清除细胞培养物中支原体的一个改良方法

支原体污染是人和动物细胞系体外培养中常见的问题，污染细胞系与未污染细胞系的形态学，酶细胞化学和免疫细胞化学分析等表型均无差异。支原体在细胞融合中却能严重地减少杂交细胞的产生，因而急需建立一个可靠的去除支原体的方法以排除它们对融合率的破坏作用．     

两步PCR法检测细胞培养物中支原体污染的初步结果

本文报道用两步ＰＣＲ法快速检测细胞培养物中污染的支原体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）。两套引物选自１６ＳｒＲＮＡ和２３ＳｒＲＮＡ保守区域，外部引物ＰＦ１，ＰＲ１扩增的ＤＮＡ片段在３６０～５００ｂｐ之间，内部引物ＰＦ２，ＰＲ２扩增的ＤＮＡ片段在１４０～２２０ｂｐ之间。试验表明，两步ＰＣＲ法能检出污染细胞培养物七种常见的支原体。１７份待检细胞培养物，两步ＰＣＲ法检测，９份（５２．９％）为阳性，直接培养法检测，５份（２９．４％）为阳性。采用快速热循仪，使ＰＣＲ反应时间大大缩短，３０次循环仅需２０分钟。反应液的用量也仅１０μｌ，提高了检测效率，节省了材料，降低了试验用费。本文就两步ＰＣＲ的灵敏度等特性也作了初步测试。     

荧光核染色法检查细胞培养物中污染的支原体

本文报道了用荧光染料HOECHST 33258核染色,检查细胞培养物中支原体污染的方法,并将荧光法与电镜及常规培养法进行了比较。荧光法与电镜法的结果基本一致,但荧光法简便、快速、结果可靠、又经济,适用于常规实验室检查细胞培养物中支原体污染用。     

细胞培养的支原体污染和分型

细胞培养的支原体污染和分型首都儿科研究所北京１０００２０任桂珍，曹玉璞，张佳杰近年来收到送检支原体污染的标本２８３份。标本包括各种肿瘤原代细胞，传代细胞、牛血清、细胞培养液及实验人员的咽拭子。送检标本用含１０％酵母浸液，２０％马血清的普通半固体及液体...     

培养细胞污染支原体的PCR检测方法的建立及应用

在生物制剂的生产和研发领域,细胞培养扮演着极其重要的角色：用原代细胞或传代细胞制造疫苗;杂交瘤细胞制造单克隆抗体;基因工程或细胞生物学的研究等。然而支原体污染常常成为细胞培养的不速之客,严重影响着细胞及生物制剂的质量。污染细胞最常见的支原体包括：     

大鼠肝星状细胞系的建立及其生物学特性的研究

目的 建立并鉴定肝星状细胞(HSC)细胞系。方法 采用肝脏离体胶原酶灌注消化及密度梯度离心的方法分离培养大鼠的HSC；通过体外长期传代培养后建立1株细胞系，应用细胞形态学观察、细胞倍增时间测定、细胞生长曲线绘制、染色体分析、双层软琼脂培养、免疫细胞化学检测、RT-PCR检测、聚硅酮膜培养法观测HSC的收缩等方法对其生物学特性进行研究。结果 HSC细胞系已传了78代，保持着肌成纤维样细胞的形态学特点。细胞倍增时间为36．5h；细胞的染色体众数42条，为正常大鼠体细胞的染色体表型；双层软琼脂培养未见细咆克隆形成；免疫细胞化学检测表明，细胞系表达Desmin、GFAP、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、iNOS、ICAM-1、TGF-α；RT-PCR检测表明，该细胞系表达TGF-β、ICAM-1；聚硅酮膜培养法显示，HSC细胞系能在ET-1作用下产生收缩反应。结论 HSC细胞系符合建系标准，是1株新建立的大鼠肝星状细胞系，命名为rHSC-99，可作为肝硬化、门静脉高压症实验研究的模型。     

