幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株增殖及凋亡影响的研究

目的探讨幽门螺杆菌感染对胃癌细胞株SGC7901增殖和凋亡的影响和机制。方法体外培养的SGC7901细胞与1×10^8、5×10^7、1×10^7、5×10^6cfu／ml浓度梯度的HPNCTC11637标准菌株共孵育,分别在24、48、72h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞和TUNEL分析细胞凋亡,RT-PCR检测survivin在mRNA的表达情况,Western blot检测细胞survivin在蛋白水平的表达。结果1×10^8、5×10^7、1×10^7、5×10^6cfu／ml浓度梯度的HP菌对SGC7901细胞作用72h的细胞增殖抑制率分别为54．5％、58．9％、67．6％、72．9％。流式细胞仪和TUNEL法检测不同浓度梯度的HP菌处理72h后细胞凋亡率分别为42．51％、45．67％、48．57％、54．61％与49．51％、51．26％、59．41％、62．46。幽门螺杆菌可以明显降低survivin的mRNA和蛋白水平的表达。这些作用均随幽门螺杆菌浓度和作用时间的延长而增强。结论幽门螺杆菌感染可能通过降低survivin的表达,在体外抑制SGC7901细胞增殖,并促进其凋亡。并且,这种作用呈时间剂量效应。     

大黄素对膀胱癌细胞BIU87增殖和凋亡的影响

目的探讨大黄素对人膀胱癌细胞BIU87生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用甲基噻唑（MTT）比色法测定不同浓度大黄素在不同作用时间内对在体外培养BIU87细胞增殖的影响,同时应用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化,免疫组化SP法检测细胞内bcl-2和caspase-3蛋白的表达水平。结果在一定范围内,大黄素的浓度（10—80μg/ml）越高、作用时间越长,对肿瘤细胞生长的抑制作用越强,凋亡率也越高[分别为（9．84±21．13）％、（18．32±22．14）％、（29．73±1．42）％、（42．13±2．36）％],与对照组[（2．01±20．92）％]相比,差异均有统计学意义（F=531．85,P〈0．01）;大黄素可在G0／G1期阻滞人膀胱癌细胞BIU87的增殖,使S期细胞比率降低[分别为（33．27±1．26）％、（29．17±1．39）％、（16．94±0．86）％、（10．85±1．47）％],与对照组[（35．45±0．38）％]相比,差异均有统计学意义（F=524．64,P〈0．01）。大黄素作用48h后,BIU87细胞中bel-2蛋白表达下降（灰度值分别为122．65±2．12、131．37±1．62、134．81±1．36、145．55±2．01）,easpase-3蛋白表达上调（灰度值分别为135．26±1．41、130．22±1．74、126．11±1．77、118．36±1．53）,呈浓度依赖性,与对照组（灰度值分别为108．42±3．73、149．35±1．82）相比,差异均有统计学意义（F=216．23、224．83,P〈0．01）。结论大黄素在体外能抑制人膀胱癌细胞株BIU87的生长、诱导细胞凋亡,其作用与下调bcl-2蛋白表达、上调easpase一3蛋白表达和阻滞细胞周期于Go／G．期有关。     

苹果提取物对食管癌细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达的影响

目的通过苹果提取物对食管癌EC9706细胞的增殖、凋亡及相关蛋白表达的影响。方法加入受试物前,将EC9706细胞接种于1640培养液中,实验设溶剂对照组及苹果提取物7个剂量组,应用MTT、流式细胞术和扫描电镜技术,观察苹果提取物对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期各时相DNA分布以及凋亡的影响;采用免疫组织化学技术,检测Bax及Bcl-2蛋白表达情况。结果各剂量组苹果提取物对食管癌EC9706细胞分别处理72h和96h后,均抑制了食管癌EC9706细胞的增殖,使细胞停滞于G2/M期,并伴随着对凋亡的诱导和Bax、Bcl-2蛋白表达的改变。经统计学分析差异具有显著意义。结论苹果提取物可阻止细胞DNA合成,降低S期百分率,减少分裂期细胞从而抑制EC9706增殖,并通过调节Bax和Bcl-2蛋白的表达诱导细胞凋亡。     

miR-21对食管癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的:探讨miR-21对食管癌细胞增殖及凋亡影响与分子机制.方法:将食管癌细胞分成miR-21-NC组、miR-21组、LY294002组、LY294002+miR-21组、对照组5组,检测miR-21表达情况及食管癌细胞系中PI3K、Akt与p-Akt表达情况.结果:食管癌细胞系的miR-21相对表达量明显高于正常食...     

