高分辨率熔解曲线技术检测非小细胞肺癌患者胸水中EGFR基因突变

目的探讨高分辨率熔解曲线(HRM)技术对非小细胞肺癌(NSCLC)患者胸水标本EGFR基因突变进行检测的可行性及临床意义。方法采用高分辨率熔解曲线技术检测30例非小细胞肺癌患者胸水标本EGFR基因18-21外显子基因突变,并与Sanger测序法检测结果进行对比分析。结果HRM法检测胸水中EGFR基因18-21外显子突变总检出率为26.67%(8/30),Sanger测序法检测突变总检出率为23.33%(7/30)。HRM法与Sanger测序法相比,敏感性为100%,特异性为95.83%,阳性预测值为88.89%,阴性预测值为100%。结论运用HRM技术对非小细胞肺癌患者胸水进行EGFR基因突变检测方法可行,适宜推广。     

改良的内切酶突变体富集法检测肺癌标本中EGFR基因突变

背景与目的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变是肺癌靶向药物疗效的可靠预测指标,因此基因突变的检测具有非常重要的临床意义。本研究建立使用常规实验仪器、高灵敏度、简便的检测表皮生长因子受体突变的方法,以利于临床中快速的检测EGFR基因突变。方法采用改良的内切酶法富集法检测251例肺腺癌DNA标本中EGFR基因外显子19缺失突变和21(L858R)点突变,并与直接测序进行比较。利用混合突变/野生型EGFR基因的细胞系测定改良方法的灵敏度。结果在251例腺癌标本DNA中使用测序法检测出EGFR外显子19突变46例、外显子21突变26例。采用改良的突变体富集法检另外测出外显子19突变78例、外显子21突变57例,总突变率53.8%。灵敏度检测显示对于外显子19和21,新方法的检测灵敏度达0.5%。结论本方法具有简便、经济、灵敏度高等特点,便于临床快速筛查非小细胞肺癌病理组织中的EGFR基因突变。     

肺癌细胞学及血液标本表皮生长因子受体基因突变对比研究

目的:研究肺癌患者渗出液细胞学及血液标本中表皮生长因子受体(EGFR)第18、19、21外显子基因突变频率和类型以及与肿瘤组织学标本的关系。方法:收集肺癌患者渗出液细胞学标本53例及血液标本24例,提取DNA,聚合酶链反应扩增EGFR外显子18、19、21序列,用直接测序法检测基因序列,分析EGFR基因突变频率和类型以及与肿瘤组织学标本的关系。结果:53例细胞学标本检测到15例EGFR基因突变（28.3%,15/53）,18外显子突变1例,19外显子突变5例,21外显子突变9例,细胞学标本与肺腺癌组织学标本突变率（32.2%）相比,差异没有显著性（P=0.624）。24例血液标本中检测到1例突变（4.2%,1/24）,位于21外显子,血液标本与肿瘤组织学标本突变率相比,差异有显著性(P=0.006)。结论:肺癌患者渗出液细胞学标本适用于直接测序法检测EGFR突变,血液标本不适于用直接测序法检测肿瘤EGFR基因突变状态。     

ADx-ARMS方法检测晚期非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞基因突变的临床意义

目的:探讨应用ADx-ARMS方法检测非小细胞肺癌患者胸水标本癌细胞基因突变应用于指导小分子EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）治疗的可行性与临床意义。方法:ADx-ARMS检测24例非小细胞肺癌患者胸水标本EGFR基因第19、20和21外显子突变与KRAS基因第2外显子突变。统计分析胸水标本与前期检测过的非小细胞肺癌组织中的EGFR、KRAS突变率差异。结果:24例胸水标本中,EGFR突变与KRAS突变分别为14例（58.3%）和1例（4.2%）。前期检测过的非小细胞肺癌组织EGFR和KRAS突变率分别为47.6%和4.5%。EGFR和KRAS突变率在胸水标本与前期肺癌组织中差异无统计学意义（P>0.05）。结论:对失去手术机会而难以获得组织标本的晚期非小细胞肺癌患者,可应用ADx-ARMS方法选择胸水标本筛查EGFR、KRAS基因突变,从而指导EGFR-TKIs的临床应用。     

