槟榔碱对α平滑肌肌动蛋白在口腔黏膜成纤维细胞中表达的影响

目的 了解肌成纤维细胞与口腔黏膜下纤维性变（OSF）的关系并探讨肌成纤维细胞分化的来源和机制。方法 体外培养正常口腔黏膜成纤维细胞和OSF成纤维细胞,用免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测α平滑肌肌动蛋白的表达,并观察槟榔碱对其表达的影响,同时用ELISA方法检测了槟榔碱对成纤维细胞合成TGFβ1的影响。结果 OSF来源的成纤维细胞中α平滑肌肌动蛋白表达明显高于正常口腔黏膜成纤维细胞,槟榔碱对体外培养成纤维细胞合成α平滑肌肌动蛋白和TGFβ1水平无明显影响。结论 肌成纤维细胞可能在OSF的发病中起作用;OSF中肌成纤维细胞的来源可能与槟榔成分对成纤维细胞的直接作用无关。     

槟榔碱干预后的血管内皮细胞上清液对口腔颊黏膜成纤维细胞生物活性的影响

目的 比较不同浓度槟榔碱干预后的血管内皮细胞上清液(AECS)对正常人、OSF患者成纤维细胞(NM-FB、OSF-FB)增殖和胶原合成的影响.方法 0、30、60、90和12μg/mL槟榔碱干预血管内皮细胞(EC)24 h,收集去除槟榔碱后EC在无血清培养液中的上清液AECS并干预FB.结果 AECS30、AECS60、AECS90较AECS0更能促进FB的增殖和胶原合成(P＜0.05),但AECS120与AECS0无明显差别(P＞0.05).结论 低浓度槟榔碱干预后的EC分泌功能改变促进FB的增殖和胶原合成能力增强,EC可能参与了OSF的形成.     

槟榔碱及口腔角质形成细胞对成纤维细胞胶原酶活性的影响

目的 了解口腔粘膜下纤维性变中胶原堆积的机制.方法 对口腔粘膜角质形成细胞和成纤维细胞进行了共培养,并采用槟榔碱预处理角质形成细胞,用明胶酶谱方法检测其胶原酶的含量及活性.用碱水解法检测胶原含量.结果 只有共同培养组才能检测到MMP-9含量;槟榔碱预处理共同培养组的活化型MMP-2水平明显升高(P＜0.05).单独培养组中无MMP-9表达.共同培养组中胶原水平明显低于单独培养组(P＜0.05).结论 OSF组织中胶原堆积可能与MMP-2,MMP-9的表达没有明显关系.     

槟榔提取物对口腔黏膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的探讨口腔黏膜下纤维性变的发病机制。方法体外培养口腔黏膜下纤维性变患者和正常人口腔黏膜成纤维细胞,并用不同浓度的槟榔提取液进行干预,用MTT法检测FB的增殖状况。结果槟榔提取物在高于1×103ng/mL时对口腔黏膜FB的生长有抑制作用;体外培养的正常人FB与口腔黏膜下纤维性变患者FB的增殖能力没有显著差异。结论OSF的发病可能并非槟榔对FB的直接作用。     

槟榔提取物体外诱导人口腔黏膜成纤维细胞增殖模型的建立

目的为研究口腔黏膜下纤维化的修复机制,建立体外人口腔黏膜成纤维细胞增殖模型。方法体外培养口腔黏膜成纤维细胞,并用波形蛋白、角蛋白免疫细胞化学方法鉴定;分别用0、5、50、100、150、200μg/mL浓度的槟榔提取液对培养的成纤维细胞诱导,MTT法检测细胞增殖。结果波形蛋白表达阳性,而角蛋白表达阴性;50、100μg/mL槟榔提取物促进口腔黏膜成纤维细胞增殖。结论培养的细胞为纯化的成纤维细胞,槟榔提取物诱导口腔黏膜成纤维细胞增殖的最佳浓度为50～100μg/mL。该模型可为进一步的研究提供实验基础。     

粉防己碱对瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的了解粉防己碱对瘢痕成纤维细胞的超微结构的影响.方法培养来自人体瘢痕的成纤维细胞,在加入粉防己碱后,用透射电镜观察其超微结构.结果使用粉防己碱后,成纤维细胞胞体变小,胞质突起变少,核变小,核仁不明显,细胞器变少且小.结论粉防己碱可影响瘢痕成纤维细胞的超微结构,从而可能降低其胶原蛋白等细胞外基质的合成.     

