四逆汤类方提取物对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的：探讨四逆汤类方提取物对离体培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用。方法：培养的乳鼠心肌细胞经终浓度分别为1、5、25μg／mL的四逆汤类方提取物预处理，进行缺氧／复氧损伤后，比色法测定细胞内线粒体脱氢酶活性、丙二醛(MDA)含量及培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果：与对照组比较，附子、干姜配葱白提取物(EAGO)，附子、干姜配甘草提取物(EAGL)，附子、干姜配胆汁提取物(EAGB)，附子、干姜配人参提取物(EAGG)可以提高细胞内线粒体脱氢酶活性，与附子配干姜提取物(EAG)组比较无显著差异。EAGO、EAGL、EAGB、EAGG可以降低上清液中乳酸脱氢酶活性，与EAG组比较差异显著。EAGL、EAGG可以降低细胞内MDA含量，与FAG组比较差异显著。结论：四逆汤类方均可以提高缺氧／复氧损伤的乳鼠心肌细胞内线粒体脱氢酶活性，降低上清液中乳酸脱氢酶活性。四逆汤和人参四逆汤提取物有降低细胞内MDA的作用。提示四逆汤类方对缺氧／复氧损伤的心肌细胞均有保护作用。     

当归黄芪超滤膜提取物预处理对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤保护作用的研究

目的探讨当归黄芪超滤膜提取物预处理对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤和氧化损伤的保护作用。方法体外培养原代乳鼠心肌细胞,不同分子量及剂量当归黄芪超滤膜提取物预处理24h后,采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）诱导心肌细胞缺氧／复氧损伤模型,测定细胞存活率（MTT法）、细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放量、细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量。结果在缺氧／复氧损伤模型和氧化损伤模型中,当归红芪超滤膜提取物预处理明显提高细胞存活率,增加胞内SOD活性,降低培养液中LDH释放量和胞内MDA含量。结论当归红芪超滤膜提取物预处理对缺氧／复氧损伤以及氧化损伤心肌细胞都具有明显的保护作用,其可能与防止氧自由基的产生或抑制氧自由基对心肌细胞的损伤有关。     

葛花总黄酮对缺氧/复氧心肌细胞的抗氧化作用研究

目的 研究葛花总黄酮预处理对缺糖缺氧/复氧复糖(A/R)损伤心肌细胞的抗氧化作用.方法 连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立乳鼠心肌细胞A/R损伤模型,不同剂量葛花总黄酮(10,30,100 mg·L-1)预处理24h后,运用比色法测定细胞内SOD活性及MDA含量和上清液中iNOS活力;运用Annexin V/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡变化.结果 与A/R模型组比较,葛花总黄酮预处理组能显著提高SOD活性(P＜0.05),降低培养液中iNOS释放量及胞内MDA含量,同时使细胞凋亡率显著降低(P＜ 0.05或P＜0.01).结论 葛花总黄酮预处理对A/R损伤心肌细胞具有明显的保护作用,此作用可能与增加SOD活性、清除自由基的产生、增强心肌抗氧化能力有关.     

丹参对ox-LDL孵育的乳鼠心肌细胞缺氧-复氧所致细胞凋亡的保护作用

目的:观察丹参对ox-LDL孵育的乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法:采用原代培养乳鼠的心肌细胞,ox-LDL孵育24小时,再采用95%N2+5%CO2模拟缺氧培养3小时后,更换为正常DMEM培养液培养9小时的方法建立心肌细胞缺氧/复氧模型。乳鼠心肌细胞随机分为6组:正常对照组(Control group);ox-LDL组(ox-LDL group);ox-LDL缺氧-复氧组(ox-LDL+A/R group);丹参保护组,加丹参低剂量(SM L/ox-LDL+A/R group)、中剂量(SM M/ox-LDL+A/Rgroup)、高剂量(SM H/ox-LDL+A/R group)组。利用MTT比色法检测心肌细胞存活率,Hoechst33342染色检测凋亡率,采用Western blot分别观察Cytc、Bax、bcl-2、caspase-3的蛋白表达。结果:通过MTT比色法检测,加入丹参高剂量组对细胞保护最有效。与Control组比较,ox-LDL组:细胞核有固缩和断裂,Cytc、Bax和caspase-3的表达升高,细胞存活率和bcl-2表达降低;与ox-LDL组比较,ox-...     