新疆天然植物黑加仑对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察新疆天然植物黑加仑水提物对食管癌细胞的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(10-1、10-2、10-3g/ml)黑加仑水提物作用不同时间(12、24、36h)对人食管癌细胞株Eca109的细胞存活量的影响,以大鼠正常肝细胞(BRL)为正常对照细胞株;用Bradford法测定肿瘤细胞蛋白质合成的变化;采用流式细胞技术(FCM)观察黑加仑作用后肿瘤细胞周期变化及凋亡情况;通过倒置显微镜观察细胞的形态变化。结果:黑加仑水提物10-1g/ml组对人食管癌细胞株Eca109作用24h后,癌细胞的生长和蛋白合成均有明显抑制作用(P<0.05),对正常肝细胞的存活量及蛋白合成均无影响;流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰,细胞凋亡率为49.6%;并且癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论:黑加仑水提物可通过诱导细胞凋亡而抑制人食管癌细胞株Eca109细胞的生长。     

FOXP3 shRNA对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭功能的作用

目的研究FOXP3shRNA对肝癌细胞株SMMC-7721和MHCC-97H的增殖、凋亡和侵袭功能的影响。方法设计3种编码FOXP3shRNA的FOXP3干扰慢病毒:sh-FOXP3-1-pGreenPuro、sh-FOXP3-2-pGreenPuro和shFOXP3-3-pgreenpuro,并分别转染SMMC-7721和MHCC-97H2个肝癌细胞培养体系,检测转染后细胞培养体系中FOXP3的mRNA和蛋白质表达水平,以评估3个慢病毒的干扰效果。采用干扰效果最好的慢病毒转染上述细胞,以CCK8检测细胞增殖、TUNEL检测细胞凋亡、Transwell检测细胞侵袭功能,并比较转染前后上述指标差异。结果经菌落PCR和测序验证,3个FOXP3干扰慢病毒载体构建正确;其中sh-FOXP3-1干扰效果最明显,后期实验均使用sh-FOXP3-1转染。与对照组相比:2种肝癌细胞转染后OD值均明显下降,细胞增殖能力显著降低;凋亡显著升高;细胞侵袭功能显著下降,以上差异均有统计学意义(P值均0.05)。结论实验条件下,干扰FOXP3的表达可抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡并降低肝癌细胞侵袭能力。未来应进一步研究其作用机理,以优化肝癌的临床治疗与预防策略。     

miR-24对胃癌细胞株BGC-803及SGC-7901凋亡和增殖的影响

目的 探讨在两株胃癌细胞株BGC-823及SGC-7901中抑制内源性miR-24的表达后对细胞凋亡和增殖的作用.方法 使用INTERFERin转染试剂将锁核苷酸标记的反义核酸miR-24-ASO转染进入胃癌细胞株,使用倒置荧光显微镜观察细胞生长变化,流式细胞计检测细胞凋亡的比例,然后使用CCK-8试剂盒对细胞增殖情况进行检测.结果 转染miR-24-ASO的BGC-803细胞和SGC-7901细胞相对于转染内参的凋亡水平分别增加了约25倍和21倍左右.转染了miR-24-ASO抑制内源性miR-24的表达之后细胞的增殖能力相对于转染阴性对照的细胞株的增殖能力均明显降低.结论 抑制内源性miR-24的表达可以诱导胃癌细胞的凋亡并导致胃癌细胞增殖能力的降低.miR-24调控了胃癌细胞的增殖和凋亡过程.揭示了miRNA在胃癌发生过程中的调控机制,并为胃癌的治疗提供了良好的应用前景.     

