“即刻法”用于免疫检验室内质控的有关问题探讨

"即刻法"即Crubbs氏法[1]被推荐作为ELISA项目检验的室内质控方法,简便实用,易于掌握.笔者将在实际应用中遇到的异常测定值问题及解决方法报道如下.     

实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用

目的研究实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用。方法对PCR在不同食品致病菌的检测效果进行比较,分析PCR在食品致病菌检测中的作用。结果实时荧光定量PCR技术在食品致病菌包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等多种致病菌都有着较为有效地检测结果。结论作为一种新兴的检测方法,PCR技术可以快速,准确地检测食品中的各种致病菌。为保障消费者的食品安全工作做出了很大的贡献。     

实时荧光定量PCR检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎中的价值

目的：分析实时荧光定量PCR（Real Time PCR）检测HBV—DNA在诊断乙型肝炎病毒（HBV）中的作用。方法：分别用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测389份临床病人血清，并用t检验分析比较HBV—DNA阳性结果。结果：在血清学标志物组合模式中，多种组合都可检测出HBV—DNA含量，尤其是在传统认为没有HBV感染的血清中也可检测到一定程度的HBV—DNA含量。结论：实时荧光定量PCR检测HBV—DNA是乙肝病毒在体内复制和传染的可靠指标，特别是在反映HBeAg阴性的乙型肝炎患者是否有病毒复制的诊断中有重要意义。     

实时荧光定量PCR检测胸水端粒酶活性

端粒酶检测方法从端粒酶重复序列扩增方法（TRAP）、TRAP-ELISA法逐渐发展为实时荧光定量PCR（FQ—PCR）方法。本文采用的FQ—PCR方法对胸水内的端粒酶活性进行检测，现报道如下。     

实时荧光定量PCR在人血液循环DNA检测中的应用

循环DNA主要存在于人血浆和血清等体液中，在多种人类疾病中含量升高，具有临床诊断意义和预后判断价值。本研究以人工重组质粒DNA为内参照物，建立双重实时荧光定量PCR检测方法，对健康人血浆和血清DNA含量进行定量测定。[第一段]     

实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体的分析

目的对实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体的效果进行分析。方法选取我院拟诊为泌尿生殖道感染患者作为研究样本,对所有患者的分泌物进行分析,分别通过金免疫层析CT抗原检测法实施检验,以及通过RT-PCR对CT的核酸进行检测,对比最终的两组检测结果。结果应用RT-PCR检测检测方法阳性检出效果明显高于对照组的阳性检出效果,对比呈现显著差异,有统计学分析价值(P<0.05)。结论在对沙眼衣原体感染患者进行诊断检查时,应用RT-PCR检测准确率相对较高,能够成为常规方法的补充,值得在临床上广泛应用普及。     

荧光实时定量PCR检测端粒长度

目的 应用定量聚合酶链反应(PCR)方法测量端粒长度.方法 随机选取63例健康人外周血样本,采用定量PCR方法测量端粒长度相对T/S比率、DNA印迹法测定端粒限制性片段(TRF)长度并进行相关性分析.结果 定量PCR测量端粒长度相对T/S比率为0.76±0.27,DNA印迹法测量平均TRF值为9.20±1.12,两种方法测量的结果 相关性分析R2=0.575,P＜0.01.结果 采用定量PCR方法测量端粒长度具有重复性好、省时、简便、可靠,可高通量的处理大量样品的特点,端粒的长短同癌症的发生有密切联系.本方法值得推广应用于癌症的遗传学和分子流行病学研究.     

TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR法检测幽门螺杆菌

目的建立TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测幽门螺杆菌(HP)的方法。方法针对HP cagA基因设计特异性引物和探针,建立TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异性、灵敏度和重复性。用该法对肝癌、肝硬化患者腹水及全血,猪、金黄地鼠、猴、犬、兔、豚鼠、大鼠、小鼠的全血、粪便、肠共1 201份标本进行检测,同时作常规细菌分离和测序分析。结果本方法特异性为100%,最低可检测2.2×101copies/μL的质粒DNA。标准曲线表明其具有良好线性关系,回归方程为:Y=-3.306X+38.633,相关系数(r)为0.999,扩增效率为100.648%。批内相对标准偏差(RSD)为0.19%～1.2%,批间RSD为0.14%～3.4%,RSD均<5%。上述1 201份标本用本法检出HP阳性130份,常规细菌分离法仅检出2份HP阳性。测序结果表明,与GenBank中收录的HP序列同源性为99%～100%。结论建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR法特异性和灵敏度高,重复性良好,适用于HP感染的检测。     

实时定量荧光PCR检测白血病融合基因

本研究旨在建立实时定量荧光PCR的方法并检测CML、ALL、APL患者中融合基因的拷贝数,观察患者体内融合基因转录水平的变化。构建质粒标准品,制作标准曲线。检测49例患者的骨髓及外周血标本130份,对个别患者连续监测融合基因转录表达水平,结果表明：在82．4％（28／34）的CML患者中检测到BCR—ABL^p210阳性（BCR—ABLP210／ABL比值为0．01～3．19）,其中在1例CML急淋变患者检测到BCR—ABL^p210。和BCR—ABL^p190双阳性;在66．7％（4／6）的ALL患者中检测到BCR—ABL阳性,其中2例BCR—ABL^p210阳性,2例BCR—ABL^p190阳性;在77．8％（7／9）的APL患者中检测到PML—RARa融合基因阳性（PML—RARa／ABL比值为0．0014～3．199）,其中3例为长型,3例为短型,1例为变异型,检测结果为阴性的患者处于缓解期;连续监测患者融合基因转录表达水平与临床缓解和复发的变化情况相吻合。结论：实时定量荧光PCR技术成熟、操作简便,检测白血病融合基因结果准确稳定,对于临床明确诊断、具体分型、动态观测肿瘤负荷、选择治疗方案、评估治疗效果和预后都有较大价值,值得推广应用。     

即刻法室内质控在ELISA实验中的应用

室内质控是保证血液质量的重要措施之一 ,EL ISA实验的质控一般采用临床化学实验质控的方法。由于 ELISA试剂盒效期短、批号更换频繁 ,试剂昂贵。加上其灵敏度高、特异性强 ,批内测定不能代表批间测定 [1] ,故实际操作较难。笔者在EL ISA实验中采用即刻法室内质控 ,并绘制了即刻法室内质控表。取得了良好的效果。现以 EL ISA法检测抗 - HIV为例报告如下。材料与方法1　质控血清　由卫生部临检中心提供 ,抗 - HIV4NCU/ml,批号 0 0 0 2。2　试验　抗 - HIV ELISA试剂盒 ,由北京金豪公司提供 ,批号 2 0 0 0 0 5 2 3。3　仪器　 …     

探讨“即刻法”在ELISA室内质控应用中的局限性

用“即刻法”进行室内质控有它的科学性和实用性因而被广泛采用。笔者在实际工作中发现“即刻法”也有其局限性，有碍实验获得正确的平均值和标准差．影响建立常规质控图的框架。现以ELISA法检测抗-HCV和抗-HIV两组数据为例，将在实际应用中遇到的问题报道如下。     

探讨“即刻法”在ELISA室内质控应用中的局限性

用“即刻法”进行室内质控有它的科学性和实用性因而被广泛采用。笔者在实际工作中发现“即刻法”也有其局限性，有碍实验获得正确的平均值和标准差．影响建立常规质控图的框架。现以ELISA法检测抗-HCV和抗-HIV两组数据为例，将在实际应用中遇到的问题报道如下。     

实时荧光定量PCR法检测产气荚膜梭菌

目的:运用实时荧光定量PCR法检测产气荚膜梭菌,为早期快速诊断气性坏疽提供新方法.方法:以产气荚膜梭菌16s rDNA基因序列为模板,在其保守区域设计特异性引物与探针,将PCR扩增所得产物片段克隆,作为定量检测的标准品,绘制标准曲线.并对荧光定量PCR体系与反应条件进行优化,验证方法的特异性、敏感性、重复性及可行性.结果:实时荧光定量PCR法对产气荚膜梭菌的检测具有高度特异性,与创伤弧菌等24种相关细菌等均无交叉反应;检测灵敏度以纯菌计数达9×102cfu/mL,相当于9 cfu/反应;反应体系有较高稳定性;整个操作过程仅需3 h;300例创伤可疑分泌物样本的荧光定量PCR检测结果与细菌培养结果一致.结论:实时荧光定量PCR法特异、灵敏、快速,适用于产气荚膜梭菌的临床检测及突发事件的批量检测.     

