小鼠调节性树突状细胞分泌的外泌体诱导免疫耐受的实验研究

本研究探讨小鼠调节性树突状细胞（rDC）分泌的外泌体（regulatory exosomes，rDex）诱导免疫耐受的作用，并与正常未成熟树突状细胞的外泌体（immature exosomes，iDex）诱导免疫耐受的作用进行比较。取C57BL／6（H-2^b）小鼠骨髓细胞诱导未成熟树突状细胞（iDC），TGF—β1联合IL-10诱导调节性树突状细胞（rDC），流式细胞术检测两种DC的表型。采用超速离心结合膜超滤的方法分别提取rDex和iDex。建立小鼠皮肤移植模型．以C57BL／6小鼠为供者，以BALB／c（H-2^d）小鼠为受者，按对受者处理的不同实验分3组，iDex组术前7、3天受者经尾静脉注射10μg供者的iDex，rDex组术前7、3天受者经尾静脉注射10μg供者的rDex，另设PBS对照组，观察移植皮肤存活情况。通过单向混合淋巴细胞反应（MLR）观察供者及非亲缘异基因供者DBA／2对同种异基因小鼠T细胞增殖情况。结果表明：TGF—β1、IL-10可下调DC表面共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达。移植皮片平均存活时间（MST），在对照组为7、8天，iDex组为10．7天，rDex组为18．8天；iDex组的移植皮片MST明显长于对照组（P〈0．05）；rDex组的移植皮片MST明显长于iDex组（P〈0．01）。MLR结果证明iDex组和rDex组B／C小鼠均对C57小鼠的脾细胞产生特异性耐受，尤其是rDex组；对非亲缘异基因DBA供者的脾细胞两组仍表现出强烈的免疫应答。结论：iDex和rDex均有诱导免疫耐受的作用，且rDex作用较iDex作用好。     

异基因骨髓移植并发移植物抗宿主病小鼠体内IL-22的细胞来源

本研究探讨小鼠经异基因骨髓移植后发生移植物抗宿主病（GVHD）时体内IL-22的细胞来源。分别以C57BL／6和BALB／c小鼠为供受鼠,受鼠经致死剂量全身照射后输注供鼠骨髓和脾淋巴细胞悬液,建立GVHD模型。实验分为正常组（normal）、单纯照射组（TBI）、骨髓移植组（BMT）和骨髓联合脾细胞诱导GVHD组（BS）。ELISA法检测小鼠血浆中IL-22的水平;流式细胞术检测IL-22的细胞来源及所属亚群情况。结果表明,Bs组小鼠血浆中IL-22水平最高,与正常小鼠相比差异有统计学意义（P〈0．01）;BS组小鼠脾、淋巴结和外周血中淋巴细胞均可产生IL-22,且IL-22＋CD4＋T细胞百分率高于IL-22＋CD8＋T细胞;除Th22细胞外,Th1细胞和Th17细胞也是GVHD小鼠体内IL-22的细胞来源,但以Th22细胞分泌IL-22为主。结论：GVHD小鼠体内可产生高水平的IL-22,其主要来源于IFN-γ-IL-17-IL-22＋的Th22细胞。     

供者淋巴细胞骨髓腔内输注对移植物抗宿主病和外周血IL-4与IFN-γ水平的影响

本研究观察骨髓腔内供者淋巴细胞输注对异基因小鼠外用造血干细胞移植（allo—PBSCT）后移植物抗宿主病（GVHD）和外周血IL-4和球N-γ水平的影响。以雌性C57BL／6小鼠为受鼠,接受全身照射（TBD预处理后,先骨髓腔移植雄性BABL／c小鼠来源的经rbG—CSF动员后的外周造血千细胞,然后分别经尾静脉和骨髓腔内进行供者淋巴细胞输注（DLI）,建立异基因GVHD模型,观察移植后小鼠的生存状态和GVHD发生情况;以酶联免疫吸附实验（ELISA）检测白介素4（IL-4）和γ干扰素（IFN-γ）水平。结果显示：骨髓腔内-DLI组的受鼠GVHD发生比例和严重程度较尾静脉一DLI组明显减低（P〈0．01）;与尾静脉-DLI组比较,骨髓腔内-DLI组IL4分泌增多,IFN-γ分泌减少（P〈0．01）。结论：与尾静脉-DLI相比,IBM—DLI有利于减少GVHD的发生。     