Tiger17促进口腔黏膜成纤维细胞的增殖和迁移

  目的  观察在不同浓度 Tiger17作用于人口腔黏膜成纤维细胞（hOMF）不同时间后对细胞增殖和迁移的影响。  方法  培养hOMF细胞，CCK8和划痕实验检测不同浓度Tiger17作用于hOMF细胞不同时间后细胞增殖和迁移的变化；Western Blot 检测hOMF细胞表达TGF-β1、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白的水平。  结果  100 μg/mL和200 μg/mL Tiger17对hOMF的增殖活性在48 h明显高于对照组（P < 0.05）；100 μg/mL Tiger17对hOMF的迁移率在24 h和48 h均明显高于对照组（P < 0.01）；不同浓度的Tiger17作用于hOMF 24 h和48 h后，细胞表达TGF-β1、p-Erk1/2蛋白升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  Tiger17使hOMF细胞表达TGF-β1、p-Erk1/2升高，促进hOMF细胞的增殖和迁移。     

Tiger17促进口腔黏膜成纤维细胞的增殖和迁移

目的 观察在不同浓度Tiger17作用于人口腔黏膜成纤维细胞(hOMF)不同时间后对细胞增殖和迁移的影响.方法 培养hOMF细胞,CCK8和划痕实验检测不同浓度Tiger17作用于hOMF细胞不同时间后细胞增殖和迁移的变化;Western Blot检测hOMF细胞表达TGF-β1、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白的水...     

槟榔碱通过促进巨噬细胞分泌含miR-155-5p外泌体诱导人口腔成纤维细胞的活化

目的 探讨槟榔碱（ARE）通过调控巨噬细胞外泌体内miR-155-5p水平诱导人口腔黏膜成纤维细胞向成纤维表型转化的作用机制。方法 以人单核细胞系（THP-1）与人口腔黏膜成纤维细胞系（HOMF）为研究对象。实验设为空白对照组、阴性对照组、ARE刺激组、ARE刺激后THP-1培养上清刺激组（CS）、ARE刺激后THP-1外泌体刺激组（EXO）、ARE刺激后THP-1无外泌体上清刺激组（NES）、miR-155-5p过表达组（miR-155-5p mimics）、ARE刺激后EXO处理对照组（NC+EXO-ARE）和miR-155-5p抑制联合ARE刺激后EXO处理（miR-155-5p inhibitor EXO-ARE）组。以流式细胞术检测THP-1细胞极化情况。Transwell细胞迁移实验检测HOMF细胞迁移能力。DCFH-DA检测细胞氧化应激水平。qRT-PCR检测细胞α-SMA、I型胶原和SOCS1的mRNA转录水平。免疫印迹实验检测细胞α-SMA、I型胶原与SOCS1蛋白表达。结果 流式检测显示,相较于对照组,ARE组THP-1细胞由M0趋向M1极化。ARE对THP-1和H...     

粉防己碱对增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的 了解粉防己碱对瘢痕成纤维细胞的超微结构的影响;方法 培养来自增生性瘢痕的成纤维细胞,在加入粉防己碱后．用透射电镜观察其超微结构;结果 使用粉防己碱后,成纤维细胞胞体变小,胞质突起变少．核变小．核仁不明显．细胞器变少且小;结论 粉防己碱可影响瘢痕成纤维细胞的超微结构,从而可能降低其胶原蛋白等细胞外基质的合成。     

VEGF-D在口腔鳞癌相关成纤维细胞的表达研究

目的:研究VEGF-D在口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)的表达情况以及其表达水平是否与口腔鳞癌淋巴结转移相关。方法:通过免疫组化和RT-PCR检测VEGF-D在NFs、无淋巴结转移CAFs、淋巴结转移CAFs的蛋白和mRNA表达情况。结果:成功培养和纯化CAFs,与NFs相比,CAFs阳性表达α-SMA,生长增殖速度明显增加,细胞排列混乱;VEGF-D在淋巴结转移CAFs的染色强度明显增加,用2-ΔΔCT法计算VEGF-D的mRNA表达水平分别为0.806 7±0.117、1.192 5±0.125、2.085 3±0.131。结论:与NFs相比,CAFs表达VEGF-D明显增加,且与患者淋巴结转移相关。     

口腔组织补片在口腔黏膜缺损修复中的临床应用

目的 探讨口腔组织补片(脱细胞异体真皮基质)在口腔黏膜缺损修复中的临床应用价值。方法 选择口腔颌面外科口腔黏膜组织缺损患者18例，在缺损创面上采用口腔组织补片修复，并对修复后近期效果及组织病理学进行观察。结果 术后经4～8月随诊，除1例大部分成活外，余口腔黏膜缺损创面完全上皮化，无1例出现排斥反应。术后组织学观察，口腔组织补片处所生成黏膜组织类似于正常粘膜组织。结论 口腔组织补片可以作为口腔黏膜缺损的修复替代材料。     

