超声微泡介导自杀基因对卵巢癌细胞的抗瘤效应

目的探讨超声微泡介导自杀基因对卵巢癌SKOV3细胞抗瘤效应的机制。方法采用最适超声转染参数,以超声介导微泡转染pORF-HSV1TK质粒,将SKOV3细胞分成6组:阴性对照组(C组)、超声辐照组(U组)、脂质体组(L组,阳性对照组)、脂质体+超声辐照组(L+U组)、脂质体+微泡+超声辐照组(L+M+U组)和微泡+超声辐照组(M+U组)。以RT-PCR检测HSV1TK的表达,以MTT测定各组细胞增殖抑制率。光镜下观察各组转染细胞数量、形态变化,以流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率及细胞周期。结果L+M+U组HSV1TK基因表达最强,细胞增殖抑制率明显高于其他组(P均<0.05),且光镜下细胞数量减少最多,形态明显异常;其细胞凋亡率为(49.13±0.82)%,且大多数细胞周期被阻断于G1期(P<0.05)。结论超声介导微泡能增强HSV1TK/GCV系统抑制SKOV3增殖和诱导SKOV3凋亡的作用,且将SKOV3细胞周期阻断在G1期,从而发挥抗瘤效应。     

超声破坏载紫杉醇微泡对卵巢癌细胞株SKOV3的抑制增殖及诱导凋亡作用

目的探讨超声破坏载紫杉醇微泡后对卵巢癌细胞株SKOV3生长抑制及凋亡诱导作用。 方法体外培养卵巢癌细胞,将细胞分为5组,即紫杉醇组,紫杉醇联合超声辐照组,载紫杉醇微泡联合超声辐照组,单纯载紫杉醇微泡组及空白对照组。用MTT法观察超声破坏载紫杉醇微泡后在不同时间对细胞的生长抑制情况,用透射电镜观察细胞的凋亡诱导情况。 结果在紫杉醇浓度为1×10^-6mol/L时,载紫杉醇微泡联合超声组的细胞在微泡辐照击破后生长明显受到抑制,并且随培养时间延长,抑制效应越明显,透射电镜观察到载紫杉醇微泡联合超声组的细胞有凋亡小体,比其它各组对卵巢癌细胞株SKOV3的凋亡诱导作用强。 结论载紫杉醇微泡被超声辐照破坏后对卵巢癌细胞株SHKOV3生长有明显抑制作用,并且能诱导其凋亡。     

低频超声辐射微泡造影剂对人乳腺癌细胞的生物学效应研究

目的观察微泡造影剂不同浓度、不同声学参数对体外培养人乳腺癌细胞的生物学效应。方法人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,受不同剂量,频率为300kHz的超声波辐照破坏微泡声学造影剂,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率。结果在微泡浓度为5%时,0.25W/cm2×10s与0.5W/cm2×5s组细胞存活率未见明显改变,而0.5W/cm2×10s、0.5W/cm2×20s、0.5W/cm2×40s、1.0W/cm2×10s、2.0W/cm2×10s各组与对照组比较,细胞存活率明显下降。辐照强度为0.5W/cm2、照射时间10s时,随着微泡浓度增加,超声对细胞的杀伤效应越强,与对照组相比,5%微泡浓度组P<0.05,其余各组P<0.01。结论超声破坏微泡声学造影剂对人乳腺癌细胞的杀伤程度与超声辐照时间、声强及微泡浓度有关。     

