套式及免疫套式聚合酶链反应检测乙型肝炎表面抗原阴性肝病患者血清中乙型肝炎病毒DNA

为了更准确、简便而又快速地了解乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性肝病患者的病因，建立了套式和免疫套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ的技术，结合丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标的检测，对ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者的病因进行了研究。发现套式ＰＣＲ能将单次ＰＣＲ的敏感性稳定地提高１０００倍；免疫套式ＰＣＲ可检测到０．１～０．０１ｐｇ／Ｌ水平。检测ＨＢｓＡｇ阴性肝硬化２２例（Ａ组）、ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝炎１３例（Ｂ组）、ＨＢｓＡｇ阴性和乙型肝炎病毒核心抗体（抗－ＨＢｃ）阳性正常对照组３０例（Ｃ组）及ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（－）肝硬化患者１２例（Ｄ组），分别有４５．５％、３０．８％、１３．３％和１００％患者血清中ＨＢＶＤＮＡ阳性。ＨＢＶＤＮＡ在一些抗－ＨＢｓ（＋）肝病患者和所谓健康人的血清中也存在。Ａ、Ｂ两组检出有ＨＢＶ和（或）ＨＣＶ感染患者分别占８１．８％和５３．８％。提示套式和免疫套式ＰＣＲ是简便、快速而又高度敏感的检测方法；ＨＢＶ感染可能是引起ＨＢｓＡｇ阴性慢性肝病的重要原因，且ＨＢｓＡｇ阴性肝病病因大多与病毒感染有关；应该重新认识自然感染者血清中抗－ＨＢｓ的临床意义。     

乙型肝炎病毒父婴传播阻断方法的临床探讨

探讨阻断乙型肝炎病毒父婴传播的方法。将１２６例父亲ＨＢｓＡＧ、ＨＢｅＡｇ均阳性的婴儿根据母亲抗－Ｇｂｓ情况分为三个观察组,并以母亲ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ均阳性而父亲均阴性且无ＢＨＶ感染史的婴儿６０例做对,分别在出生后给与乙肝免疫球蛋白和乙肝疫苗联合接种,并于１年后分析其免疫保护率和ＨＢＶ感染率。结果对照组免疫保护率（ＩＰＲ）为９３．３３％,ＨＢＶ感染率为５．０％,而观察组ＩＰＲ为６６．６７％,ＨＢ     

PCR检测献血员乙肝感染状况

目的对部分献血员中乙型肝炎感染状况进行调查．方法用ＰＣＲ法对检查合格的２９０份献血血样进行ＨＢＶ＿ＤＮＡ检测．结果本组２９０份血样中ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ全部呈阴性．１６７例ＨＢＶＭ阳性；其中８０例单项抗ＨＢｓ阳性，５０例单项抗ＨＢｃ阳性，１９例抗ＨＢｓ和ＨＢｃ两项阳性，１２例抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ两项阳性；６例抗ＨＢｓ，抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ三项阳性，而ＨＢＶ－ＤＮＡ的阳性率在各组中分别为８８％（７／８０），２６０％（１３／５０），１０５％（２／１９），７５０％（９／１２），３３３％（２／６）．１２３例ＨＢＶＭ阴性，ＨＢＶ－ＤＮＡ的阳性率为１６％（２／１２３）．２９０例中ＨＢＶ－ＤＮＡ的总检出率为１２１％（３５／２９０）．结论合法献血员中存在着乙肝病毒感染者．     

用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎疫苗免疫后无抗体反应者血清HBVDNA

为了解乙型肝炎（乙肝）疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，作者用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了正常人群中乙肝疫苗免疫后１５例不产生抗－ＨＢｓ和２０例产生抗－ＨＢｓ者血清的ＨＢＶＤＮＡ，同时用Ａｂｂｏｔｔ试剂检测血清的ＨＢｅＡｇ。结果发现，不产生抗－ＨＢｓ的１５例中有６例（４０％）第２次ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ为阳性，其中３例（５０％）为ＨＢｅＡｇ阳性，产生抗－ＨＢｓ者的２０例其血清ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｅＡｇ均为阴性。提示：常规方法漏检的低水平ＨＢＶ感染可能是造成乙肝疫苗免疫后不产生抗－ＨＢｓ的原因之一。     