溶血磷脂酸对心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的：观察溶血磷脂酸（LPA）对体外培养心脏成纤维细胞（CF）的细胞增殖和胶原合成的影响。方法：用消化法培养新生SD大鼠的CF，实验分为四组。对照组（加含5％小牛血清的DMEM培养液），实验组根据不同浓度的LPA又分为10^-6μmol／L组、10^-7μmol／L组和10^-8μmol／L组。用单四唑（MTT）比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸碱水解法测定胶原合成，分别观察不同浓度LPA对CF增殖和胶原合成的影响。结果：①随着LPA浓度的升高，MTT比色法吸光度（A490）值呈上升趋势。在药物作用48h后，仅有10^-6μmol／L组A。值较对照组有显著升高（P〈0．05）；作用至72h后，10^-8μmol／L组、10^-7μmol／L组、10^-6μmol／L组A490值均较对照组显著升高（P〈0．05）；作用至96h后，各实验组A。值较对照组均有显著升高（P〈0．05和P〈0．01）。②随着LPA浓度和作用时间的增加，CF分泌的胶原呈递增趋势。LPA作用48h仅10^-6μmol／L组胶原浓度较对照组显著升高（P〈0．01）；作用至72h后，10^-7μmol／L组、10^-8μmol／L组胶原含量较对照组有显著升高（P〈0．05和P〈0．01）；作用至96h，各实验组胶原含量均较对照组有显著升高，10^-6μmol／L组与10^-7μmol／L组、10^-8μmol／L组之间差异亦有显著性意义（P〈0．05）。结论：LPA具有促进SD新生大鼠CF增殖和胶原合成的作用。     

卡维地洛对高血压大鼠心脏成纤维细胞胶原合成及NO含量的影响

目的探讨卡维地洛对自发性高血压大鼠(SHR)心脏成纤维细胞(CFs)胶原合成及NO含量的影响及其作用机制。方法以SHR和Wistar大鼠为研究对象,采用消化法培养CFs,用硝酸还原酶法检测不同浓度(0、0.01、0.10、1.00、10.00μmol/L)卡维地洛干预下CFs培养液中的一氧化氮(NO)含量,用3H-脯氨酸掺入法观察CFs的胶原合成情况。结果(1)在基础状态下培养72h,SHR空白对照组的NO含量明显低于Wistar大鼠空白对照组(P<0.01);SHR空白对照组的3H-脯氨酸掺入率明显高于Wistar大鼠空白对照组(P<0.01)。(2)卡维地洛以浓度依赖的方式促进CFs的NO含量增加。(3)卡维地洛以浓度依赖的方式抑制CFs的3H-脯氨酸掺入率。(4)在不同浓度卡维地洛干预下,SHRCFs的3H-脯氨酸掺入率随NO含量的增高而减低,二者呈显著负相关(r=-0.943,P<0.01)。结论卡维地洛能促进CFs的NO合成,直接抑制CFs的胶原合成,进一步逆转高血压大鼠的左室重构。     

谷甾醇-3-O-葡萄糖苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响

目的探索谷甾醇-3-O-葡萄糖苷对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KF)抑制作用的研究。方法 0(对照组),3.125、6.25、12.5、25、50、100μg/m L的谷甾醇-3-O-葡萄糖苷作用KF细胞48 h后,MTT法检测细胞活力,Ed U染色法检测细胞增殖,流式细胞术分别检测细胞凋亡及细胞周期,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中COL I、COL III含量。结果 3.125、6.25、12.5、25、50、100μg/m L谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的降低KF细胞活力(P0.01),提高细胞增殖抑制率(P0.01),IC50=(27.54±2.18)μg/m L。与对照组比较,12.5、25、50μg/m L谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的降低细胞增殖率(P0.01),提高细胞早期及晚期凋亡率(P0.01),使细胞周期阻滞在G1期(P0.01),同时还能显著的降低细胞中COL I、COL III含量(P0.01)。结论谷甾醇-3-O-葡萄糖苷能显著的抑制KF细胞增殖,诱导细胞凋亡,同时还能抑制胶原的合成。     

