内放射对兔颈动脉术后中膜平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的　通过血管内放射防治颈动脉内膜剥脱术 (CEA)后再狭窄 ,动态观察其对中膜平滑肌细胞(SMC)凋亡和增殖的影响 ,并初步探讨其防治再狭窄的可能机理。方法　 4 0只兔行CEA后 ,随机分为 4组 ,分别给予 0Gy、10Gy、2 0Gy及 4 0Gy放射剂量的3 2 P ,于术后 3d、7d、14d、2 8d及 5 6d分别处死动物 ,取出血管标本进行病理组织学分析。结果　术后除 3d及 7d外 ,对照组发生明显内、中膜增生及管腔狭窄 ,而内放射组可见内、中膜增生明显受抑制 ,管腔面积缩小显著减轻 (P<0 .0 5 )。SMC凋亡率和细胞增殖核抗原 (PCNA)阳性细胞均于术后 3d增加 ,7d时达高峰 ,治疗组与对照组比较差异有显著性意义 (P<0 .0 1) ;2 0Gy和 4 0Gy的作用明显强于 10Gy组 (P<0 .0 1)。结论　内放射治疗可能是通过抑制SMC增殖、迁移 ,诱导SMC凋亡 ,防治再狭窄 ,并且随剂量呈递增效应 ;球囊损伤后早期以细胞增生和凋亡为主要表现 ,晚期表现为内、中膜面积的增加     

低剂量β-射线预防自体移植静脉内膜增生和狭窄的实验研究

目的 观察不同剂量^32P照射对兔自体移植静脉（AVG）内膜增生和狭窄的预防作用。方法 用苏木素-伊红（HE）染色、增殖细胞核抗原（PCNA）1免疫组织化学染色和计算机图像分析等方法观察每平方厘米25.9、51.8、103.6和207.2MBq/cm^2^32P照射30min后AVG内膜面积、平滑肌细胞（SMC）增殖和管腔相对丢失率,并与卡托普利治疗效果比较。结果 207.2MBq/cm^2和103.6MBq/cm^2组无明显新生内膜形成,但血管结构,细胞大量坏死;51.8MBq/cm^2组少量新生内膜形成,血管结构完整,内膜面积、SMC增殖和管腔丢失明显低于对照组和卡托普利治疗组;25.9MBq/cm^2组各指标与对照组及卡托普利组差异无显著性。结论 低剂量^32P照射（51.8MBq/cm^2,30min)可有效抑制AVG内膜增生和狭窄,且作用优于卡托普利。     

激素对重症肌无力胸腺细胞增殖和凋亡的影响

目的　通过观察激素对胸腺细胞凋亡及Fas表达的影响 ,探讨糖皮质激素、雌激素、甲状腺素在重症肌无力(MG)发生、发展和治疗中的作用。方法　用流式细胞术分析胸腺细胞Fas、CD4 和CD8分子的表达 ;用琼脂糖凝胶电泳和细胞形态学观察细胞凋亡 ;用噻唑蓝 (MTT)比色分析法观察细胞的增殖情况。结果　地塞米松和雌激素均能抑制MG患者胸腺细胞增殖 ,对胸腺细胞的细胞增殖抑制率分别为 63.72 %和 61 .0 6% ,胸腺细胞DNA电泳可见梯状条带。甲状腺素可促进胸腺细胞增殖。地塞米松诱导MG患者胸腺细胞Fas表达百分率增加 ,数据为 (2 0 .38±6 .0 7) % ,与空白对照组 (1 2 .43± 4.32 ) %相比 ,差异有显著性(P<0 .0 5)。结论　激素对MG患者胸腺细胞增殖和凋亡有显著影响     

牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察牛磺酸对系膜细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其作用的可能机制。方法 用噻唑蓝MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡，吖啶噔活体染色观察细胞凋亡形态，免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测cjn,cfos表达。结果 在5－50mmol/L浓度范围内牛磺酸能剂量依赖性地抑制系膜细胞增殖，可使G0－G1期细胞增多，S期细胞减少，并能明显抑制c-jun,c-fos的表达（P＜0．01），而牛磺酸并不诱导系膜细胞的凋亡。结论 牛磺酸可显著抑制系膜细胞增殖，使系膜细胞阻滞于G0－G1期；牛磺酸对系膜细胞增殖的抑制作用与其抑制c-jun,c-fos的表达有关。牛磺酸对系膜细胞凋亡无诱导作用。     

