口腔扁平苔藓患者黏膜脱落上皮中人β防御素-2和白色念珠菌的研究

目的 研究口腔扁平苔藓（OLP）患者口腔黏膜脱落上皮中的人β防御素-2（HBD-2）及白色念珠菌的情况。方法 运用RT-PCR和沙堡琼脂培养基细菌培养方法分析10例健康人、70例口腔扁平苔藓患者（35例充血糜烂型、35例斑纹型）口腔黏膜脱落上皮细胞中HBD-2、白色念珠菌的情况。结果 10例健康对照组中HBD-2和白色念珠菌的实验结果均为阴性;70例病例组患者中,HBD-2在充血糜烂型组阳性表达率为45.71%（16/35）,在斑纹型组阳性表达率为22.86%（8/35）,HBD-2在充血糜烂组与在斑纹组中的表达结果比较,差异具有显著性意义（P<0.05）,HBD-2在病例组与在健康对照组的表达结果比较,差异具有显著性意义（P<0.05）;白色念珠菌在充血糜烂型组阳性检测率为37.14%（13/35）,在斑纹型组阳性检测率为14.29%（5/35）,白色念珠菌在充血糜烂组与在斑纹组中的检测结果比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;白色念珠菌在病例组中阳性检测率为25.71%（18/70）,与在正常组中的阳性检测结果（0/10）比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;病例组中HBD-2与白色念珠菌的相关关系比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 口腔扁平苔藓患者口腔黏膜脱落上皮中HBD-2的表达情况和白色念珠菌的检测情况与扁平苔藓的病变程度有密切的关系,并随病情的加重所得结果均有增高表现。     

小鼠β-防御素研究进展

β-防御素已从起初的几个防御素家族类别细化为以物种、特性、作用等为主的防御素多肽.近年来,对小鼠β-防御素的研究日益增多,已发现了十余种不同亚型的β-防御素.它除了具有良好的抗菌、抗病毒、抗真菌、抗肿瘤等生物学活性外,还具备诱导机体免疫应答的能力,其医学作用不容忽视.β-防御素不仅分布广泛,在物种中也存在高度的同源性,...     

益生菌VSL#3对Oxazolone小鼠结肠炎结肠黏膜中β防御素-2表达的影响

目的观察益生菌VSL#3对Oxazolone小鼠结肠炎结肠黏膜中β防御素-2表达的影响。方法建立Oxazolone小鼠结肠炎模型并分为VSL#3治疗组、SASP治疗组、治疗对照组。免疫组化方法、RT-PCR及Western blot检测各组结肠粘膜组织中β防御素-2的蛋白及mRNA的表达。结果免疫组化方法、RT-PCR检测及Western blot检测发现VSL#3治疗组小鼠结肠粘膜中β防御素-2的蛋白及mRNA的表达低于治疗对照组,与SASP治疗组比较差异没有显著性。结论VSL#3对Oxazolone诱导的小鼠结肠炎有治疗作用,其作用机制可能与下调β防御素-2的表达有关。     

β防御素-2在天疱疮中表达的研究

目的：研究和探讨HBD-2在天疱疮中表达和意义。方法采用免疫组化SP法检测20例天疱疮皮损组织、20例寻常型银屑病皮损组织、20例正常人皮肤组织石蜡标本中HBD-2在皮损中表达。结果 HBD-2在天疱疮皮损表达主要见于表皮全层。HBD-2水平均高于银屑病组及正常皮肤组。差异有统计学意义（P＜0.05）。结论推测HBD-2在天疱疮的免疫反应过程中起到一定的作用。     

