DFF45在肝细胞肝癌中的低表达及其临床意义

背景与目的:研究表明DNA裂解因子45(the DNA fragmentation factor 45,DFF45)在肿瘤细胞中表达异常与肿瘤细胞凋亡、分化、恶性表型密切相关.本研究探讨DFF45在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织、癌旁肝组织、正常肝组织、3种不同的肝癌细胞株、永生化的肝细胞株L02中的表达,并分析其与肝癌患者临床参数的相关性.方法:采用免疫组化、Western blot及RT-PCR检测35例HCC组织及相应癌旁组织、10例正常肝组织中DFF45蛋白及mRNA表达;Western blot、RT-PCR检测肝癌细胞株QGY-7701、SMMC-7721、HepG2及永生化的肝细胞株L02中DFF45蛋白及mRNA表达.结果:免疫组化显示DFF45在HCC组织、癌旁组织、正常肝组织阳性率分别为48.6％ (17/35)、77.1％(27/35)和90％ (9/10),HCC组织中DFF45蛋白表达明显低于癌旁及正常组织(P＜0.05).DFF45蛋白的表达与肿瘤大小、病理分级相关.Western blot检测进一步验证了该免疫组化结果.RT-PCR结果显示,DFF45 mRNA在HCC组织中表达(0.453±0.111)同样低于癌旁组织(0.518±0.094)及正常肝组织(0.535±0.112),差异有统计学意义(P＜0.05).DFF45蛋白及mRNA在3种肝癌细胞株中表达均低于永生化的细胞株.结论:DFF45在HCC组织及肝癌细胞系中呈低表达,可能参与了肝癌的发生发展,并有可能成为肝癌治疗的新靶点.     

人肝细胞癌中内质网分子伴侣GRP94的异常表达及意义

目的:探讨肝细胞癌中内质网分子伴侣GRP94的表达及其与肝癌分化程度、临床分期及淋巴结转移的关系。方法:采用免疫组织化学法分别检测肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织GRP94的表达水平,结合临床病理特征于光学显微镜下用半定量法对结果进行统计分析。结果:正常肝组织、癌旁组织及肝癌组织均有GRP94的表达。表达水平随细胞分化的降低、肿瘤体积的增大及肿瘤转移而升高,但与患者性别和年龄无关。结论:GRP94的表达可能参与了肝癌的发生、发展,抑制GRP94的表达有可能会抑制肿瘤的生长。     

血管内皮生长因子与抑癌基因PTEN在肝细胞癌组织中表达及临床意义

目的:观察第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(phosphatase and tensinhomlog deleted on chromosome ten protein,PTEN)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)在肝细胞癌(hepatocellular carcino-ma,HCC)中表达及其关系,并探讨两者与HCC发生、发展及肿瘤侵袭性的关系。方法:采用免疫组织化学链霉素亲合素-生物素-过氧化物酶复合物(SP)法、半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测60例HCC及癌旁组织中PTEN与VEGF蛋白及mRNA表达和微血管密度(microvessel density,MVD),并进一步分析它们之间的相关性及其与肝癌组织临床病理分期、侵袭性的关系。结果:HCC中PTEN蛋白及mRNA表达阳性强度明显低于癌旁组织,而VEGF阳性表达强度明显高于癌旁组织,且两者间呈负相关(r=-0·613、-0·572,P=0·000、0·002);肝癌组织分化程度、侵袭性与PTEN表达呈负相关(P=0·02、0·000),而与VEGF和MVD表达呈正相关(P=0·000);MVD与PTEN表达呈负相关(r=-0·439,P=0·001),而与VEGF表达呈正相关(r=0·645,P=0·000)。结论:PTEN和VEGF表达水平一定程度上能反映HCC组织分化和侵袭性强弱;HCC中PTEN表达缺失可能引起VEGF表达增加,从而在肿瘤侵袭、转移中发挥一定作用。     

人肝癌组织糖调节蛋白94的表达及其意义

目的 :探讨人肝癌组织糖调节蛋白 94(glu cose regulatedprotein 94,GRP94)的表达及意义。方法 :采用SABC法检测人肝癌组织GRP94的表达 ,镜下观察GRP94在癌组织中的表达特点。结果 :免疫组化显示 ,40例肝癌组织中 3 8例 ( 95 0 % )存在GRP94的表达 ,不同癌组织存在胞质、胞膜和胞核表达强度及部位的差异 ;癌旁组织亦存在较弱的表达。结论 :人肝癌组织存在GRP94的表达异质性 ,呈现了胞质、胞膜和胞核的表达差异 ,GRP94在人肝癌组织的表达特点为以后肿瘤抗原肽瘤苗的提取和实验研究作了铺垫。     