苯肾上腺素对体外培养人前列腺平滑肌细胞增殖及凋亡的作用

目的探讨苯肾上腺素（PE）对体外培养人前列腺平滑肌细胞增殖及凋亡的作用。方法将原代培养得到的3—5代人前列腺平滑肌细胞随机分组，各组加入浓度为0．1μmol／L～100μmol／L的PE和／或10μmol／L a1受体阻滞剂酚妥拉明（Ph），以噻唑蓝（MTT）检测细胞增殖情况．原位凋亡法（TUNEL）检测细胞凋亡情况。结果PE浓度大于1μmol／L时对前列腺平滑肌细胞有诱导增殖和抗凋亡作用（P均〈0.05），并且存在浓度依赖性。r分别为0．90和-0．893（P均〈0．05）；10μmol／L Ph能够拮抗PE的诱导增殖和抗凋亡作用（P〈0．01）。结论PE可以通过a1受体信号传导途径诱导体外前列腺平滑肌细胞增殖增加和凋亡减少。     

雷帕霉素对肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度雷帕霉素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 使用不同浓度雷帕霉素（1 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、8 μg/L、16 μg/L）处理大鼠肾小球系膜细胞,并设正常对照组。MTT法测不同浓度雷帕霉素干预24 h、48 h、72 h后对细胞增殖的影响,并描记生长曲线。干预72 h后,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各浓度雷帕霉素组细胞周期负调蛋白p27和p53的mRNA和蛋白表达变化;用流式细胞计量术检测各浓度雷帕霉素组细胞周期及凋亡率。 结果 小剂量雷帕霉素（1 μg/L）对系膜细胞增殖即具有明显的抑制作用,停滞于G1期的细胞数明显增加,但对系膜细胞凋亡无明显影响。较大剂量雷帕霉素(8~16 μg/L)能够明显增加肾小球系膜细胞凋亡。雷帕霉素能够增加肾小球系膜细胞p27、p53 mRNA和蛋白表达,且呈剂量依赖性。 结论 雷帕霉素可能通过增加p27、p53表达抑制肾小球系膜细胞增殖和促进系膜细胞凋亡。     

p27kip1基因表达对大鼠移植静脉内膜平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的观察以聚乳酸聚乙醇酸（PLGA）纳米粒子为载体的人p27^kip1基因局部转染自体移植静脉后，对大鼠静脉内膜平滑肌细胞增殖及凋亡的影响。方法Wistar大鼠120只建立自体静脉移植模型，随机分成3组。转基因组：移植静脉转染以PLGA纳米粒子为载体的p27^kip1基因；空白对照组：转染不含有p27^kip1基因的单纯PLGA纳米粒子；单纯静脉移植组：使用生理盐水。分别于术后3、7、14、28d取材，常规HE、Verhoeff弹力纤维染色，Western blot检测p27^kip1蛋白的表达，免疫组化（SABC）法检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达、TUNEL法观察内膜平滑肌细胞凋亡的动态变化。结果转基因组内膜中p27^kip1蛋白表达水平高于其他组；内膜平均厚度7、14、28d低于其他2组（P〈0．01）；转基因组内膜PCNA的表达7、14d明显受到抑制（P〈0．01），平滑肌细胞的凋亡细胞百分比于7、14d较对照组明显增加（P〈0．01），单纯静脉移植组与空白对照组之间各项监测指标差异无统计学意义。结论p27^kip1基因的过表达能够有效抑制自体静脉移植后的内膜增生（IH），促进平滑肌细胞的凋亡。     

肝癌组织经32P玻璃微球内放射治疗后的细胞凋亡改变

目的　了解经内放射治疗后肝癌细胞是否产生凋亡以及内放射对癌周组织的影响。方法　对我院1994～ 1998年收治的 4 4例不能切除的晚期肝癌患者施行3 2 P玻璃微球 (3 2 P GMS)肝动脉灌注治疗后 2～ 6个月 ,有 3例肝癌得以二期切除 ,作为治疗组 ;另外选择相应年龄、相同部位、相同分化程度的可切除的 4例肝癌作为对照组。将切除的肝癌组织行TUNEL染色并对其观察计数 ,计算凋亡指数。结果　肝癌细胞凋亡指数治疗组为 2 9%～ 34% ,平均 (31± 16 ) % ;而对照组为 4 %～ 6 % ,平均 (5± 12 .2 ) %。癌周组织凋亡指数治疗组为 2 7%～ 37% ,平均 (35±11) % ;对照组为 0 .3%～ 5 .0 % ,平均 (4.1± 3.3) %。结论　3 2 P GMS内放射治疗肝癌后 ,能较长时间促进肝癌细胞及癌周组织产生细胞凋亡     