急性肺损伤小鼠肺组织β防御素-4和β防御素-6的基因表达

目的观察小鼠肺组织中β防御素-4（mBD-4）和mBD-6的基因表达水平，以及急性肺损伤（AH）对其表达的影响。方法将60只成年昆明小鼠随机分为Au组和对照组（每组30只），用脂多糖腹腔注射复制Au模型，于不同时间点处死小鼠获取肺组织，实时荧光定量PCR检测肺组织mBD-4、mBD-6的基因表达水平，测序鉴定PCR产物的特异性。结果对照组肺组织中各时间点及Au组6h点均无mBD-4、mBD-6基因表达，而Au组12h，1d和3d时间点表达显著升高（依次为mBD-4：0．0326±0．0104，0．0487±0．0126，0．04684±0．0092；mBD-6：0．03974±0．0083，0．04444±0．0072,0．04254±0．0113）。Au组小鼠mBD-4表达在12h时间点显著低于1d和3d时间点（P均〈0．05），在1d与3d时无显著差异（P〉0．05）；Au组mBD-6表达在12h，1d和3d时间点无显著差异（P〉0．05）。结论mBD-4和mBD-6基因在昆明小鼠肺组织中没有组成型表达，而Au可以诱导其表达。     

β-防御素2研究进展

防御素是一类分子量约为4．0～5．0kMr、含有6个半胱氨酸残基、三对二硫键的阳离子多肽。防御素不仅通过直接杀菌作用抵御入侵机体的病原微生物，还在介导获得性免疫反应、调节机体的免疫炎症反应和创伤修复过程中起着重要作用。β-防御素2是人体中第一个被发现的可诱导性防御素，因此，β-防御素2的基因表达调控、生物学活性、与皮肤／肺部疾病发生发展相关性等方面的研究较为深入。采用重组DNA技术从原核表达体系、真核表达体系中获取具有生物学活性的β-防御素2多肽，并研究其在呼吸道细菌感染、脓毒症所致肺损伤／肺功能障碍发生发展中的保护作用，将有助于阐明β-防御素2在免疫相关疾病中的作用，有助于阐述肺损伤／呼吸功能障碍发生发展的机制与防治。     

β防御素2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

人β防御素2是细菌和前炎性因子刺激下合成表达的抗菌肽,主要分布在感染后的皮肤和黏膜组织中,构成机体抵御微生物的第一道化学屏障,在中耳胆脂瘤形成和发展的免疫学机制中发挥了重要作用。     

β防御素-2和γ干扰素在尖锐湿疣皮损中表达的研究

目的:研究和探讨β防御素-2(HBD-2)和γ干扰素(IFN-γ)在尖锐湿疣发病和预后中的作用.方法:用免疫组化法检测HBD-2和IFN-γ在25例尖锐湿疣(CA)(初发患者)皮损、20例寻常性银屑病皮损以及25例健康人皮肤石蜡切片中的表达.SPSS 16.0统计软件进行数据分析,组间行Wilcoxon秩和检验,并进行相关性分析.结果:HBD-2、IFN-γ在尖锐湿疣皮损的表达主要见于基底层, HBD-2、IFN-γ水平明显低于银屑病阳性对照组(Z=-7.174,-7.230;P<0.O1),HBD-2的水平较正常皮肤为高表达(Z=-5.147,P<0.01), IFN-γ的水平较正常皮肤为低表达(Z=-6.311,P<0.05),且HBD和IFN无相关性(r=0.123,P=0.467>0.01).结论:推测HBD-2、IFN-γ可能通过不同的途径共同参与了尖锐湿疣的免疫反应过程并发挥了一定的作用.     

白介素-22诱导肺泡上皮2型人β防御素表达的初步研究

目的:初步探讨对于直接或间接引起的肺内感染,炎症反应产生的白介素(IL)-22能否刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,并且诱导其生成?释放2型人β防御素(human β-defensin-2,HBD-2)发挥抗感染作用?方法:流式细胞术检测肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞膜表面IL-22R表达水平?重组人IL-22(20 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,RT-PCR检测不同时间(0?2?4?8?16?24 h)HBD-2表达情况?不同浓度的重组人IL-22(0?4?20?100?500 ng/ml)刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞,RT-PCR检测HBD-2表达情况?结果:肺泡Ⅱ型上皮细胞膜表面IL-22R表达呈强阳性,阳性率达(99.90 ± 0.13)%?比较6个时间点HBD-2表达差异,发现HBD-2表达具有时间依赖性?比较不同浓度IL-22处理下HBD-2表达差异,IL-22 100 ng/ml为最佳干预浓度,且HBD-2表达与IL-22浓度具有依赖关系?结论:IL-22能显著诱导肺泡上皮细胞生成并释放HBD-2,且具有时间和剂量依赖性?     

