肝癌单抗重链可变区基因的克隆及序列测定

从分泌与肝细胞肝癌特异性强并具有良好人体内导向作用的鼠源性单克隆抗体的杂交瘤细胞ＨＡｂ２５中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ，用合成的寡核甘酸引物从中扩增出抗体重链可变区基因。将此基因克隆到ｐＵＣ１９质粒中，测定了此可变区基因的全序列。经计算机分析，结果表明基因长度为３６０ｂｐ，编码１２０个氨基酸，是具有功能性的抗体可变区基因，在核苷酸序列上与小鼠重链ＶＨ１８６．２家族同源性最高，属免疫球蛋白重链可变区基因９个家族中的第三族     

单克隆抗体3D3重链可变区基因结构分析

单克隆抗体（ＭｃＡｂ）在科研及影像诊断等领域应用十分广泛，鼠源性单克隆抗体，由于其抗原性，在人体疾病治疗应用受到限制，利用ＤＮＡ重组技术，构建各种重组抗体基因，表达制备重组抗体，可降低其抗原性，前提是必须获得其可变区基因，我们利用设计合成的一对鼠抗体...     

早产儿与足月儿免疫球蛋白重链可变区基因异型性

目的：分析和比较早产儿和足月儿免疫球蛋白重链可变区基因中的可变区基因片段、多样化基因片段（Ｄ）和连接区基因片段的使用,ＶＨ上的体突变,在ＶＨ－Ｄ和Ｄ－ＪＨ连接点插入的ＮＭＤＮ长度以及开放性阅读框（ＯＲＦ）等特征及其差异性。方法：７例胎龄为２５－３０周的足月儿脐带单核细胞ＤＮＡ被抽提,使用套式ＰＣＲ扩增ＩｇＨ基因,扩增产物被克隆筛选和测序。结果：在早产儿,共有２０个不同的ＶＨ被使用,其中ＤＰ７３（Ｖ     

抗鳗弧菌独特型单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列测定

鳗弧菌感染是养殖及野生海水鱼的重要疾病之一 ,大面积发病会给养殖渔业带来巨大经济损失。目前 ,对鱼鳗弧菌感染的防治主要是利用抗生素及减毒、灭活疫苗。抗生素的长期使用易使鱼体产生耐药性 ;减毒疫苗的安全性较难把握 ;灭活疫苗的抗原性较弱且制备过程中残存的杂质还可能使鱼体出现炎症甚至死亡。针对鳗弧菌保护性表位制备的抗鳗弧菌独特型单克隆抗体 (ｍＡｂ)具有良好的安全性及免疫原性[1] ,但大量生产成本较高。为此 ,我们应用ＲＴ ＰＣＲ从分泌抗鳗弧菌独特型ｍＡｂ的杂交瘤细胞株 4Ａ6中 ,扩增了该ｍＡｂ的重链可变区 (ＶＨ)基因…     

抗BAFF单克隆抗体轻链和重链可变区基因的克隆及鉴定

目的:在本实验室成功制备小鼠抗人BAFF单克隆抗体的基础上,通过分子克隆方法获得该抗体可变区基因序列。方法:从1株小鼠抗人BAFF单克隆抗体杂交瘤细胞FMMUB4中提取总RNA,以此为模版反转录成cDNA,用针对小鼠单克隆抗体重链和轻链可变区基因序列的特异性引物分别进行PCR反应,PCR产物连接入载体,经筛选阳性克隆、酶切鉴定后送测序,测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因,测序结果证实序列正确。结论:获得了抗BAFF单克隆抗体FMMUB4重链和轻链可变区基因序列,为下一步构建相关基因工程抗体打下良好基础。     

抗HLA－A2单抗重链可变区基因的克隆及其序列分析

从５株抗ＨＬＡ－Ａ２单抗杂交瘤细胞株中提取ｍＲＮＡ，以特异性引物采用ＰＣＲ技术，扩增和克隆出单抗可变区重链基因，并采用双脱氧链式终止法及计算机基因文库测定和分析了其全部的氨基酸序列，对抗体的生物学特性的研究具有重要意义，为构建基因工程抗体奠定了基础。     

CEA单抗轻重链可变区基因的克隆和序列分析

从分泌具有高亲和力和特异性的小鼠抗癌胚抗原（ＣＥＡ）的单抗杂交瘤细胞株Ｃ５０中提取总ＲＮＡ，通过ＲＴＰＣＲ扩增并克隆了抗体的轻、重链可变区基因。核苷酸序列分析表明所克隆基因分别为抗体轻、重链可变区基因。     

