共刺激通路阻断剂在角膜移植排斥治疗中的应用

共刺激通路阻断剂是利用分子生物学方法重组免疫调节分子,人为干预免疫应答,以抑制特异性T细胞免疫反应,在诱导移植耐受和治疗自身免疫性疾病中显示了良好的应用前景。本文针对角膜组织的免疫学特点及共刺激通路阻断剂如CTLA4 Ig、CD4 0Ig、抗CD15 4mAb、CTLA4 FasL在角膜移植排斥治疗中的应用进行综述。     

共刺激分子Tim-1在角膜移植排斥反应中的作用

背景 角膜移植是目前临床上治疗角膜盲可靠且有效的复明手段,角膜移植术后的免疫排斥反应是角膜移植失败的主要原因. 目的 研究共刺激分子Tim-1在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植排斥反应发生和发展过程中的作用.方法 40只清洁级成年雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组、自体角膜移植组和同种异体角膜移植组.正常对照组大鼠未行任何手术,自体角膜移植组分别以Wistar大鼠作为供体和受体施行穿透角膜移植术,而同种异体角膜移植组以SD大鼠角膜作为供体,Wistar大鼠作为受体行穿透角膜移植术,各组供体角膜植片均为3.5mm,植床直径为3.0 mm.分别于术后7d、14d在裂隙灯显微镜下观察术眼角膜炎症反应情况,按照Larkin的标准进行排斥反应评分,计算排斥反应指数（RI）,观察各组角膜植片的平均存活时间和植片存活率.术后7d、14d,3个组各取3只大鼠眼球制备角膜组织切片,分别行组织病理学检查和免疫组织化学检测,观察角膜组织的炎症反应和共刺激分子Tim-1蛋白在角膜组织中的表达;此外分别于术后7d、14d各组取5只大鼠角膜制备组织匀浆,采用实时荧光定量PCR法检测共刺激分子Tim-1 mRNA在大鼠角膜植片中表达量（吸光度,A）的变化.结果 术后7d,自体角膜移植组和同种异体角膜移植组大鼠角膜植片均出现轻度水肿;术后14 d,自体角膜移植组角膜植片水肿消失,植片透明,而同种异体角膜移植组大鼠角膜植片水肿增厚,呈灰白色混浊,可见新生血管形成.自体角膜移植组植片的存活率为100％,同种异体角膜移植组植片存活率为0,平均生存时间为（9.8±1.2）d.组织病理学检查表明,术后7d自体角膜移植组植片基质层可见炎性细胞浸润,但术后14d炎性细胞明显减少;同种异体角膜移植组术后7d植片水肿,基质层可见炎性细胞浸润,术后14 d阳性细胞大量增加,可见新生血管.免疫?     

ICOS共刺激通路参与角膜移植免疫排斥反应的研究

目的研究可诱导共刺激分子（ICOS）共刺激通路与角膜移植急性免疫排斥反应的关系。方法建立大鼠同种异体穿透角膜移植模型,分别于术后7d、14d取植片进行病理学观察,采用RT-PCR法检测植片组织ICOS mRNA的表达情况,免疫组织化学法检测植片组织淋巴细胞ICOS蛋白水平;同时采用流式细胞术检测外周血CD3^＋ICOS^＋T／CD3^＋T的表达情况。均以正常大鼠作为正常对照。结果正常大鼠角膜组织未检测到ICOS蛋白及ICOS mRNA的表达,移植术后植片组织可以检测到ICOS蛋白及ICOS mRNA的表达,且术后14d高于术后7d（P=0．000）;与正常大鼠外周血CD3^＋ICOS^＋T／CD3^＋T的表达相比术后表达皆升高（方差齐性,P=0．156）,且术后14d外周血CD3^＋ICOS^＋T／CD3^＋T的表达高于术后7d的表达（P=0．000）。结论共刺激分子ICOS与角膜移植急性免疫排斥反应密切相关。     

CD40-CD154共刺激信号及其在角膜移植排斥中的研究进展

角膜移植手术失败的主要原因是T细胞介导的免疫排斥反应，T细胞的充分活化需要共刺激信号的协同作用。研究表明CD40-CD154信号在角膜移植排斥中具有重要意义，阻断该信号可延长移植物的存活、本文就其分子特性、免疫学功能进行了综述，重点探讨了阻断该信号抑制角膜移植排斥反应的效应和机制。     