低频超声辐照联合微泡对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的观察低频超声辐照联合微泡对体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法联合不同浓度的SonoVue(0、0.5×106、1.0×106、1.5×106、2.0×106/mL),使用42.6kHz超声分别辐照大鼠主动脉平滑肌细胞10s、20s、30s,空白对照组不作任何处理。台盼蓝染色分析辐照后即刻细胞存活率,流氏细胞仪观察辐照后24h细胞凋亡率。结果细胞的死亡和凋亡与微泡浓度及辐照时间相关。当超声波在微泡浓度达到或超过0.5×106/mL,联合辐照30s,以及微泡浓度达到2.0×106/mL,联合辐照10s、20s时,细胞大量死亡。在超声辐照10s时,辐照后24h细胞凋亡率随微泡浓度的增加而增加,但在微泡浓度低于1.0×106/mL时,细胞即刻存活率并无显著减少。在超声辐照20s时,细胞即刻存活率随微泡浓度的增加而减少,辐照后24h细胞凋亡率在微泡浓度为0.5×106/mL、1.0×106/mL、1.5×106/mL时差异无统计学意义。结论在一定空化强度范围内,低频超声辐照后24h细胞凋亡率随强度增加而增加,但超过一定程度,则无法增加细胞凋亡率,只会导致细胞死亡。低频超声辐照联合微泡的空化作用可在短时间内诱导体外培养的大鼠血管平滑肌细胞凋亡。     

自制脂质微泡联合超声辐照介导pGL3-Promoter-EGFP质粒转染卵巢癌细胞的实验研究

目的 探讨超声微泡介导基因转染卵巢癌细胞的可行性及转染效率.方法 (1)以不同声强作用SKOV3细胞60 s,筛选出对细胞活性无明显抑制的声强;(2)将筛选出的声强分别与不同浓度的微泡联合作用于SKOV3细胞,筛选出对细胞无明显抑制的最适声强和微泡浓度的组合;(3)将SKOV3细胞分成5组,不同方式转染pGL3-Promoter-EGFP质粒:(1)裸质粒组;(2)质粒 微泡组;(3)质粒 超声组;(4)质粒 超声 微泡组;(5)质粒 脂质体组,比较各组转染效率.结果 (1)声强0.5、0.75 W/cm2的超声辐照,细胞死亡率＜10%;(2)0.24×108/ml或0.12×108/ml浓度的微泡联合0.5W/cm2超声辐照,细胞死亡率＜10%;(3)第4组与第5组转染效率无区别(P=0.133),但高于第1、2、3组(P＜0.001).结论 适当浓度微泡联合超声辐照能将外源基因在卵巢癌细胞中高效转移.     

超声辐照SonoVue增强脂质体介导pEGFP-N1转染乳腺癌细胞

目的 探讨超声辐照SonoVue介导增强型绿色荧光蛋白报告基因质粒(pEGFP-N1)转染乳腺癌MCF-7细胞的最优条件以及超声联合微泡造影剂增强脂质体转染的效果.方法 体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,按照不同的辐照条件分组:不处理组,超声辐照十质粒组,微泡浓效组,超声声张组,辐照时间组及工作周期组.分别进行超声辐照,辐照后以MTT法测细胞存活度,流式细胞仪测pEGFP-N1瞬时转染率,取得最佳的辐照条件.重新准备细胞后先以脂质体转染细胞,2 h后加入超声微泡并以最佳条件辐照,用同样的方法测细胞存活率及转染率.结果 20%的造影剂浓度、1.5 W/cm2的声强、90 s的辐照时间、20%的工作周期(占空比)为超声辐照SonoVue介导pEGFP-N1转染MCF-7细胞的最优条件,转染率为(14.21±2.55)%,细胞存活率为(84.60±2.85)%.在增强脂质体转染的实验中,超声微泡脂质体组的转染率最高(22.15±2.69)%,与其他各组相比差异有统计学意义(P<0.05),此时细胞存活率为(80.13±3.61)%.结论 20%的造影剂浓度、1.5 W/cm2的声强、90 s的辐照时间、20%的工作周期是MCF-7细胞的最佳转染条件,超声联合微泡能够增强脂质体转染的效果.     

