阿托伐他汀对慢性肾衰竭大鼠外周血内皮祖细胞的影响

目的探讨阿托伐他汀对慢性肾衰竭大鼠外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量和功能的影响。方法采用分阶段5/6肾切除制备大鼠慢性肾衰竭模型。实验动物随机分为4组:假手术组、慢性肾衰竭组(模型组)、8mg.kg-1.d-1阿托伐他汀干预组(小剂量组)、16mg.kg-1.d-1阿托伐他汀干预组(大剂量组)。大鼠阿托伐他汀灌胃8周后,取其外周血分离与培养EPCs,并检测EPCs数量及其增殖、黏附能力。结果与假手术组比较,慢性肾衰竭大鼠外周血EPCs数量及其增殖、黏附能力均下降(P<0.05)。应用阿托伐他汀能明显增加慢性肾衰竭大鼠外周血EPCs数量,改善外周血EPCs增殖、黏附能力(P<0.05),并且呈剂量依赖性。结论阿托伐他汀可改善慢性肾衰竭大鼠外周血EPCs的数量和功能。     

白藜三醇对人外周血内皮祖细胞功能的影响

目的 观察白藜三醇(Res)对人外周血内皮祖细胞(EPCs)功能的影响.方法 密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞,培养7 d后,收集贴壁细胞并加入Res(1、10、25、50 μmol/L)干预一定时间(6、12、24、48 h).激光共聚焦显微镜和流式细胞术鉴定EPCs,分别观察EPCs的增殖、黏附、迁移和体外血管生成能力.结果 Res促进外周血EPCs扩增,50 μmol/L Res作用24 h对EPCs数量的影响最为显著(P<0.01).Res也显著改善了外周血EPCs的增殖、黏附、迁移和体外血管生成能力.结论 Res可增加EPCs数量并改善其功能.     

阿托伐他汀对外周血培养内皮祖细胞数量及功能的影响

目的 观察阿托伐他汀对体外培养外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的影响.方法 分离培养人外周血单个核细胞,分别接种在普通培养基(A组)及阿托伐他汀干预培养基(B组),7d后收集贴壁细胞进行分析.激光共聚焦显微镜下双染色阳性细胞鉴定为正在分化的EPCs,采用transwell小室、细胞计数法评估EPCs扩增、黏附及迁移能力的差别.结果 与A组相比,B组体外培养EPCs的数量显著增多,黏附及迁移能力显著提高.结论 阿托伐他汀在外周血EPCs培养中能促使细胞扩增,增强黏附及迁移功能,可作为EPCs培养的一种改良方法.     

Exendin-4对Ⅰ型糖尿病小鼠内皮祖细胞功能及AKT/eNOS信号通路的影响

目的探讨Exendin-4对Ⅰ型糖尿病小鼠内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)增殖、迁移、黏附、衰老的影响及对AKT/eNOS信号通路的影响。方法采用密度梯度离心法分离并培养6月龄Ⅰ型糖尿病小鼠EPCs,并用不同浓度的Exendin-4(1、5、10、25μmol·L^-1)处理EPCs,观察EPCs体外克隆形成及增殖能力。同时观察其对糖尿病小鼠EPCs迁移、黏附及衰老的影响。Western blot检测Exendin-4处理对EPCs蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(AKT/eNOS)信号通路的影响。结果Exendin-4处理可增加Ⅰ型糖尿病小鼠EPCs克隆形成及增殖能力,尤以10μmol·L^-1时作用效果最佳。Exendin-4处理可增加Ⅰ型糖尿病小鼠EPCs的体外迁移、黏附功能,并抑制细胞衰老。Western blot结果显示,Exendin-4可增强AKT及eNOS磷酸化水平,而GLP-1R抑制剂Exendin-9-39和AKT抑制剂MK-2206则可以阻断这种效应。结论Exendin-4可改善Ⅰ型糖尿病小鼠EPCs增殖、迁移、黏附能力并抑制细胞衰老,其机制可能与调控AKT/eNOS信号通路有关。     

脂联素对内皮祖细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的观察脂联素对氧化低密度脂蛋白（oxidative low density lipoprotein,Ox-LDL）诱导的人外周血内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）氧化损伤的保护作用,并探讨其可能的机制。方法密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,通过流式细胞仪鉴定内皮祖细胞。培养7d后,收集贴壁细胞并随机分为正常对照组、Ox-LDL组（10μg·mL-1）及脂联素干预组（Ox-LDL10μg·mL-1加脂联素,浓度分别为1.25,2.5,5μg·mL-1）,干预24h后采用细胞活力噻唑蓝（MTT）法测定细胞活力。并取各组细胞上清液行超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量检测。结果脂联素可以改善Ox-LDL诱导氧化损伤的EPCs的活力,增加SOD活性,降低MDA含量。结论脂联素对氧化损伤的EPCs具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶活性有关。     

