巴细胞细胞毒活性中的作用

选用Ｈ＿２２（小鼠肝癌）、Ｂ＿１６（小鼠黑色素瘤）和Ｅ＿（１０）（小鼠淋巴瘤）三种动物模型分离肿瘤浸润淋巴细胞（ＴｕｍｏｒｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇＬｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ＴＩＬｓ），在含ＩＬ－２２００Ｕ／ｍｌ的培养系统中以６０钴灭活自身瘤细胞，周期性刺激进行扩增。实验发现，被选用的三种动物瘤株中。仅从Ｅ＿（１０）淋巴瘤分离的ＴＩＬ显示明显的增殖和对自身瘤细胞的杀伤活性。对三种瘤株体外ＭＨＣ限制性观察结果表明，未测出Ｈ＿（２２）、Ｂ＿（１６）瘤株细胞表达Ｋ￣ｂ、Ｄ￣ｂ、Ｋ￣ｋ、Ｄ￣ｋ、Ｋ￣ｄ、Ｄ￣ｄ位点编码的ＭＨＣ－Ｉ类分子，而Ｅ＿（１０）瘤细胞则表达强阳性的Ｋ￣ｂ、Ｄ￣ｂ位点编码的ＭＨＣ－Ｉ类分子。此外，Ｈ＿（２２）、Ｂ＿（１６）瘤细胞可在多种品系（Ｃ＿（５７）ＢＬ／６、Ｃ＿３Ｈ、Ｂａｌｂ／Ｃ及昆明种）小鼠中生长，而Ｅ＿（１０）瘤株只限制在Ｃ＿（５７）ＢＬ／６品系小鼠中生长。     

OKT3＋rhIL－2激活胎儿脾细胞的研究

观察了１８～２８周龄胎儿脾单个核细胞（ＦＳＭＣ）在体外对ＯＫＴ３＋ｒｈＩＬ－２联合刺激的反应性，结果发现：ＯＫＴ３单独能活化ＦＳＭＣ，最适浓度ＯＫＴ３与ｒｈＩＬ－２联合对ＦＳＭＣ有强协同刺激作用。ＯＫＴ３刺激ＦＳＭＣ后明显促进ＩＬ－２Ｒ表达，表明ＯＫＴ３对ＦＳＭＣ的括化作用与ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ途径相关。ＯＫＴ３＋ｒｈＩＬ－２协同诱导的ＦＳＭｃ能产生ＮＫ和ＬＡＫ活性，且ＬＭ活住较单用ｒｈＩＬ－２诱导者强，间接免疫荧光染色ＦＡＣＳ分析显示，ＯＫＴ３＋ｒｈｌＬ－２协同激活的ＦＳＭＣ主要是ＣＤ８￣＋Ｔ细胞。结果表明ＦＳＭＣ与成人ＰＢＭＣ－样能被ＯＫＴ３活化。