抗—HEV单克隆抗体B4C重链可变区基因的克隆及初步表达

抗－ＨＥＶ８７Ａ株单克隆抗体（ｍＡｂ）Ｂ４Ｃ的经体外研究鉴定，证实对我国暴发和散发性ＨＥＶ毒株有很高的特异性。为从分子水平上了解ｍＡｂＢ４Ｃ，我们利用基因工程技术，从杂交瘤细胞系中克隆出了重链可变区基因，并对其全部核苷酸序列进行了分析，可能属于小鼠免疫球蛋白重链Ｉ亚组，将ＶｎｃＤＮＡ克隆到高效表达载体ｐＱＥ－３１中，经ＩＰＴＧ诱导，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，可见１条Ｍｒ的１６０００左右的表达带，表达产     

抗人IgM重链单克隆抗体的特性分析

本文报道取正常人混合血清纯化 IgM,经断链后获得(Fo)_5μ片段作为免疫原免疫动物,应用杂交瘤技术获得16株分泌抗人IgM McAb的细胞株。用琼脂双扩散、免疫电泳、ELISA等方法证实所分泌的 McAb对人 IgM 呈高特异性。杂交瘤细胞诱生腹水的抗体效价在双扩散试验中可达1:256,在ELISA 中可达10~(-7)。用被动血凝抑制试验及ELISA试验比较了其中4种McAb(M_5、M_(12)、M_(23)、M_(25))的抗原结合力大小,表明M_(12)有较高亲和力。用ELISA固相竞争试验分析,证明该4种McAb针对同一抗原的不同决定簇。该 16种McAb除 M_(22)为 IgA外,余均属 IgG1亚类。     

亲和层析法纯化肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体

应用小鼠抗大鼠Ｋａｐｐａ轻链单克隆抗体亲和层析系统，对抗肾综合征出血热病毒大鼠ＭｃＡｂ进行了纯化研究，使用该系统具有ＭｃＡｂ回收率好，纯度高，能较好地保持ＭｃＡｂ免疫学活性，操作，快速，可一步除去腹水中宿主杂蛋白，并能适应不同类别ＭｃＡｂ纯化的特点，此外还对自制盐析纯大鼠Ｋａｐｐａ轻链ＭｃＡｂ柱与进口亲和纯大鼠Ｋａｐｐａ轻链ＭｃＡｂ柱进行了比较和探讨。     

抗人白介素6受体单抗的制备和鉴定

利用重组人可溶性ＩＬ－６受体免疫小鼠后，制备了两株抗ＩＬ－６Ｒ的单克隆抗体１７６／Ｂ６帮１５１／Ｈ１２两者分别识别ＩＬ－６胞外肽段的近膜区和远膜区。免疫迹分析表明，两株单抗均能够特异地结合天然的膜ＩＬ－６Ｒ蛋白，然而不能阻断ＩＬ－６Ｒ的生物功能。     

结肠癌单克隆抗体的制备和鉴定

用1高碘酸处理结肠癌组织,然后免疫小鼠制备单克隆抗体.获得2株产生高效价、针对结肠癌抗原的抗体杂交瘤细胞株C_8和C_(102)。经免疫组织化学染色后知其抗原定位于结肠癌腺体的上皮细胞及其分秘物.由Immunoblotting知其抗原的分子量为20万道尔顿.初步研究表明,C_8和C_(102)是特异性较强的针对结肠癌的单克隆抗体(IgG2b).经高碘酸(或胰酶)处理证明,其相应抗原决定基部分是蛋白质而不是多糖.     