牙龈上皮β-防御素-2诱导表达的中药筛选

目的 筛选出对大鼠牙龈上皮β-防御素-2具有诱导表达作用的中药。方法 2019年2月至2020年4月选取90只大鼠作为研究对象。将90只健康成年Wistar大鼠随机分为固有表达组(10只)、阴性对照组及阳性对照组(各10只);实验组分别给予药物(黄芪组、板蓝根组、丹参组、柴胡组、鱼腥草组、穿心莲内酯组,每组10只,共60只),连续给药7 d后将大鼠处死,切取大鼠牙龈上皮,采用免疫组织化学方法检测大鼠牙龈上皮β-防御素-2蛋白的表达情况。结果 黄芪组和板蓝根组大鼠牙龈上皮β-防御素-2蛋白的表达明显高于固有表达组,差异有统计学意义(P0.05),但与阳性对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 中药黄芪和板蓝根能够诱导大鼠牙龈上皮β-防御素-2的表达增高,黄芪和板蓝根具有调节大鼠口腔黏膜天然免疫的作用。     

三磷酸腺苷对小鼠内源性β防御素2表达的作用研究

目的 研究三磷酸腺苷(ATP)对小鼠内源性β防御素2(mice β-defensin-2 mBD-2)表达的影响,探讨提高机体抗感染防御能力的途径和方法。方法 取60只小鼠为研究对象,随机分为对照组(N,30只)和实验组(T,30只),实验组小鼠每只体内注入相同剂量的ATP,对照组小鼠注射等剂量的生理盐水,于注射后不同时间段12h(T1组)、24h(T2组)、36h(T3组)分别(10只/组)提取小鼠肺组织,检测内源性mBD-2mRNA的表达,同时制作肺组织病理标本,用免疫组化法检测各组小鼠肺组织中mBD-2蛋白的表达。结果 与对照组相比,经ATP处理后,实验组小鼠内源性mBD-2 mRNA的表达出现不同程度的上调,差别有统计学意义(P＜0.01)。实验组间比较,T2组mBD-2 mRNA表达水平较T1组高,差别有统计学意义(P＜0.01);T2组mBD-2 mRNA表达水平较C组高,差异具有统计学意义(P＜0.05);mBD-2 mRNA表达水平在T1组和T3组之间无差异,无统计学意义(P＞0.01)。免疫组化结果提示经ATP作用后,实验组小鼠肺组织中mBD-2蛋白表达上调,在24h达强阳性,与12h和36h相比有显著差异(P＜0.05)。结论 体内注射外源性ATP可以上调小鼠肺组织mBD-2 mRNA的表达,且mBD-2 mRNA及mBD-2蛋白的表达随ATP作用时间的不同而不同,其在24h时表达水平达到峰值。     

小鼠β-防御素-2对肿瘤细胞 SiHa 生长的抑制作用及其机制

目的：探讨小鼠β-防御素-2（beta defensin 2,BD2）对 SiHa 细胞生长的抑制作用及其机制。方法将pcDNA3．1（＋）/mBD 2、pcDNA3．1（＋）/rmBD 2质粒转染 SiHa 获得的稳定转染细胞 SiHa/M、SiHa/R 裂解,用细胞裂解上清进行 Western blot 检测 mBD2蛋白表达;同时采用细胞活力分析对转染细胞的细胞活力进行测定,采用 AnnexinⅤ、PI 流式细胞分析法和 TUNEL 法检测细胞凋亡情况,并计算细胞凋亡指数。结果 SiHa/M、SiHa/R 组在4～6 Ku 区域出现目标条带;SiHa/M、SiHa/R 组细胞在贴壁后2～3 d 细胞活性明显低于 SiHa 细胞（P ＝0．018）,但随着时间推移,细胞活性开始下降,3组细胞的细胞活力差异无统计学意义（P ＝0．374）;SiHa/M、SiHa/R 及 SiHa 组 Annexin Ⅴ＋/PI＋双阳性细胞的百分率分别为2．4％、2．3％、2．3％;Annexin Ⅴ＋/PI-细胞分别为0．9％、1．2％、1．5％,3组差异无统计学意义（P ＝0．743）;SiHa/M、SiHa/R 组凋亡细胞发生率较高,分别达到40．7％、30．2％,而 SiHa 组细胞凋亡率只有7．3％,SiHa/M、SiHa/R 组细胞凋亡率明显高于 SiHa 组,差异有统计学意义（P ＝0．004）;SiHa/M 组凋亡发生率高于 SiHa/R 组,差异有统计学意义（P ＝0．003）。结论 mBD 2能够抑制 SiHa 细胞的生长和诱导细胞凋亡。     

