肝星状细胞凋亡研究进展

细胞凋亡(apoptosis)是一种由基因调控的,具有特征性的细胞主动死亡过程。细胞凋亡与细胞增殖组成一对矛盾统一体,贯穿生命活动的始终。它们共同决定着细胞和组织的基本特征和命运。随着对细胞凋亡分子机制认识的深入,不仅有助于阐明许多长期困扰人类的疾病,而且还可通过诱导细胞凋亡,为一些疾病的治疗提供新的途径。现就肝纤维化逆转过程中肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)凋亡研究进展作一简述。     

肝星状细胞凋亡机制及调控研究进展

抑制活化肝星状细胞(HSCs)增殖和诱导其凋亡成为阻止肝纤维化(HF)进程的途径之一。在细胞凋亡的发生过程中,有多种不同因素和途径参与活化HSCs的凋亡,活化HSCs的凋亡受到凋亡和抗凋亡基因、细胞因子等调控。作者就近年来有关HSCs凋亡及其调控的研究进展作一综述。     

Survivin在活化的肝星状细胞中的表达及其意义

目的 了解survivin在活化的肝星状细胞中的表达及其意义.方法 用细胞免疫荧光和RT-PCR方法检测survivin在活化的肝星状细胞中的表达,并以肝癌细胞和肝细胞为对照.结果 细胞免疫荧光显示survivin在活化的肝星状细胞中明显表达,阳性率为(66.07±8.55)%,明显高于肝细胞(9.74±2.68)%,两者比较差异有显著性(P<0.05).而且肝细胞表达荧光强度很弱;在肝癌细胞中表达率最高,阳性率达(69.41%±9.10)%.RT-PCK结果显示survivin mRNA在肝星状细胞和肝癌细胞中检测到,在肝细胞中未检测到.结论 survivin在活化的肝星状细胞中有明显表达,可能与肝星状细胞中抑凋亡基因survivin过度表达有关.因此,抑制活化的肝星状细胞中survivin的表达,可能对抑制活化的肝星状细胞增殖和诱导其凋亡产生效应.     

肝缺血-再灌注损伤与细胞凋亡

细胞凋亡是细胞在生理和病理情况下的一种死亡模式,凋亡过程受基因严格调控。细胞凋亡是肝缺血—再灌注损伤重要的病理生理特征。本文对细胞凋亡、肝缺血—再灌注损伤中细胞凋亡的发生机制及凋亡相关基因的研究进展进行综述。     

肝星形细胞及相关细胞因子IFN、TNF在肝纤维化形成中的作用

肝纤维化的本质是肝脏内结缔组织的增生大于降解,从而引起细胞外基质过度沉积。肝星形细胞(HSCs)在这一过程中起到至关重要的作用,其活化和凋亡与肝纤维化形成及逆转密切相关。因此,寻找抑制HSCs活化、促进HSCs凋亡的途径是防治肝纤维化的重要策略。近年来对HSCs活化和凋亡的研究已取得了一些新的进展。本文简要综述了HSCs及相关细胞因子干扰素、肿瘤坏死因子在肝纤维化形成过程中的生物学作用。     

MicroRNA-484通过靶向肝星状细胞中Fis1调控肝纤维化进程

目的 探讨微RNA-484 (miR-484)对肝纤维化发生和发展过程中关键细胞肝星状细胞(HSC)的作用和影响.方法 以前期芯片筛选结果为基础,通过细胞转染人为干预miR-484在HSC-T6细胞株中的表达.利用qPCR、蛋白质印迹法检测肝纤维化及凋亡相关指标的表达变化;以Annexin V-FITC/PI双染细胞后,用流式细胞仪检测miR-484对细胞凋亡的影响.结果 与对照组相比,人为下调miR-484在HSC-T6细胞株中的表达后,其靶基因Fis1及促凋亡因子caspase-3在mRNA和蛋白水平的表达均升高(P＜0.05),凋亡抑制因子Bcl-2表达下降(P＜0.05);流式细胞仪检测到HSC-T6细胞凋亡率升高[(32.81±3.21)％ vs (57.54±6.76)％,P＜0.05];同时肝纤维化相关指标α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白水平均下调(P＜0.05).结论 miR-484通过靶向Fis1抑制HSC凋亡、促进其活化,从而促进肝纤维化的发生和发展.     