低频超声联合微泡影响前列腺癌DU145细胞血管内皮细胞生长因子表达的实验研究

目的探讨低频超声联合微泡对前列腺癌DUl45细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法体外培养前列腺癌DUl45细胞,细胞呈对数生长时分为4组进行实验：对照组（细胞悬液1ml）、单纯微泡组（800μl细胞悬液加入200μl微泡剂SonoVue）、单纯低频超声组（1ml细胞悬液以频率80kHz、声强0．45W／cm2超声辐照30S）、低频超声联合微泡组（800μl细胞悬液加入200μl微泡剂SonoVue后立即以频率80kHz、声强0．45W／cm2超声辐照30s）。MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测凋亡率,Western印迹法检测细胞VEGF蛋白的表达。采用单因素方差分析比较对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞存活率、凋亡率、VEGF蛋白表达量差异,进一步组间两两比较采用SNK-q检验。结果对照组、单纯微泡组、单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞存活率分别为100％、（96．50±12．49）％、（93．20±5.31）％、（81．30±9．32）％;凋亡率分别为（1．10±0．26）％、（1．78±0．63）％、（5．85±0．45）％、（9．36±0．90）％;VEGF蛋白表达量分别为0．81±0．05、0．79±0．06、0．58±0．04、0．38±0．05。单纯微泡组、单纯低频超声组细胞存活率与对照组比较差异均无统计学意义,低频超声联合微泡组细胞存活率较对照组降低,且差异有统计学意义（q=5．88,P〈0．05）。单纯微泡组细胞凋亡率、VEGF蛋白表达量与对照组比较差异均无统计学意义;单纯低频超声组、低频超声联合微泡组细胞凋亡率均高于对照组,VEGF蛋白表达量均低于对照组,且差异均有统计学意义（q=14．09、24．51、8．06、14．89,P均〈0．05）。低频超声联合微泡组细胞凋亡率高于而VEGF蛋白表达量低于单纯低频超声组,且差异亦均有统计学意义（q=10．42、6．83,P均〈0．05）。结论微泡能增强低频超声抑制前列腺癌DUl45细胞增殖及促进凋亡,其机制可能与其下调前列腺癌DUl45细胞VEGF表达有关。     

超声辐照和SonoVue微泡在介导hAng-1基因体外转染时的作用和量效关系探讨

目的 探讨超声辐照和SonoVue微泡分别使用和联用在介导hAng-1基因体外转染过程中的作用以及辐照强度和微泡浓度对转染效率和细胞活性的影响.方法 实验分四组A组:单纯超声辐照+质粒组;B组:微泡+质粒组;C组:超声辐照+微泡+质粒组和空白对照组D组. C组内转染参数分别设置为超声照射强度0.5、1.0 、1.5和2.0 W/cm~2,微泡浓度5%、10%、20%、30%和40%.将连接有eGFP-C_3-hAng-1质粒的SonoVue微泡对293T细胞进行转染,48 h后检测各组基因转染效率和细胞存活率. 结果转染48 h后C组转染效率最高,荧光阳性细胞数最多,强度最大;A组转染效率很低,见少量荧光表达;B、D组无明显基因转染发生.随着超声照射强度和微泡浓度的增加,基因转染效率会逐步升高,具有统计学意义.微泡浓度大于20%、超声照射强度超过1.5 W/cm~2后基因转染效率不再升高甚至降低,细胞死亡率显著增高(P<0.01).结论 SonoVue微泡介导外源基因转染必须联合超声辐照才能获得较好的转染效率.对于hAng-1基因和SonoVue微泡,选择声强1.5 W/cm~2,微泡浓度20%是相对最佳转染条件.     

