Rad51基因沉默对铅诱导TK6细胞DNA双链断裂损伤修复的影响

目的 研究Rad51基因沉默后对醋酸铅染毒致人淋巴母细胞（TK6细胞）DNA双链断裂损伤的修复作用的影响。方法 构建Rad51沉默慢病毒载体及阴性对照,感染对数期TK6细胞,荧光定量PCR和Western blot验证感染效果。运用480μmol/L的醋酸铅染毒TK6细胞24 h(Control组、shRNA-NC组和shRNA-Rad51组),采用免疫荧光法检测TK6细胞的磷酸化组蛋白H2AX（γ-H2AX）的表达,Western Blot检测TK6细胞的Rad51、BRCA1、53BP1蛋白的表达。结果 shRNA-Rad51组的Rad51 mRNA表达水平和Rad51蛋白表达水平均低于Control组及shRNA-NC组（P <0.01）;shRNA-Rad51组的γ-H2AX阳性率为（27.48±1.66）%,与Control组的（14.77±1.21）%及shRNA-NC组的（14.04±1.31）%比较,差异均有统计学意义（P <0.01）;shRNA-Rad51组的BRCA1蛋白表达水平为（0.25±0.03）,与Control组的（0.55±0.04）及sh...     

硒对铅致TK6细胞遗传损伤的拮抗作用

目的 研究亚硒酸钠对铅致TK6细胞遗传毒性损伤的拮抗作用。方法 培养TK6细胞,调整细胞密度为1×106/mL,试验分3组,正常对照组、铅染毒组和亚硒酸钠干预组,采用免疫荧光染色检测细胞DNA双链断裂损伤生物标志物γH2AX、ELISA试剂盒检测细胞DNA氧化损伤生物标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)和染色体畸变试验检测细胞染色体损伤情况。结果 铅染毒后,TK6细胞内γH2AX含量、8-OHdG水平和染色体畸变数明显增高,与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);0.01 μg/mL的亚硒酸钠干预后,细胞内γH2AX含量和染色体畸变数下降,与铅染毒组比较差异有统计学意义(P<0.01),细胞内8-OHdG水平明显下降,与铅染毒组比较差异有统计学意义(P<0.01),而与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 铅对TK6细胞有遗传毒性损伤作用,0.01 μg/mL的亚硒酸钠具有拮抗铅对TK6细胞遗传毒性损伤的作用。     

miRNA-22对食管癌细胞放射敏感性的影响

目的 探究miRNA-22对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)放射敏感性的影响。方法 建立miRNA-22表达的稳定转染细胞模型,通过克隆形成实验和MTT法检测miRNA-22表达对受照食管癌细胞增殖活性的改变。结果 体外稳定转染细胞模型中,克隆形成实验和MTT法结果表明,miRNA-22表达升高,显著降低了食管癌细胞增殖活性(P < 0.01),促进了ESCC细胞对γ-射线的放射敏感性。反之,miRNA-22表达降低,显著增加了食管癌细胞增殖活性(P < 0.01),抑制了ESCC细胞对γ-射线的放射敏感性。结论 miRNA-22的表达与食管癌放射敏感性密切相关,miRNA-22表达量越高,食管癌细胞放射敏感性越高。     

人乳铁蛋白提高H460细胞放射敏感性的初步研究

目的 观察hLF对于人非小细胞肺癌H460细胞辐射敏感性的影响。方法 用pBC1-hLF载体转染H460细胞,同时以hLF标准品处理为参照,细胞活力实验、克隆形成试验和流式检测细胞凋亡来观察hLF基因高表达对H460细胞生长特性和辐射敏感性的影响。结果 hLF基因高表达可以显著抑制H460的生长(P<0.01),提高其对射线的敏感性,hLF处理组与pBC1-hLF转染组辐射增敏率分别为1.29和1.59。hLF可促进H460细胞自发和受照后的凋亡,降低克隆形成能力(P<0.01)。结论 hLF基因高表达可以体外显著抑制人非小细胞肺癌H460细胞的生长,提高其辐射敏感性。     