内皮抑素质粒联合顺铂对上皮性卵巢癌细胞株A2780增殖和凋亡的影响

目的:探讨内皮抑素质粒联合顺铂对上皮性卵巢癌细胞株A2780增殖和凋亡的影响。方法:通过瞬时转染内皮抑素质粒到卵巢癌细胞A2780后,采用MTT法和流式细胞术检测内皮抑素以及内皮抑素和顺铂联合应用对细胞增殖和凋亡的影响。结果:MTT法检测发现转染内皮抑素质粒后,A2780细胞的增殖明显减慢,顺铂对其生长抑制作用明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测发现与空白组相比,转染内皮抑素质粒后A2780细胞的G0/G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少,细胞的凋亡率由(1.59±0.86)%增加到(8.66±1.27)%;内皮抑素质粒联合顺铂治疗后,上述差异更加显著(P<0.01)。结论:内皮抑素联合顺铂可通过抑制A2780细胞的生长和增加其凋亡而产生协同抗瘤作用。     

6-姜酚对人宫颈癌细胞的增殖和凋亡的影响及机制的研究

目的探讨6-姜酚在人宫颈癌细胞增殖、凋亡中的作用及作用机制。方法体外常规培养人宫颈癌HeLa细胞,对未接受药物作用组、接受10μg/ml浓度6-姜酚作用组及接受20μg/ml浓度6-姜酚作用组间细胞增殖及凋亡情况,并分析三组间基因蛋白表达水平差异。结果 10 ug组及20μg组观察时间内细胞抑制率及凋亡率呈升高趋势,且各观察时间点均以20μg组最高(P0.05)。同时,三组间24 h后S期,caspase-3表达水平及caspase-9表达水平以20μg组最高,survivin表达水平以20μg组最低(P0.05)。结论 6-姜酚可通过激活多种基因蛋白而达到抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖并诱导其凋亡。     

抗氧化维生素对内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的：　观察氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）对内皮细胞增殖与凋亡的影响以及抗氧化维生素（维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素）对内皮细胞的防治效应。方法：　在体外培养的小牛主动脉内皮细胞中分别加入不同浓度的抗氧化维生素,作用１２ｈ 后,再与终浓度为０．１ｇ Ｐｒ／Ｌ的ｏｘＬＤＬ共同培养２４ｈ,采用噻唑蓝比色分析法和流式细胞仪分析法对贴壁内皮细胞进行检测,分别观察抗氧化维生素对经ｏｘＬＤＬ作用的内皮细胞的形态、生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果：　（１）维生素Ｅ和维生素Ｃ能显著减轻ｏｘＬＤＬ对内皮细胞形态的损伤作用;β－胡萝卜素作用稍弱。（２）三种抗氧化维生素均可降低ｏｘＬＤＬ对内皮细胞生长增殖的抑制作用,使其抑制率降低。（３）三种抗氧化维生素均可促进内皮细胞由Ｇ１ 期进入ＤＮＡ合成的Ｓ期,促进内皮细胞的增殖并阻止内皮细胞凋亡的发生。结论：　维生素Ｅ、维生素Ｃ及β－胡萝卜素均可减轻ｏｘＬＤＬ在形态、增殖及凋亡等方面对内皮细胞的损伤作用,这可能是抗氧化维生素加速内皮细胞损伤后修复、促进内皮细胞增殖,从而发挥其抗动脉粥样硬化形成的部分机制。     

桦木酸对酒精性肝损伤小鼠线粒体凋亡通路的影响

目的研究桦木酸(betulinic acid,BA)对酒精性肝损伤小鼠线粒体信号通路的影响。方法 56只健康雄性小鼠随机分为8组,即正常对照组(NC),酒精模型组(MC),BA低、中、高剂量组(L-BA,M-BA, H-BA,按0.25、0.5、1 mg/kg bw给与),BA低、中、高剂量与酒精联合组(L-BAA, M-BAA, H-BAA)。NC、MC组灌胃1%的可溶性淀粉,其余各组灌胃混悬于可溶性淀粉中不同剂量的BA,1/d,连续14d后,除NC组,L-BA,M-BA,H-BA组灌胃生理盐水外,其余4组均按10 ml/kg灌胃50%酒精诱发酒精性肝损伤模型。检测血清细胞色素P450 2E1(CYP2E1)水平,采用Western blot检测肝脏线粒体信号通路中Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达的变化。结果 BA预处理后,抑制由酒精引起的CYP2E1水平升高,显著降低酒精致肝损伤小鼠Bax/Bcl-2比值,明显减少Caspase-9和Caspase-3蛋白表达量,且呈量效关系。结论说明BA对酒精诱导肝损伤有预防性的保护作用,这种保护作用可能与调控线粒体凋亡通路有关。     