青藤碱拮抗培养乳鼠心肌细胞的缺氧/复氧损伤

目的:研究青藤碱对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的影响。方法:建立心肌细胞A/R损伤(低氧2h,复氧1h)模型,于复氧后测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)变化及细胞内丙二醛(MDA)含量和细胞存活率。结果:与正常对照组相比,单纯A/R组LDH漏出量、MDA水平显著升高(P<0.01),细胞存活率显著降低(P<0.01)。与A/R组比较,青藤碱10、30、100μmol/L处理组上述变化明显减轻(P<0.05)。结论:青藤碱对乳鼠心肌细胞A/R损伤具有保护作用。     

薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用

目的:研究薯蓣皂苷对缺氧/复氧所致乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用,并探讨其作用机制。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,以不同剂量的薯蓣皂苷进行干预。实验分为5组:空白对照组、缺氧/复氧组、薯蓣皂苷低、中、高剂量(10,20,40μmol/ml)干预组。MTT法检测心肌细胞存活率;TUNEL法检测心肌细胞凋亡百分率;Fluo-3负载激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内[Ca2+]i的变化;硝酸还原酶法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度。结果:与缺氧/复氧组比较,薯蓣皂苷各剂量干预组心肌细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,心肌细胞[Ca2+]i荧光强度明显减弱,心肌细胞培养液中NO浓度降低。结论:薯蓣皂苷能有效抑制缺氧/复氧导致的乳鼠心肌细胞的凋亡,其可能与减轻细胞内钙超载,抑制受损心肌细胞NO升高,减轻过量NO的细胞毒性作用有关。     

山柰酚和槲皮素对乳鼠心肌缺氧复氧及过氧化损伤的保护作用

目的:观察山柰酚和槲皮素对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的干预作用并探讨其作用机理。方法:取大鼠新生乳鼠心肌细胞做原代培养,MTT法检测细胞活力,确定药物作用安全范围;考察药物对心肌细胞缺氧复氧损伤模型LDH漏出的改变;复制心肌细胞过氧化氢损伤模型,观察药物对细胞活力及上清液中LDH含量的影响。结果:山柰酚和槲皮素125μg/ml以下对心肌细胞活力无明显影响。山柰酚或槲皮素100、50、25、12.5μg/ml均可以降低缺氧复氧损伤后心肌细胞的LDH漏出率(P<0.01或P<0.05),其中山柰酚100、50、25μg/ml浓度,槲皮素以50、25、12.5μg/ml浓度作用较佳。山柰酚、槲皮素对心肌细胞过氧化氢损伤均有显著的抑制作用,均呈浓度依赖性,并可显著降低过氧化氢损伤所致的LDH释放。结论:山柰酚和槲皮素具有显著的抗心肌细胞缺氧损伤的能力,与其抗氧化的药理作用有关。     

葛根素对乳鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤时NO产量增加的抑制作用

目的 :观察葛根素对缺氧 复氧损伤诱导的大鼠乳鼠心肌细胞一氧化氮 (NO)产生的作用。方法 :采用硝酸还原酶法测定对照组、模型组、及 1,0 .1,0 .01g·L^-1Pue给药组在各个时间点时细胞培养上清液中NO含量的变化。结果 :复氧开始后 ,模型组NO合成显著性地增加 (P<0 .0 1)。复氧后 6h ,NO合成激增 ,并一直保持。 3种剂量的Pue在复氧后 6h才表现显著性抑制 (P<0.01)NO合成的作用 ,并保持至其后 24h。结论 :在NO合成量激增时Pue才表现出显著降低缺氧 复氧损伤时心肌细胞分泌的NO ,并呈剂量依赖趋势。     

活络效灵丹对乳鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用研究

目的 探讨活络效灵丹含药血清对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧( hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 取体外培养的乳鼠心肌细胞,建立H/R心肌细胞损伤模型,实验分为4组:正常血清对照组、模型组(H/R组)、活络效灵丹(HXP)血清组和单硝酸异山梨酯(ISMN)血清组,采用MTT比色法检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞存活率的影响,测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量以及胞浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并采用流式细胞仪检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞凋亡的影响.结果 与正常组比较,模型组细胞存活率明显降低,上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量升高,SOD活性降低,细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);与模型组比较,活络效灵丹含药血清可明显提高细胞存活率,增加胞浆SOD活性,减少上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量,并降低细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 活络效灵丹对H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用可能与其抗脂质过氧化作用有关.     