肝脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征中的变化与意义

目的探讨肝脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征（MODS）免疫紊乱机制中的影响与作用。方法150只C57BL／6小鼠经腹腔注射酵母多糖复制MODS模型，随机分为正常对照组和致伤后3～6h、12～48h、5～7d及10～12d组。观察各组小鼠肝脏间质树突状细胞的形态学变化及其表面标记物CD11c、CD205、CD80和I—A^B的表达水平；用流式细胞术检测各组外周血CD4^＋与CD8^＋的T细胞数量及CD4’／CD8’比值。结果急性损伤期（12～48h）肝脏间质树突状细胞大量增生，CD11c、CD205、CD80和I—A^b表达均较正常对照组显著上升（P均〈0．01），外周血T细胞CD4^＋／CD8^＋比值则明显下降（P〈O．01）；功能衰竭期（10～12d）肝脏间质树突状细胞继续增生，但CD205、CD80和I—A^b表达较急性损伤期显著减少（P〈0．05或P〈0．01），外周血T细胞CD4^-／CD8^＋比值下降至最低。结论肝脏间质树突状细胞参与并影响了MODS中肝脏局部与全身免疫失衡及免疫抑制过程。     

雷帕霉素诱导耐受性树突状细胞抑制急性移植物抗宿主病的动物实验

目的探讨雷帕霉素(RAPA)诱导过继性输注的耐受性树突状细胞(DCs)对急性移植物抗宿主病(a GVHD)的治疗效果。方法分离15只BALB/C雄性小鼠(MHC为H-2Kd)的骨髓细胞及脾细胞,输注入经8.5Gy辐射处理(TBI照射)的30只雄性C57BL/6J小鼠(MHC为H-2Kb)中建立a GVHD模型(BALB/C→C57BL/6J);为验证a GVHD造模是否成功,将C57BL/6J小鼠分为MHC不合移植组、MHC相合移植组及单纯TBI照射组(10只/组),3组小鼠经8.5 Gy TBI照射后分别输入BALB/C来源骨髓细胞及脾细胞、C57BL/6J来源骨髓细胞及脾细胞及同等体积PBS对照,采用流式细胞术检测供鼠植入比例并观察受鼠存活情况。体外培养受鼠骨髓来源DCs,加入RAPA以诱导耐受性DCs(RAPA-t DCs),加入PBS作为对照DCs(PBS-DCs)。将a GVHD模型鼠随机分为3组(10只/组),分别是RAPA-t DCs实验组(静脉输注RAPA-t DCs 4!106/只)、PBS-DCs对照组(静脉输注PBS-DCs 4!106/只)及PBS对照组(静脉输注PBS);采用活体荧光成像观察DCs在a GVHD小鼠体内的迁移、分布情况;同时监测3组小鼠的平均体重波动并统计生存率,评价RAPA-t DCs对小鼠a GVHD的抑制效果。结果流式细胞术检测:与PBS-DCs组小鼠比较,RAPA-t DCs组小鼠DCs表面的CD40、CD80、CD86和MHCII表达丰度明显受到抑制(P0.05);2组小鼠DCs表面趋化因子受体CCR1平均荧光强度(MFI)为14.5±1.4 vs.10.0±2.1,表面趋化因子受体CCR5为12.7±2.3 vs 7.2±1.2(P0.05),表面趋化因子受体CCR7为7.8±1.3 vs.6.2±2.5(P0.05)。活体成像分析:RAPA处理不影响DCs在体迁移能力,RAPA-t DCs仍可归巢至淋巴结、脾脏等淋巴组织或器官。PBS-DCs组和RAPA-t DCs组a GVHD小鼠在移植后19 d体重(g)下降-2.4±1.5 vs-1.9±1.2(P0.05),生存期(d)延长10.1±5.5 vs 16.6±6.7(P0.05),但各组小鼠最终均全部死亡,整体生存率无差异。结论 RAPA可通过抑制小鼠DCs表面共刺激分子的表达诱导DCs耐受,过继性RAPA-t DCs仍具备一定的T细胞富集区归巢能力;过继性输注RAPAt DCs可一定程度缓解小鼠a GVHD,延长小鼠生存期,但对其整体存活率无明显改善。     

