重组痘病毒活疫苗研究进展

痘病毒特别是痘苗病毒已成功地表达了数十种外来抗原。但由于痘苗病毒的神经毒性等原因,对重新使用该病毒作为活疫苗的载体仍有争议,从而限制了痘苗病毒重组活疫苗在人类及其他哺乳动物中广泛使用。为了解决这些问题,近年来许多研究者进行了深入研究,并取得了重要进展,本文从四个方面进行阐述:(1)痘苗病毒毒力基因的研究;(2)高度减毒重组体及兽用口服疫苗的研究;(3)多价重组体的构建;(4)禽痘病毒非复制性活疫苗的研制。     

痘病毒疫苗载体

1798年，Jenner的发现奠定了免疫学的基础并最终导致天花病毒在地球上根除。尽管天花病毒已被消灭，在20世纪80年代仍引起一场研究痘苗病毒的高潮，其中部分原因是分子遗传学应用于对重组牛痘病毒外源基因的克隆和表达，而生物恐怖又重新引起人们对牛痘的关注。这些重组病毒在研究和疫苗学中均有多方面用途，并促进载体疫苗的发展，例如重组牛痘狂犬病疫苗在西欧及最近在美国被用来消除狂犬病；选择性的痘病毒载体，例如禽痘病毒用于非禽类动物时被证明是安全有效的非复制型载体。     

在小鼠中比较复制缺陷型腺病毒与Nyvac痘病毒疫苗载体的效力

近年来,在重组活疫苗的研究中越来越多地将腺病毒和痘病毒用作重组疫苗载体.作者对以两者为载体构建的重组活疫苗免疫小鼠后的效力进行了比较.实验选用能引起小鼠致死性感染的伪狂犬病病毒(PRV)为攻击病毒,将能诱生中和抗体的PRV糖蛋白gD基因分别与复制缺陷型腺病毒和Nyvac痘病毒组建成重组疫苗Ad-gD和vP900.两种重组疫苗分别以不同剂量[10~(2.9)～10~(8.9)半数组织培养感染量     

表达JEV prM和E基因的高度减毒痘苗病毒MVA株免疫小鼠后对致死性JEV感染的防御作用

作者将韩国分离的乙型脑炎病毒（JEV）野毒株K94P05的糖基化膜前体（PrM）和包膜(E）蛋白的基因插入到高度减毒的宿主范围限定的痘苗病毒MVA株基因组内,获得两个重组病毒vJH6和vJH9,分别由合成的痘病毒启动子Psyn和修饰的痘苗病毒H5启动子控制。JEV野毒株K94P05的核苷酸序列与JEV原型中山株有88％相同,但是K94P05株的E基因内没有痘菌病毒早期终止信号。应用转移载体将目的JEV基因转移至MVA基因组内的缺失位点组成重组病毒并用JEV抗体免疫染色进行检测,结果表明两个重组体都稳定地表达prM和E蛋白。但vJH9的滴度较vJH6高3～5倍。vJH6和vJH9感染的CEF细胞与抗JEV K94P05株E蛋白表位的单克隆抗体NBl的免疫荧光反应强度与K94P05野毒株相似,而非重组MVA感染的细胞则未显示这种染色结果。用JEV多克隆抗体的结果与单克隆抗体相似。     

在被动抗体存在情况下的重组痘苗免疫接种

作者将表达流感血凝紊HI的重组痘苗病毒（Vac／HI）兔疫已注射抗痘苗和抗流感（H1N1）病毒免疫血清的小鼠，测定免疫后血清IgG抗体应答及被动抗体对它的影响。     

金丝雀痘-狂犬病重组病毒的效力研究

作者在金丝雀痘病毒中插入狂犬病病毒糖蛋白基因,从而研制出安全有效的vCP16重组疫苗。本文报道该疫苗与其他两种痘-狂犬病重组疫苗的效力比较试验结果。将狂犬病病毒Era株糖蛋白cDNA插到经PvuⅡ酶切的,长度为3.3千碱基对(Kbp)的金丝雀痘病毒DNA亚基因组片段内独特的EcoR1位点上,糖蛋白基因表达受一个早/晚痘苗病毒启动子转录控制。用标准方法分离和蚀斑纯化重组金丝雀痘病毒vCP16,然     