正常和异常肝组织增生中细胞增殖与凋亡的关系

目的 探讨正常和异常肝细胞增生过程中,细胞周期调控下细胞增殖与凋亡关系的异同。方法 分别以大鼠肝切除后肝再生和二乙基亚硝胺（DEN）诱导的大鼠肝癌为正常（40只）及异常（60只）组织增生模型;以Ki-67抗原检测和Sub-G1法分别作为细胞增殖和细胞凋亡定量分析方法：凋亡细胞比例（Ap）与Ki－67阳性细胞比例（Ki）之比值（Ap/Ki）为描述两者关系的指标。结果 肝再生和诱癌发生肝硬化以前的Ap和Ki基本呈正比关系,Ap/Ki峰值出现。结论 细胞增殖和细胞凋亡相伴相随,始终贯穿于正常或异常肝组织增生的全过程;对正常组织增生,细胞凋亡可限制其增生速度和规模。对异常组织增生,还监测和清除异常细胞;应以Ap/Ki作为衡量细胞凋亡在组织增生各时期所具有作用之重要指标。     

P物质对病理性瘢痕成纤维细胞增殖及凋亡影响的实验研究

目的探讨P物质(SP)对不同病理性瘢痕成纤维细胞(Fb)增殖及凋亡的影响。方法增生性瘢痕、瘢痕疙瘩及手术剩余正常皮肤标本取自笔者单位12例烧伤患者,采用组织块培养法体外培养Fb并传至6-8代。根据DMEM培养液中培养物质的不同分为SP组(含1×10-6 mol／L SP)、SP+SP受体拮抗剂(spantide)组(含1×10-6 mol／L SP、3×10-5 mol／L spantide)、空白对照组(含体积分数10％胎牛血清)。采用噻唑蓝比色法和流式细胞仪检测SP、spantide对瘢痕疙瘩Fb(KSF)、增生性瘢痕Fb(HSF)及正常真皮Fb(NDF)增殖活性[吸光度(A)值]及凋亡率的影响;另取1×10-6 mol／L SP分别培养Fb 24-120 h,以及SP组划分出1×10-9-1×10-5 mol／L的浓度梯度,检测SP对上述3组不同样本中Fb作用的时间、剂量效应。结果空白对照组各样本Fb的A值及凋亡率无明显差异。SP组KSF、HSF、NDF的A值分别为0．656±0．071、0．525±0．064、0．404±0．063,凋亡率分别为(1．5±0．3)％、(4．0±0．5)％、(5．5±0．7)％,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P< 0．05);SP对Fb作用的强弱为KSF>HSF>NDF。SP+spantide组部分抑制SP对KSF的作用而完全抑制其对HSF、NDF的作用。SP作用的时间、剂量效应检测结果显示,SP对KSF的作用较HSF、NDF更加灵敏、持久。结论SP对不同病理性瘢痕Fb增殖、凋亡的影响符合病理性瘢痕的临床特征,提示SP在其形成过程中发挥了重要作用。     

Cilostazol suppresses neointimal hyperplasia in canine vein grafts

Purpose  To investigate whether cilostazol, a cyclic adenosine monophosphate (cAMP) phosphodiesterase inhibitor, suppresses intimal hyperplasia in canine vein grafts, and to elucidate its mechanisms in terms of cell proliferation and apoptosis. Methods  Bilateral reversed jugular vein interposition grafts of the common carotid artery were performed in 12 beagle dogs. Starting from 7 days before surgery, either cilostazol (30 mg/day; n = 6) or a placebo (n = 6) was given orally twice daily. Vein grafts were harvested at 1 or 4 weeks, and fixed under pressure for histological examination. Results  By 1 week after implantation, the cilostazol group showed significantly less cell proliferation than the placebo group. By 4 weeks after implantation, intimal and medial thickness was significantly thinner in the cilostazol group than in the placebo group. There was significantly more apoptosis in the placebo group than in the cilostazol group at both time points. Conclusion  Cilostazol suppressed the development of intimal hyperplasia in canine autogenous vein grafts. Thus, it may be associated with the modulation of cell proliferation and apoptosis.     