乙型肝炎表面抗原阳性血吸虫病患者 HDV 感染的血清学及预后调查

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测１２３例乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阳性的各期血吸虫病患者及５０例ＨＢｓＡｇ阳性的非血吸虫病对照人群血清丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）标志物，用斑点杂交检测晚期血吸虫病（晚血，ＡＳ）患者ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果表明，ＨＢｓＡｇ阳性的晚血患者ＨＤＶ标志物（ＨＤＶ－Ｍ）检出率１４．５％，显著高于急性血吸虫病（急血）、慢性血吸虫病（慢血）患者（２．５％）及对照人群（２．０％）（Ｐ＜０．０５）。随访观察发现，ＨＢＶ／ＨＤＶ双重感染的晚血患者病死率４０％，显著高于单纯ＨＢＶ感染的晚血患者（８．５％，Ｐ＜０．０５），提示晚血患者是ＨＤＶ感染的易感人群，ＨＤＶ感染是ＨＢｓＡｇ阳性晚血患者病情加重或恶化的一个重要原因，ＨＢＶ／ＨＤＶ双重感染与晚血患者死亡密切相关。     

肝细胞癌患者乙、丙和丁型肝炎病毒感染状况

为探讨乙型、丙型和丁型肝炎病毒（ＨＢＶ，ＨＣＶ和ＨＤＶ）感染对肝细胞癌（肝癌）发生的意义，本文作者采用ＥＬＩＳＡ和聚合酶链反应法对７２例广东籍肝癌患者ＨＢＶ、ＨＣＶ和ＨＤＶ血清标志以及血浆ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。ＨＢｓＡｇ和抗－ＨＣＶ阳性率分别为８４．７％和１８．１％，显著高于１２８名健康对照者。ＨＢｓＡｇ和／或ＨＢＶＤＮＡ总阳性率为９３．１％，抗－ＨＣＶ和／或ＨＣＶＲＮＡ阳性率为２７．８％，ＨＢＶ和ＨＣＶ重叠感染率为２２．２％。其中６１例ＨＢｓＡｇ阳性肝癌的ＨＤＶ血清标志检出率为１４．８％，明显高于６１例ＨＢｓＡｇ阳性的肝炎对照者。结果表明，广州地区肝癌的发生，主要与ＨＢＶ和ＨＣＶ感染密切相关外，且可能与ＨＤＶ感染有关。     

肝病患者丁肝病毒感染标志物检测及其临床意义

从１１７例肝病患者因清中检出２４例丁肝病毒（ＨＤＶ）感染者，总感染率为２０．５％。发现慢性活动性肝炎（ＣＡＨ）者的ＨＤＶ感染率明显高于生肝炎（ＡＨ）；ＨＤＶ感染乾的ＨＢｓＡｇ均为阳性；乙肝病毒（ＨＢＶ）复制指标阳性者的ＨＤＶ感染指标阳性率显著高于ＨＢＶ复制有性者。提示：（１）ＨＤＶ感染可加重病情，使病情慢性化。（２）ＨＢｓＡｇ与ＨＤＶ密切相关。（３）ＨＤＶ感染似有促进ＨＢＶ复制的作用。     

快速简便筛检乙型肝炎病毒C基因启动子变异的方法及应用

目的明确中国乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因启动子（ＢＣＰ）区段变异特点及其可能的临床意义。方法应用错配聚合酶链反应限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法，结合核苷酸序列分析，检测１４３例ＨＢｓＡｇ阳性的ＨＢＶ慢性感染者中Ｘ基因／ＢＣＰ区的核苷酸（ｎｔ）１７６２碱基由Ａ→Ｔ和１７６４碱基由Ｇ→Ａ变异。结果在１１４份ＨＢＶＤＮＡ阳性血清中，３７例感染ＢＣＰ变异株，其中３１例为慢性肝炎病例，６例为慢性ＨＢＶ无症状感染者（ＡｓＩ）；其中４１例ＨＢｅＡｇ阳性ＡｓＩ中仅２例检出，１８例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＩ中也有４例检出。ＨＢｅＡｇ阳性的６５例中，１３例有ＢＣＰ区变异，而ＨＢｅＡｇ阴性的４９例中，２４例有ＢＣＰ区变异（Ｐ＜０．０１）。结论错配ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检测这一对点突变，具有快速、简便、适用的优点；ＨＢＶ毒株ＢＣＰ变异可能与肝病变活动有一定关系。     