肾综合征出血热病毒单克隆抗体的制备及其特性研究

用肾综合征出血热病毒(HFRSV)陈氏株免疫获得5株单克隆抗体(McAb).B_9株McAb具有血凝抑制和体内保护活性:F_-3、H_(11)株McAb具有较弱的中和活性及体内保护活性;B_9株McAb与重型HFRSV毒株的大部分发生反应.与轻型HFRSV毒株不反应;F_3、H_7株McAb与检测的24个HFRSV毒株均发生反应.B_(11)、F_3、H_7、H_(11)等4株McAb可用于酶联免疫吸附试验。     

抗人肝癌单克隆抗体重链可变区基因克隆和序列测定

应用反转录ＰＣＲ方法从分泌抗人肝癌单克隆抗体鼠杂交瘤细胞系ＨＢｂ２７中成功地克隆了单抗重链可变区基因，将此基因重组入Ｍ１３噬菌体中，双脱氧链终止法测定了核苷酸序列。经计算机分析，基因全长４０８ｂｐ，编码１３６个氨基酸，并进行了基因同湖泊性分析，结果表明获得的重链可变区基因是具有功能性的，两端引物自带起始码和终止码，可直接插入原核载体中进行表达。     

二株单克隆抗体识别人类由不同位点编码的类Ia抗原分子

用人的急性淋巴细胞白血病细胞株(Reh cell line)作免疫原,得到二株抗人的类Ia抗原单克隆抗体:H4和3A4。它们对带有类Ia 抗原的所有细胞都有补体依赖的细胞毒反应。二者免疫沉淀法试验结果也都表示它们识别的抗原是由分子量为 35 K和 28 K的 α链及β链组成。这和 Ia抗原一致。但在细胞毒滴度相同条件下,H4可明显抑制 MLC反应,而3A4无抑制作用,H4单克隆抗体的 F(ab’)_2 断片也对3A4的细胞毒无抑制作用。顺序免疫沉淀研究结果证明H4和3A4这二个单克隆抗体是和不同的抗原分子起反应,提示人类可能存在二种以上类Ia抗原,分别由不同的基因位点编码。从这二个单克隆抗体对 MLC抑制反应的不同,进一步推测 D和 DR基因可能也不相同。     

小儿急性白血病的免疫球蛋白重链基因VDJ区重组及其部分序列分析

在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法分析的基础上用ＰＣＲ方法分析了２７例小儿急性白血病细胞的免疫球蛋白重链基因ＶＤＪ区的变化。６例未分化型白血病中５例有Ｖ＿Ｈ－Ｄ＿Ｈ－Ｊ＿Ｈ基因扩增带，提示已定向Ｂ系。１３例Ｂ系来源的白血病细胞中９例发生ＶＤＪ完全重排，４例Ｂ系来源和１例未分化型白血病ＰＣＲ无阳性扩增带而Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法有重排带。１例普通型白血病ＰＣＲ有阳性扩增带而Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法呈胚系。在１４例阳性病例中有１例出现二条扩增带呈双克隆性。１例Ｔ细胞性白血病和７例非淋系白血病均为阴性与ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法结果一致，对２例未分化型，２例普遍型白血病进行顺序分析，发现它们的重排格局各不相同。     

抗HSV糖蛋白单克隆抗体重链可变区DNA的克隆及序列分析

作者从分泌具有高中和活性和高保护作用的抗ＨＳＶ型共同性糖蛋白Ｃ的鼠源性单抗的杂交瘤细胞１Ａ１２／４Ｄ５中提取ＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ。用合成的寡核苷酸引物从中扩增了抗体的重链可变区基因，并克隆入质粒，随机挑取两个阳性克隆进行核苷酸序列分析，见所克隆基因确可编码小鼠抗体的重链可变区。     

SARS冠状病毒核壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒(CoV)核壳(N)蛋白单克隆抗体,为寻求SARS早期诊断的方法及深入研究SARS疾病提供有力的工具。方法以重组SARS—CoVN蛋白免疫小鼠,采用甲基纤维素半固体培养基法制备单克隆抗体。通过间接酶联免疫分析、间接免疫荧光、免疫双向扩散等方法鉴定抗体的特异性、亲和力、类型及亚类、配对效果等。结果共获得15个阳性克隆,其中10个与天然SARS-CoV呈阳性反应。10株单抗的相对亲和常数在108～109mol／L^-1之间;10株中有1株为IgG2b。、1株为IgG3,其余均为IgG1;10株单抗中有8株与12种肺炎相关的病原体无交叉反应,1株与流感病毒A、B,副流感病毒有交叉反应,1株与流感病毒A、B有交叉反应;10株单抗中的5株可形成5种配对,其中两种配对用于检测重组SARS病毒N蛋白,灵敏度可达1μg/L。结论获得了特异性针对SARS冠状病毒N蛋白的单克隆抗体,并初步建立了检测SARS-CoVN蛋白的酶联双抗体夹心法,为SARS的早期诊断、蛋白质组学的研究奠定了基础。