九龙藤总黄酮对缺氧/复氧心肌损伤的作用

目的研究九龙藤总黄酮对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞的影响及作用机制。方法建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,给予不同剂量九龙藤总黄酮(终质量浓度分别50、100、200 mg·L-1)预处理,倒置显微镜下观察心肌细胞形态学变化;酶联免疫法测定肿瘤坏死因子活性;免疫组化方法观察Bcl-2、Bax、NF-κB蛋白的表达;Annex v-FITC/PI双染法测定心肌细胞凋亡率。结果与模型组相比,九龙藤总黄酮预处理能减轻心肌细胞损伤,降低肿瘤坏死因子-α、诱导型一氧化氮合酶、维持内皮型一氧化氮合酶水平,上调Bcl-2、下调Bax、NF-κβ蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡(P<0.01或P<0.05)。结论九龙藤总黄酮对缺氧/复氧心肌损伤具有保护作用,其机制可能与调节诱导型一氧化氮合酶、核转录因子-κβ信号通路,上调Bcl-2、下调Bax和核转录因子-κB蛋白表达,抑制心肌细胞凋亡有关。     

四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧乳鼠心肌细胞细胞凋亡的影响,探讨其心肌细胞保护作用。方法采用胰蛋白和胶原酶联合消化的方法原代培养的SD乳鼠心肌细胞,利用高纯氮气建立心肌细胞缺氧／复氧模型。实验分为正常组、模型组和药物干预组（予四妙勇安汤合生脉饮）。采用流式细胞术AnnexinV-FITC／PI双染法检测心肌细胞凋亡率。结果与正常组比较,模型组及药物干预组心肌细胞凋亡率均升高（P〈0．05）。与模型组比较,药物干预组心肌细胞凋亡率下降（P〈0．05）。结论四妙勇安汤合生脉饮对缺氧／复氧后心肌细胞凋亡有保护作用。     

皂荚皂苷对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的研究皂荚皂苷对缺氧/复氧(H/R)诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法采用原代培养的心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分9组:正常对照组,H/R组,H/R 皂荚皂苷(100,50,25,12.5,6.25,3.12,1.56μg·mL-1)剂量组。观察各组细胞经H/R损伤后,细胞内天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的变化情况。结果皂荚皂苷(50,25,12.5,6.25μg·mL-1)剂量组可显著降低缺氧/复氧损伤心肌细胞内AST、CK、LDH释放量及MDA的生成,并能提高SOD活性。结论皂荚皂苷具有明显的抗缺氧/复氧损伤,保护心肌细胞的作用。     

异芹菜脑在隔山香药材中的含量测定及其对心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用

目的 建立隔山香药材中异芹菜脑（Isoapide,Iso）的高效液相色谱法（ HPLC）, 测定方法并初步探讨异芹菜脑对体外培养乳鼠心肌细胞缺 氧/复氧损伤的保护作用。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相：以甲醇-水（70 ∶ 30）洗脱,流速为 1.0 mL·min-1,检测波长为 280 nm,柱温室温,进样量：10 μL。并用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧复/氧损伤模型,异芹菜脑在建模前进行预干预,心肌细胞随机分为5 组,空白对照组（Control,CON）,缺氧/复氧组（hypoxia/reoxygenation,H/R）,异芹菜脑低、中、高剂量干预组（IsoL、IsoM、IsoH）。缺氧4 h/复氧4 h后,采用 CCK-8法检测心肌细胞存活率。结果 异芹菜脑在0.02096~0.2096 mg·mL-1线性关系良好（r=0.9999）,平均回收率为 98.09 %,RSD=1.25 %。与空白对照组比较,缺氧/复 氧组心肌细胞存活率显著降低（P ＜ 0.01）;与缺氧/复氧组比较,IsoL、IsoM、IsoH剂量干预组心肌细胞存活率均显著升高。结论 异芹菜脑对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧 /复氧损伤具有一定的保护作用,隔山香药材中异芹菜脑的 HPLC 测定方法准确、简便、重现性好,有助于完善隔山香药材的质量控制。     