C形臂X射线机扫描对小鼠的辐射损伤研究

目的 研究C形臂X射线机扫描对小鼠的辐射损伤作用。方法 随机数字表法将72只昆明雄性小鼠分成6组,设对照组、单次、两次、四次、八次、十六次扫描组。用C形臂X射线机全身扫描各组小鼠24 h后,总抗氧化能力检测试剂盒(ABTS快速法)、GSH检测试剂盒和活性氧检测试剂盒分别用于检测脾脏总抗氧化能力(T-AOC)、还原型谷胱甘肽(GSH)含量和活性氧(ROS)水平。流式细胞仪检测各照射组小鼠外周血淋巴和骨髓细胞的DNA损伤(γ-H2AX)水平(1 h后检测)和骨髓细胞周期进程变化(24 h后检测)。结果 四次、八次和十六次C形臂X射线机扫描显著增加了脾脏中ROS的水平(P < 0.05),十六次扫描极大的降低了GSH含量和T-AOC(P < 0.05)。四次、八次和十六次C形臂X射线机扫描增加了小鼠外周血淋巴和骨髓细胞的γ-H2AX水平。十六次C形臂X射线机扫描增加了骨髓细胞G₀/G₁期和G₂/M百分率(P < 0.05),八次和十六次扫描降低S期百分率(P < 0.05)。结论 C形臂X射线机扫描对小鼠产生了不同程度的辐射损伤。     

X射线对人肝癌血管内皮细胞迁移的影响及其机制

目的 探讨X射线对人肝癌血管内皮细胞（TEC）迁移的影响并探讨其机制。方法 细胞划痕实验检测TEC细胞迁移能力，实时荧光PCR法检测Plk1 mRNA表达水平，免疫印迹法检测Plk1、STAT3及磷酸化STAT3（p-STAT3Y705）水平。结果 2 Gy X射线照射后24 h TEC迁移距离为（114.37±35.12）像素，对比未受照射TEC迁移距离（78.89±24.67）显著升高（P<0.01）；2 Gy X射线照射后Plk1 mRNA表达水平显著升高（P<0.05），BI2536抑制Plk1激酶活性后p-STAT3Y705水平降低；2 Gy X射线照射后Plk1和p-STAT3Y705水平显著升高。结论 2 Gy X射线通过Plk1磷酸化STAT3（而非增加STAT3表达水平）来发挥其促进TEC迁移作用。     

60Coγ-射线诱导人膀胱癌EJ细胞中磷酸化组蛋白H2AX焦点形成

目的探讨^60Coγ-射线是否可在人膀胱癌EJ细胞中诱导磷酸化组蛋白H2AX焦点形成以及形成的焦点数量与照射剂量及照射后时间的关系。方法免疫印迹法和流式细胞分析法用于检测不同剂量^60Coγ-射线照射后脚细胞中γH2AX蛋白表达的变化；免疫荧光法检测不同剂量照射后以及2Gy照射后不同时间日细胞中γH2AX焦点的数量。结果γ-射线照射后γH2AX蛋白表达明显增加，但量效关系不明显；免疫荧光法可检测γH2AX焦点形成的数量和大小，并且存在剂量-效应关系及有时间依赖性，随着照射剂量的增加，γH2AX焦点数目及大小均明显增加，照射的剂量范围从0．1～4．0Gy均可检测，照射后24h仍可检测到γH2AX焦点，但焦点数随时间延长而减少、减弱。结论免疫荧光法检测照射后γH2AX焦点数目可敏感、直观地反映DNA损伤及修复情况，有望成为辐射检测及辐射致癌的好的生物指标。     

电磁辐射对PC12细胞GluR2蛋白质表达及磷酸化的影响

目的 探讨电磁辐射对PC12细胞GluR2蛋白质表达及蛋白质磷酸化水平的影响。方法 对离体培养的PC12细胞给予平均功率密度为90mW/cm²的电磁波持续辐照20min,采用western blot方法检测辐照后0h、3h、12h、24h四个时相点GluR2蛋白质表达及蛋白质磷酸化水平的变化。结果 电磁波辐照后0h和3hGluR2的蛋白质表达水平降低(P<0.05),其余各时相点无显著变化;辐照后0hGluR2的蛋白质磷酸化水平显著降低(P<0.01),3h后逐渐恢复至正常水平。结论 平均功率密度为90mW/cm²的电磁波持续辐照20min能够降低PC12细胞GluR2的蛋白质表达和蛋白质磷酸化水平。     

