常见证候荷瘤小鼠神经内分泌免疫组织基因转录的总体特征

目的揭示常见证候荷瘤小鼠神经-内分泌-免疫组织基因转录的总体特征。方法采用小鼠标准化四诊及辨证方法,及Gene Chip Mouse Exon1．0ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛（邪毒）和气虚、中期阳气虚、中晚期气阴阳虚等4个常见证候下丘脑、垂体、肾上腺、睾丸、脾脏、胸腺、肿瘤RNA的转录与剪接。结果正常昆明种雄性小鼠下丘脑、垂体、肾上腺RNA电泳的28S峰低于18S,而睾丸、脾脏、胸腺、肿瘤相反。肿瘤发生的早期,下丘脑、垂体、肾上腺基因表达模式发生显著改变,邪毒尤甚,出现了失代偿。下丘脑28SRNA迅速抬升并持续,气虚强于邪毒。垂体RNA总量降低,28S陡降,邪毒尤甚。肾上腺RNA电泳特征类似垂体,气虚与邪毒相近,中晚期气阴阳虚尤甚。睾丸变化不明显。随着病情发展,脾脏重量持续增加,而胸腺相反,重量持续下降,蛋白合成和糖代谢下降。肿瘤组织蛋白合成与糖代谢,邪毒大于气虚。以上7个组织与正常对照组相比,有9127个基因表达发生差异、51126个外显子剪接发生差异。结论神经-内分泌-免疫网络组织基因转录的差异是荷瘤小鼠不同证候内在重要的物质基础。     

正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴相关基因转录的特征

目的:观察正常气虚小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴与睾酮合成调节相关基因的转录特征。方法:采用小鼠标准化诊法和辨证方法,筛选出正常气虚小鼠与正常小鼠,采用GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测其下丘脑-垂体-睾丸轴有关基因的转录水平。结果:与正常对照小鼠比较,正常气虚小鼠下丘脑Gnrh1表达略增;垂体上Gnrh受体上调,但Cga、Fshb和Lhb下调;睾丸Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b1、Hsd3b6等与睾酮合成相关酶一致上调。结论:正常小鼠出现气虚证时,垂体促性腺激素表达量略减,而睾丸合成睾酮的系列关键酶的表达活跃,这构成了正常气虚证小鼠下丘脑-垂体-睾丸轴的特征。     

同病异证H22肿瘤小鼠内分泌-免疫网络的物质基础

目的:揭示同病异证肿瘤小鼠内分泌-免疫网络的物质基础。方法:采用标准化诊法技术在接种同样H22腹水癌细胞数的肿瘤小鼠中筛选出不同组别的同病异证肿瘤小鼠,ELISA法检测血清内分泌-免疫网络有关激素与分子含量。结果:筛选出邪危组、邪毒组、邪中组、邪微组及邪中兼气虚组等5个同病异证组别小鼠,发现其ACTH、醛固酮、TSH、T3、T4、FT3、FT4、睾酮、IL-2、IL-10、IL-12、TNF-α、IFN-γ等含量与同病异证有着对应性改变。结论:荷瘤小鼠存在同病异证且有其内在复杂及特征性的内分泌和免疫系统改变,这为荷瘤小鼠个体化辨证论治及其疗效评价提供了客观依据,也为比较和优化辨证论治方案提供了模式生物的依据。     

邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织基因的表达特征研究

目的揭示H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证肿瘤组织基因表达的特征。方法采用GeneChipMouseExon1．0STArray等技术及芯片分析方法,观察H22荷瘤小鼠邪毒壅盛、早期气虚、中期阳气虚及中晚期气阴阳虚证肿瘤组织基因表达的差异。结果筛选到邪毒壅盛证独特性高表达的基因32个,其中包括Tete3、Phf7、Ldhc等参与睾丸发育、精子或卵子发生的基因22个,Adipoq、Nream、Tnfaip6等与肿瘤有关的基因4个,以及Atp8b3、Pnpla3、Retn等其他功能的基因6个。筛选到邪毒壅盛证独特性低表达的基因2个,有Cort和LOC668417。结论邪毒壅盛证H22荷瘤小鼠肿瘤组织中存在大量独特性表达的基因,可能是该证候与其他证候区别的内在特征。     

荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸下调的基因

目的:观察H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛和气虚证睾丸组织一致下调的基因。方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊和辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和早期气虚证睾丸组织基因表达谱的差异,重点关注早期阶段2个证候一致下调且表达量较大的基因。结果:筛选出早期邪毒壅盛和气虚证一致下调的基因共150个,其中有11类可以简单归类的基因;气虚与邪毒壅盛证这些基因的表达量差异不大,前者略高于后者;中晚期荷瘤小鼠这些基因表达接近正常对照组,甚至上调。结论:肿瘤发生的早期睾丸基因改变以下调为主,一些基因涉及精子发生,提示荷瘤小鼠生殖受到影响;鉴于两个证候这些基因表达的差异不大,及中晚期表达有增加趋势,提示这些基因下调可能与肿瘤早期应激有关;多数基因在睾丸组织中的功能还不清楚,提示有大量探索工作。     

有关证与神经内分泌免疫网络的研究

指出，“证”是中医所特有，也是中医理论的精华之一，证不仅包括一定的病理生理状态，且代表疾病在发展过程中某一阶段的动态表现，也可以出现在多种疾病中，需用通过分析比较，才能作出科学的定量的注解。认为，如果没有“肾”本质这40年的证明性研究，中西医结合的研究是难以过渡到代生命科学领域的，中西医结合把中医理论的说理能力以及治病的可信度推向了当今的国际前沿水平。     

H22荷瘤小鼠肿瘤发生后睾丸表达改变显著的基因

目的:探讨H22荷瘤小鼠肿瘤发生后睾丸基因表达谱改变的特征。方法:采用荷瘤小鼠标准化四诊及辨证方法,以及Gene Chip Mouse Exon1.0 STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠睾丸组织早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证3个阶段4个证候睾丸基因表达谱的差异,重点关注肿瘤发生后一致上调或下调明显且表达量大的基因。结果:肿瘤发生后三个阶段一致上调的基因5个;一致下调的基因12个,其中7个与性激素和生殖有关;早期上调、中期和中晚期下调的基因1个;早期和中期上调、中晚期下调的基因3个。在这些基因中,Saa3在晚期气阴阳虚证表达上调了近60倍,Abpg、Pip、Car6在早期邪毒壅盛证表达上调了40~80倍,值得关注。结论:肿瘤发生后荷瘤小鼠睾丸基因表达的改变以下调为主,性激素合成与生殖受到影响;一些表达显著改变的基因值得进一步研究。     

有关证与神经内分泌免疫网络的研究

指出 ,“证”是中医所特有 ,也是中医理论的精华之一 ,证不仅包括一定的病理生理状态 ,且代表疾病在发展过程中某一阶段的动态表现 ,也可以出现在多种疾病中 ,需用通过分析比较 ,才能作出科学的定量的注解。认为 ,如果没有“肾”本质这 4 0年的证明性研究 ,中西医结合的研究是难以过渡到现代生命科学领域的。中西医结合把中医理论的说理能力以及治病的可信度推向了当今的国际前沿水平。     

阳气虚证H22荷瘤小鼠胸腺独特上、下调的高表达基因

目的:观察荷瘤小鼠中期阶段阳气虚证胸腺独特上调和下调的高表达基因。方法:综合采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测在肿瘤中期阳气虚证H22荷瘤小鼠胸腺组织基因的表达,筛选独特上调或下调者,并重点关注表达量高的基因。结果:肿瘤中期阳虚证荷瘤小鼠胸腺独特上调的基因达260个,下调仅15个。结论:(1)荷瘤小鼠发展到中期的阳气虚证,其胸腺虽然已出现萎缩的现象,但仍处于代偿阶段;(2)Hey2、Hivep2、Stat6、Prdm1、Avpr1a、Ralb、Trdn、Mcmdc1、Olfr1351、Avil、Gns、Ros1等高表达上调的基因,可能与促进T细胞的分化成熟有关;(3)St8sia4、Nxph4、Spred2、Bcas3、Tbcd、Ctns等独特下调基因标志着胸腺内基因表达调节在整体上出现了紊乱,可能预示着胸腺衰竭阶段的到来。这些构成了肿瘤中期阶段阳气虚证荷瘤小鼠胸腺基因表达层面的特征。     

衰老神经内分泌免疫网络的中医药研究进展

1977年，Base dovsky提出神经内分泌免疫(NFI)网络学说，认为神经内分泌系统与免疫系统之间存在完整的功能性调节环路。研究表明，神经内分泌系统与免疫系统可以共用细胞因子、肽类激素和神经递质并产生广泛而密切的网络联系；在这个网络中，神经内分泌激素可影响免疫功能，而免疫反应也可导致神经内分泌的改变。神经内分泌免疫调节网络的失衡可加速衰老的进程。近年来，中医药在此方面作了大量研究，兹综述如下。     