供体淋巴细胞在GVHD模型小鼠组织器官中迁移和分布的动态观察

本研究应用小鼠GVHD模型探讨异基因T淋巴细胞在移植受体体内的迁移和分布。将C57BL／6的骨髓细胞和转基因荧光C57BL／6小鼠的脾淋巴细胞输入经8Cy全身照射的BALB／c小鼠，建立eGFP标记供体淋巴细胞的GVHD小鼠模型；应用荧光显微镜和流式细胞术观测GVHD模型中eGFP^＋细胞的分布；ELISA法检测GVHD靶组织中趋化因子MIP—1α水平的改变。结果表明：①输入脾细胞和骨髓细胞第8天后出现GVHD临床及病理表现；②CVHD模型中，受体鼠肝、皮肤、肠、脾、肺、舌有eGFP^＋细胞浸润；③GVHD小鼠肝、脾eGFP^＋细胞中CD4^＋、CD8^＋细胞比例均逐渐升高；④GVHD鼠脾、肝组织中MIP—1α水平升高，脾中MIP-1α水平高峰出现于移植后第3天，肝中MIP—1α水平高峰出现于移植后第7天。结论：除肝、肠、皮肤外，肺、舌可能也是GVHD靶器官。肝、脾组织中供体淋巴细胞浸润伴随MIP—1α水平的升高。     

肾脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征中的变化与作用

目的探讨肾脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征免疫紊乱中的影响与作用。方法腹腔注射酵母多糖制造C57BL/6小鼠MODS模型,分为正常、3～6h、12～48h、5—7d和10-12d组。观察各组小鼠肾脏间质树突状细胞的病理学变化及其表面标记物CD11c、CD205、CD80和I—A^b在MODS各期肾脏中的表达水平;流式细胞术检测外周血CD4^＋与CD8^＋的T细胞数量与比值。结果在急性损伤期,肾脏间质树突状细胞大量增生,CD80和I-A^b表达较正常组差异具有统计学意义（P〈0．01和P〈0．05）,外周血T细胞CD4^＋／CD8^＋比值则明显下降（P〈0．01）。功能衰竭期,肾脏间质树突状细胞增生至最高点,但其CD80和I-A^b表达较急性损伤期显著减少（P〈0．01）,外周血T细胞CD4^＋／CD8^＋比值下降至最低（P〈0．01）。结论肾脏间质树突状细胞参与并影响了MODS中肾脏局部与全身的免疫失衡及免疫抑制过程。     

慢病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦系统抑制移植物抗宿主病的实验研究

目的研究慢病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶／更昔洛韦（HSV-TK／GCV）系统对小鼠异基因骨髓移植（allo—BMT）后移植物抗宿主病（GVHD）的防治作用。方法将转染HSV-TK基因的慢病毒感染供鼠（C57BL／6小鼠）脾脏淋巴细胞，将感染后的淋巴细胞与供鼠骨髓细胞混合，移植给经。Co1射线照射后的受鼠（BALB／c小鼠）。分别于移植后当天、移植后7天（＋7天）和＋12天腹腔注射GCV25mg／kg×7d，观察受鼠生存期、GVHD发生率及严重程度、T细胞亚群（CD3、CD4、CD8）及异基因嵌合等指标。结果HSV-TK／GCV使用0天、＋7天、＋12天组受鼠生存时间分别为（30．10±5．21）d、（36．40±5．28）d、（28．20±4．82）d，三组生存时间均较移植对照组[（15．10±0．43）d]明显延长（P〈0．05）；HSV-TK／GCV＋7天组小鼠50d存活率达60％，高于HSV-TK／GCV0天（40％）和＋12天组（30％）（P〉0．05）。对照组小鼠全部发生Ⅲ～Ⅳ级GVHD，实验组死亡小鼠有Ⅱ～Ⅲ级GVHD病理学改变，而长期生存小鼠仅出现Ⅰ～Ⅱ级GVHD。在＋5，＋10，＋15d，3个时间点实验组小鼠CD4^＋细胞明显高于对照组（P〈0．05），CD8^＋细胞均低于对照组（P〈0．05）。＋30天受鼠异基因嵌合率为100％。结论慢病毒载体介导的HSV-TK／GCV系统能有效控制小鼠allo—BMT后GVHD；＋7天外周血白细胞数开始回升时用GCV控制GVHD效果最佳。     