冬凌草甲素抑制胃癌SGC-7901细胞增殖诱导DNA损伤相关蛋白表达的实验研究

目的探索冬凌草甲素对胃癌细胞增殖及DNA损伤相关蛋白表达的影响。方法MTT法检测冬凌草甲素对胃癌细胞的增殖活性的影响;Western blot检测H2AX、γH2AX、ATM、phospho-ATM、phospho-P53、P53、phospho-CHK2等DNA损伤相关蛋白表达的变化;免疫荧光检测冬凌草甲素对phospho-ATM和γ-H2AX焦点形成的影响。结果 MTT结果显示冬凌草甲素能够抑制胃癌细胞增殖,具有剂量依赖关系;Western blot结果显示γH2AX、phospho-ATM、phospho-P53、P53、phospho-CHK2蛋白水平呈剂量依赖性增高;免疫荧光结果发现phospho-ATM、γH2AX焦点随着药物浓度增大而增多。结论冬凌草甲素可以抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导DNA损伤及相关蛋白表达,且具有剂量依赖性,但DNA损伤信号通路详细机制有待进一步研究。     

Celecoxib对肺癌细胞的辐射增敏实验研究

目的 建立裸鼠非小细胞肺癌(NSCLC)H460细胞动物模型,观察环氧化酶2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布(Celecoxib)对H460放疗的增敏作用,并对其作用机理进行初步探讨。方法 建立Balb/c裸鼠肿瘤模型。动物随机分成3组:对照组、放疗组、塞来昔布+放疗组。灌肠法给予塞来昔布16mg/kg/d,4周时对比两组肿瘤瘤重;免疫组化方法分析共济失调-毛细血管扩张症突变蛋白(ATM)和表皮生长因子受体(EGFR)表达变化。结果 4周时塞来布昔+放疗组与放疗组的抑瘤效果比较有显著差异(P < 0.05)。结论 塞来昔布可能通过提高ATM和EGFR的表达,增强H460细胞的放疗敏感性,将来可能具有较好的临床应用价值。     

γ-H2AX的辐射剂量效应关系研究

目的用共聚焦显微镜分别检测在整体和离体条件下电离辐射强度与γ-H2AX的剂量效应关系以及整体与离体之间的一致性关系。方法用137Cs源分7个剂量点(0、0.5、1、2、4、6、8Gy)照射Wister雌性大鼠外周全血,提取淋巴细胞,利用共聚焦显微镜检测电离辐射与γ-H2AX的剂量效应关系。结果在离体和整体条件下均发现电离辐射与γ-H2AX存在剂量反应关系,拟合的剂量反应曲线分别为:Y整=0.096+0.13X;Y离=0.040+0.21X。并且在离体和整体两种条件下的剂量反应关系具有一致性(R=0.98)。结论γ-H2AX与照射剂量之间存在正相关,相关系数R大于0.98。表明γ-H2AX检测有作为快速辐射生物剂量指标的可能性,可以用离体照射实验替代整体照射。     