荷瘤小鼠虚证、实证垂体基因表达的差异

目的:揭示荷瘤小鼠实证与虚证垂体基因表达的差异.方法:采用四诊计量检测方法及计量辨证方法,运用GeneChipMouseExon1.0 STArray等技术,检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表迭的差异,重点关注那些表达量大、差异显著的基因.筛选出邪毒壅盛证较其他三个证候一致上调或下调的基Igl.结果:筛选出邪毒壅盛较其他三证一致上调的基因121个.介绍了邪毒壅盛证芯片读数大于1500的9个基因:Gabra6、DOH4S114、Ales2、Pvalb、Plpl、Itprl、Narg2、LOC627016、Gpm6b;一致下调的基因340个.介绍了正常小鼠芯片读数大于1500的21个基因:Abpg、Pip、Dlkl、Car6、Eif3s5、Gnb2、Pcskln、Aplpl、S1c22a17、Dnpep、Rnfl87、IOC639100、Rablb、Aldh2、Pten、Tapbp、2310044H10Rik、Cxxc5、Gamdl、Renl、Lrpll.结论:H22荷瘤小鼠的实证与虚证.其垂体基因存在大量的表达差异.其中部分可能是实证与虚证的标志基因.     

脾虚证荷瘤小鼠模型的建立

目的:利用泻下加劳倦过度方式结合皮下接种H-22肝癌细胞的模式造成脾虚型荷瘤小鼠模型。方法:16只昆明小鼠随机分为对照组和模型组,每组8只,10天后取食量、体重、肛温、腹泻、肛门污秽、拉尾排便次数、悬空拉尾抵抗时间及一般状况(拱背、毛色枯槁及脱毛、倦卧嗜睡等),作小鼠脾虚征象详情记录。取血测定血清D-木糖醇、血清胃泌素、处死剖取胸腺、脾脏称重,计算胸腺指数和脾脏指数,评价模型的建立和病理生理特点。结果:造模后,造模小鼠腋下均长出肿瘤结节,并且出现明显食少、稀便、肛门污秽、神软萎靡、喜聚堆倦伏、毛色枯槁、拱背竖毛、活动缓慢、反应迟钝等脾虚证状,以第6天最显著。结论:泻下加劳倦过度方式结合皮下接种H-22肝癌细胞的模式在小鼠体内可以成功建立病证结合的脾虚证荷瘤模型。     

加味八珍汤对S180荷瘤小鼠的免疫抑瘤作用

目的：研究加味八珍汤对S180荷瘤小鼠的免疫抑制作用。方法：以S180荷瘤小鼠为模型，系统地观察加味八珍汤对瘤重和脾细胞免疫功能的影响。结果：加味八珍汤对S180荷瘤小鼠的平均抑瘤率最高达45．9%，且剂量依赖性地抑制瘤重，明显促进NK活性和IL-2分泌，增强腹腔巨噬细胞吞噬能力。结论：加味八珍汤增强荷瘤小鼠细胞免疫功能是其抑制肿瘤效应的机制。     

地魄汤对阴虚小鼠免疫功能的影响

目的:研究地魄汤对阴虚小鼠免疫功能的影响。方法:将50只ICR小鼠灌胃甲状腺素(300 mg·kg-1)制作阴虚模型,造模成功的小鼠分为模型组、六味地黄组、地魄汤低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组各10只,另取10只做正常组。正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,六味地黄组给予六味地黄汤3.0 g·kg-1灌胃,地魄汤低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予地魄汤3.6 g·kg-1,7.2 g·kg-1,14.4 g·kg-1灌胃,每天1次,连续10 d。分别用碳粒廓清法、溶血素抗体测定法、耳廓肿胀法检测地魄汤对阴虚小鼠单核吞噬细胞吞噬功能、溶血素抗体生成(HC50)、迟发型超敏反应以及胸腺指数和脾指数的影响。结果:地魄汤低剂量组、中剂量组、高剂量组使阴虚小鼠吞噬指数和吞噬系数、HC50、胸腺指数和脾指数升高,耳肿胀度降低,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:地魄汤可增强阴虚小鼠的免疫力。     