在小鼠骨髓移植中CCRS与急性移植物抗宿主病的相关性研究

本研究评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用，为今后的异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据。经过致死剂量照射的BALB／c小鼠接受异基因C57BL／6小鼠的骨髓移植。根据回输的细胞不同实验分为4组：B6CCR5KO组，受者接受C57BL／6CCR5^-/-小鼠骨髓和脾脏细胞；B6WT组，受者接受野生型C57BL／6小鼠骨髓和脾脏细胞；B6CCR5KOBMC组，受者只接受C57BL／6CCR5^-/-小鼠骨髓细胞；B6、WT BMC组，受者只接受野生型C57BL／6小鼠骨髓细胞。结果表明：较之B6、WT组，B6CCR5KO组小鼠以更快的速度死于急性GVHD；其受者体内的CD8^＋T细胞更大量的增殖；其T细胞恢复后产生更多的INF-γ和TNF-α并且由于其T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平，从而进一步促进T细胞的增殖，提示CCR5的作用之一是下调参与排异反应的供者CD8^＋T细胞的增殖。组织学评价提示，移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现了病理损伤并且肝脏存在有更为严重的病理变化。结论：剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率的增加，供者CD8^＋T细胞在受者体内增殖增加以及肝肾损害加重，这提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用。     

异基因NK细胞在白血病小鼠单倍体相合骨髓移植中的作用

本研究观察异基因NK细胞在白血病小鼠单倍体相舍骨髓移植中的作用。建立荷EL9611（H-2^d）红白血病细胞的CB6F1^H-2b/d小鼠动物模型,5天后将其随机分为7组,每组10只。CB6F1^2b/d受鼠为移植组,9Gy（^60Co）照射后以C57BL／6^h-2b为供鼠,进行骨髓移植。对照组分为5组：对照1组为未治疗组;对照2组为单纯照射组;对照3组为阿糖胞苷治疗组：小鼠腹腔注射阿糖胞苷50mg／kg×6d;对照4组为单纯骨髓细胞移植组：小鼠照射后4小时移植C57BL／6^h-2b小鼠骨髓细胞;对照5组为GVHD对照组：小鼠照射后4小时移植C57BL／6^H-2b小鼠骨髓细胞和脾细胞。实验组分为2组：实验A组,照射后输注C57BL／6^H-2b小鼠NK细胞1×10^6／只,4小时后移植C57BL／6^H-2b。小鼠骨髓细胞;实验B组：照射后同实验1组,4小时后移植C57BL／6^H-2b小鼠骨髓细胞和脾细胞。以血象、体重、生存期和病理组织学变化为观察指标并作组间比较。结果表明,对照1、2、3、5组小鼠生存期分别为（10．10±0．88）天、（9．80±0．92）天、（22．70±3．23）天、（20．10±1．73）天,对照4组生存期为（30．10±15．95）天,其中2只小鼠超过30天;实验A、B组小鼠生存期分别为（39．10±18．11）天、（49．30±17．24）天,实验1组4只小鼠生存期超过30天,实验2组7只生存期超过30天,其中实验1组与对照1、2、3、5组比较均有显著性差异（P〈0．01）,实验2组同其他组比较均有显著性差异（P〈0．05）。因白血病死亡的小鼠,可见肝脾明显肿大,结构破坏,有大量白血病细胞浸润。实验组长期存活的小鼠出现Y染色体（嵌合率80％-90％）。结论：在荷EL9611（H-2^d）红白血病细胞CB6F1^H-2b小鼠模型的单倍体相合骨髓移植中供者NK细胞具有杀灭白血病细胞并降低GVHD的双重作用。     

小鼠移植物抗宿主病模型的建立

背景：小鼠移植物抗宿主病是异基因造血干细胞移植的主要并发症,表现为多系统损害（皮肤、食管、胃肠、肝脏等）的全身性疾病,是造成异基因造血干细胞移植后死亡的重要原因之一。目的：探讨建立小鼠移植物抗宿主病模型的方法,为实验性研究药物防治移植物抗宿主病提供有效的动物模型。方法：选择C57BL/6（H-2b）→BALB/C（H-2d）作为完全异基因移植供、受体。通过注射移植供鼠脾脏淋巴细胞及骨髓细胞数以建立移植物抗宿主病模型。根据临床表现、病理检查等判断移植物抗宿主病模型是否建立。结果与结论：给予5×106个以上的供鼠脾细胞的小鼠都发生了急性移植物抗宿主病,但小鼠移植物抗宿主病出现的时间、存活期不同。提示,输入5×106个供鼠脾细胞可有效建立移植物抗宿主病模型,小鼠异基因骨髓移植动物模型是可靠的,可用于移植物抗宿主病防治的实验性研究。     

