青蒿琥酯对胃癌细胞系 HGC27 细胞增殖、凋亡的影响及其机 制简

目的 探讨青蒿琥酯对大胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 体外培养HGC27细胞,采用不同浓度青蒿琥酯处理24、48、72 h,MTT法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测Casepase-3、Caspase-9相对活性、Western blot法检RUNX-3蛋白表达情况.结果 青蒿琥酯（浓度10～100 mg/L）能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态.青蒿琥酯（浓度分别为20、40、80 mg/L）作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为11.5％、21.4％、36.6％,而对照组凋亡率仅为2.2％;处理后Casepase-3相对活性分别为（0.19±0.02）、（0.25±0.04）和（0.31±0.03）,对照组为（0.11±0.02）,Casepase-9相对活性分别为（0.18±0.02）、（0.23±0.03）和（0.30±0.04）,对照组为（0.10±0.02）,与对照组比较,青蒿琥酯处理组Casepase-3、Caspase-9相对活性显著增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;RUNX-3蛋白表达上调,呈剂量依赖性.结论 青蒿琥酯能抑制HGC27细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3、Caspase-9活性、上调RUNX-3蛋白的表达有关.青蒿琥酯是一种前景广阔的抗肿瘤药物.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对宫颈癌细胞系HeLa细胞凋亡及bcl-2/bax表达的影响。方法 体外培养HeLa细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度的EGCG处理24、48、72 h,对照组加入等体积的培养基。采用MTT法测定EGCG对HeLa细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;EGCG(浓度分别为20、40、80μg/mL)处理HeLa细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期、分光光度计检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Casepase-3)相对活性、Western blot法检测bcl-2/bax蛋白表达情况。结果 EGCG(浓度10~100μg/mL)能抑制HeLa细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;浓度为20、40、80μg/mL的EGCG作用HeLa细胞48 h后,细胞凋亡率逐渐上升,分别为12.4%、23.4%、35.4%,明显高于对照组(3.3%);细胞周期结果显示EGCG能抑制细胞的G1期行进和G1/S转换,降低S期细胞比例;实验组HeLa细胞Caspase-3相对活性分别为(1.36±0.07)、(1.85±0.06)、(2.45±0.07),均高于对照组(0.93±0.06),差异均有统计学意义(P<0.05);bax蛋白表达量升高,而bcl-2蛋白表达量降低,呈剂量依赖性。结论EGCG能抑制HeLa细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3活性、下调bcl-2基因的表达及上调bax基因有关。EGCG是一种前景广阔的抗肿瘤药物。     

EGCG通过抑制COX-2表达及PGE2合成诱导胃癌细胞系HGC27凋亡

目的:探讨EGCG对胃癌细胞系HGC27细胞凋亡的影响及其机制。方法:体外培养的HGC27细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度EGCG处理24、48、72 h,对照组加入同等体积的培养基,MTT法测定其对HGC2细胞增殖的影响;EGCG(浓度分别为0、10、20、40μg/m L)处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性,Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,western blot法检测环氧合酶2(COX-2)基因表达,ELISA法检测PGE2含量。结果:EGCG(浓度10~80μg/m L)能显著抑制HGC27细胞增殖,呈剂量和时间依赖性;EGCG(浓度分别为10、40、80μg/m L)作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为14.8%、25.8%、37.7%,对照组凋亡率为0.6%;Casepase-3、Casepase-9相对活性显著增加,线粒体膜电位降低,COX-2的表达降低,PGE2合成减少。结论:EGCG可通过抑制HGC27细胞COX-2表达及PGE2合成,激活线粒体凋亡途径,抑制细胞增殖并促进其凋亡。EGCG可能是一种前景广阔的抗肿瘤药物。     

熊果酸对乳腺癌细胞凋亡影响及其机制

目的：探讨熊果酸对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制。方法：体外培养MDAMB-231细胞,用不同浓度的熊果酸处理24、48、72 h,MTT法测定其对MDA-MB-231细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;熊果酸（浓度分别为20、40、80μmol/L）处理MDA-MB-231细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性,western blot法检测p16、p27基因表达情况。结果：熊果酸（浓度10~100μmol/L）能抑制MDA-MB-231细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;熊果酸（浓度分别为20、40、80μmol/L）作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率分别为11.5%、21.4%、36.6%,对照组凋亡率仅为2.2%;细胞周期结果显示熊果酸能抑制细胞的G1期行进和G1/S转换,S期细胞比例降低;Casepase-3、Casepase-9的相对活性显著增加;p16、p27的表达升高,呈剂量依赖性。结论：熊果酸能抑制MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与上调p16、p27表达阻滞细胞周期并增加细胞Caspase-3、Caspase-9激活线粒体凋亡途径有关。熊果酸是一种前景广阔的抗肿瘤药物。     