人β防御素-2研究进展

内源性抗生素肽(endogenous antibiotic peptides)是动、植物天然免疫的重要介质,在哺乳动物(包括人)中,由于对革兰氏阳性菌、阴性菌、真菌、螺旋体、分枝杆菌及某些包膜病毒等均有很强杀伤活性,故将其命名为防御素(defensin).迄今为止,在人体中已发现的防御素共有两类(α、β)10种.其中β防御素家族共发现3种,分子量为4～5kD,含38～47个氨基酸残基阳离子,分别为人β防御素-1,2,3(human β-defensin-1,2,3. hBD-1,2,3).德国Harder J等[1]于1997年首先发现hBD-2,他们用大肠杆菌亲和柱结合高压液相层析法在牛皮癣病人皮肤中分离并纯化到约4.3kD的多肽,经氨基酸序列分析表明与牛的TAP(气管抗菌肽)、LAP(舌抗菌肽)及hBD-1同源,属于人β抗菌肽成员之一,命名hBD-2.已证实hBD-2是黏膜和上皮细胞抵抗微生物入侵的重要介质,在持续暴露在病原微生物的器官表面发挥重要的抗菌作用.     

肺炎球菌多糖疫苗对老龄大鼠肺组织β-防御素-2表达的影响

目的研究肺炎球菌多糖疫苗(纽莫法)对老龄大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的影响.方法将18～22月的老龄大鼠随机分为实验组与对照组,实验组给予纽莫法0.2 ml/kg腹腔注射,对照组给予等量生理盐水腹腔注射.24 h后处死,取肺组织,提取总RNA,以β-actin为内参照,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织rBD-2基因表达水平.结果实验组老龄大鼠24 h后rBD-2基因表达水平为0.500±0.126,对照组为0.209±0.138,两组间差异有统计学意义(P<0.05).结论纽莫法可上调老龄鼠肺组织β-防御素-2基因的表达,增强机体局部免疫力.     

人类β-防御素-2的研究进展

防御素(defensins)是已知发现的内源性抗生素肽家族中最大的亚家族,是一类重要的抗菌肽分子[1],它普遍存在于动物、植物、昆虫及人类体内,分子结构相对稳定,且又具有较为强力广谱抗菌、抗病毒、抗螺旋体及肿瘤等生物学活性。目前研究已经发现的人类β-防御素(HBD-1~6)中,β-防御素-2(HBD-2)广泛表达于皮肤和黏膜上皮细胞中,其诱导表达高、     

人β-防御素2在大肠杆菌中的高效表达和纯化

目的：研究具有生物学活性的人防御素2（HBD2）多肽在大肠杆菌中的原核高效表达的可行性及融合表达蛋白的分离纯化技术。方法：PCR扩增不合前导序列的HBD2成熟肽的编码框全长的cDNA片段（smHBD2-cDNA），利用BglⅡ和BamHⅠ同尾酶构建多拷贝串联的nsmHBD2-cDNA的克隆载体，利用NcolⅠ和HindⅢ限制性内切酶构建融合表达载体pET32-nsmHBD2-cDNA，在大肠杆菌中BL21（DE3）中诱导表达含HBD2的融合蛋白，SDS-PAGE分析产量。可溶蛋白经亲和层析、肠激酶酶切、离子交换层析等方法分离、纯化HBD2多肽。采用液体培养法，测定重组人β防御素2对大肠杆菌的抑菌活性。结果：构建了n为1、2、4或8倍的多拷贝串联nsmHBD2-cDNA表达载体，1、2和4倍smHBD2-cDNA的可溶蛋白比例分别为52％、48％和31％；而8倍HBD2-cDNA几乎不合可溶蛋白，目标蛋白以包含体形式表达，集中在不可溶部分。重组HBD2对E．coli K12 D31有较强的抑制作用，在终浓度约为0．4至0．5μg／ml时，90％细胞的生长被抑制。结论：采用融合表达、多拷贝串联表达方式，可增加产物长度以弱化蛋白酶的降解作用，也减弱了目标蛋白产物对宿主的毒性；适当的多拷贝串联基因可以提高HBD2的产量，但拷贝数过高会影响重组蛋白表达产量，且易形成不溶蛋白；在大肠杆菌中可达到具有生物学活性的HBD2多肽的原核高效表达。     