肝癌组织CD24基因表达及其临床意义

目的:探讨CD24基因在原发性肝细胞癌(HCC)组织中表达的特征及其临床病理意义.方法: 应用RT-PCR及免疫组化方法检测CD24基因在42例肝癌组织、相应42例癌旁组织中的表达,分析其与临床病理特征的相关性.结果: RT-PCR显示,CD24 mRNA阳性表达与肝细胞癌组织分化程度(P=0.019)及有否肝内转移有关(P=0.031),与肝细胞癌患者性别、HBsAg状态、术前AFP水平、肿瘤是否有包膜、肿瘤大小、癌肿数目无关(P>0.05);Elivision法显示,CD24蛋白阳性表达与肿瘤的组织分化程度(P=0.025)、有无肝内转移密切相关(P=0.008), 而与患者性别、HBsAg状态、术前AFP水平、肿瘤是否有包膜、肿瘤大小、癌肿数目无关(P>0.05).HCC组织中CD24表达较癌旁组织明显升高.结论: HCC组织中CD24基因表达能促进HCC的发生、发展和转移,可作为判断HCC恶性程度、评价预后的指标.     

tktl1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究转酮醇酶样基因1(tktl1)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与临床病理的关系.方法:RT-PCR法检测转酮醇酶基因家族各成员(tkt、tktl1、tktl2)mRNA在42例HCC及癌旁组织中的表达并研究其与临床病理参数间的关系.结果:HCC组织中tktl1 阳性表达率明显高于tkt和tktl2的阳性表达率 (P＜0.05).tktl1在HCC中的阳性表达率明显高于癌旁组织(P＜0.05);而 tkt和tktl2阳性表达率在肝癌及癌旁组织间无明显差异(P＞0.05). HCC中tktl1的高表达同肿瘤分化程度,静脉癌栓,CLIP评分有关 (P＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肝内及淋巴转移、AFP水平无关(P＞0.05).结论:tktl1与HCC的发生发展有关,影响肝癌的分化、转移及患者预后,有望成为HCC治疗的新靶点.     

葡萄胎和绒毛膜癌组织中葡萄糖调节蛋白94的表达及意义

目的:探讨葡萄糖调节蛋白94(glucose-regulated protein,GRP94)在葡萄胎和绒毛膜癌组织中的表达及意义。方法:采用DA-KO EnVision免疫组织化学染色法对39例葡萄胎及20例绒毛膜癌组织中的GRP94进行染色,镜下观察GRP94在葡萄胎和绒毛膜癌组织中的特点,用图像分析软件对其积分光密度(IOD)进行分析。结果:39例葡萄胎组织中34例(87.2%)滋养层细胞胞质有GRP94表达,且合体滋养层细胞胞质比细胞滋养层细胞胞质表达强,P=0.000。在20例绒毛膜癌组织中16例(80%)癌细胞胞质有GRP94表达,同时也发现GRP94在合体滋养层细胞胞质比细胞滋养层细胞胞质表达强,P=0.017,且癌细胞胞质比癌旁平滑肌细胞胞质的表达强,P=0.000。在葡萄胎和绒毛膜癌滋养层细胞胞质中GRP94的表达随分化程度降低而升高,P=0.04;其中,在细胞滋养层细胞胞质中GRP94的表达也是随分化程度降低而升高,P=0.005。而在合体滋养层细胞胞质中发现GRP94的表达与分化程度不相关,P>0.05。结论:GRP94的表达强度与滋养细胞肿瘤的分化程度有关。     

人肝癌组织糖调节蛋白94的表达及其意义

目的：探讨人肝癌组织糖调节蛋白94(glucose-regulated protein-94，GRP94)的表达及意义。方法：采用SABC法检测人肝癌组织GRP94的表达．镜下观察GRP94在癌组织中的表达特点。结果：免疫组化显示，40例肝癌组织中38例(95．0%）存在GRP94的表达．不同癌组织存在胞质、胞膜和胞核表达强度及部位的差异：癌旁组织亦存在较弱的表达。结论：人肝癌组织存在GRP94的表达异质性．呈现了胞质、胞膜和胞核的表达差异．GRP94在人肝癌组织的表达特点为以后肿瘤抗原肽瘤苗的提取和实验研究作了铺垫。     