血站室内质控即刻法在ELISA检测中的应用

目前，血站对献血者进行乙型肝炎表面抗原（HBsAg），丙型肝炎病毒抗体（抗－HCV）及艾滋病病毒抗体（抗－HIV）的筛选，主要采用酶联免疫吸附试验（ELISA）。要保证检测结果的可靠性，保障供血质量，就必须对ELISA检测开展室内质控。我站应用即刻法对ELISA检测进行室内质控，并绘制了即刻法室内质控表。通过二年来的实践证明效果良好，现以抗－HIV为例，将实验方法报告如下：１材料与方法１．１仪器：WellscanMK２型酶标仪及洗板机。１．２试剂：抗HIVELISA试剂盒，由上海科华生物工程有限公司提供，批号２００１０３０。…     

Excel电子表格在即刻法室内质控中的应用

即刻法室内质控因简便实用被临床实验室广泛采用,但在日常工作中手工计算、绘制质控图既繁琐又容易出错.Microsoft Excel具有强大的数据处理功能,笔者应用Excel电子表格制作了自动的即刻法室内质控图,取得了良好的效果.现以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的即刻法室内质控过程为例,介绍如下.     

斑点杂交与荧光定量PCR检测血清HBV-DNA的临床意义

ＨＢＶ ＤＮＡ是一种十分重要的ＨＢＶ感染标志 ,是直接反映ＨＢＶ的存在、病毒活动性复制与具有传染性的标志 ,对于确定ＨＢＶ感染的诊断有重要价值[1] 。目前ＨＢＶ感染的基因诊断技术已从定性发展到定量[2 ] 。斑点杂交定性检测不能直接反映病毒负荷量。近年来 ,荧光定量ＰＣＲ逐渐应用于临床检测ＨＢＶ ＤＮＡ。通过对 10 5例慢性乙型肝炎患者用斑点杂交与荧光定量ＰＣＲ两种方法同时进行血清ＨＢＶ ＤＮＡ检测 ,以了解两种方法的一致性 ,探讨两者的临床应用价值及问题。1　材料和方法1.1　研究对象　 2 0 0 1年 3至 7月间中山医科大学…     

乙型肝炎病毒核酸的实时荧光定量PCR检测及其临床意义

目的建立实时荧光定量PCR(rea l-tim e fluorescence quan titative PCR,RFQ-PCR)检测HBV-DNA含量的方法,探讨其在乙型肝炎预防、诊断、治疗及判断病情等方面的临床应用价值。方法在HBV S基因高保守区设计了特异性的引物和探针,利用T aqM an探针的基本原理,PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中HBV-DNA的准确含量。结果220例临床样本的检测结果显示,乙肝大三阳患者HBV-DNA阳性率(98.8%)显著高于其它各组(P<0.01),病毒平均含量为7.52±0.43 cop ies/m l;小三阳患者HBV-DNA阳性率低于大三阳组(P<0.01),但平均病毒含量与大三阳组无差异(P>0.05),高达7.41±0.26 cop ies/m l;单独HB sA g阳性和单独HB sA b阳性组HBV-DNA阳性率分别为56.4%,19.2%,平均病毒含量分别为5.35±0.32 cop ies/m l,4.02±0.31 cop ies/m l;80例献血员血清仍有3例HBV-DNA阳性,其病毒含量低于其它各组。结论RFQ-PCR检测HBV-DNA含量比EL ISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,对临床上抗病毒药物的选择和判断疾病的预后意义重大。