人类β-防御素2在口腔扁平苔藓病损中表达的研究

目的探讨口腔扁平苔藓（OLP）患者病损中的人类β-防御素2（hBD-2）的表达,以分析hBD-2在OLP发病机制与上皮抗感染免疫中的作用。方法采用免疫组织化学技术（IHC）和反转录聚合酶链式技术（RT-PCR）,检测25例OLP病损组织、7例对照组织中hBD-2多肽的表达,并进行分析。结果 hBD-2在所有样本中均出现了阳性胞浆染色,健康口腔黏膜组中hBD-2蛋白为弱阳性染色,与呈强阳性染色的OLP组差异有统计学意义（P〈0.05）;RT-PCR检测结果显示,所有样本均出现了hBD-2的cDNA电泳条带,在健康口腔黏膜组中呈微弱表达,在OLP组织中表达明显增强,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论健康口腔黏膜组织也有少量hBD-2表达,提示其作为机体先天性免疫的组成部分,在维持口腔黏膜健康上具有一定作用。在OLP的病理过程中hBD-2可能呈炎性诱导上调表达而参与了OLP的免疫发病过程。     

白细胞介素-10对人外周血白细胞β-防御素2基因诱导性表达的影响

目的:探讨炎症抑制因子白细胞介素-10(白介素-10)在β-防御素2(hBD-2)基因诱导性表达中的作用。方法:22例健康人被纳入本研究中,以终浓度0 ng/m l的LPS、100 ng/m l的LPS、10ng/m l的IL-10、100 ng/m l的LPS+10 ng/m l的IL-10加入900μl人外周血中,于37℃刺激培养6 h后,提取外周血白细胞总RNA,用实时定量RT-PCR的方法测定外周血白细胞hBD-2mRNA的表达水平。结果:0 ng/m l的LPS或10 ng/m l的IL-10刺激6 h的白细胞中未检测到hBD-2 mRNA,100 ng/m l的LPS刺激6 h后hBD-2mRNA的表达水平为166.9±35.14,而IL-10与LPS共同刺激6 h后hBD-2 mRNA的表达水平为30.40±9.18。IL-10使hBD-2mRNA的诱导性表达水平明显降低(P<0.05)。结论:人外周血白细胞中hBD-2基因呈现诱导性表达,IL-10能下调hBD-2的诱导性表达。     

β防御素-2和白细胞介素-1β在寻常型银屑病患者皮损中表达的研究

目的探讨β防御素-2（HBD-2）和白细胞介素-1β（IL-1β）在寻常型银屑病皮损中的表达及其共同作用对银屑病皮损形成的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测45例银屑病患者皮损区、非皮损区及15例正常人皮肤中HBD-2和IL-1β的表达情况,对其在皮损中的表达情况进行相关性分析,并将其与PASI评分进行相关性分析。结果与正常人皮肤组织和银屑病患者非皮损区相比,银屑病患者皮损区HBD-2和IL-1β的表达明显上调,非皮损区HBD-2和IL-1β的表达也高于正常人皮肤组织,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。银屑病患者皮损中HBD-2和IL-1β的表达水平与PASI评分之间均存在正相关关系（P〈0.05）。结论HBD-2和IL-1β在寻常型银屑病皮损中的表达均升高,可能共同参与银屑病的发病过程。