多聚酶链式反应在慢性乙型肝炎血清学标志物检测中的应用

作者应用多聚酶链式反应检测９５例慢性乙型肝炎患者的血清标本，ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢｃ阳性组，ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ阳性组，ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｃ阳性组，抗－ＨＢｓ阳性组，抗－ＨＢｅ，抗－ＨＢｃ阳性组其ＨＢＶＤＮＡ阳性率分别为９６．５５％（２８／２９例），７８．９５％（１５／１９例），４０％（８／２０），２０％（２／１０例），１０％（１／１０例），并提出乙型肝炎病毒复制和传染性     

乙型肝炎病毒基因组S区编码产物的检测及临床意义

为了进一步明确 ＨＢＶ基因组 Ｓ区编码产物对乙型病毒性肝炎诊断的临床价值，用双抗体夹心 ＥＬＩＳＡ法检测 ９０份乙型病毒性肝炎患者血清标本ＨＢｓＡｇ·ＰＨＳＡ－Ｒｅ、Ｐｒｅ－Ｓ１和 Ｐｒｅ－Ｓ２，并与 ＨＢＶＭ及 ＨＢＶＤＮＡ ＰＣＲ进行对比分析。结果以抗 ＨＢｃ、ＨＢｓＡｇ·ＰＨＳＡ－Ｒｅ、ＨＢＶＤＮＡ（ＰＣＲ）及 Ｐｒｅ－Ｓ２的阳性检出率为最高，分别为８７．８％、７３．３％、７２．２％和６４．４％，以ＨＢＶＤＮＡ作为ＨＢＶ感染的金标准，无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；其中ＨＢｓＡｇ·ＰＨＳＡ－Ｒｅ与 ＨＢＶＤＮＡ和ＨＢｅＡｇ的符合率最高，分别为 ７６．７ ％和 ７４．７ ％；ＭＢｓＡｇ·ＰＨＳＡ－Ｒｅ与 ＨＢＶＤＮＡ具有高度相关性。ＨＢｓＡｇ·ＰＨＳＡ－Ｒｅ做为早期诊断ＨＢＶ感染及判断是否具有传染性方面，是一项非常重要的血清学指标，Ｐｒｅ－Ｓ２也可作为ＨＢＶ复制活跃的标志之一，用于急慢性肝炎的预后判断．     

聚合酶链反应检测HBV DNA的临床意义

应用ＰＣＲ对１７１例肝病血清检测结果，ＨＢＶＤＮＡ阳性率５９．１％，ＥｌｉＳＡ检测ＨＢｓＡｇ阳性率４３．２７％，二者比较有显著性差异（Ｐ〈０．０１），ＨＢｓＡｇ（＋）／ＨＢｅＡｇ（＋）组ＨＢＶＤＮＡ阳性率７９．５％，而ＨＢｓＡｇ（＋）抗－ＨＢｅ（＋）组主５７．９％，ＨＢｓＡｇ（－）／抗－ＨＢｓ（＋）组，ＨＢＶＤＮＡ阳性率３６．８％。     

用套式聚合酶链反应检测乙型肝炎疫苗免疫后无抗体反应者血清…

为了解乙型肝炎（乙肝）疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，作者用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了正常人君中乙肝疫苗免疫后１５例不产生抗－ＨＢｓ和２０例产生抗－ＨＢｓ者血清的ＨＢＶ ＤＮＡ，同时用Ａｂｂｏｔｔ试剂检测血清的ＨＢｅＡｇ。结果发现，不产生抗－ＨＢｓ者的１５例中有６例（４０％）第２次ＰＣＲ扩增ＨＢＶ ＤＮＡ为阳性，其中３例（５０％）为ＨＢｅＡｇ阳性，产生抗－ＨＢｓ者的２０例其血清ＨＢＶ     