超声介导靶向微泡联合紫杉醇对卵巢癌细胞线粒体膜电位的影响

目的探讨超声介导LHRHa靶向微泡联合紫杉醇对人卵巢癌细胞株A2780/DDP线粒体膜电位的影响。方法采用生物素-链霉亲和素法合成LHRHa靶向微泡。将对数生长期的A2780/DDP细胞随机分为对照组、紫杉醇组、紫杉醇+超声组、普通微泡+紫杉醇+超声组、LHRHa靶向微泡组和LHRHa靶向微泡+紫杉醇+超声组。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,激光共聚焦检测细胞线粒体膜电位变化。结果LHRHa靶向微泡+紫杉醇+超声组对细胞增殖抑制作用最明显,24h、48h和72h抑制率分别为(35.39±2.12)%、(66.90±2.15)%、(69.53±2.85)%,明显高于其他处理组(P均<0.05)。与对照组相比,除LHRHa靶向微泡组外,各处理组细胞线粒体膜电位均出现不同程度的降低,LHRHa靶向微泡+紫杉醇+超声组线粒体膜电位明显低于其他组(P均<0.05)。结论超声介导LHRHa微泡联合紫杉醇能有效增加紫杉醇对人卵巢癌细胞株A2780/DDP的增殖抑制和线粒体膜电位的耗散。     

凋亡相关基因Bcl—XL、Bax表达与人卵巢癌细胞辐照凋亡效应的相关性研究

目的：探讨60Coγ射线作用下人卵巢癌细胞株A2780及其顺铂耐药株A2780－cp凋亡相关基因Bcl-XL、Bax的表达及在辐照凋亡效应中作用。方法：分别运用流式细胞技术（FCM）及RT－PCR方法，分析A2780－A2780－cp中Bcl-XL、Bax转录的相对表达与辐照诱导的细胞凋亡率的关系。结果：A2780－cp细胞较其亲本株A2780细胞有较高水平的Bcl-XL表达；辐照后2h两者呈现不同程度的Bcl-XL、Bax的转录增加及Bcl-XL/Bax比率变化。结论：不同p53基因状态卵巢癌细胞对辐照诱导的凋亡敏感性与肿瘤细胞的Bcl-XL、Bax表达及二者的比率有关。     

超声微泡转染前列腺癌细胞的参数筛选

目的观察不同辐照参数下超声微泡对前列腺癌细胞生长及基因转染效率的影响。方法采用噻唑兰比色法检测单纯超声、单纯微泡、超声辐照微泡对前列腺癌细胞生存率的影响。荧光显微镜观察超声微泡介导的质粒为EGFP基因与HSV l-TK基因共表达载体。观察它对前列腺癌细胞PC-3转染后荧光表达情况,Westernblot检测EGFP蛋白的表达情况。结果 MTT显示超声强度为1.0W/cm2,频率为1MHz,辐照时间30s时超声辐照对细胞无明显的抑制作用;采用不同浓度的微泡对前列腺癌细胞PC-3作用24h后,各实验组细胞存活率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);当采用最适的超声辐照时间辐照微泡浓度为10、20、40、80μL时,超声+微泡(80μL)组细胞存活率低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),而10、20、40μL组中细胞生长良好;转染EGFP后48h,在荧光显微镜观察对照组未见荧光表达,其他各组中均有荧光表达,并随着微泡剂量的增加,荧光表达量增多;Western blot检测显示各处理组中均有EGFP蛋白的表达,超声+微泡(20μL)+TK(1μg)组、超声+微泡(40μL)+TK(1μg)组的EGFP蛋白表达明显高于其他各组。结论在最适辐照参数下,超声微泡造影剂能够有效地促进TK基因的转染。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对卵巢癌裸鼠移植瘤SKOV3细胞的促凋亡研究

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)蛋白对SKOV3移植瘤细胞半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响及其与肿瘤细胞凋亡的关系.方法 建立雌性裸小鼠SKOV3移植瘤24只,随机分为4组,每组6只.TRAIL组单用重组人TRAIL蛋白(10μg/kg),顺铂(DDP)组单用DDP(3 mg/...     