黄芪甲苷对氧化低密度脂蛋白诱导内皮祖细胞炎症损伤的保护作用

目的 观察黄芪甲苷对氧化低密度脂蛋白(oxidative low density lipoprotein,ox-LDL)介导的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)炎症损伤的保护作用并探讨其可能机制。方法 密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,贴壁法培养EPCs。培养7 d后,收集贴壁细胞并随机分为对照组、ox-LDL组(100 μg·mL^-1)及黄芪干预组(ox-LDL 100 μg·mL^-1加黄芪甲苷,浓度分为2,10和50 μg·mL^-1),干预24 h后分别采用Matrigel体外成血管试验、Transwell小室法、黏附能力测定实验及细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)观察ox-LDL对EPCs成血管能力、迁移能力、黏附能力及增殖能力的影响,并取各组细胞培养上清液行白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量检测。结果 ox-LDL损伤后,外周血EPCs的成血管能力、迁移能力、黏附能力及增殖能力显著受损,伴随细胞上清液IL-6及TNF-α水平显著升高;黄芪甲苷干预24 h后,显著改善了EPCs的成血管、迁移、黏附及增殖能力,且黄芪甲苷各组IL-6及TNF-α水平显著降低。结论 黄芪甲苷对ox-LDL损伤后EPCs的细胞生物学功能有显著保护作用,其机制可能与抗炎症损伤有关。     

SDF-1对糖尿病外周血EPCs功能的影响及其与PI3K/AKT信号通路的关系

目的观察基质细胞衍生因子-1(SDF-1)对糖尿病外周血内皮祖细胞(EPCs)功能的影响,探讨SDF-1对EPCs的影响是否与PI3K/AKT信号通路有关。方法采集糖尿病患者(DM组)和健康对照者(HC组)外周血30 m L,提取并培养EPCs。(1)SDF-1干预组加入100μg/L SDF-1培养液,非干预组加入EGM-2MV培养基,采用Boyden小室和体外血管生成试剂盒观察EPCs的迁移和体外血管生成能力。(2)将培养的EPCs分为空白对照组、1μg/L SDF-1组、10μg/L SDF-1组、100μg/L SDF-1组、单纯AMD3100组及100μg/L SDF-1+AMD3100组,通过Western blot法检测各组EPCs中AKT蛋白的表达水平。结果 (1)无SDF-1干预时,DM组EPCs迁移和血管形成能力低于HC组,SDF-1干预后,2组的EPCs迁移和血管形成能力均较干预前增强,但DM组增强的幅度高于HC组。(2)同一浓度下,DM组的AKT蛋白表达水平均低于HC组(均P<0.01)。无论是DM组还是HC组,AKT蛋白的表达均随着加入SDF-1浓度的增加而呈递增趋势(P<0.05);100μg/L SDF-1+AMD3100组AKT蛋白的表达水平较100μg/L SDF-1组明显降低(P<0.05)。结论 SDF-1可增强外周血EPCs迁移和血管形成能力,对糖尿病患者效果更为明显,且SDF-1对EPCs的影响与PI3K/AKT信号通路有关。     

可溶性环氧化物水解酶抑制剂对内皮祖细胞迁移功能的影响

目的 研究不同浓度可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB对内皮祖细胞（EPCs）迁移功能的影响。方法 密度梯度离心法分离培养小鼠骨髓来源EPCs,不同浓度t-AUCB预干预EPCs,检测干预后EPCs体外迁移情况。结果 从0~100μmol/L,随着浓度增加,t-AUCB可呈浓度依赖性增强EPCs体外迁移能力。结论 可溶性环氧化物水解酶抑制剂t-AUCB参与正向调控EPCs迁移功能。     

钙调神经磷酸酶在人外周血内皮祖细胞增殖调节中的作用

目的观察钙调神经磷酸酶(CaN)活性改变对培养的人外周血内皮祖细胞(EPCs)增殖和凋亡的影响。方法密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,贴壁培养获得EPCs。依据干预方式分四组:对照组;苯肾上腺素(PE,10μmol/L)组;环孢素A(CsA,1μg/mL)组;CsA+PE组。比色法测定CaN活性和细胞增殖能力;TUNEL染色检测细胞凋亡。结果 PE干预能明显增加细胞CaN活性,促进细胞增殖能力;CsA作用可明显抑制PE促进的CaN活性和细胞增殖,增加EPCs凋亡率。结论在培养的人外周血来源EPCs,CaN活性的维持具有促进细胞增殖和防止细胞凋亡的作用。     