鄂尔多斯地区晚期肺腺癌患者EGFR敏感基因突变状态与一般临床特征的关系

目的:分析鄂尔多斯市中心医院晚期肺腺癌患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变状态与一般临床特征的关系。方法:分析自2012年6月开始收治的Ⅲb-Ⅳ期肺腺癌患者接受EGFR 19、21外显子突变情况与患者一般临床特征、转移部位、治疗情况的关系。结果:选取123例晚期肺腺癌患者纳入分析,46.34%（57/123）的晚期肺腺癌患者接受了EGFR 19、21外显子检测, EGFR基因突变率为49.12%（28/57）,其中19外显子突变率为39.29%（11/28）,21外显子突变率为46.43%（13/28）,19、21外显子同时突变率为14.29%（4/28）。EGFR基因突变状态在患者性别、年龄、吸烟状态、分期、体力评分和转移部位间比较未见显著性差异,19或21外显子突变在患者性别、年龄、吸烟状态、分期、体力评分和转移部位间比较未见显著性差异,根据EGFR基因突变状态选择一线治疗模有统计学意义（P＜0.05）。结论:鄂尔多斯地区晚期肺腺癌接受EGFR敏感基因检测率为46.34%,突变率为49.12%,突变状态在一般临床特征和转移部位间未见显著性差异,根据EGFR基因突变状态患者选择一线治疗方式差异有显著意义。     

中国肺腺癌患者上皮生长因子受体基因突变的研究

目的:分析我国肺腺癌患者上皮生长因子受体(EGFR)基因突变的发生率和突变类型。方法:在上海、杭州和昆明等地收集61例肺腺癌及其正常肺组织,采用PCR扩增和基因测序方法对组织DNA中EGFR外显子19~21基因突变进行分析。结果:正常肺组织中EGFR基因均为野生型,肺腺癌组织中EGFR基因突变检测率为47.5%(29/61),其中外显子19和21突变分别占突变总数的55.2%(16/29)和44.8%(13/29),外显子20未检测到突变。外显子19突变发生在第746~752位密码子,均为碱基缺失突变,有6种不同类型。外显子21突变全部是第858位密码子碱基替换突变。EGFR基因突变与患者性别和年龄无显著相关性。但昆明和上海等地患者的基因突变存在明显差异。结论:EGFR基因突变是一种肿瘤特异性的体细胞遗传改变,突变发生率约占肺腺癌总数的一半,其中以外显子19和21突变为主。我国EGFR基因突变存在地域差异。     

TaqMan-MGB探针实时荧光聚合酶链反应快速检测非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)瘤组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变及TaqMan MGB探针实时荧光PCR快速检测EGFR突变的诊断价值。方法应用聚合酶链(PCR)反应,对80例手术切除NSCLC瘤组织EGFR基因的第18、19和21外显子片段进行扩增和测序, Chromas软件分析基因突变。设计EGFR突变位点的TaqMan MGB探针,采用实时PCR检测瘤组织EGFR突变,并与测序结果比较。实时PCR的敏感性与特异性评价,用不同混合数量的PC-9细胞(19外显子缺失)为阳性参照。结果21例NSCLC瘤组织存在EGFR基因突变,总体突变率为26.3%。其中13例为EGFR第19外显子阅读框内多核苷酸的缺失,8例为第21外显子2573位核苷酸点突变。诊断的特异性与敏感性均为100%。当PC-9突变型细胞仅占10%时或PC-9细胞数低达50只时,PCR仍然检测到EGFR基因突变的存在。女性、不吸烟和肺腺癌患者EGFR基因突变率显著高于男性、吸烟和非腺癌患者(P<0.05)。EGFR基因突变与患者年龄、TNM分期等因素无关。结论NSCLC存在EGFR基因的突变或缺失,其中以女性、腺癌和不吸烟患者突变率较高。TaqMan MGB探针联合实时PCR可有效地检测出EGFR基因突变,操作简便,易于临床推广。     