低频低功率超声联合微泡对DU145细胞及PC3细胞早期凋亡的影响

目的比较低频低功率超声联合微泡造影剂对人前列腺癌DU145细胞与PC3细胞早期凋亡率的不同影响。方法使用低频低功率超声连续波辐照人前列腺癌DU145细胞和PC3细胞悬液60 s,实验中两种细胞系各分为4组:空白对照组(A组)、单纯微泡组(B组)、单纯超声组(C组)和超声联合微泡组(D组),辐照后细胞继续培养24 h,流式细胞仪检测细胞早期凋亡情况,透射电镜观察细胞形态改变。结果两种细胞D组的早期细胞凋亡率明显高于其余各组(P﹤0.01),C组亦均高于A组(P﹤0.05),A、B组之间差异无统计学意义;两种细胞经相同处理后,C、D组PC3细胞的早期细胞凋亡率均高于DU145细胞(P﹤0.01)。透射电镜下两种细胞D组可见癌细胞体积变小变圆,空泡增多,有明显的凋亡小体形成,PC3细胞内还可见大量的自噬体出现。结论低频低功率超声联合微泡造影剂能明显诱导人前列腺癌细胞的早期凋亡,且对PC3细胞早期细胞凋亡作用强于DU145细胞。     

细胞免疫功能测定在危重症患者中的临床意义

目的探讨细胞免疫功能与危重症患者病情严重程度和预后的关系。方法选择资料完整的危重症患者43例,根据28d生存情况,将患者分为存活组(21例)及死亡组(22例),并通过急性病生理学和长期健康评价(APACHE)Ⅱ评分计算出分值,采用流式细胞仪对T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞进行检测。结果与存活组比较,死亡组外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+及CD8+细胞计数低于存活组,差异均具有统计学意义([270.32±187.58)、(189.27±156.99)、(88.73±56.74),(489.05±109.18)、(342.05±116.41)、(170.33±68.69)个/μl,P均0.05];死亡组外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+及NK细胞百分数低于存活组,差异均具有统计学意义([43.07±10.35)%、(21.88±8.04)%、(13.71±6.27)%、(7.35±4.46)%,(52.91±13.24)%、(29.76±6.02)%、(24.45±10.78)%、(14.35±5.03)%,P均0.05]。存活组和死亡组患者APACHEⅡ评分与CD3+、CD4+、CD8+细胞计数均呈负相关(P均0.05),而与CD3+、CD4+、CD8+及NK细胞百分数均无相关性(P均0.05)。结论细胞免疫功能水平高低与危重症患者病情严重程度有关。细胞免疫功能水平可作为评估危重症患者病情和预后的重要检测指标。     

微泡造影剂与超声消融子宫肌瘤能效关系的研究

目的 研究微泡造影剂对超声消融人子宫肌瘤能效因子的影响.方法 因切除子宫肌瘤而的新鲜离体子宫20个,体外灌注造影剂与林格氏液混悬液,分为三组.浓度A组：微泡浓度2×108/ml;浓度B组：微泡浓度1×108/ml,对照组：单纯林格氏液.超声观察到肌瘤内部出现回声增强时,立即用聚焦超声肿瘤治疗系统以定点方式消融,消融深度分别为20 mm、30 mm及40 mm.超声消融结束后测量坏死区域体积,计算能效因子.结果 浓度A组能效因子为（6.85±3.16）J/mm3,浓度B组为（14.79±5.24）J/mm3,对照组为（29.11±10.76）J/mm3,三者依次增大,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 加入微泡造影剂后,消融单位体积子宫肌瘤组织所需能量明显降低.     

免疫性血小板减少性紫癜患者脾切除术前后外周血T细胞亚群的检测意义

目的探讨免疫性血小板减少性紫癜（ITP）患者脾切除术前后外周血T淋巴细胞亚群及CD56＋NKT细胞的变化及血液学疗效与各检测指标的关系。方法应用流式细胞技术,检测34例ITP患者腹腔镜脾切除术前后7d外周血T细胞亚群（CD3＋、CD3＋CD4＋和CD3＋CD8＋）及CD56＋NK细胞的百分数。根据不同的血液学疗效,将患者分为手术有效组（A组,22例）和无效组（B组,12例）。应用SPSS13.0forWindows软件对比分析两组术前后T细胞亚群、CD56＋NK细胞的百分数及CD4＋/CD8＋比值的差异及各组术前后各指标的变化。结果 A组和B组术前CD3＋CD4＋细胞百分数分别为（32.83±8.07）%和（26.23±6.17）%（P=0.045）,术前CD4＋/CD8＋比值分别为（1.30±0.51）和（0.84±0.42）（P=0.022）。余两组术前后各指标差异无统计学意义;B组术前后CD3＋细胞百分数分别为（65.51±4.54）%和（60.38±12.97）%（P=0.017）,CD3＋CD8＋细胞百分数分别为（37.27±12.47）%和（32.96±13.18）%（P=0.025）。余各组术前后各指标差异无统计学意义。结论脾切除疗效不同的ITP患者存在不同的细胞免疫发病机制。术前外周血CD3＋CD4＋细胞百分数及CD4＋/CD8＋比值有助于预测手术疗效。     