肝星形细胞凋亡机制的最新进展

慢性肝病是全球重要死因之一,各种致病因素所致慢性肝损伤均可引起肝纤维化。近年来临床和实验数据均显示肝纤维化甚至肝硬化均可通过肝星形细胞(HSC)的凋亡而得以逆转,因此,阐明肝星形细胞凋亡的分子机制成为发展抗纤维化药物的重要途径之一。肝星形细胞的凋亡受多种因素调控,包括生长因子及其受体、自然杀伤细胞、细胞外基质组分、神经内分泌通路、药物制剂以及翻译后修饰均可影响肝星形细胞的凋亡。在此就各相关因素进行综述。     

P选择素单抗对肝缺血再灌注时细胞凋亡的影响

目的"探讨P选择素及其单克隆抗体对肝缺血再灌注损伤及细胞凋亡的影响. 方法"建立大鼠肝缺血再灌注损伤模型,分别采用免疫组化LSAB法和原位DNA片段末端标记法检测有或无P选择素单抗治疗组肝组织中P选择素表达及凋亡细胞. 结果"大鼠肝缺血再灌注时,肝组织出现显著病理改变及细胞凋亡,且P选择素在肝组织中表达;P选择素单抗作用组肝组织无明显病理变化且细胞凋亡减少,肝组织中未见P选择素表达. 结论"P选择素介导中性粒细胞浸润和细胞凋亡,可能是肝缺血后再灌注损伤的重要机制之一.     

黄芩甙对肝星状细胞凋亡的影响

目的 研究黄芩甙对大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响,探讨黄芩甙抗肝纤维化的机制.方法 采用胶原酶循环灌流法分离肝星状细胞.以不同浓度黄芩甙作用后,通过相差显微镜观察细胞形态变化,用MTT法、溴乙锭/吖啶橙荧光染色法、流式细胞术检测黄芩甙对活化的HSC凋亡的影响.结果 黄芩甙显著促进活化的HSC凋亡,此作用随黄芩甙浓度增加而增强,呈药物浓度依赖关系.结论 黄芩甙可以促进HSC凋亡,减少活化HSC的总量,发挥其抗肝纤维化作用.     

细胞外信号调节激酶磷酸化对十字孢碱诱导肝星形细胞凋亡的调控

目的:肝星形细胞(hepatic stellate cells, HSCs) 是参与肝纤维化和肝硬化发展过程的主要细胞。在肝纤维化过程中, 肝星形细胞增殖并发生表型转化, 从静止状态向肌纤维母细胞样转化。后者的归宿可为凋亡, 也可重归静止状态。目前转化肌纤维母细胞样细胞的凋亡机制尚未明确。本文研究细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases, ERKs)磷酸化状态对十字孢碱诱导HSCs凋亡的影响。方法:采用Western 印迹和流式细胞术检测4种肝星形细胞株(CFSC-8B, -2G, -3H and-5H) 的ERKs表达水平和细胞凋亡状态。结果:4种肝星形细胞株各具有形态特异性, 并与其内α-SMA表达水平相符, 其中 CFSC-8B 细胞株 α-SMA表达水平为最高。虽然 ERK1/2 总蛋白表达水平在4种细胞株相似, 但磷酸化 ERK1/2在 CFSC-8B 和 CFSC-2G 2个细胞株中表达明显高于 CFSC-3H 和 CFSC-5H细胞株。进一步采用CFSC-8B 细胞(ERK1/2 高磷酸化水平)和 CFSC-5H 细胞(ERK1/2 低磷酸化水平), 通过staurosporine 诱导细胞凋亡。结果显示 CFSC-8B 细胞对staurosporine诱导的细胞凋亡敏感性明显增加。同时, staurosporine还可进一步增加这2株细胞内ERK1/2的磷酸化程度。结论:HSCs中ERK1/2 的磷酸化程度决定细胞对 staurosporine 所致细胞凋亡的敏感性。     