荷瘤小鼠气阴阳诸虚证垂体独特上调和下调基因的表达及特征

目的：筛选荷瘤小鼠中晚期气阴阳诸虚证垂体独特上调和下调的基因并描述其特征。方法：采用荷瘤小鼠及其标准化四诊及辨证方法，及Gene Chip Mouse Exonl．0ST Array等技术，检测H22荷瘤小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共3阶段4个证候垂体基因表达的差异，重点关注那些表达量大、差异显著的基因，筛选气阴阳虚证独特上调和下调的基因。结果：筛选到气阴阳虚证独特上调的基因13个：Apoe、S100a8、Anxal、LOC383949、Iq2-Ea、S100a6、Vim、Tjnf2、Ngp、Gbp5、Myc、Cls、Ltf；独特下调的基因5个：Klklb5、A1bl、Scdl、Bglap2、Gc。结论：①存活到中晚期的气阴阳虚证荷瘤小鼠，垂体细胞的增殖与代谢十分活跃；②这些基因的表达变化可能是肿瘤小鼠气阴阳诸虚证的标志之一。     

安体康注射液对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的：观察安体康注射液对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：建立荷瘤小鼠模型,分别给予安体康注射液治疗,检测T淋巴细胞转化功能,白介素-2（IL-2）的活性,自然杀伤细胞（NK）活性和巨噬细胞吞噬活性。结果：安体康注射液能促进荷瘤小鼠的T淋巴细胞的分化与繁殖,显著提高淋巴细胞诱生IL-2活性和NK细胞活性;对巨噬细胞的吞噬功能无显著影响。结论：安体康注射液可增强荷瘤小鼠的免疫功能。     

狼毒多糖对S180荷瘤鼠免疫功能的调控作用

目的:观察狼毒多糖(EFP-AW1)对S180荷瘤鼠免疫逃逸功能的影响。方法:将50只雄性ICR小鼠随机分为空白对照组、模型组、狼毒多糖100 mg.kg-1组、环磷酰胺100 mg.kg-1组(CTX)、联合给药组(EFP-AW1+CTX)。分组给药10 d后,通过噻唑蓝(MTT)、酶联免疫吸附实验(ELISA)、流式细胞术(FCM)之方法,检测荷瘤鼠脾淋巴细胞增殖情况、转化生长因子β1(TGF-β1)、T淋巴细胞亚群(CD4+T,CD8+T)表达。结果:狼毒多糖可增加刀豆蛋白A(ConA)/脂多糖(LPS)诱导的荷瘤鼠脾淋巴细胞增殖能力(P<0.05),降低血清中TGF-β1的分泌(P<0.05),增加CD8+T细胞百分含量(P<0.05)。结论:ESP-AW1可通过增强荷瘤鼠抗肿瘤免疫应答功能,抑制肿瘤细胞在体内转移和复发。     

二氢卟吩e6脂质体在荷瘤小鼠体内的药动学及靶向性分析

目的:研究二氢卟吩e6(Ce6)磷酸盐缓冲液(PBS)溶液及其脂质体在荷瘤小鼠体内的药物动力学特性,并验证Ce6脂质体的肝脏靶向性和肿瘤靶向性。方法:荷瘤小鼠尾静脉注射Ce6溶液或其脂质体后,通过HPLC测定不同时间点血浆及组织中Ce6的质量浓度,流动相乙腈-0.2%磷酸盐(50∶50),检测波长403 nm。采用DAS 2.1.1软件计算药动学参数,以8 h内相对摄取率(RE)来评价Ce6对主要器官的靶向性。结果:Ce6溶液和Ce6脂质体在荷瘤小鼠血浆中的药动学模式均符合二室模型,分布相半衰期(t1/2α)分别为1.516,0.507 h;消除相半衰期(t1/2β)分别0.457,1.366 h;清除率(CL)分别为0.178,0.067 L·h-1·kg-1;药时曲线下面积(AUC0-∞)分别为16.734,51.475 mg·h·L-1。在肝、脾、肿瘤组织中,RE分别为1.149,1.477和1.277。经统计学分析,Ce6溶液和Ce6脂质体的药动学结果有显著性差异(P0.05)。结论:Ce6脂质体在体内的药物代谢清除速度更缓慢,分布更迅速、广泛,并能选择性聚集于肝脏和肿瘤组织。Ce6脂质体制剂可继续开发以用于治疗肝癌。     

大黄(庶虫)虫丸加减方对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的 探讨大黄(庶虫)虫丸加减方对克洛氏(S180)荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响.方法 建立小鼠S180肉瘤动物模型,将荷瘤小鼠分为大黄磨虫丸加减方高、中、低剂量组及模型组,同时设正常组,流式细胞术检测荷瘤鼠T淋巴细胞亚群.结果 大黄(庶虫)虫丸加减方能调节CD4/CD8细胞比例,尤以高剂量组最为明显.结论 大黄(庶虫)虫丸加减方能缓解和改善S180荷瘤小鼠免疫力的低下和免疫紊乱状态,其中高剂量组疗效最佳.