不同年龄段健康人及老年肺癌患者外周血中Helios＋调节性T细胞比例的研究

目的：观察健康青年人（青年组）、健康老年人（老年组）及老年肺癌患者（肺癌组）外周血中Helios＋调节性T细胞分布比例。方法流式细胞技术检测青年组、老年组及肺癌患者外周血中CD4＋Foxp3＋、CD4＋Foxp3＋Helios＋细胞所占比例,同时比较各组人群之间是否存在差异。结果1.青年组、老年组、肺癌组外周血中CD4＋Foxp3＋细胞占CD4＋T细胞的比例分别为（2.77±0.53）%、（3.82±0.61）%、（6.00±2.40）%,青年组明显低于老年组（P＜0.01）,老年组明显低于肺癌组（P＜0.01）。2.青年组、老年组、肺癌组外周血中CD4＋Foxp3＋Helios＋细胞占CD4＋Foxp3＋T细胞的比例分别为（47.67±4.53）%、（26.38±4.50）%、（16.76±4.13）%,青年组明显高于老年组（P＜0.01）,老年组明显高于肺癌组（P＜0.01）。3.肺癌组中,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期CD4＋Foxp3＋Helios＋细胞占CD4＋Foxp3＋T细胞的比例分别为（18.52±2.99）%、（18.57±3.05）%、（12.13±3.23）%,肺癌Ⅰ期与Ⅱ期患者无明显区别,而Ⅲ期则明显降低（P＜0.01）。结论Helios＋调节性T细胞在青年组比例明显高于老年组及肺癌组,早期肺癌明显高于晚期肺癌。     

两种不同化疗方案对晚期非小细胞肺癌患者骨髓抑制及免疫力的影响

目的 探讨不同方案化疗对晚期非小细胞肺癌患者骨髓抑制及免疫力的影响.方法 选择晚期非小细胞肺癌患者46例,随机分为NP组（长春瑞滨＋顺铂）23例和DP组（多西紫杉醇＋顺铂）23例,分别于患者化疗前和2个周期化疗结束后监测骨髓抑制及免疫力,并进行分析.结果 NP组和DP组的中位生存期（MST）分别为10.3个月和6.2个月,1年生存率分别为52.17％和30.43％,两组比较差异均有统计学意义（x2值分别为3.987、4.603,P均＜0.05）.化疗后,DP组血小板计数为（108.87±15.63）×109/L,较NP组[（128.17±15.3）×109/L]降低幅度明显（=3.819,P＜0.05）.NP组患者化疗前CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4 ＋/CD8＋及NK分别为（61.17±9.13）％、（36.99±7.83）％、（26.94±6.14）％、（1.93±0.21）％、（30.12±8.62）％;化疗后分别为（52.82±8.19）％、（33.22±6.92）％、（23.21±5.64）％、（1.53±0.11）％、（28.07±8.17）％;各指标较化疗前均明显降低（t值分别为2.097、3.217、2.251、3.027、2.717,P均＜0.05）.DP组化疗前CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4 ＋/CD8＋及NK分别为（62.82±9.13）％、（38.82±9.19）％、（27.81±7.97）％、（1.82±0.13）％、（31.82±7.48）％,化疗后分别为（50.76±8.19）％、（28.92±8.13）％、（20.82±8.93）％、（1.36±0.16）％、（29.12±7.31）％,各指标较化疗前均明显降低（t值分别为2.347、2.591、3.785、2.438、2.157,P均＜0.05）;化疗后,两组患者CD4＋、CD8＋、CD4 ＋/CD8＋比较,差异均有统计学意义（t值分别为2.591、3.785、2.438,P均＜0.05）,CD3＋、NK比较差异无统计学意义（t值分别为0.027、0.323,P均＞0.05）.结论 NP方案化疗能够减轻晚期非小细胞肺癌患者因化疗造成的免疫功能降低程度,对化疗造成的免疫功能降低程度优于DP化疗方案;疗效优于DP化疗方案.     