Wnt信号转导通路与肝纤维化关系的研究进展

肝纤维化是十分复杂的病理过程,其本质是肝星状细胞（ hepatic stellate cells,HSCs）的活化和细胞外基质（ extracellular matrix,ECM）的过度沉积。目前认为HSCs的活化与多种信号通路的激活相关。相关研究证实Wnt信号转导通路在调控肝脏病理生理的过程中起到重要作用,阻断该通路可以抑制HSCs的增殖及诱导其凋亡。本文就Wnt信号转导通路与肝纤维化关系的研究进展进行综述。     

桃红四物汤加丹参对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨桃红四物汤加丹参时活化的人肝星形细胞（HSC）增殖和凋亡的影响，阐明其时肝纤维化的防治作用。方法将人肝星状细胞体外培养，加入不同浓度桃红四物汤加丹参干预48h后，采用MTT法以及流式细胞仪检测其增殖及凋亡情况。结果桃红四物汤加丹参0．4mg／mL、0．2mg／mL两种浓度均能抑制肝星状细胞增殖，并能促进其凋亡。结论桃红四物汤加丹参具有抑制人肝星状细胞的增殖，诱导肝星状细胞凋亡的作用。可能为肝纤维化的中医药防治研究提供新的思路。     

TACE治疗后肝细胞癌及癌旁组织Fas抗原表达及凋亡指数变化的研究

目的:从细胞凋亡的角度研究肝动脉化疗栓塞(TACE)治疗原发性肝癌的机制.方法:应用免疫组化中LAB-SA(SP)法和TUNE法检测了20例正常的肝组织,23例TACE治疗后及37例未经TACE治疗的癌及癌旁肝组织中Fas抗原表达及细胞凋亡水平.结果:不同肝组织及癌组织中Fas抗原表达及细胞凋亡指数均有显著差异,而且Fas抗原表达与细胞凋亡之间存在正相关关系,经TACE治疗后的癌及癌旁组织中Fas抗原表达明显增强,细胞凋亡指数明显升高.结论:TACE治疗原发性肝癌的部分机制可归结为由于TACE刺激和促进了肝癌细胞Fas抗原的表达,从而增加了癌细胞的凋亡.     

腺病毒介导AMP激活的蛋白激酶的过表达诱导肝星状细胞株LX2凋亡

目的 探讨在肝星状细胞株LX2中,用腺病毒介导AMP激活的蛋白激酶(AMPK)过表达对细胞凋亡的影响.方法 病毒感染细胞后,用免疫印记的方法检测外源基因的表达;流式细胞仪分析细胞的凋亡;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带,免疫印迹检测caspase-3以及Bcl-2、Bax表达的变化.结果 免疫印迹结果显示表达组成性激活的AMPK的腺病毒感染LX2细胞72 h,AMPK过表达.过表达AMPK的LX2细胞用流式细胞仪检测到有凋亡的亚二倍体峰出现;DNA断裂出现梯状条带,casepase-3被激活,Bcl-2在LX2中是低表达的,而Bax表达水平升高.结论 腺病毒介导AMPK的过表达可以诱导LX2细胞发生凋亡,其可能的机制之一是上调促凋亡基因bax的表达.     

保肝中药复方对肝星形细胞组织金属蛋白酶抑制剂表达及凋亡的干预

目的观察保肝中药复方药物血清对传代肝星形细胞组织金属蛋白酶抑制剂(TIMP-1)表达及凋亡的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用靶点.方法采用大鼠肝星形细胞分离培养,免疫组化ABC法检测肝星形细胞TIMP-1表达与药物血清的干预,经图像分析定量;Giemsa染色和TUNEL染色计算凋亡细胞百分比.结果药物血清组的肝星形细胞TIMP-1阳性反应物吸光度与对照组比P＜0.05;细胞凋亡率为10.3%.结论保肝中药复方药物血清能抑制肝星形细胞TIMP-1的表达,并促进活化的肝星形细胞凋亡.     