肝细胞肝癌上皮型钙黏素基因表达和启动子甲基化研究

目的 探讨上皮型钙黏素(E-cad)基因表达和启动子CpG岛甲基化与肝细胞肝癌(HCC)的关系.方法 用甲基化特异性PCR技术检测36例HCC肿瘤组织及其癌旁非肿瘤组织中,E-cad基因启动子CpG岛甲基化状况,E-cad mRNA表达用RT-PCR技术检测.结果 癌旁组织中E-cad mRNA表达水平显著高于肿瘤组织(P<0.001),Ⅲ～Ⅳ期肿瘤组织中的表达水平显著低于Ⅰ～Ⅱ期肿瘤(P=0.025),较大肿瘤(>5 cm)组织中的表达水平显著低于较小肿瘤(P=0.035),包膜完整的肿瘤组织中E-cad mRNA表达水平显著高于包膜不完整的肿瘤(P=0.001);E-cad基因在HCC肿瘤组织中的甲基化率显著高于癌旁组织(P=0.035),在包膜完整的肿瘤中的甲基化率显著低于包膜不完整的肿瘤(P=0.015);E-cad甲基化阳性的肿瘤组织中,其mRNA表达水平显著低于E-cad非甲基化阳性的肿瘤(P<0.000).结论 E-cad基因表达下降可能与HCC进展相关,其启动子甲基化是该基因表达下降的重要原因之一.     

肿瘤干细胞标志物CD133在胃癌中的表达及其临床意义

目的：探讨CD133在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测38例手术切除的胃癌原发组织、癌旁正常胃粘膜组织和其中8例肝转移灶组织中CD133mRNA的表达，免疫组织化学方法检测肿瘤组织中CD133蛋白的表达情况，分析CD133的表达与临床病理参数的关系。结果：胃癌癌旁、原发、转移组织中CD133mRNA的灰度相对值分别为0．189±0．149、0．3054-0．118和0．359±0．139，癌旁与原发组织之间差异有统计学意义（P〈0．01），原发与转移组织之间差异无统计学意义（P〉0．05）。免疫组化检测肿瘤组织中CD133蛋白表达，阳性细胞稀少。原发组织CD133mRNA的表达与肿瘤大小和Ki-67表达相关（P〈0．05），与性别、年龄、浸润深度、淋巴结转移分期、TNM分期、组织分化程度及p53表达均无关（P〉0．05）。结论：CD133的表达与胃癌的发生有关，与转移的关系有待进一步研究，可能在胃癌的诊断中起一定的作用。     

肝细胞癌中APC基因启动子甲基化及蛋白表达的研究

目的：探讨肝细胞癌中APC基因启动子甲基化状态及蛋白表达的临床意义。方法：应用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）和免疫组织化学方法检测61例HCC及相应的癌旁肝组织中APC基因启动子甲基化状态和蛋白表达水平,分析甲基化与临床资料及蛋白表达的关系。结果：癌组织及癌旁组织中APC基因启动子甲基化阳性率分别为26.23%和11.47%（P〈0.05）。癌与癌旁组织APC蛋白表达无统计学差异（P〉0.05）。APC基因启动子甲基化与临床分期、门脉癌栓、术后复发、肝外转移、肿瘤大小、肿瘤分化、肿瘤个数及血清AFP值无关。APC基因启动子甲基化与蛋白表达无相关性。结论：APC启动子区甲基化可能参与了肝癌的发生,但在HCC的发展中的作用仍需进一步研究。     

COX-2和HIF-1α在肝细胞癌中的表达及意义

目的：研究环氧化酶-2（COX-2）和缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在肝细胞癌（HCC）中的表达及意义。方法：采用原位杂交技术检测48例HCC组织中COX-2mRNA和HIF-1αmRNA的表达，通过免疫组化sP法，用抗CD34抗体标记血管内皮细胞，检测微血管密度（MVD）。结果：COX-2mRNA在HCC中的表达显著高于正常肝组织（P〈0．05），并与肿瘤数目、血管侵袭、淋巴结转移、临床分期显著相关（P〈0．05）；HIF-1αmRNA在HCC中的表达亦显著高于正常肝组织（P〈0．05），并与肿瘤分化程度、包膜形成、血管侵袭、淋巴结转移、临床分期显著相关（P〈0．05）；COX-2mRNA、HIF-1αmRNA的表达均与MVD呈正相关（P〈0．05）；COX-2mRNA与HIF-1αmRNA的表达强度呈正相关（P〈0．05）。结论：COX-2和HIF-1α在HCC的发生、发展、浸润和转移中发挥重要作用，促进了血管生成，且两者具有协同效应。     