miRNA-21靶向作用于maspin及其对胆管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的通过抑制miRNA-21的表达观察对胆管癌细胞株增殖、凋亡的影响,并探讨miRNA-21可能调控的靶基因。方法以人胆管癌细胞RBE细胞为研究对象,根据处理方法不同,细胞分为四组：正常细胞组、脂质体组（仅予脂质体）、阴性对照组（转染相关阴性对照试剂）、miRNA-21抑制组（转染miRNA-21抑制剂）。应用MTT方法检测细胞增殖活性的变化,应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化,通过荧光定量PCR技术及蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测RBE细胞中maspin基因表达的改变。结果 miRNA-21在经转染miRNA-21抑制剂后在RBE细胞中的表达得到有效抑制,荧光定量PCR结果显示与正常细胞相比,其表达下降了0.02倍。MTT结果显示RBE细胞在抑制miRNA-21表达后增殖活性明显受到抑制（P〈0.05）,流式细胞仪结果显示各组细胞凋亡率分别为2.29%、2.43%、2.89%、19.35%,miRNA-21的表达降低后,RBE细胞的凋亡率明显增高（P〈0.05）,并且荧光定量PCR及western blot结果显示maspin mRNA及其蛋白的表达明显上调（P〈0.05）。结论通过抑制miRNA-21的表达可抑制RBE细胞的增殖,促进RBE细胞的凋亡,miRNA-21可通过靶向抑制maspin的表达发挥生物学作用。     

靶向p38反义寡核苷酸-脂质体复合物对人卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响

目的:探讨p38反义寡核苷酸(p38 anti-ODN)对卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响。方法:培养卵巢癌细胞株(CAOV3),以MTT比色法及克隆形成实验测定p38 anti-ODN抑制卵巢癌细胞株CAOV3增殖的作用。免疫印迹法测定p-p38、Cyclin D1及p21waf/cip1表达。免疫沉淀法纯化蛋白并p38试剂盒测定p38活性。结果:MTT实验及克隆分析法均显示p38 anti-ODN明显抑制CAOV3细胞增殖、p-p38表达、下调Cyclin D1表达,同时上调p21waf/cip1表达。结论:p38反义寡核苷酸可以抑制卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖,其机制与影响p38通路及下游CyclinD1、p21waf/cip1表达有关;干预p38通路是基因治疗卵巢癌的重要途径之一。     

硒蛋氨酸对食管癌细胞株增殖的影响

本研究的目的是观察硒蛋氨酸对体外培养食管癌细胞系(EC9706)生长的影响，以探讨其对食管癌的防治作用。     

枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响

目的观察枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌Hela细胞生长及其细胞凋亡的影响。方法不同剂量的枸杞多糖作用于体外培养的宫颈癌Hela细胞，用苔盼蓝染色、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法及流式细胞仪检测人宫颈癌Hela细胞存活率、抑制率及细胞凋亡等指标。结果枸杞多糖可明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长，抑制率司达96．85％，并呈剂量效应关系，细胞凋亡率可达36．8％。结论枸杞多糖对人宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用，其抑制机制可能是通过影响人宫颈癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。     

叶酸对人胃腺癌细胞SGC-7901增殖的影响

目的：采用叶酸处理体外培养的人胃腺癌细胞株SGC-7901来研究叶酸在体外的抑癌作用。方法：采用生长曲线法，群体倍增时间法，集落形成实验来研究叶酸对人胃腺癌细胞株SGC-7901体外增殖的影响；采用FCM进行细胞周期分析研究叶酸对细胞周期的影响。结果：叶酸浓度达375nmol／L、750nmol／L和1875nmol／L时对人胃腺癌细胞株的增殖有抑制作用，叶酸处理的SGC-7901，G0／G1期细胞比例增大，细胞分裂受阻。结论：叶酸可以抑制胃腺癌细胞的生长、增殖并延长其群体倍增时间，降低其集落形成能力，叶酸可使胃腺癌细胞的细胞周期阻滞于G0／G1期，从而达到抑制癌细胞生长的目的。     