胚胎成纤维细胞对糖尿病溃疡成纤维细胞老化表型和功能的影响

目的：观察人胚胎成纤维细胞（ FBs）对糖尿病足FBs生物学特性的影响,探讨其促进糖尿病溃疡愈合的机制。方法分离培养糖尿病创面FBs10例,分别与孕中期人胚胎皮肤FBs 3例（实验组）、正常人皮肤FBs 5例（对照组1）于transwell小室培养体系中间接共培养,并设立空白对照（对照组2）。绘制共培养体系中糖尿病足FBs生长曲线;观察共培养7 d后糖尿病足FBs形态;共培养至第4、7 d后,将各组糖尿病足FBs分离培养2 d,测量和对比上清液中羟脯氨酸和TGF-β1含量;检测共培养第3、5、7 d,β-半乳糖苷酶（ SA-β-gal ）染色阳性细胞百分率。胚胎FBs制作三维培养应用于8例糖尿病足溃疡,比较治疗前后创面愈合时间,做自身前后对照研究。结果实验组糖尿病足FBs比2个对照组增殖活跃,形态更接近于正常。经胚胎FBs处理4、7 d,糖尿病足FBs培养上清液中羟脯氨酸、TGF-β1明显增高,相对2个对照组差异均有统计学意义（羟脯氨酸4、7 d：与对照组1相比P＝0.023、P＝0.007;与对照组2相比P＝0.007、P＝0.003;TGF-β14、7 d：与对照组1相比P＝0.000、P＝0.000;与对照组2相比P＝0.000、P＝0.000）。实验组糖尿病足FBs的SA-β-gal染色阳性率在共培养第3、5及7 d无明显变化,2个对照组则明显增高。8例临床糖尿病足溃疡应用胚胎FBs三维培养治疗后创面均愈合。结论胚胎FBs能显著促进糖尿病足FBs增殖,延缓老化表型出现,同时上调羟脯氨酸、TGF-β1的分泌,可能与促进创面愈合机制有关。     

rhGM-CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成的影响

目的探讨rhGM-CSF促进口腔溃疡愈合的作用机制.方法取体外培养的胎儿口腔粘膜成纤维细胞,用rhGM-CSF刺激成纤维细胞后第2、4、6天用细胞计数及3H-胸腺嘧啶掺入法(3H-TdR)测定其增殖情况.结果 rhGM-CSF对胎儿口腔粘膜成纤维细胞增殖及DNA合成有刺激作用,在80～100 ng/ml 时,细胞生长达到最佳状态,过高浓度rhGM-CSF的刺激作用反而下降.结论 rhGM-CSF可以通过刺激成纤维细胞增殖及DNA合成促进口腔溃疡愈合.     

苦参碱抑制大鼠肺成纤维细胞增殖及其机制

目的观察苦参碱(Mat)对大鼠肺成纤维细胞增殖及纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)表达的影响.方法体外培养新生Wistar大鼠的肺成纤维细胞,倒置显微镜下观察活细胞形态;四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞分析仪测定细胞周期;免疫荧光测定FN的蛋白含量.结果不同浓度苦参碱处理36 h后,细胞MTT-OD值呈递减趋势,S期细胞百分率下降,G0/G1期百分率上升,FN的表达下降,且成剂量依赖性,与空白组相比,差异有显著性(P＜0.01).结论苦参碱可抑制大鼠肺成纤维细胞增殖,其作用与降低FN表达有关.     

钙调神经磷酸酶调控血管升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的作用

目的：探讨钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路对血管升压素（AVP）诱导新生大鼠心脏成纤维细胞（CF）胶原合成的调控作用。方法：采用胰酶消化法培养新生SD大鼠CF，应用羟基脯氨酸比色法测定细胞培养上清中羟基脯氨酸含量，CaN活性通过分光光度计测定。结果：①CF培养上清中羟基脯氨酸含量随着AVP浓度的升高而增加，其中10^-7mol／LAVP和10^-6mol／LAVP组羟基脯氨酸含量与空白对照组比较有显著性差异（均P〈0．01）；在0．5μg／mlCaN的特异性抑制剂环孢素共同干预下，羟基脯氨酸含量明显减少，并有统计学意义（P〈0．01）。②随着AVP浓度的升高，CF内CaN活性亦随之增高，与空白对照组比较，10^-7和10^-6mol／LAVP组细胞内CaN活性显著增高（P〈0．01）。③在10^-7mol／LAVP作用下，随着细胞内CaN活性的升高，CF培养上清中羟基脯氨酸含量随之增加，两者之间呈显著正相关（r=0．91，P〈0．05）：④在10^-7mol／LVI受体拮抗剂[d（CH2）5-Tyr2（Me）]AVP和10^-7mol／LAVP共同作用下，CF中CaN活性和培养上清中羟基脯氨酸含量与单独10^-7mol／LAVP作用组比较均显著降低，并有统计学意义（均P〈0．01）：结论：CaN信号通路在AVP诱导CF胶原合成过程中起到了重要的调控作用，该通路的激活可能是通过V1受体介导的.