大鼠颈静脉分支-颈动脉间置模型新生内膜细胞来源研究

目的探讨大鼠颈静脉分支-颈动脉间置模型新生内膜细胞来源。方法建立SD大鼠颈静脉分支-颈动脉间置模型,分别于术后1、3、7、14和28d取静脉移植血管,定量分析新生内膜厚度,并进行α-SM—actin和CD34免疫组织化学分析。结果新生内膜增生在28d时最明显,血管吻合部位狭窄最严重,增生厚度近端（65．2±4．6）μm,远端（64．7±5．3）μm,中段（63．5±5．6）μm。新生内膜细胞主要来源于内皮细胞、相邻动脉血管平滑肌细胞或循环祖细胞,以新生内膜腔面为著。结论静脉移植血管新生内膜细胞主要来源于静脉移植血管本身内皮细胞、相邻动脉血管平滑肌细胞或循环祖细胞,提示可于血管吻合完成后进行局部干预或术后尽早全身用药,以防止移植血管狭窄。     

可降解外套管减轻自体移植静脉内膜增生的动物模型建立

目的建立可降解外套管束缚自体移植静脉减轻静脉内膜增生的动物模型,探讨可降解材料做外套管对防止或延缓桥静脉再狭窄的可行性.方法以"no-touh"方法取犬股静脉,调转后移植到同侧股动脉,其中一侧加用聚乳酸-聚乙醇酸(PLGA)做成的圆柱形外套管(外套管组),另一侧单纯静脉移植(对照组).超声多普勒观察移植静脉是否通畅.术后4周和24周再次手术取移植静脉段.病理切片行苏木素-伊红hE)染色测量移植静脉中段内膜、中层厚度;维多利亚蓝(VB)染色观察胶原纤维、弹力纤维;免疫组织化学平滑肌α-actin抗体染色鉴定静脉平滑肌.结果(1)所有动静脉吻合口无狭窄,术后早期,外套管组2条静脉血栓形成、闭塞,对照组1条静脉血栓形成、闭塞;(2)外套管变化术后4周内外套管无变形,6周开始变形,24周完全降解;(3)静脉内膜和中层厚度外套管组静脉内膜增生轻,厚度均匀,对照组静脉内膜不均匀增厚,术后4周和24周外套管组静脉中段的内膜及中层厚度均显著小于对照组,差异有非常显著性 (P< 0.01); (4)移植静脉新生内膜主要由平滑肌细胞(SMCs)和胶原纤维构成,术后4周和24周对照组两者含量丰富,而外套管组含量少于对照组且排列整齐.结论该动物模型设计合理,PLGA可以做移植静脉的外套管材料,外套管降解前后均可明显减轻移植静脉内膜和中层增生,减少平滑肌细胞和胶原纤维在内膜沉积.     

Potential role of vacuolar H-adenosine triphosphatase in neointimal formation in cultured human saphenous vein

OBJECTIVE: Vacuolar H(+)-adenosine triphosphatase plays a pivotal role in pH regulation and molecular transport across the vacuolar membranes and is involved in cell proliferation and transformation. In the present study, possible involvement of vacuolar H(+)-adenosine triphosphatase in neointimal formation was investigated in an organ culture model of human saphenous vein. Methods and results: Cultured saphenous vein segments developed neointimal formation and marked thickening of the media within 14 days. Neointimal formation and medial thickening were completely inhibited by 10 nmol/L bafilomycin A(1), a selective inhibitor of vacuolar H(+)-adenosine triphosphatase, although structurally related macrolide antibiotics FK-506 and erythromycin were without an effect. The neointimal cells were positive for alpha-smooth muscle actin and vimentin but negative for desmin, indicative of myofibroblasts. The emergence of myofibroblasts was inhibited, and endothelial cells were preserved in the saphenous vein segments treated with bafilomycin A(1). Uptake of bromodeoxyuridine, a proliferation marker, by myofibroblasts was abrogated in the saphenous vein segments treated with 10 nmol/L bafilomycin A(1). Detection of apoptotic cells by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling concomitant with identification of desmin-expressing smooth muscle cells demonstrated that neointimal myofibroblasts, but not medial smooth muscle cells, that expressed desmin underwent apoptosis by treatment with bafilomycin A(1). CONCLUSIONS: These results suggest that vacuolar H(+)-adenosine triphosphatase may be involved in myofibroblast growth that contributes to neointimal formation and medial thickening in cultured human saphenous vein. Increased sensitivity of myofibroblasts, but not endothelial cells, and differentiated smooth muscle cells to bafilomycin A(1) may have potential therapeutic implications in the treatment for vein graft disease.     