鸭乙型肝炎动物模型的建立和DHBV在肝脏的定位研究

本文利用ＤＨＢＶ阳性血清感染１日龄雏鸭，感染后２、４、８周以血清斑点杂交和Ｄｏｔ－ＥＩＡ检测鸭血清中的ＤＨＢＶ－ＤＮＡ和ＤＨＢｓＡｇ，其阳性率分别为５６．３％、６５．６％、７４．２％和５３．１％、７１．９％、７０．９％。进一步采用原位杂交和免疫组化对鸭肝组织内ＤＨＢＶ－ＤＮＡ和ＤＨＢｓＡｇ进行检测，结果表明ＤＨＢＶ－ＤＮＡ主要存在于细胞浆中，而ＤＨＢｓＡｇ主要分布于细胞浆及细胞膜。对肝组织的病理检查及胶原纤维特殊检测发现，ＤＨＢＶ阳性组与阴性组无明显差别。     

小儿乙型肝炎血清,病理及免疫病理分析

本文通过检测１５例小儿病毒性肝炎患者血清ＨＡＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ标志及肝组织内ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ发现ＨＡＶ和ＨＣＶ标志全部阴性，ＨＢＶ标志全部阳性。１５例ＨＢＶ感染中，血清ＨＢＶＤＮＡ阳性１１例。其中ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｇ（＋）９例，ＨＢｓＡｇ（＋）、ＨＢｅＡｂ（＋）２例。综合血清其它的感染指标与肝脏病理及免疫病理的变化对１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病例作了重要分析。进一步证实ＨＢｅＡｇ为临     

抗HCV阳性慢性肝病患者HBV感染及前C／C区基因变异

探讨ＨＢＶ基因变异在ＨＢｓＡｇ阴性抗ＨＣＶ阳性慢性肝病中的意义。方法用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）与限制片段长度多态性相结合，对５６例慢性肝病患者６例ＨＢｓＡｇ阴性抗ＨＣＶ阳性（Ａ组）．１９例ＨＢｓＡｇ阳性抗ＨＣＶ阳性（Ｂ组）及３１例单独ＨＢＶ成染（Ｃ组）进行前Ｃ区密码２８终止变异（Ａ８３）和Ｃ区密码９７异亮氨酸亮氨酸变异（Ｌ９７）分析。结果Ａ组和Ｂ组Ａ８３和Ｌ９７变异检出率分别为３３％和４２％显著低于Ｃ组８１％（Ｐ值＜０．００１）：而Ａ组和Ｂ组间无统计学差异（Ｐ值＞０．０５）。结论ＨＢＶ和ＨＣＶ双重感染ＨＢｓＡｇ阴性与Ａ８３和Ｌ９７变异无相关。     

血清抗-HBs阳性慢性肝病患者的病因研究

目的部分抗－ＨＢｓ阳性者仍有活动性肝病存在，其病因还不十分清楚．本研究旨在探讨血清抗ＨＢｓ阳性慢性肝病患者的病因．方法应用套式聚合酶链反应检测血清抗ＨＢｓ阳性慢性肝病患者血清中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ．患者３２例，男２５例，女７例，平均年龄４１７岁（２１岁～６３岁），其中慢性肝炎１８例，肝硬变１４例．９例慢性肝炎和５例肝硬变经肝活检证实，其余为临床诊断．结果血清中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ的检出率分别为６２５％（２０／３２）和２８１％（９／３２）；ＨＢＶＤＮＡ和（或）ＨＣＶＲＮＡ总检出率为８１３％（２６／３２）．结论血清抗ＨＢｓ阳性慢性肝病患者的病因多数与ＨＢＶ和（或）ＨＣＶ感染有关．     