不同辐照方式对IL-4刺激的RAW264.7细胞MMP-2/9和VEGF表达的影响

目的 研究不同辐照方式对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分泌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和血管内皮生长因子（VEGF）的影响,为肿瘤的预后影响因素研究提供依据。方法 实验分为两个部分,第一部分用0、2、5、10 Gy X射线照射细胞24 h后给予IL-4刺激12 h,第二部分用IL-4刺激3 h后用0、2、5、10 Gy X射线照射9h,Western blot方法检测RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF蛋白的表达情况。结果 照射+IL-4组,随着受照剂量的增加,RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达量增加（P<0.05）,存在剂量-反应关系,并且MMP-2和VEGF存在强相关性（P<0.001）,MMP-9和VEGF也存在强相关性（P<0.001）;IL-4+照射组,随着受照剂量的增加,RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达量增加（P<0.05）,存在剂量-反应关系,并且MMP-2和VEGF存在强相关性（P<0.001）,MMP-9和VEGF也存在强相关性（P<0.001）;与照射+IL-4组比较,IL-4+照射组RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF的增加更显著（P<0.05）。结论 电离辐射能导致RAW264.7细胞MMP-2、MMP-9和VEGF表达增高,不同辐照方式对RAW264.7细胞MMP-2/9和VEGF表达的影响不同,本研究为肿瘤的治疗提供作用靶点。     

γ-H2AX 在辐射生物剂量估算中的研究进展

γ-H2AX对受照人员DNA双链断裂损伤修复具有重要作用,利用γ-H2AX焦点计数可以估算照射剂量,因其检测周期短、特异性与灵敏度相对较高,近几年被国内外广泛应用于辐射剂量生物估算研究。本文对γ-H2AX在生物剂量估算中的应用与研究进展做一综述,对其在核与辐射事故批量受照人员的快速剂量估算以及伤员分类的应用前景上进行展望。     

Early increase of radiation-induced γH2AX foci in a human Ku70/80 knockdown cell line characterized by an enhanced radiosensitivity

A better understanding of the underlying mechanisms of DNA repair after exposure to ionizing radiation represents a research priority aimed at improving the outcome of clinical radiotherapy. Because of the close association with DNA double strand break (DSB) repair, phosphorylation of the histone H2AX protein (γH2AX), quantified by immunodetection, has recently been used as a method to study DSB induction and repair at low and clinically relevant radiation doses. However, the lack of consistency in literature points to the need to further validate the role of H2AX phosphorylation in DSB repair and the use of this technique to determine intrinsic radiosensitivity. In the present study we used human mammary epithelial MCF10A cells, characterized by a radiosensitive phenotype due to reduced levels of the Ku70 and Ku80 repair proteins, and investigated whether this repair-deficient cell line displays differences in the phosphorylation pattern of H2AX protein compared to repair-proficient MCF10A cells. This was established by measuring formation and disappearance of γH2AX foci after irradiating synchronized cell populations with (60)Co γ-rays. Our results show statistically significant differences in the number of γH2AX foci between the repair-deficient and -proficient cell line, with a higher amount of γH2AX foci present at early times post-irradiation in the Ku-deficient cell line. However, the disappearance of those differences at later post-irradiation times questions the use of this assay to determine intrinsic radiosensitivity, especially in a clinical setting.     

NNK-Induced DNA Methyltransferase 1 in Lung Tumorigenesis in A/J Mice and Inhibitory Effects of (−)-Epigallocatechin-3-Gallate

DNA methyltransferase 1 (DNMT1), a key enzyme mediating DNA methylation, is known to be elevated in various cancers, including the mouse lung tumors induced by the tobacco-specific carcinogen 4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone (NNK). However, it is not known whether DNMT1 expression is induced right after NNK treatment and how DNMT1 expression varies throughout lung tumorigenesis. In the present study, we found that administration of NNK to A/J mice caused elevation of DNMT1 in bronchial epithelial cells at Days 1, 3, and 14 after NNK treatment. DNMT1 elevation at Day 1 was accompanied by an increase in phospho-histone H2AX (γ-H2AX) and phospho-AKT (p-AKT). At Weeks 5 to 20, NNK-induced DNMT1 in lung tissues was in lower levels than the early stages, but was highly elevated in lung tumors at Week 20. In addition, the early induction of p-AKT and γ-H2AX as well as cleaved caspase-3 in NNK-treated lung tissues was not detected at Weeks 5 to 20 but was elevated in lung tumors. In concordance with DNMT1 elevation, promoter hypermethylation of tumor suppressor genes Cdh13, Prdm2, and Runx3 was observed in lung tissues at Day 3 and in lung tumors. Treatment by EGCG attenuated DNMT1, p-AKT, and γ-H2AX inductions at Days 1 and 3 and inhibited lung tumorigenesis.