Importance of minor histocompatibility antigen expression by nonhematopoietic tissues in a CD4+ T cell-mediated graft-versus-host disease model

Minor histocompatibility antigens with expression restricted to the recipient hematopoietic compartment represent prospective immunological targets for graft-versus-leukemia therapy. It remains unclear, however, whether donor T cell recognition of these hematopoietically derived minor histocompatibility antigens will induce significant graft-versus-host disease (GVHD). Using established bone marrow irradiation chimeras across the multiple minor histocompatibility antigen-disparate, C57BL/6-->BALB.B combination, we studied the occurrence of lethal GVHD mediated by CD4+ T cells in recipient mice expressing only hematopoietically derived alloantigens. Even substantial dosages of donor C57BL/6 CD4+ T cells were unable to elicit lethal GVHD when transplanted into [BALB.B-->C57BL/6] chimeras. Instead, chimeric mice displayed transient cachexia with reduced target-tissue injury over time, reflecting an early, limited, graft-versus-host response. On the other hand, the importance of minor histocompatibility antigens derived from nonhematopoietic tissues was demonstrated by the finding that [C57BL/6-->BALB.B] chimeric mice succumbed to C57BL/6 CD4+ T cell-mediated GVHD. These data suggest that severe acute CD4+ T cell-mediated GVHD across this minor histocompatibility antigen barrier depends on the expression of nonhematopoietically rather than hematopoietically derived alloantigens for maximal target-tissue infiltration and injury.     

环磷酰胺联合树突状细胞分泌的外泌体和PolyⅠ:C的抗肿瘤作用研究

目的观察树突状细胞(DC)分泌的外泌体(exosomes)与环磷酰胺(CTX)、PolyⅠ∶C联合应用的抗肿瘤效果。方法重组鼠粒细胞-单核细胞集落刺激因子诱导骨髓来源的造血干细胞分化为髓系树突状细胞,肿瘤细胞L1210的冻融抗原负载树突状细胞,以超速离心结合膜过滤的方法提取外泌体;用得到的外泌体在DC存在的情况下刺激T细胞,应用cck-8试剂盒测量T细胞的增殖;制备抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL),通过DIOC-18联PI的方法测定CTL对肿瘤的杀伤作用;L1210细胞接种小鼠,制备荷瘤小鼠模型,分为实验组(exosomes联合CTX和PolyⅠ∶C)和对照组(1.PBS组,2.CTX组,3.CTX+PolyⅠ∶C组4.exosomes组)作治疗,观察肿瘤的生长速度,小鼠的生存期。结果T细胞的增殖实验中,平均吸光度:实验组为0.90±0.22,对照组为0.53±0.13,差异具有统计学意义(P<0.05)。负载肿瘤抗原的exosomes刺激的CTL在体外能够特异性杀伤肿瘤细胞L1210,在效靶比分别为5∶1和10∶1时实验组的杀伤率分别为(21.19±3.99)%、(30.56±3.85)%,对照组的杀伤率分别为(17.54±4.48)%、(19.38±4.68)%,10∶1时实验组与对照组相比杀伤率差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,实验组荷瘤小鼠的肿瘤生长速度明显降低,小鼠的生存期延长。结论经过肿瘤抗原负载的exosomes刺激的T细胞体外能够杀伤肿瘤细胞;exosomes联合CTX和PolyⅠ∶C能显著抑制荷瘤小鼠体内肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠的生存期。     

人骨髓来源间充质干细胞分泌外泌体特性研究

本研究旨在探讨正常人骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells,BMMSC）分泌的外泌体（exosome）免疫调节功能及支持血管形成能力。收集第4—6代BMMSC上清液提取外泌体,应用透射电镜观察其形态,蛋白印迹法检测其表面特异标志CD9,bicinchoninicacid（BCA）方法定量检测外泌体分泌量;与正常人外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells,PBMNC）作用72h后用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测PBMNC分泌的γ-干扰素（IFN-γ）;实时定量PCR检测外泌体内免疫相关microRNA表达;共聚焦显微镜观察外泌体与人脐带静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC）的作用方式,与HUVEC共培养后观察其网状结构形成;应用裸鼠体内试验检测外泌体对血管形成能力的作用。结果表明,正常人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体近似圆形,直径在40—160nm之间,表达表面标志CD9,其分泌量与接种细胞数呈线性关系,可抑制PBMNC分泌IFN-γ（P〈0．01）,内含有免疫相关microRNA如miR301、miR22和miR-let-7a等,能促进HUVEC网状结构形成和血管形成（P〈0．01）。结论：BMMSC分泌外泌体具有免疫调节功能与支持血管形成作用。     