NF-κB信号通路的阻断对皮肤鳞癌SCL-1细胞凋亡的影响

目的：利用siRNA技术抑制核因子-kappa B（nuclear factor-kappa B,NF-κB）亚单位p65基因的表达,研究其对p65表达的抑制作用,并探讨其对皮肤鳞癌SCL-1细胞凋亡的影响。方法：将终浓度为50 nmol/L的p65 siRNA转染皮肤鳞癌SCL-1细胞,通过RT-PCR检测p65 mRNA的表达;利用Western blotting检测p65、bcl-2和bax蛋白表达,利用Caspase-Glo^®-3/7,8和9检测试剂盒检测caspase-3/9的活性;最后通过流式细胞术检测细胞凋亡。结果：p65 siRNA转染SCL-1细胞后的48 h,p65 mRNA的表达水平最低,与0 h相比, 差异有统计学意义（0.23±0.10 vs. 0.66±0.05, P<0.05）;转染48 h后,p65和bcl-2蛋白表达水平下调,而促凋亡蛋白bax的表达上升,进一步caspase-3/9的活性也显著升高。流式细胞术结果表明,p65 siRNA能明显诱导SCL-1细胞发生凋亡,其早期凋亡的比率为20.28%±1.87%,显著高于未处理组和对照siRNA组（凋亡率分别为9.13%±1.51%和9.37%±1.38%,F=47.532,P<0.01）。结论：p65 siRNA能够阻断皮肤鳞癌细胞中NF-κB信号通路,并下调抑凋亡蛋白bcl-2的表达,上调促凋亡蛋白bax的表达以及提高caspase的活性,提示NF-κB信号通路有望成为皮肤鳞癌基因治疗的分子靶点。     

右美托咪定对脂多糖诱导RAW264.7细胞凋亡的影响

目的：探讨右美托咪定（ DEX）对脂多糖（ LPS）诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响。方法：体外培养小鼠巨噬细胞系 RAW264.7,细胞随机分为正常对照组、LPS刺激组（10 mg/L）、DEX组（0.1、1、10、100μmol/L）和LPS＋DEX组（0.1、1、10、100μmol/L）;采用四甲基偶氮唑盐（ MTT）微量酶反应比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹法（ western blot）检测bax、bcl-2蛋白表达。结果：与正常对照组相比,DEX组（浓度为0.1、1、10μ mol/L ）对RAW 264.7细胞生存率、凋亡率以及bax、bcl-2的表达影响不明显（ P﹥0.05）;100μmol/L DEX对RAW264.7细胞生存率、凋亡率明显下降,bax的表达明显增加,bcl-2表达降低（P﹤0.05）;与 LPS刺激组相比,LPS＋DEX组（0.1,1,10μmol/L）可增加RAW264.7细胞的生存率,降低细胞凋亡率,bax表达降低,bcl-2表达增加（ P﹤0.05）,LPS＋100μmol/L DEX组细胞生存率显著降低,凋亡率显著增加,bax表达明显增加,bcl-2表达显著降低。结论：低浓度DEX（﹤10μmol/L）抑制LPS诱导RAW264.7细胞凋亡,高浓度则表现为增强作用。     

高浓度葡萄糖损伤人腹膜间皮细胞分子机制的研究

目的：探讨高浓度葡萄糖损伤人腹膜间皮细胞的机制。方法：（1）人腹膜间皮细胞分别经含1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖的M199培养基培养48小时后，检测间皮细胞线粒体膜电位（Ψ）、凋亡率、caspase-3活性、bax和bcl-2基因mRNA表达；（2）分别用0．1μmol／L和0．01μmol／L环孢素A（CsA）与4．25％葡萄糖共同作用人腹膜间皮细胞，检测细胞凋亡率和caspase-3活性。结果：（1）随着葡萄糖浓度增加，Ψ丧失的细胞百分率、bax mRNA表达量、caspase-3活性、凋亡率增加（P〈0．05），而bcl-2 mRNA表达量减少；（2）随着葡萄糖浓度增加，bax mRNA的表达量与皿丧失的间皮细胞百分率呈显著正相关（P〈0．01）；bcl-2 mRNA的表达量与Ψ丧失的间皮细胞百分率呈显著负相关（P〈0．01），Ψ丧失的间皮细胞百分率与间皮细胞凋亡率、caspase-3活性呈显著正相关（P〈0．01）：（3）0．1μmol／L CsA组间皮细胞凋亡率和caspase-3活性显著低于高糖对照组（P〈0．05）。结论：（1）高糖可能通过上调bax基因表达和下调bcl-2基因表达，诱导人腹膜间皮细胞线粒体活化、caspase-3活化和凋亡。（2）高糖诱导人腹膜间皮细胞caspase-3活化和凋亡可能依赖于线粒体活化。     