α-辅肌动蛋白4对卵巢癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其机制

目的:探讨体外沉默α-辅肌动蛋白4(alpha-actinin-4,ACTN4)基因的表达对卵巢癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其可能的机制。方法:化学合成靶向ACTN4基因的ACTN4-siRNA,体外转染至人卵巢癌细胞株SKOV3和OVCA429中,采用real-time PCR检测ACTN4 mRNA的表达,采用MTT法检测卵巢癌细胞的增殖能力及存活率,采用流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡情况,采用Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果:ACTN4-siRNA转染SKOV3/OVCA429细胞后,ACTN4的mRNA及蛋白的表达均明显下降;细胞增殖能力明显受到抑制。在不同浓度紫杉醇作用下,与转染CtrlsiRNA的对照组相比,ACTN4-siRNA转染组SKOV3/OVCA429的细胞存活率均显著降低,即转染ACTN4-siRNA后的SKOV3/OVCA429细胞对紫杉醇的敏感性明显增加(P0.01)。SKOV3细胞瞬时转染ACTN4-siRNA48 h后,细胞凋亡率[(7.22±0.31)%]明显高于转染Ctrl-siRNA的对照组[(2.07±0.08)%];OVCA429细胞的情况与之一致,转染ACTN4-siRNA后细胞凋亡率为[(23.37±0.18)%],对照组为[(19.49±0.19)%],差异均有统计学意义(P0.05)。转染ACTN4-siRNA后,SKOV3/OVCA429中p-Akt和p-FAK蛋白表达明显减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减少,而促凋亡蛋白Bid和Bim表达则明显增加。结论:ACTN4可以降低卵巢癌细胞的化疗敏感性,这种作用可能通过抑制细胞凋亡实现。     

超声造影定量分析动脉相血流灌注参数在肝局灶性结节增生和肝细胞肝癌鉴别诊断中的价值

目的探讨超声造影定量分析动脉相血流灌注参数在肝局灶性结节增生（FNH）和肝细胞肝癌（HCC）鉴别诊断中的价值。方法经肘静脉团注声诺维（2．4m1）造影剂后利用时间．强度曲线分析软件对17例FNH19个病灶（FNH组）和41例HCC41个病灶（HCC组）的动脉相血流灌注参数（到达时间,峰值时间和峰值强度）进行测定,并计算出增强斜率和增强时间,对这些参数进行对照分析。结果（1）造影剂到达时间：FNH组为（10．44±1．43）s,HCC组为（12．64±2．30）s;（2）峰值时间：FNH组为（16．64±2．75）S,HCC组为（21．32±3．86）S;（3）增强时间：FNH组为（6．19±1．79）S,HCC组为（8．67±2．62）s;（4）增强斜率：FNH组为（5．48±1．71）dB／s,HCC组为（3．79±0．99）dB／s。FNH组与HCC组造影剂到达时间、峰值时间、增强时间、增强斜率比较差异有非常显著性（P=0．000）;（5）峰值强度：FNH组为（31．42±3．15）dB,HCC组为（30．73±3．86）dB,两组比较差异无统计学意义（P=0．344）。结论超声造影定量分析法可以发现FNH和HCC动脉相血流灌注差异,有助于FNH与HCC的鉴别诊断。