睾丸支持细胞促进体外培养神经元生长的研究

目的　探讨睾丸支持细胞 (SC)对体外培养神经元生长发育的促进作用。　方法　将SCs制备成饲养层和SCs条件培养液 (SCM)后与神经元共培养 ,观察培养细胞的存活数和突起数 ,并应用图像分析仪观察细胞的面积。　结果　SCs饲养层及SCM培养神经元的存活数、突起数和胞体面积明显高于对照组 (P <0 0 1)。　结论SCs对体外培养的神经元具有显著的促生长作用。     

IN VITRO CULTURE OF VARIOUS SPECIES OF MICROSPORIDIA CAUSING KERATITIS: EVALUATION OF THREE IMMORTALIZED CELL LINES

Being intracellular parasites, microsporidia can only be propagated in cell culture systems. This study evaluated three cell lines to determine the most suitable host-parasite In vitro system. Confluent monolayers of vero, SIRC, and HeLa cell lines, grown in 24-well tissue culture plates, were inoculated with varying concentrations (1 × 10⁴to 1 × 10⁸ spores/ mL) of Vittaforma corneae, Encephalitozoon hellem, Encephalitozoon cuniculi, and Encephalitozoon intestinalis spores. Growth was compared quantitatively at weekly intervals. Encephalitozoon species showed the highest amount of growth when cultured in vero cell line, while there was no significant difference in their growth in SIRC and HeLa cell lines. In comparison, V. corneae showed the highest growth in SIRC cells, followed by vero cells. The analytical sensitivity was found to be 1 × 10⁴ spores/mL for vero cell line compared to 1 × 10⁵spores/mL for SIRC cell line and 1 × 10⁷ spores/ mL for HeLa cell line. HeLa cells also showed rapid disruption of cells, and the spores could not be easily distinguished from cell debris. This is the first report of the comparison of vero, SIRC, and HeLa for the propagation of microsporidial spores. Vero cell line was found to be more sensitive than SIRC and HeLa cells, and we believe that the inclusion of vero cell line in the routine culture protocols of ocular parasitology laboratories would result in a significant increase in the diagnostic yield.     

交感神经节的分离细胞培养及扫描电镜观察

用简化的分离细胞培养法,将新生大白鼠颈上节细胞培养在小培养皿的圆凹内。培养液含神经生长因子(nerve growth factor,NGF)粗制剂。交感节神经元获得生长,其胞体大而圆,表面折光性强,甚易与非神经元细胞区别。神经突起(neurite)自胞体发出,汇集成束或交织成网。随培养时间延长,神经元的胞体明显增大1倍或1倍以上,神经突起网亦变得更加稠密。除活体观察外,并制作了扫描电镜标本,以研究细胞的表面形态。根据分离细胞培养中交感节神经元胞体表面结构的不同,可将神经元分为3类。第1类表面有微绒毛、小泡或皱褶;第2、3类均没有这些表面结构,但第2类表面光滑;第3类则相反,表面粗糙不平。3类不同的表面结构,可能代表细胞不同的功能或活动状态。本文对此进行了一些讨论。雪旺细胞附着神经突起生长,其表面十分光滑。在分离交感神经节细胞培养中,被囊(卫星)细胞不易与游离的雪旺细胞区分。     

人胃癌细胞系BGC—823不同转移能力的细胞克隆间的细胞微丝结构特征研究

用单细胞培养法，从人胃癌细胞系ＢＧＣ－８２３中分离出１０个克隆。通过裸鼠致瘤和转移检测，进一步筛选出具有较高转移性的Ｃ１、Ｃ６和低转移的Ｃ５、Ｃ８等４个细胞株。它们的生长能力虽无明显差异，但超微结构显示Ｃ５和Ｃ８细胞表面微绒毛少，而且长度不一，微丝长而粗，将列规则，组装程度较好；Ｃ１和Ｃ６细胞微绒毛多而密集，长度均一，微丝短而粗，呈点状或玫瑰状小体，组装程度差，此外本研究显示肿瘤细胞内的微丝骨架组     