tktl1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的：研究转酮醇酶样基因1（tktl1）在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及其与临床病理的关系。方法：RT-PCR法检测转酮醇酶基因家族各成员（tkt、tktl1、tktl2）mRNA在42例HCC及癌旁组织中的表达并研究其与临床病理参数间的关系。结果：HCC组织中tktl1阳性表达率明显高于tkt和tktl2的阳性表达率（P〈0.05）。tktl1在HCC中的阳性表达率明显高于癌旁组织（P〈0.05）;而tkt和tktl2阳性表达率在肝癌及癌旁组织间无明显差异（P〉0.05）。 HCC中tktl1的高表达同肿瘤分化程度,静脉癌栓,CLIP评分有关（P〈0．05）,而与性别、年龄、肿瘤大小、肝内及淋巴转移、AFP水平无关（P〉0．05）。结论：tktl1与HCC的发生发展有关,影响肝癌的分化、转移及患者预后,有望成为HCC治疗的新靶点。     

金属蛋白酶抑制基因RECK在肝细胞癌中的表达及生物学意义

目的探讨金属蛋白酶抑制基因RECK在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达及其临床意义。方法用实时逆转录聚合酶链反应（real-time RT-PCR）技术和免疫组化方法分别检测61例HCC、癌旁组织及18例正常肝组织中RECK mRNA和蛋白表达情况。结果 RECK mRNA在HCC中表达水平（0.0269±0.0026）低于癌旁肝组织（0.0378±0.0031,P〈0.05）。RECK蛋白在HCC组织中阳性表达率（59.0%）也显著低于癌旁肝组织（78.7%,P〈0.05）。RECK在HCC组织中的阳性检出率与肿瘤大小、是否复发、有无门脉癌栓、肿瘤有无完整包膜等临床因素显著相关（P〈0.05）,而与年龄、性别、有无肝硬化、乙肝表面抗原、AFP水平等无关。对61例患者的随访资料进行生存分析显示,RECK阳性组3年生存率83.9%,明显高于RECK阴性组52.1%（P〈0.05）。结论 RECK可能参与HCC的发生发展,有可能成为预测HCC浸润与转移的参考指标。     

WFDC-1基因在原发性肝癌组织中的表达及其临床意义

目的检测WFDC-1基因在肝癌和正常肝组织的表达差异并探讨其临床意义。方法采用荧光实时定量PCR（FQ-RT-PCR）法检测30例肝癌组织及相应远端正常肝组织WFDC-1mRNA的表达,分析其表达与肝癌患者临床特征的相关性。结果 WFDC-1mRNA在肝癌组织中的表达水平（0.050±0.026）明显低于远端正常肝组织（0.113±0.040）,两者差别有统计学意义（P〈0.05）。WFDC-1mRNA在肝癌中的表达水平与HBsAg水平有关,合并HBsAg阳性的肝细胞癌（HCC）中的表达低于HBsAg阴性HCC组（P〈0.05）,而与年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、AFP及有无肝硬化无关（P〉0.05）。结论肝癌组织中WFDC-1基因表达水平明显低于相应正常肝组织,提示WFDC-1表达与降低肿瘤发生有一定的相关性,为潜在的抑癌基因。     

石蜡包埋的肝细胞癌组织中ASPP家族的表达

目的：研究肝细胞癌中p53凋亡刺激蛋白（ASPP）家族的表达以及临床意义。方法：应用免疫组织化学SP方法检测73例甲醛固定和石蜡包埋的肝细胞癌组织切片和相应癌旁正常组织中ASPP蛋白家族的表达情况。结果：在癌旁正常组织中,ASPP1和ASPP2的表达阳性率高于肝细胞癌组织（P=0．000,0．000）,但是肝细胞癌组织中iASPP的表达阳性率高于相应癌旁正常组织（P=0．000）。在肝细胞癌组织中,ASPP1的表达与患者性别、年龄、临床分期以及淋巴结转移均无相关性（P〉0．05）,但与病理分级有关（P=0．001）;ASPP2的表达与病理分级和临床分期有关（P=0．000,0．000）,与胜别、年龄以及淋巴结转移无关（P〉0．05）。iASPP的表达与淋巴结转移有关（P=0．004）,但是与性别、年龄、病理分级和临床分期无关（P〉0．05）。结论：ASPP蛋白家族异常表达可能与肝细胞癌的发生机制相关,ASPP1和ASPP2表达水平下调并与肝细胞癌病理分级相关,而iASPP的表达水平上调与癌的淋巴转移相关,iASPP可能是基因治疗肝细胞癌的一个靶点。     