重组痘苗病毒诱导的抗口蹄疫病毒的保护性免疫力

本文报道利用空斑形成分离重组痘苗病毒的方法来构建表达口蹄疫病毒 ( FMDV)C3Arg85株四种结构蛋白前体的重组痘苗病毒 ,并将其作为活疫苗 ,在小鼠中进行试验。　　将从质粒 p UC1 9- P1中获得的 FMD-VC3Arg85株 P1基因插入 p RB2 1质粒的Sma I位点构成重组质粒 p RB2 1 - P1或p RB2 1 ,再将其转染痘苗病毒 v RB2 1感染的CV- 1细胞构成重组痘苗病毒 v RB1 2 - P2 1和v RB1 2 - P1。以 6 0～ 90日龄雌性 Balb/c小鼠和新生小鼠为试验动物 ,分别腹腔注入 1 0 7空斑形成单位 ( PFU)的 v RB1 2 - P2 1、1 0 7PFU的 v RB1 2 - …     

呼吸道合胞病毒疫苗研究进展

本文介绍了近年来呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）疫苗的研究状况。重组亚单位疫苗安全，但免疫原性有待提高；减毒活疫苗能诱导全面免疫应答，若合理减毒，似可成为有希望的候选疫苗。     

研制甲型肝炎疫苗的可能途径

十多年前,甲型肝炎病毒(HAV)在细胞培养中增殖成功,开创了研制减毒活疫苗和灭活疫苗的途径。非人灵长目动物实验证实,HAV在细胞培养中连续传代可导致减毒。连续传代获得的几个候选活疫苗已在志愿者中进行评价.感染细胞培养中的病毒抗原产量显著提高促进了灭活疫苗的研制.这类福尔马林灭活的HAV疫苗含有装配成病毒颗粒的病毒核壳抗原。HAV疫苗候选株的免疫原性主要取决于是否保持核壳蛋白构型。含VP1的免疫原序列的合成肽以及在大肠杆菌中以融合蛋白形式表达的可溶性核壳蛋白,高浓度注射家兔仅表现为微弱的免疫原性.另一方面,用表达P1的重组活痘苗免疫狮猴,可防御病毒攻击.然而活痘苗病毒作为载体使用,仍有很大缺陷。已构建出脊髓灰质炎-HAV VP1嵌合病毒,这类杂交病毒不能诱生免疫应答,可能由于脊髓灰质炎病毒对插入的HAV表位的构型限制.最近有人报道在杆状病毒和痘苗病毒系统中表达空病毒颗粒。     

表达甲型H5N1禽流感病毒结构蛋白的重组痘苗病毒的构建与鉴定

目的  构建表达甲型H5N1禽流感病毒（H5N1 avian influenza A virus,H5N1 AIAV）NIBRG14株结构蛋白的重组痘苗病毒,为研制新型人用流感疫苗奠定基础。方法  通过反转录PCR扩增H5N1 AIAV NIBRG14株的血凝素（hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（neuraminidase,NA）编码基因,并将改造的HA、NA基因克隆至痘苗病毒穿梭质粒 pSCCK。在重组质粒与痘苗病毒天坛株（vaccinia virus Tiantan,VTT）于Vero细胞中发生同源重组后,筛选同时表达HA和NA的重组痘苗病毒（rVTT-HA/NA）,并对其进行鉴定。结果  反转录PCR扩增的HA和NA基因大小约分别为1 700和1 400 bp,与预期相同。DNA测序证实,改造的HA和NA序列正确。对获得的rVTT-HA/NA进行PCR及测序表明,HA和NA基因正确插入VTT。蛋白质印迹显示,rVTT-HA/NA感染的Vero细胞表达的HA和NA能与相应的抗体发生反应。表达的HA具有血凝活性,血凝滴度为1∶32。结论  重组痘苗病毒rVTT-HA/NA可稳定表达H5N1 AIAV NIBRG14株的HA和NA。     

单价山羊痘病毒重组疫苗对牛瘟和牛皮肤肿块病的防御作用

作者构建了含全长度牛瘟病毒（ RPV）融合（F）蛋白基因CDNA的重组山羊痘病毒（CPV）。该基因在痘苗病毒主要晚启动子Pll控制下与对向定位的在痘苗病毒早／晚启动子 P7 5控制下的大肠杆菌 gpt（黄瞟吟鸟瞟吟磷酸核糖转移酶）基因一起插入CPV基因组的胸耷激酶基因位点。羔羊睾丸细胞感     

被动获得抗体抑制痘苗-麻疹重组病毒诱导麻疹病毒抗体产生

麻疹在发展中国家1岁以下儿童中引起很高的死亡率。在该年龄组儿童中。母体抗体限制了麻疹活疫苗病毒的复制。本文作者应用痘苗病毒(VV)重组体表达的麻疹病毒(MV)血凝素(VV-H)和融合蛋白(VV-F),以小鼠为模型,研究了在被动获得的抗MV抗体存在时对MV抗原的免疫应答情况。 对Balb/c小鼠注射不同剂量抗MV多克隆血清,1天后再用VV-H或VV-F免疫。     