阿司匹林对大肠癌LoVo细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的 观察阿司匹林对人结肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及探讨可能的作用机制.方法 用不同浓度阿司匹林处理体外培养的LoVo细胞24、48、72h,MTT法检测其对结肠癌LoVo细胞增殖的影响,倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,阿司匹林（浓度分别为2、4、8mmol/L）分别处理LoVo细胞48h,行流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度计检测easepase-3相对活性,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca2＋浓度的变化,Western blot法检测bcl-2、bax基因表达情况.结果 阿司匹林（浓度1～10mmol/L）能显著抑制LoVo细胞增殖,呈剂量、时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;阿司匹林处理LoVo细胞48h后,细胞凋亡率分别为11.4％、22.3％、37.1％,对照组凋亡率为2.4％;阿司匹林处理细胞48h后,casepase-3相对活性显著增加;阿司匹林能上调bax的表达并下调bcl-2表达,呈剂量依赖性.结论 阿司匹林均能抑制LoVo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能为增加细胞内Ca2含量、casepase-3活性及上调bax的表达并下调bcl-2表达.     

牛磺酸通过线粒体凋亡途径诱导胃癌细胞凋亡

目的:探讨牛磺酸对人胃癌细胞系HGC27细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:体外培养的HGC27细胞,用不同浓度牛磺酸处理24、48、72 h,MTT法测定其对HGC27细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;牛磺酸(浓度分别为20、40、80 mmol/L)处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,western blot法检Bcl-2、Bax、细胞色素C(cyt-c)、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达情况。结果:牛磺酸(浓度10~160 mmol/L)能抑制HGC27细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;牛磺酸(浓度分别为20、40、80 mmol/L)作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为15.2%、23.3%、35.4%,而对照组凋亡率仅为3.4%;线粒体膜电位降低,Bax、细胞色素C表达上调,而Bcl-2表达下调,Casepase-3、Caspase-9酶原均有活化,可见裂解后片段,呈剂量依赖性。结论:牛磺酸能抑制HGC27细胞的增殖并可能是通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。     

紫草素诱导人结肠癌细胞SW620凋亡及机制研究

目的探讨紫草素诱导人结肠癌细胞株SW620凋亡及分子机制。方法体外培养人结肠癌细胞株SW620,加入终浓度分别为2.5～15μmol/L的紫草素。采用MTT法测定紫草素对肿瘤细胞的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,Western blot方法测定对bcl-2、bax蛋白表达水平。结果紫草素随时间和浓度的增加对SW620细胞增殖抑制率增加,细胞凋亡率增加（P〈0.05）。Western blot法检测发现bax蛋白表达升高同时bcl-2蛋白表达下降。结论紫草素有抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡的作用,可以通过调控bax和bcl-2蛋白的表达经线粒体途径诱导细胞凋亡。     

去甲斑蝥素诱导胆管癌细胞凋亡及对bax、bcl-2、半胱天冬酶3和细胞色素C凋亡相关因子影响

目的研究去甲斑蝥素对人胆管癌细胞株RBE细胞抗肿瘤作用及bax、bcl-2、活化半胱天冬酶3和细胞色素C转录及表达的影响,探讨其作用机制。方法体外培养胆管癌RBE细胞,在不同浓度去甲斑蝥素中干预一定的时间,5-二苯基四氮唑溴盐[3-（4,5-dimethylthiazol-2-y1）-2,5-diphenyhetrazoliumbromide,MTr]比色法检测去甲斑蝥素对胆管癌RBE细胞抑制作用,膜联蛋白／碘化丙啶（annexinV／PI）双染检测凋亡率,免疫印迹及实时定量聚合酶链反应检测bax、bcl-2、活化半胱天冬酶3、细胞色素C蛋白及mRNA表达的变化。结果胆管癌RBE细胞经不同浓度的去甲斑蝥素作用后增殖明显受到抑制。AnnexinV-FITC／PI检测显示去甲斑蝥素能诱导RBE细胞凋亡,与对照组相比有更高的凋亡率,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫印迹及实时定量聚合酶链反应检测显示bax、活化半胱天冬酶3和胞浆内细胞色素C转录和表达升高,bcl-2转录水平降低。结论去甲斑蝥素对胆管癌RBE细胞的增殖具有明显的抑制作用,其可能通过增加bax、抑制bcl-2的转录和表达,释放细胞色素C激活半胱天冬酶3诱导RBE细胞凋亡。     