乙型肝炎患者血清Pre-S-2抗原的意义

目的研究ＰｒｅＳ２抗原与乙型肝炎患者ＨＢＶ标记的关系．方法血清ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋），ＨＢｃＡｂ（＋）的乙型肝炎患者２６例，血清ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｂ（＋），ＨＢｃＡｂ（＋）的乙型肝炎患者４７例及健康献血者２０例，血清用ＲＩＡ法检测ＰｒｅＳ２抗原及用ＰＣＲ法检测ＨＢＶＤＮＡ．结果血清ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｇ（＋），ＨＢｃＡｂ（＋）的乙型肝炎患者２６例，ＰｒｅＳ２抗原与ＨＢＶＤＮＡ均阳性（１００％）；血清ＨＢｓＡｇ（＋），ＨＢｅＡｂ（＋），ＨＢｃＡｂ（＋）的乙型肝炎患者４７例，ＰｒｅＳ２抗原３０例阳性（６３８％），１７例阴性（３６２％），ＨＢＶＤＮＡ３２例阳性（６８１％），１５例阴性（３１９％），ＰｒｅＳ２抗原与ＨＢＶＤＮＡ均阳性２８例（５９６％），均阴性１４例（３００％）．健康献血者２０例，ＰｒｅＳ２抗原阳性１例（５０％），阴性１９例（９５０％），ＨＢＶＤＮＡ阳性２例（１００％），阴性１８例（８００％），ＰｒｅＳ２抗原及ＨＢＶＤＮＡ均阳性０例（０％），均阴性１８例（８００％）．结论ＰｒｅＳ２抗原可作为预测慢性乙型肝炎患者病情活动与传染的标志．     

聚合酶链反应评价原位杂交检测慢性HBV感染者肝内HBVDNA的结果

用地高辛素探针原位杂交检测慢性ＨＢＶ感染者肝内ＨＢＶＤＮＡ，聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测血清ＨＢＶＤＮＡ评价病毒复制状态。发现肝内ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，在１４例肝组织病变不活动的ＨＢｅＡｇ阳性慢性无症状ＨＢＶ携带者（ＡｓＣ）呈弥漫性分布；而在ＨＢｅＡｇ阳性或阴性活动性肝病病人均聚合分布于肝细胞坏死区。上述慢性感染者９８％血清ＨＢＶＤＮＡ阳性。说明ＨＢＶ复制与肝组织病变有关但非肝损伤直接原因。１６例ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ中，９例肝内仅见局灶性ＨＢＶＤＮＡ阳性肝细胞，其中４例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性，说明部分ＨＢｅＡｇ阴性ＡｓＣ也存在极低水平病毒复制。     

反义寡核苷酸抗HBV作用的双峰现象

ＨＢＶ基因组含３－２ｋｂＤＮＡ,有至少４个ＯＲＦ,其中Ｓ区包含Ｓ基因,ｐｒｅＳ１基因和ｐｒｅＳ２基因,编码形成大、中、小３种蛋白,构成ＨＢＶ的包膜蛋白（ＨＢｓＡｇ,ｐｒｅＳ１Ａｇ,ｐｒｅＳ２Ａｇ）．其中ＨＢｓＡｇ在体内引起的免疫病理反应是ＨＢＶ感染中的重要致病机制,ｐｒｅＳ２Ａｇ较ＨＢｓＡｇ有更强的抗原性,并具有反式激活作用,在ＨＢＶ感染及肝癌发生中关系密切．因而如何从基因水平抑制ＨＢｓＡｇ和ｐｒｅＳ２Ａｇ的表达,对抗ＨＢＶ治疗有重要意义．我们设计了针对Ｓ基因翻译起始区和ｐｒｅＳ２基因翻译起…     

HBV宫内感染儿童接种乙型肝炎疫苗免疫失败与IL-2及其受体的关系

目的从ＩＬ－２及其受体角度探讨宫内感染ＨＢＶ导致乙型肝炎（乙肝）疫苗免疫失败的机制。方法采用体外细胞培养、流式细胞仪和酶联免疫检测技术对２２例ＨＢＶ宫内感染儿童和１５例正常儿童的外周血单个核淋巴细胞（ＰＢＭＣ）在非特异性刺激（ＰＨＡ）和特异性刺激（ＨＢｓＡｇ）下的膜ＩＬ－２受体表达水平和ＩＬ－２含量进行了测定。结果在ＨＢｓＡｇ刺激情况下，ＨＢＶ宫内感染儿童接种乙肝疫苗无反应组ＰＢＭＣ的ＩＬ－２膜受体表达水平低于有反应组和正常儿童组。在ＰＨＡ或ＨＢｓＡｇ刺激情况下，ＨＢＶ宫内感染儿童接种乙肝疫苗无反应组ＰＢＭＣ细胞培养上清的ＩＬ－２水平低于有反应组和正常儿童组。结论ＩＬ－２分泌能力低下，以及ＩＬ－２膜受体表达不足可能是宫内感染ＨＢＶ导致乙肝疫苗免疫失败的机制之一。