不同浓度雌激素对急性期高血压脑出血患者的内皮祖细胞功能及衰老的影响

目的分析不同浓度的雌激素干预急性期高血压脑出血患者的内皮祖细胞(EPCs)后其功能变化及对衰老的影响。方法选取2015年3月至2016年6月在我院神经内科进行治疗的男性患者80例,平均分为5组,一组向其培养液中添加等量0.9%氯化钠注射液,作为对照组,3组分别添加浓度为10nmol/L、100nmol/L、1μmol/L的雌激素,作为雌激素组,最后一组先用磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂干预1h后,再用1μmol/L的雌激素干预。分别观察分析雌激素对EPCs的功能及衰老的影响。结果 EPCs形成集落的数量与雌激素的浓度呈正比(t=0.314,P=0.004);EPCs细胞的黏附能力、增殖能力、迁移能力随着雌激素浓度的增加而增加(P值分别为0.003、0.004、0.004);EPCs细胞的血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质表达效果和抗衰老能力与雌激素浓度呈正比,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。拮抗剂LY对雌激素有抑制作用。结论雌激素可以促进急性期高血压脑出血患者的EPCs集落,可增强其黏附能力、增殖能力、迁移能力,有利于EPCs VEGF蛋白质的表达,可以很好地抑制EPCs衰老。     

同型半胱氨酸对内皮祖细胞增殖 黏附和凋亡的影响

目的观察不同浓度同型半胱氨酸(Hcy)对内皮祖细胞(EPCs)功能的影响。方法密度梯度离心法获取单个核细胞,培养7d后,收集贴壁细胞。在多波长激光共聚焦显微镜下,呈异硫氰酸荧光素标记的荆豆凝集素(FITC-UEA-I)和DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双染色阳性者为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs。不同浓度同型半胱氨酸组(10、50、100、200μmol/L)干预24h,分别测定EPCs的增殖、黏附和凋亡。结果与对照组比较,Hcy组呈剂量依赖性地损害EPCs的增殖、黏附,促进其凋亡。200μmol/L的Hcy组对EPCs影响最为显著(P<0.01)。结论Hcy损害EPCs的功能。     

2型老年糖尿病患者外周血内皮祖细胞黏附功能与sCD_(44)s黏附分子临床意义研究

目的观察2型糖尿病(T2DM)老年患者外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)黏附功能和sCD44s变化,探讨二者在T2DM发生发展中的作用。方法选择老年T2DM患者20例和正常对照10例,密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,接种在培养板内,培养7d后对贴壁细胞进行测定。流式细胞仪鉴定FITC标记荆豆凝血素Ⅰ(FITC-UEA-I)和DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白(DiI-acLDL)双阳性细胞为正常分化的EPCs。胰蛋白酶消化后计数贴壁细胞观察EPCs黏附能力。采用定量ELISA法测定10例老年糖尿病患者血清中sCD44s的含量。结果①T2DM患者外周血EPCs黏附细胞数较正常对照组显著减少(P<0.01);T2DM患者随血糖、糖化血红蛋白升高,EPCs黏附细胞数逐渐降低,两组间有统计学差异(P<0.05)。T2DM患者外周血sCD44s较正常对照组升高(P<0.05);T2DM患者随血糖、糖化血红蛋白升高,sCD44s逐渐升高,两组间无统计学差异(P>0.05)。②T2DM患者EPCs黏附能力与sCD44s二者间相关系数r=0.361(P>0.05),二者间无相关性。结论 T2DM患者外周血EPCs的黏附能力明显受损,但与血清中sCD44s的升高无相关性,EPCs的生物学功能仍需进一步研究。     

曲美他嗪对内皮祖细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的: 研究曲美他嗪(TMZ)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用。方法: 采用密度梯度离心法分离人脐带血单个核细胞,使用EBM-2完全培养基诱导单个核细胞向内皮祖细胞分化,经细胞形态学变化及流式细胞术测定内皮祖细胞特异性标记物CD133、CD34和VEGFR抗原来鉴定内皮祖细胞。体外建立内皮祖细胞过氧化氢(100 μmol·L^-1)损伤模型,加入不同浓度曲美他嗪(0.1,0.5,1,5 μmol·L^-1),观察曲美他嗪作用不同时间后(0.5,1,6,12 h)内皮祖细胞增殖、黏附、迁移、一氧化氮(NO)分泌能力的变化。结果: 曲美他嗪呈剂量及时间依赖性降低过氧化氢对内皮祖细胞的氧化应激损伤,保护内皮祖细胞增殖、黏附、迁移、分泌的生物学功能。结论: 曲美他嗪在氧化应激条件下对内皮祖细胞生物学功能的保护可能是其心血管保护作用的机制之一。     