膀胱癌组织Survivin和Livin表达及其临床意义的研究

目的：研究凋亡抑制蛋白Survivin和Livin在膀胱癌组织中的表达及其临床意义。方法：用荧光定量PCR技术检测40例膀胱癌组织、10例正常和癌旁组织中Survivin及Livin基因的表达,用蛋白质印迹法和免疫组化的方法验证,分析两者在膀胱癌组织表达及相关性。结果：荧光定量PCR检测结果显示,Survivin和Livin在正常和癌旁组均无表达,在肿瘤组表达分别为0．01（0．00～0．03）和0．42（0．03～2．23）,与正常组相比差异有统计学意义,P=0．000。两者表达与性别、肿瘤的单发和多发、分级和分期无关,P〉0．05。蛋白质印迹法检测结果显示,膀胱癌组织中Survivin蛋白的定量值为0．40±0．11,Livin蛋白为1．14±0．13,差异有统计学意义,P＝0．001。免疫组化结果显示,癌组织中Survivin表达率为47．5％（19／40）,Livin表达率为65．og（26／40）,差异无统计学意义,P＝0．118。在高分级、浸润性、多发、复发的膀胱癌组织中,Livin比Survivin表达更显著。结论：Livin与Survivin两者有相关性,可作为肿瘤复发有效的预测因子。Livin可能与膀胱癌的浸润性有关。     

胃癌中D2-40和CD34的表达及临床意义

目的 探讨D2-40和CD34在胃癌组织中的表达及D2-40阳性的淋巴管密度（LVD）和CD34阳性的微血管密度（MVD）与临床病理特征和预后的关系。方法 采用组织芯片和免疫组化技术检测108例胃癌和36例癌旁组织中D2-40和CD34的表达情况,并分别计数D2-40阳性的LVD和CD34阳性的MVD,分析两者与临床病理特征和预后的关系。结果 D2-40在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率分别为85.2％（92／108）和22.2％（8／36）,差异有统计学意义（P=0.000）;CD34在胃癌组织中的阳性表达率为94.4％（102／108）,高于癌旁组织的36.1％（13／36）,差异有统计学意义（P=0.000）。胃癌组织中LVD和MVD计数分别为10.14±5.37和45.32±15.78,显著高于癌旁组织中的3.38±1.69和4.92±1.26,差异均有统计学意义（P均为0.000）;单因素分析显示两者与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关,与性别、年龄无关。Cox多因素分析显示肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及MVD和LVD是胃癌预后的独立影响因素。Kaplan-Meier生存分析显示,乏淋巴管组的中位生存时间为69.0个月（95％ CI：59.91～77.20个月）,高于富淋巴管组的33.0个月（95％ CI：23.20～42.66个月）;乏微血管组的中位生存时间为67.0个月（95％ CI：58.10～76.39个月）,高于富微血管组34.0个月（95％ CI：24.63～44.02个月）,上述差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 D2-40标记的LVD和CD34标记的MVD与胃癌的临床病理特征密切相关,有望成为胃癌发展及预后的预测指标。     

卵巢上皮性癌组织eIF-4A蛋白表达临床意义研究

目的：探讨真核细胞翻译起始因子eIF-4A在卵巢上皮性癌组织中的表达及其临床意义。方法：选取青岛大学医学院附属医院妇科2008-01-01-2012-12-31住院病例。应用免疫组织化学方法测定41例卵巢上皮性癌组织、23例交界性卵巢上皮性肿瘤组织、25例良性卵巢上皮性肿瘤组织及30例正常卵巢组织中eIF-4A蛋白的表达情况。结果：eIF-4A蛋白在正常卵巢组织（3.33%）和卵巢交界性肿瘤组织（60.87%）中阳性表达率差异有统计学意义,z=4.607,P〈0.001;在卵巢良性肿瘤组织（12.00%）及卵巢交界性肿瘤组织中的阳性表达率差异有统计学意义,z=3.638,P〈0.001;在卵巢交界性肿瘤组织和卵巢上皮性癌组织（87.80%）中阳性表达率差异有统计学意义,z=2.399,P=0.016。卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织中eIF-4A蛋白的表达差异无统计学意义,z=1.239,P=0.215。eIF-4A蛋白在卵巢上皮性癌组织中的阳性表达与FIGO手术病理分期（χ2=7.080,P=0.020）、组织分级（P=0.002）及是否有淋巴结转移（P=0.008）呈明显的相关性;与患者的年龄（χ2=0.035,P=1.00）及卵巢上皮癌的病理类型（χ2=0.093,P=1.00）无明显的相关性。结论：eIF-4A可能参与卵巢上皮性癌的发生、发展并参与淋巴结转移过程,eIF-4A蛋白可能成为治疗卵巢上皮性癌的一个潜在的分子靶点。