槐耳清膏对口腔鳞癌细胞SCC-15增殖、凋亡及侵袭能力影响的实验研究

目的:探究将槐耳清膏加入到体外培养的口腔鳞癌细胞SCC-15中是否对其有抑制增殖、侵袭,并诱导其凋亡的作用。方法:采用MTT法分析不同浓度的(0.5、1.0、3.0、5.0、10.0 mg/ml)槐耳清膏加入口腔鳞癌细胞中24 h、48 h后对其的增殖抑制作用。流式细胞仪分析槐耳清膏作用24 h后口腔鳞癌SCC-15的凋亡情况。TRANSWELL法探究口腔鳞癌细胞侵袭能力的变化。结果:槐耳清膏作用于体外培养的口腔鳞癌细胞,对其增殖能力具有显著的抑制作用,与药物浓度存在量效关系并随时间延长作用效果加强。槐耳清膏有促进口腔鳞癌细胞凋亡的作用。培养24 h后,浓度在0.5 mg/mg的槐耳清膏对细胞侵袭能力的影响无统计学意义,1.0、3.0、5.0、10.0 mg/ml的槐耳清膏可以明显减低细胞的侵袭能力,浓度越高抑制作用越明显。结论:槐耳清膏能够降低体外培养口腔鳞癌细胞的增殖及侵袭能力并诱导细胞的凋亡。     

卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响

目的:探讨卵巢颗粒细胞高尔基体磷酸化蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)表达对颗粒细胞凋亡及卵母细胞发育潜能的影响。方法:收集2016年5月—2017年4月因输卵管性不孕行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕的80例患者的卵巢颗粒细胞,根据妊娠结局分为临床妊娠组40例、未妊娠组40例。采用免疫细胞化学、蛋白质印迹(Western blotting)方法检测2组患者颗粒细胞GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达,采用实时聚合酶链反应(real-time PCR)方法检测2组患者GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3基因表达,并进行相关性分析。结果:GOLPH3、Bcl-2、Bax、Caspase-3在2组颗粒细胞中均有表达,其中临床妊娠组GOLPH3、Bcl-2的表达高于未妊娠组(P0.05),而Bax、Caspase-3的表达低于未妊娠组(P0.05)。相关性分析显示,GOLPH3表达与Bcl-2表达呈显著正相关(P0.001),与Bax、Caspase-3表达呈显著负相关(均P0.001),与优质胚胎数、优质囊胚数、可利用胚胎数呈显著正相关(均P0.001)。结论:卵巢颗粒细胞中GOLPH3表达水平可能通过Bcl-2、Bax、Caspase-3凋亡信号转导通路调控颗粒细胞凋亡作用,并进而对卵母细胞的发育潜能产生影响。     

亚砷酸钠对Chang肝细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨亚砷酸钠对正常人Chang肝细胞体外增殖及凋亡的影响.方法 采用0(对照)～100 μmol/L亚砷酸钠分别处理细胞24、48、72、96 h.采用MTT比色法检测细胞活力;采用流式细胞术检测染毒48 h时的细胞凋亡率.结果 仅0.2μmol/L亚砷酸钠染毒24 h的细胞活力略高于对照组,但差异无统计学意义;且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高和染毒时间的延长,Chang肝细胞存活率均呈下降趋势,并具有剂量-效应和时间-效应关系.与对照组相比较,5～100 μmol/L亚砷酸钠染毒组Chang肝细胞凋亡率均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,Chang肝细胞的凋亡率呈显著升高趋势,并具有剂量-效应关系.结论 亚砷酸钠有明显的细胞毒性,能抑制Chang肝细胞的增殖,这可能与其诱导细胞凋亡有关.     

丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3增殖与凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制和诱导凋亡作用及其可能机制。方法:培养人卵巢癌细胞SKOV3,经TanⅡA作用后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测Survivin与Smac/DIABLO mRNA表达水平;免疫荧光细胞化学检测Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白的表达。结果:1.0～10.0μg/ml TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制作用,并具有时间-剂量依赖性。实验组较对照组G1/G2期细胞数量增多,而S期细胞数量减少(P<0.05)。随着TanⅡA干预浓度的增加和作用时间的延长,Survivin mRNA的表达受到明显抑制(P<0.05),而Smac/DIABLO mRNA的表达明显上调(P<0.05)。Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白均表达于SKOV3细胞,其表达多定位于细胞质中,偶见于细胞核。结论:TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过抑制人卵巢癌细胞SKOV3 Survivin和促进Smac/DIABLO的表达而实现的。