miRNA-155表达对人肺癌细胞A549增殖的影响

【目的】探讨miRNA-155在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达及miRNA-155对人肺癌细胞A549增殖的影响。【方法】采用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）技术检测15例非小细胞肺癌组织及其癌旁组织中miRNA-155的表达;A549细胞分别转染miR-NC和miRNA-155 mimic ,采用Real-time PCR技术检测转染后A549细胞中的miRNA-155表达水平,同时采用MTT 技术和流式细胞技术检测转染后A549细胞增殖情况,Western印迹法检测转染后A549细胞中Akt、p-Akt（Ser473）、p27、bcl-2、bax的表达。【结果】miRNA-155在非小细胞肺癌组织中的表达情况明显高于癌旁组织（ P ＜0．05）;与转染 miR-NC 组相比, A549细胞转染miRNA-155 mimic后miRNA-155表达水平明显增高（ P ＜0．001）,MTT实验和流式细胞技术显示miRNA-155促进A549细胞的增殖;Western印迹法结果显示：转染miRNA-155的A549细胞p-Akt （Ser473）,bcl-2的表达水平增高,p27、bax的表达水平降低。【结论】miRNA-155可能通过促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p-Akt（Ser473）、bcl-2表达,同时抑制p27、bax的表达来促进非小细胞肺癌的发生发展。     

冬凌草甲素诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡及其机制

目的 研究冬凌草甲素对人脑胶质瘤U251细胞体外生长抑制及诱导凋亡的作用及其机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对U251细胞的生长抑制作用;倒置显微镜法和荧光显微镜Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪Annexin V FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Realtime PCR法检测冬凌草甲素作用U251细胞后的bcl 2、bax及caspase-3基因表达水平的变化。结果 冬凌草甲素对U251细胞有明显的生长抑制作用（P<0.05）,呈明显的时间和浓度效应关系。冬凌草甲素作用U251细胞24h后出现明显的细胞凋亡形态学改变。随着冬凌草甲素作用浓度增加,凋亡和坏死细胞数均增加,浓度越高,诱导细胞凋亡的作用越明显（P均 <0.05）。随着冬凌草甲素作用时间延长,U251细胞的bax和caspase-3基因的表达逐渐增强,bcl-2基因的表达逐渐减弱（P均<0.05）。结论 冬凌草甲素能诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡,其凋亡机理可能与bax和caspase 3基因表达的上调,bcl-2基因表达的下调相关。     

bcl-2和bax在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化

目的:探讨bcl-2和bax在三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化。方法:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h,RT-PCR和Western-blot分别检测bcl-2和bax基因mRNA表达及相应的蛋白表达变化。结果:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h后,bcl-2 mRNA相对表达分别为(65.02±4.69)%、(40.70±3.94)%,baxmRNA相对表达分别为(46.71±4.26)%、(95.65±5.57)%,Western-blot检测bcl-2蛋白相对表达分别为(56.34±6.45)%、(42.01±3.01)%,bax蛋白质表达分别是(50.65±4.50)%、(66.78±5.05)%,对照组与实验组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:As₂O₃诱导HL-60细胞凋亡过程中,下调bcl-2 mRNA和蛋白质表达,同时上调bax mRNA和蛋白质表达,可能是As₂O₃诱导细胞凋亡信号传导通路之一。     

大蒜素对大肠癌细胞系LoVo细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨大蒜素对大肠癌细胞系Lo Vo细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:体外培养的Lo Vo细胞,用不同浓度大蒜素处理24、48、72 h,MTT法测定其对Lo Vo细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;大蒜素(浓度分别为3、6、12μg/m L)处理Lo Vo细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测Casepase-3相对活性、western blot法检测环氧合酶2(COX-2)、P16基因表达情况。结果:大蒜素(浓度2~32μg/m L)能抑制Lo Vo细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;大蒜素(浓度分别为3、6、12μg/m L)作用Lo Vo细胞48 h后,细胞凋亡率分别为12.5%、23.3%、35.4%,对照组凋亡率为3.4%;Casepase-3相对活性显著增加;COX-2的表达降低,而P16的表达升高,呈剂量依赖性。结论:大蒜素能抑制Lo Vo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3活性、下调COX-2基因的表达及上调P16基因有关。大蒜素是一种前景广阔的抗肿瘤药物。     

三氧化二砷诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨三氧化二砷体外诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡的作用及其可能的机制. 方法:梯度浓度三氧化二砷处理视网膜母细胞瘤细胞系HXO-RB44,MTT法观察增殖的变化,AO/EB染色法、Annexin V PI法流式细胞仪检测细胞凋亡.活性比色法检测caspase-3活性变化,Western 免疫印迹法测定bcl-2和bax蛋白的表达. 结果:三氧化二砷处理后的HXO-RB44细胞增殖抑制,抑制率呈剂量时间依赖性;其细胞凋亡率显著增加;caspase-3活性增加,bcl-2/bax的比值下调. 结论:三氧化二砷在体外可通过诱导HXO-RB44细胞凋亡达到抑制其增殖的作用;其诱导凋亡的作用可能与激活caspase-3和下调bcl-2/bax比值有关.