黄芪提取物对大鼠骨髓源性内皮祖细胞的作用

摘要： 目的 探讨黄芪提取物对大鼠骨髓源性内皮祖细胞 （EPCs） 黏附、 迁移、 活力、 血管形成能力及内皮型一氧 化氮合成酶 （eNOS） 表达的影响。方法 体外培养、 分离和鉴定 EPCs, 设 10-4、 10-3、 10-2 g/L 黄芪提取物组和对照组。 倒置显微镜下观察并比较各组 EPCs 黏附、 迁移、 血管形成能力的差异; MTT 法检测 EPCs 的活力变化; RT-PCR 法检 测 EPCs 中 eNOS mRNA 的表达;Western blot 检测 EPCs 中 eNOS 蛋白的表达。结果 与对照组相比, 不同浓度黄芪 提取物组促 EPCs 黏附、 迁移、 血管形成能力均显著增强, 且呈浓度依赖性(F 值分别为 15.256、 13.633、 97.549, 均 P < 0.05); EPCs 的活力显著增加, 呈时间 （F 时间=9.755） 和浓度依赖性 （F 组间=10.018）; 且 EPCs 中 eNOS mRNA 和蛋白的表 达水平均明显升高, 呈浓度依赖性(F 值分别为 56.356、 77.125, 均 P < 0.05)。结论 黄芪提取物具有调控 EPCs 促血 管新生的作用, 该作用可能与上调eNOS 的表达水平密切相关。     

木瓜酶促进大鼠血管内皮细胞成血管的功能研究

目的　通过体外鼠细胞模型实验,检测木瓜酶在体外培养环境下对血管内皮细胞成血管向分化的促进功能。方法　采用P3代大鼠血管内皮细胞,将木瓜酶溶解于完全培养基内,按照10 μg/ml、50 μg/ml、100 μg/ml浓度配置含木瓜酶的完全培养基,与空白对照组共同培养0、7、14 d,通过逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测成血管分化相关基因VEGF（血管内皮生长因子）、CD31（血小板-内皮细胞粘附分子）的表达水平,通过CCK-8法检测不同组细胞的增殖活力。统计学方法为方差分析。结果　经14 d培养,添加木瓜酶的细胞VEGF、CD31表达水平及增殖能力显著高于空白对照组,木瓜酶浓度达到50 μg/ml时VEGF表达水平达到最高,为空白对照组的3.28倍,CD31表达水平随着木瓜酶浓度升高而升高,最高达到空白对照组的3.66倍。结论　适宜浓度的木瓜酶能够在体外促进内皮细胞的成血管分化及增殖,表明木瓜酶对血管组织形成具有一定的促进作用。     

eNOS:糖尿病内皮祖细胞功能失调的一个关键因素

糖尿病是由多种病因引起的,以慢性高血糖为特征的代谢紊乱综合征。糖尿病患者内皮祖细胞(EPCs)数目减少,动员、迁移、归巢、分化能力明显降低,这可能是引起糖尿病大血管并发症的主要原因之一。内皮型NO合酶(eNOS)是调节内皮祖细胞功能的关键酶。该文就eNOS与糖尿病内皮祖细胞功能失调的相关性进行综述,为糖尿病治疗提供新的思路。     

MK对人脐静脉内皮细胞增殖及迁移的影响

目的 通过研究midkine（MK）蛋白对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖、迁移的影响,阐明MK蛋白在血管生成中的作用.方法 选择HUVEC为研究对象进行细胞常规培养,分为5组分别给予不同浓度MK进行干预,实验组MK浓度分别为0.5、5、50和500 ng/ml,以未处理组作为对照组.利用CCK-8试剂盒检测MK对HUVEC增殖能力的影响,利用Transwell技术检测MK对HUVEC迁移能力的影响.结果 与对照组相比,5 ng/ml的MK作用24h和48 h可以促进细胞增殖,差异有统计学意义（P＜0.05）;5 ng/ml的MK作用24 h可以促进细胞迁移,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 一定浓度的MK作用于内皮细胞,可以促进其增殖和迁移,提示MK在血管生成中具有重要作用.     

麝香保心丸促进血管新生作用的活性成分筛选

目的对麝香保心丸中单体入血促进血管新生活性成分进行筛选,以确定其中发挥促进血管新生作用的药效物质。方法采用实时细胞分析仪（xCELLigence系统）检测麝香保心丸及其单体入血成分对内皮细胞增殖、迁移活性的影响,并建立细胞体外成管模型和大鼠主动脉环模型评价麝香保心丸及其入血单体成分的体外血管新生活性。结果细胞增殖、迁移及体外成管实验结果显示,不同浓度的麝香保心丸（10^-4-10^-2μg/ml）、人参皂苷Rg3（1-10μmol/L）和人参皂苷Rh2（1-10μmol/L）能够明显促进人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖、迁移及管腔结构形成（P〈0.05）。此外,与对照组相比,高浓度麝香保心丸（10-2μg/ml）、Rg3（10μmol/L）和Rh2（10μmol/L）具有诱导主动脉环内皮细胞出芽的活性（P〈0.05）。结论麝香保心丸及人参皂苷Rg3、Rh2均在体外具有促进血管新生的活性。