血管外雷帕霉素缓释涂层抑制移植静脉再狭窄

目的观察血管周围局部应用雷帕霉素对兔自体移植静脉段内膜过度增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法大耳白兔30只,采用自身对照设计建立模型。任取一侧静脉旁路为干预组,外涂含0.3 mg雷帕霉素的Pluronic凝胶;另一侧为对照组,外涂空凝胶。4周后测旁路静脉内膜厚度、细胞的增殖指数及PCNA、P27~(kipl)免疫组化阳性细胞数。并于术后1、2、4、8周检测血管壁中雷帕霉素的含量。结果干预组旁路静脉内膜厚度(63.72±14.00)μm与对照组(77.76±14.90)μm相比,增生明显减少(P<0.05)。增殖指数对照组(29.30±7.15)明显高于干预组(20.10±9.48)(P<0.05)。在干预组和对照组均有阳性PCNA免疫组化染色表达细胞,正常静脉未见阳性表达,对照组较干预组细胞的阳性表达更强(P<0.05)。P27~(kipl)免疫组化染色干预组见阳性表达细胞,对照组表达阴性(P<0.05)。干预组血管壁术后1～8周均可测到雷帕霉素,含量呈逐步递减趋势。结论血管周围局部应用雷帕霉素具有抑制兔移植静脉内膜过度增殖的作用;这种作用和P27~(kipl)的上调表达有关。     

组织型纤溶酶原激活因子基因对移植静脉再狭窄的影响

目的探讨组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)局部转基因表达对移植静脉血栓形成和内膜增生的影响。方法 72只兔建立颈外静脉-颈总动脉移植模型,并随机分为基因治疗组(n= 24)、载体对照组(n=24)和空白对照组(n=24),进行局部基因转染,于术后不同时点取材,逆转录 -聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blot)和底物发色法分别检测移植静脉t-PA基因表达和活性变化,放射标记计数观察其对血小板沉积的影响,病理形态学观察移植血管新生内膜增生情况。结果术后2、5、14、28 d,转基因组检测到移植静脉外源性t-PA mRNA的转录和蛋白表达,其活性分别为(370．63±59．44)、(344．13±48．47)、(252．87±51．80)和(161．75±68．94)U／g,对照组各时点则未检测到纤溶酶活性。术后2 d,转基因组、载体组和空白对照组平均血小板沉积数分别为(85．04±21．58)×10 6,(225．87±85．13)×10 6和(211．57±78．02)×10 6,转基因组明显少于载体组和空白对照组(P<0．05)。术后5、14、28、60 d,转基因组新生内膜面积、内膜中膜面积比均明显小于对照组。结论局部转染t-PA基因,能抑制移植静脉血栓形成,减轻新内膜的增殖,从而有效预防再狭窄的发生。     

Calcium channel antagonist verapamil inhibits neointimal formation and enhances apoptosis in a vascular graft model

BACKGROUND: The potential of the calcium channel antagonist verapamil to cause apoptosis (programmed cell death) is of considerable importance in arterial injury where the loss of smooth muscle cells may contribute to a reduction in intimal hyperplasia development. The aim of this study was to determine whether verapamil induces vascular cell apoptosis after carotid artery synthetic grafting. METHODS: Thirty-two adult-female Merino sheep received gelatin sealed fusiform shape-Dacron grafts into the left common carotid artery at day 0. After operation animals were randomly allocated to either a control group or one of three treatment groups (groups 2, 3, and 4). Group 1 animals (n = 9) received no treatment. For the treatment groups, intravenous verapamil was given at a rate of 0.5 mg/kg per day in two divided doses. Group 2, 3, and 4 sheep were treated for 1, 2, and 4 weeks, respectively. Animals were sacrificed at 4 weeks. Apoptosis was detected by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-fluorescent labelling. Proliferating cells and their phenotype were determined by doublestaining with antiproliferation cellular nuclei antigen and anti-alpha-actin or anti-HAM-56. RESULTS: There were significantly more apoptotic cells in the perigraft adventitia in the 4-week treatment group than in the control group (P <0.05). The average number of proliferating cells at 2 and 4 weeks in the intima were significantly less than in the control (P <0.05). The average numbers of macrophages inside graft matrix in the 2 and 4 weeks treatment groups were significantly less than for the control (P <0.05). The number of proliferating cells inside the graft was significantly lower at 4 weeks compared with control (P <0.05). There was negative correlation between intimal PCNA expression and perigraft apoptotic expression level (P <0.05). CONCLUSION: The antihypertensive agent verapamil inhibits intimal hyperplasia through enhancing adventitial cell apoptosis and inhibiting intimal cell proliferation after vascular grafting.