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??OBJECTIVE To observe the effect and mechanism of Bauhinia championii flavones (BCF) on anti-hypoxia/reoxygenation injury in cardiomyocytes via inhibiting necroptosis. METHODS The cardiomyocytes hypoxia/reoxygenation injury model was developed and pretreated with Bauhinia championii flavones. ELISA was used to evaluate the contents of TNF-??, and the activities of T-AOC were determined by ultraviolet spectrophotometric method. The protein expression of RIPK3 was observed by Western-blotting, and the necroptosis rate was determined by using Annex v-FITC/PI double staining.RESULTS Compared with model group, Bauhinia championii flavones pretreatment alleviated cardiomyocytes injury, increased T-AOC level, decreased the activity of TNF-??, down-regulated the expression of RIPK3, and inhibited cardiomyocytes necroptosis(P<0.05). It had synergistic effect when combined BCF with necrostatin-1(P<0.05). CONCLUSION BCF can inhibit necroptosis and has protective effects on hypoxia/reoxygenation injury, which are associated with increasing the level of T-AOC, down-regulating TNF-?? and RIPK3, and decreasing the cardiomyocytes necroptosis rate.     

大蒜素对乳鼠心肌细胞延迟预处理保护作用及其信号转导机制的研究

目的:研究大蒜素预处理对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的延迟保护作用及其部分信号转导机制.方法:采用细胞存活率、乳酸脱氢酶活性、丙二醛含量作为心肌细胞受损指标,观察终浓度为20μg/ml的大蒜素预处理24h后对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及蛋白激酶抑制剂H-7、丝裂素激活蛋白激酶抑制剂PD 98059对大蒜素预处理作用的影响;并通过免疫印迹技术(Western blot analysis)测定大蒜素预处理24h后,nPKC-ε、热休克蛋白70(HSP70)和核因子-кB(NFкB)的表达情况.结果:大蒜素预处理能显著提高缺氧复氧损伤心肌细胞存活率,减少LDH漏出和MDA生成,H-7、PD 98059可完全取消这种心肌保护作用.大蒜素预处理可明显增加nPKC-ε、HSP70的表达,H-7能抑制此作用,而PD98059仅对HSP70表达有抑制,NF-кB在各组间均无明显表达.结论:大蒜素能够模拟缺血预处理延迟保护作用,其机制涉及PKC及MAPKs信号途径,可能通过活化nPKC-ε,使下游靶蛋白MAPKs磷酸化而诱导HSP70的高度表达产生延迟预处理心肌保护作用.     

刺囊酸预处理对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

 目的 研究刺囊酸预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制。方法 用终浓度分别为0.5, 5和50 μmol·L^-1的刺囊酸预处理原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞1 h, 予以缺氧3 h后, 再复氧2 h后,检测细胞存活率、乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、丙二醛含量及热休克蛋白70表达等指标,观察其对缺氧/复氧损伤的延迟保护作用,并探讨一氧化氮合成酶抑制剂0.1 mmol·L^-1的N-硝基-L-精氨酸甲酯、促分裂原活化蛋白激酶抑制剂50 μmol·L^-1的PD98059和1 μmol·L^-1K⁺-ATP通道阻断剂格列苯脲对其保护作用的影响。结果 与缺氧/复氧组比较,不同剂量的刺囊酸预处理组能显著提高细胞存活率,降低乳酸脱氢酶活性,呈剂量依赖性,且显著能增加超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低丙二醛含量,增加热休克蛋白70表达,能对抗缺氧/复氧损伤;而N-硝基-L-精氨酸甲酯和PD98059能部分取消刺囊酸预处理的上述保护作用。结论 刺囊酸预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤有显著抗氧化作用,且其保护作用机制可能与一氧化氮生成、促分裂原活化蛋白激酶活化及增加热休克蛋白70表达有关。     

红黑二丸甾醇提取物通过非钙依赖磷脂酶A2介导的抗心肌细胞缺氧复 氧损伤研究

目的：探讨红黑二丸甾醇提取物抗心肌细胞H/R损伤的作用与机制。方法：western blot检测不同H/R时间点iPLA2蛋白的表达,确定H/R的时间点;在H/R的基础上,用不同浓度梯度的红黑二丸甾醇提取物处理细胞,western blot 检测iPLA2蛋白表达,MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测 LDH、SOD、MDA、TNF-α的含量,流式细胞术检测凋亡。结果：H60min/R30min,iPLA2蛋白表达最高（P<0.01）,红黑二丸甾醇提取物量效依赖地降低了其蛋白表达,同时降低H/R时LDH、MDA、TNF-α的含量,减少凋亡,提高SOD的活性及细胞的存活率 (P<0.05)。结论：红黑二丸甾醇提取物能通过iPLA2量效依赖地抗心肌细胞H/R损伤。