非清髓性单倍体骨髓移植后输注供体免疫细胞治疗白血病的研究

本研究在小鼠非清髓性单倍体骨髓移植模型上,观察移植后早期输注供体免疫细胞对促进植入及改善疗效的作用。以CB6F1雌性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,移植前4 d经尾静脉注射小鼠红白血病细胞1×106个/只,移植前2 d和1 d分别通过腹腔注射阿糖胞苷0.015 g/只,移植前1d予450 cGy全身照射（TBI）,移植当天给予供鼠骨髓及脾细胞混合物6×107个/只,移植后15 d输注供体免疫淋巴细胞6×107个/只,移植后定期监测受鼠外周血供鼠CD3＋细胞嵌合状态和供鼠性别决定基因（SRY）,观察小鼠急性移植物抗宿主病（aGVHD）、疾病复发及生存情况。结果表明：经尾静脉注射小鼠红白血病细胞1×106个/只,不予治疗,小鼠平均生存期为15±1 d;混合骨髓移植组移植后供者细胞获得植入,SRY基因在移植后30和60 d时检测PCR结果均阳性,移植后14、30、60 d外周血供鼠CD3＋细胞嵌合率分别为（17.95±12.03）%、（37.34±2.78）%,（47.06±6.1）%;DLI组移植后30、45、60 d嵌合率为（69.78±12.62）%、（75±15.97）%、（83.41±16.07）%;小鼠移植后平均生存期分别为66.66±1.47 d、78.2±7.82 d。结论：移植前高肿瘤负荷影响供体细胞植入及预后,移植后早期行供体免疫淋巴细胞输注可以进一步改善治疗效果,延长生存期。     

黄芪多糖对白血病患者树突状细胞来源的外泌体促成熟作用的研究

目的在黄芪多糖（APS）作用于骨髓单个核细胞（BMNc）来源的树突状细胞（DC）成熟过程中,研究其是否可以增加树突状细胞来源的外泌体（Dex）表面功能分子的表达水平。方法分离急性髓细胞白血病完全缓解期（AML—CR）患者BMNC,采用含有重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rHuGM-CSF）和重组人白细胞介素4（rhuIL-4）的RPMI1640完全培养基培养在37℃5％CO2细胞培养箱中培养至第7天。阳性对照组加常规量的脂多糖（LPS）,实验组用APS50、100、200g／L刺激DC,阴性对照组加相同体积的培养基,培养36小时后,分级分离法提取DC培养上清液中Dex,在透射电镜下观察Dex的形态,流式细胞仪检测Dex表面分子人白细胞抗原DR、CD80、CD86的表达水平。并对DC进行形态学和表面分子鉴定。结果APS组与对照组所诱生的Dex的形态学差异无统计学意义。中剂量APS组中Dex表面分子（CD80、CD86、HLA-DR）表达量较其他各组显著增高（P〈0．05）。结论APS可以增加急性髓细胞白血病患者BMNC来源的DC诱生的Dex表面分子的表达量。     

体外转染mFasL-cDNA小鼠骨髓细胞预防移植物抗宿主病的实验研究

为了探讨通过Fas FasL途径清除骨髓移植物中T细胞后 ,预防移植物抗宿主病 (GVHD)的可能性 ,采用脂质体转移法将FasL cDNA转染雌性BALB/c小鼠骨髓细胞 ,证实其获得表达后 ,体外与雄性BAC (BALB/c×C57BL/ 6)小鼠骨髓移植物混合培养后输注给经致死照射的BALB/c鼠 ,然后观察受体鼠GVHD的表现、死亡率 ,进行组织病理学检查 ,骨髓细胞Y染色体及CFU S检测。结果表明 :实验组 10只小鼠 ,60天死亡 2只 ,4只有GVHD改变 ;对照组 10只 ,60天死亡 7只 ,10只均有GVHD改变 ;两组骨髓细胞Y染色体分析显示均有供体鼠来源的骨髓细胞植入 ;CFU S检测表明实验组动物体内 10天即有CFU S形成 ,移植后第 2 0天即达正常水平。结论 :转染mFasL cDNA小鼠骨髓细胞能有效地预防GVHD的发生 ,并能使受体造血功能获得重建。