新型骨基质材料复合骨髓基质干细胞体外培养的形态学观察

目的：新型有机-无机复合类骨基质材料(New Bone-matrix Material，NBM)的研制及其细胞相容性的初步检测，为骨组织工程探寻一种新型复合类细胞外基质材料提供实验依据。方法：应用组织培养技术，对兔骨髓基质干细胞(Bone Marrow Stromal Cell，BMSC)和NBM体外联合培养进行相差显微镜观察和扫描电镜观察。结果：骨髓基质干细胞可以在NBM材料上发生良好的粘附、增殖，并能长入材料的孔隙内，分泌大量的细胞外基质成份。结论：NBM是一种新研制的有机-无饥复合类骨基质材料，具有网状孔隙结构；在体外与BMSC复合培养时表现出良好的细胞相容性，对细胞的粘附、增殖和功能表达未见明显影响。     

培养中E8鸡胚前脑5-羟色胺免疫反应神经细胞的鉴定

本研究采用免疫细胞化学PAP方法,对培养4天的E_8鸡胚前脑5-羟色胺(5-HT)免疫反应神经细胞的表达进行研究。发现生长在基板蛋白(LN)支持物上的前脑细胞,98％为神经特异性烯醇酶(NSE)免疫反应阳性细胞,证明为神经细胞;其中部分神经细胞显示5-HT免疫反应强阳性,约占培养神经细胞的10.4％,大多数细胞为多突或双极的形态学特征。为了要了解其余2％的NSE免疫反应阴性细胞是否为胶质细胞,我们以胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗体做胶质细胞特异性染色,阳性细胞为2％,与上述结果一致。     

睫状神经营养因子对体外培养的星形胶质细胞细胞周期及Fos蛋白表达的影响

目的研究睫状神经营养因子（CNTF）对体外培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞（Ast）细胞周期及Fos蛋白表达的影响。方法通过体外纯化培养获取大鼠大脑皮质Ast,将CNTF加入培养液,作用相应的时刻点后,应用流式细胞仪测定细胞周期的变化,采用免疫细胞化学方法研究Fos蛋白的表达。结果CNTF作用Ast6垢,可显著促进细胞周期进程,表现为G0／G1期细胞百分比降低;S期＋G2／M期细胞百分比（增殖指数,poliferation index,PI值）升高。12h促增殖作用达高峰,24h、48h有所恢复,但PI仍明显高于对照组。CNTF作用于Ast 2 h后即可引起Fos蛋白的显著表达,并持续至24h,而糖皮质激素预处理可明显抑制Fos蛋白表达。结论CNTF可促进Ast增殖及Fos蛋白表达。     

中枢神经系统不同部位来源的神经干细胞在体外生长特性的比较

目的 比较相同发育阶段中枢神经系统不同部位来源的神经干细胞在体外的生长特性。方法 胚胎小鼠(E14)于无菌条件下分别分离并收集皮层、纹状体、间脑、中．后脑和脊髓,各部分制备成单细胞悬液,接种在添加有纤维细胞生长因子(FGF)的无血清培养液内,神经干细胞克隆生成后,经免疫细胞化学方法鉴定细胞特性,并在相同条件下进行传代,相差显微镜下观察克隆生成和细胞的迁移特性。结果 在添加有纤维细胞生长因子的无血清培养液中,少量接种的单个细胞会增殖并形成悬浮于细胞培养液中的细胞克隆。这些克隆具有生成新克隆并分化成神经元和胶质细胞的能力。在相同发育阶段,皮层、纹状体、间脑均可生成悬浮的克隆,其中皮层生成的速度最快,纹状体、间脑较慢,中．后脑、脊髓生成克隆的速度最慢;生成克隆后,皮层克隆的贴壁能力最差,贴壁的克隆少有细胞从其底部迁出,纹状体、间脑克隆较易贴壁,贴壁克隆底部有明显的细胞迁出,中．后脑、脊髓生成的克隆不易悬浮,很快贴壁,在贴壁克隆的底部有大量的细胞迁出。结论 在无血清培养液中,神经干细胞可在体外增殖、传代并分化生成神经元和胶质细胞,不同部位来源的神经干细胞在体外生成克隆的速度和细胞迁移性不同,这可能同体内特定部位细胞的发育特性有关。