重组腺病毒载体RNA干扰阻断ICOS共刺激通路抑制大鼠角膜移植免疫排斥反应的研究

目的观察携带有报告基因绿色荧光蛋白且表达ICOS-siRNA的重组腺病毒载体Ad-siICOS-EGFP阻断ICOS共刺激通路对角膜移植急性免疫排斥反应的抑制作用。方法取Wistar大鼠(供体)及SD大鼠(受体),建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,将SD大鼠随机分为A、B、C、D4组,每组各20只:A组为单纯角膜移植对照组;B组为Ad-siICOS-EGFP注射组,术后即刻于球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP;C组为Ad-EGFP注射组,术后即刻于球结膜下注射Ad-EGFP;D组为生理盐水注射组,术后即刻于球结膜下注射生理盐水;每眼选择角膜缘1200位、600位两个注射点,每个注射点注射剂量为15μL。术后每天在裂隙灯显微镜下观察排斥反应指数的变化并记录植片的存活时间。各组分别于术后5d随机取10只大鼠,麻醉后取角膜,部分植片行RT-PCR检测,部分角膜冰冻切片行共聚焦显微镜观察。各组其余大鼠进行角膜植片存活时间统计。结果 A组、B组、C组、D组角膜植片平均存活时间分别为(9.800±0.632)d、(14.700±1.418)d、(10.000±1.054)d、(10.100±0.876)d,其中B组存活时间最长,与其余各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);A组、C组、D组各组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。B组及C组角膜植片共聚焦显微镜下可见GFP绿色荧光表达,表达位于角膜植片上皮层及整个角膜基质层;A组、D组角膜植片未见绿色荧光表达。A组、B组、C组、D组植片组织ICOS的PCR产物凝胶电泳条带灰度值比值分别为1.004±0.164、0.621±0.096、0.929±0.134、0.918±0.120,其中B组最低,与其余各组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);A组、C组、D组各组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 Ad-siICOS-EGFP可以有效地抑制大鼠植片组织ICOSmRNA及蛋白的表达,从而阻断ICOS共刺激通路;移植术后即刻受体鼠球结膜下注射Ad-siICOS-EGFP,可以抑制大鼠角膜移植急性免疫排斥反应,延长角膜植片存活时间。     

B7：CD28／CTLA—4共刺激分子及其在眼科的研究进展

大量实验证实B7家族分子与其受体CD28和CTLA-4结合后所产生的共刺激信号在T淋巴细胞激活中起重要作用,决定着受到抗原刺激的T细胞是分化、增殖为效应细胞,还是进入无反应状态,其在眼科的研究主要集中于眼科自身免疫性疾病、角膜和视网膜三个方面,阻断B7：CD28/CTLA-4态。其在眼科的研究主要集中于眼科自身免疫性疾病、角膜和视网膜三个方面,阻断B7：CD28/CTLA-4通路可能为眼科自身免疫性疾病、角膜移植排斥反应和视网膜葡萄膜疾病的治疗提供新的途径,本就其分子特性、功能及其在眼科的研究进展等方面的有关资料作一综述。     

树突状细胞在角膜移植排斥反应中的免疫调节机制的探讨

目的 观察自体未成熟树突状细胞(Idc)对于小鼠同种异体角膜移植的免疫调节作用,探讨其作用机制.方法 PBS或自体Idc尾静脉注射7 d后,采用双色免疫荧光染色法及流式细胞术分析小鼠脾脏中CD4 CD28 及CD4 CTLA4 T细胞的表达.PBS或自体Idc尾静脉注射7 d后进行小鼠同种异体角膜移植,临床观察两组植片的存活时间.结果 Idc注射后,脾脏中CD4 CD28 T细胞的比例下降(P＜0.01),而CD4 CTLA 4 T细胞比例明显升高 (P＜0.01).Idc经尾静脉注射后明显延长了同种异体角膜移植片的存活时间(P＜0.01).结论 Idc可诱导CD80/CD86-CTLA-4抑制型共刺激信号替代CD80/CD86-CD28信号通路,从而阻断协同刺激信号的传递及T细胞的活化,对于同种异体角膜移植排斥反应具有免疫抑制作用.     

FOXP3在角膜移植免疫排斥反应中的作用

目的 探讨转录因子FOXP3在角膜移植免疫排斥反应中的作用.方法 建立角膜移植动物模型.将57只SD大鼠随机分为A组(正常组)、B组和C组(术后0、2、 4、 6、8 d分别球结膜下注射生理盐水和地塞米松注射液).用裂隙灯观察移植排斥情况,RT-PCR检测植片内FOXP3 mRNA的表达,流式细胞术检测移植术前和术后不同时间外周血CD4 CD25 T及CD4 FOXP3 T淋巴细胞的表达.对各组角膜植片进行CD4、CD8、CD25和FOXP3表达的免疫组织化学检测.结果 C组发生排斥反应时间较B组明显延迟(P<0.05),B组术后第11 d角膜植片内FOXP3 mRNA的表达较C组明显减弱(P<0.05),对照组CD4 CD25 T/CD4 T的表达明显高于术前(P<0.05),而CD4 FOXP3 T/CD4 T的表达明显低于术前(P<0.05),植片中CD4、CD8和CD25表达明显,FOXP3有一定的表达.角膜移植排斥反应期间,地塞米松治疗组FOXP3和CD4 FOXP3 T/CD4 T的表达明显增强,CD4 CD25 T/CD4 T的表达明显减弱.结论 FOXP3在角膜移植免疫排斥反应过程中发挥重要的作用;增强植片内FOXP3的表达或增加外周血CD4 CD25 Tr淋巴细胞的含量有助于抑制角膜移植免疫排斥反应的发生.     

可诱导的共刺激分子在大鼠角膜中的表达

目的 探讨可诱导的共刺激分子(ICOS)在大鼠角膜移植排斥反应中角膜上的表达和意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹分析检测大鼠角膜移植后角膜中ICOS mRNA和蛋白的表达;免疫组织化学方法 检测ICOS蛋白在角膜中的表达部位.结果 ICOS在正常的角膜中无表达;同种异体角膜移植组术后角膜中的ICOS mRNA转录及蛋白的表达从第1 d起即呈明显上升趋势,第7 d达高峰;免疫组织化学显示同种异体角膜移植术后ICOS阳性表达见于角膜基质层浸润的淋巴细胞.结论 同种异体角膜移植术后ICOS在角膜中表达较对照组明显升高,可能在同种异体角膜术后的免疫排斥反应中起重要作用.