重组HAV抗原:改进生产和在免疫诊断测定中的应用

甲型肝炎病毒（HAV）的免疫测定是利用细胞培养获得的HAV抗原检测HAV特异性抗体。目前,生产HAV抗原的方法是组织培养,不但耗时而且价格昂贵。作者先前已经在重组痘苗病毒中表达了HAV的开放阅读框架（rV-ORF）。重组HAV多蛋白被精确地加工并装配成亚病毒颗粒。这种颗粒可与HAV中和抗体结合并能激发可被市售免疫测定试剂盒检出的抗体。本研究是将传统的细胞接种法生产的HAV抗原与重组痘苗病毒系统表达的HAV抗原作一比较。另外,还对HAV与rV-ORF抗原在免疫诊断测定中的应用进行了评价。     

新型登革热疫苗研制现状

蚊传登革（DEN）病毒和乙型脑炎病毒是人类中节肢动物传播的病毒性疾病的主要原因，目前尚无批准使用的能提供长期有效抗四个血清型DEN病毒的四价疫苗。本文概述了DEN疫苗研究的新进展，包括减毒活疫苗、传染性cDNA克隆、DEN病毒传染性克隆嵌合体、重组亚单位疫苗和裸DNA疫苗的开发策略。     

痘苗病毒在疫苗释放中的应用

痘苗诱导人体产生免疫力的机理以及以前接触痘苗对非痘苗抗原免疫应答的影响方面资料的缺，阻碍了痘苗载体疫苗的构建。近来的研究讨论了该病毒在人体中诱导的免疫应答以及重组病毒诱导对不同感染途径的不同病原体的免疫力的能力。     

痘苗病毒-汉滩病毒疫苗能保护仓鼠抵抗汉滩和汉城病毒的攻击

作者构建了能表达汉滩（HTN）病毒M和S片段产物的重组痘苗,这种疫苗能诱导     

DNA疫苗、重组病毒载体复合型疫苗的临床前毒理学研究

本研究中的复合型疫苗是采用双疫苗组分-DNA疫苗和重组痘病毒载体疫苗(简称“痘苗”),免疫策略为“prime-boost”方案。本研究设计了DNA单独免疫、复合型疫苗以及痘苗单独免疫1次和2次的毒性研究。并且根据其体液免疫和细胞免疫的特点,检测其免疫原性、免疫毒性相关指标,进行了     

口服痘苗病毒重组体诱导粘膜及全身免疫应答

本文旨在证明口服痘苗病毒（ＶＶ）重组体能激发机体产生对载体ＶＶ和重组产物的高水平的免疫应答。 作者用ＷＲ株构建ＶＶ重组体。ＶＶ－ｌｕｃ表达虫荧光素酶基因（位于ＶＶ ｐ７．５启动子之后）和 β半乳糖苷酶基因（β－ｇａｌ）（位于ＶＶｐ１１启动子之后）,ＶＶ－ｅｎｖ－１表达１型人类免疫缺陷症病毒（ＨＩＶ－１）Ⅲ Ｂ株的ｅｎｖ基因和β－ｇａｌ基因。病毒于 ＨｅＬａ细胞中生长,用非洲绿猴肾ＢＳＣ－４０细胞滴定,并用蔗糖速度沉降法纯化。给Ｂａｌｂ／ｃ小鼠口服不同的ＶＶ重组体,口服１剂或１４天后再加强１剂。眶后丛…     

重组糖蛋白gIV免疫能防御牛BHV-1感染

1型牛疱疹病毒(BHV-1)是引起牛多种疾病的重要病原体。BHV-1的p8-2和108毒株于MDBK细胞内增殖,痘苗病毒(WR株)和重组痘苗病毒于BSC-1细胞内增殖,人腺病毒5型和重组腺病毒生长于293细胞,杆状病毒属首蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)和重组病毒在SF9秋粘虫细胞内制     

候选痘病毒重组JE疫苗能诱导人体产生JE病毒特异性CTL

候选痘病毒重组乙型脑炎（JE）疫苗NYVAC-JEV和ALVAC-JEV含有编码JE病毒前膜（prM）、包膜（E）及非结构1（NS1）蛋白的基因。本文旨在确定这些候选疫苗能否诱导人体产生JE病毒特异性CD8~+细胞毒性T淋巴细胞（CTL）。