川芎嗪对肝星状细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究川芎嗪对大鼠肝星状细胞(HSC)凋亡的影响及可能机制,为肝纤维化的治疗提供新的方法.方法 以血小板衍生生长因子(PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞系HSC-T6,建立体外肝纤维化细胞模型,在此基础上,给予川芎嗪30μmol/L刺激HSC-T6,作用24 h后,Western blot法检测相关蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Hoechst 33258染色法观察各组HSC的凋亡形态.结果 Western blot法结果表明,与PDGF组比较,川芎嗪组ERS标志性蛋白GRP78表达增多,并且ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12表达增强,Bcl-2/Bax比例明显下调,p-ERK/ERK水平降低.流式细胞仪检测结果表明川芎嗪组较PDGF组HSC凋亡率增强,同时Hoechst 33258染色结果表明川芎嗪组HSC呈现典型的核固缩等凋亡形态变化.结论 川芎嗪可以诱导PDGF活化的HSC发生凋亡,其可能与ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12的表达上调、ERK1/2磷酸化水平降低,进而下调Bcl-2/Bax比例,发生相关凋亡.     

TACE治疗后肝细胞癌及癌旁组织Fas抗原表达及凋亡指数变化的研究（摘要）

目的 :从细胞凋亡的角度研究肝动脉化疗栓塞(TACE)治疗原发性肝癌的机制 .方法 :应用免疫组化中LAB -SA (SP)法和TUNE法检测了 2 0例正常的肝组织 ,2 3例TACE治疗后及 3 7例未经TACE治疗的癌及癌旁肝组织中Fas抗原表达及细胞凋亡水平 .结果 :不同肝组织及癌组织中Fas抗原表达及细胞凋亡指数均有显著差异 ,而且Fas抗原表达与细胞凋亡之间存在正相关关系 ,经TACE治疗后的癌及癌旁组织中Fas抗原表达明显增强 ,细胞凋亡指数明显升高 .结论 :TACE治疗原发性肝癌的部分机制可归结为由于TACE刺激和促进了肝癌细胞Fas抗原的表达 ,从…     

免疫相关性肝纤维化的研究进展

肝纤维化是代谢性疾病,病毒感染,药物损伤,和自身免疫等攻击靶向肝细胞和胆管产生慢性损伤的共同病理过程。慢性肝损伤表现为肝脏实质细胞发生坏死、凋亡,间质细胞增生主要表现为肝星状细胞活化、增殖,细胞外基质过度增生,最终导致肝脏内纤维结缔组织异常沉积。肝纤维化是慢性肝脏炎症病变的病理过程,其中免疫细胞在炎症反应中发挥了重要作用。本文对近年来免疫细胞如何发挥调节肝纤维化的进程进行综述。     

胎盘细胞凋亡与妊娠内胆汁瘀积症关系的研究

目的：从胎盘细胞的凋亡的表达差异探讨妊娠肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)围产儿死亡原因,方法：29例妊肝内胆汗瘀积症胎盘和5例正常胎盘,分别进行分光镜检查,原位细胞凋亡标记实验和p53基因mRNA原因细包杂交实验,结果：正常胎盘的细胞凋亡率为9．11％,ICP的细胞的调亡率为28．75,差异有显著性（P＜0．05）,p53基因在ICP胎盘组织中未见阳性表达,结论：妊娠肝内胆汗瘀积症胎盘组织的细胞凋亡水平明显高于正常胎盘组织,ICP围产儿死亡率高的原因原可能与其胎盘组织的细胞凋亡水平增加有有,ICP减肥中盘组织的细胞凋亡可能是非p53基因依赖田。     

胰岛素样生长因子与肝纤维化的研究进展

肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的激活和增殖是肝纤维化的中心环节,胰岛素样生长因子(insulin-like growth factors,IGFs)是一类重要的促细胞活化、分裂的生长因子.IGFs与其受体结合后通过Ras/细胞外信号调节激酶途径、PI3-K途径、影响Na /H 交换以及抑制肝星状细胞凋亡等方式促进肝星状细胞增殖,从而加速肝纤维化.