维吾尔族肺腺癌患者的EGFR基因突变分析

背景与目的 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是一种跨细胞膜糖蛋白,属于受体型酪氨酸激酶家族.以吉非替尼为代表的EGFR酪氨酸激酶抑制剂对于EGFR突变的肺癌患者显示出良好的治疗效果,然而EGFR的突变率在不同民族和不同种族的人群中表现出较大差异.本研究旨在分析维吾尔族中肺腺癌患者肿瘤组织的EGFR基因突变情况,同时比较维吾尔族与汉族肺腺癌患者肿瘤组织EGFR基因突变率的差异性.方法 收集临床肺腺癌患者石蜡包埋组织标本138例,包括68例维吾尔族和70例汉族肺腺癌的样本,采用ARMS(amplification refractory mutation system,ARMS)PCR扩增方法检测EGFR基因外显子18、19、20及21的突变,x2分析对比维吾尔族和汉族肺腺癌EGFR基因突变差异.结果 138例肺腺癌患者中有43例EGFR基因突变,总突变率为31.2％,其中维吾尔族突变11例,突变率为16.2％,汉族突变32例,突变率为45.7％,维吾尔族肺腺癌EGFR突变率与汉族肺腺癌EGFR突变率比较有明显差异(P＜0.001),突变以外显子19-del和L858R为主要突变点.结论 维吾尔族中肺腺癌EGFR基因突变率为16.2％,汉族中EGFR基因突变率为45.7％,维吾尔族肺腺癌EGFR突变率明显低于我国汉族EGFR基因突变.     

肺腺癌中表皮生长因子受体基因突变与拷贝数的检测分析

目的检测肺腺癌组织中表皮生长因子受体（EGFR）19、21外显子基因突变和拷贝数,分析EGFR基因突变和拷贝数变化的相关性。方法应用荧光定量PCR技术和荧光原位杂交（FISH）技术分别检测58例肺腺癌患者肿瘤组织中的EGFR基因突变和基因扩增,用X^2检验进行数据分析。结果58例肺腺癌患者组织中,EGFR19、21外显子突变率为43．1％（25／58）,其中2例存在两种类型的突变。EGFR基因拷贝数增加阳性率为51．7％（30／58）,包括8例扩增,22例高多体扩增。不同分化程度的肺腺癌组织间,扩增阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）,低分化癌的突变率低于高、中分化癌（P〈O．05）。EGFR基因突变与EGFR基因拷贝数之间显著相关（P〈0．01）。结论肺腺癌组织具有较高的EGFR基因突变率和扩增阳性率;联合检测EGFR基因拷贝数和基因突变,更有利于靶向药物的筛选。     

竞争性等位基因特异性荧光探针聚合酶链法检测肺腺癌组织 EGFR 基因突变

目的：探讨竞争性等位基因特异性荧光探针聚合酶链（castPCR）法检测初治肺腺癌组织表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的应用价值,及 EGFR 突变状态与患者临床生物学行为的相关性。方法：收集2010年10月至2014年12月南京鼓楼医院103例初治肺腺癌组织标本及患者的临床病理资料。使用 castPCR 法检测 EGFR 基因突变（外显子19 del 2235-2249和 del 2236-2250、外显子20 T790M、外显子21 L858R）。结果：103例肺腺癌患者肿瘤组织中共有54例检出了存在至少一个位点的 EGFR 基因突变（突变率52.43%）,其中敏感突变（外显子19和/或外显子21）45人（43.69%）,外显子20突变11人（10.68%）。同时发现部分患者存在敏感突变与敏感突变、敏感突变与耐药突变共存的现象,其中外显子19和20共突变2人,外显子19和21共突变4人,外显子20和21共突变1人。结论：通过对103例肺腺癌患者肿瘤组织 EGFR 基因突变状态的检测,初步论证了 castPCR 法在肺癌 EGFR 驱动突变检测方面的临床可行性。     

肺癌胸水细胞块与组织学EGFR基因扩增检测对比研究

目的：对比肺癌胸水细胞块与组织学中EGFR基因扩增情况,探讨非小细胞肺癌患者阳性胸水细胞块检测EGFR基因扩增情况及临床意义。方法：收集60例非小细胞肺癌患者阳性胸水离心获取肿瘤细胞制作成石蜡细胞块,其中有28例的组织学对照,免疫组化分型后进行FISH检测EGFR基因,荧光显微镜观察基因扩增情况。结果：28例细胞块有组织学EGFR基因检测对照,在有组织学对照细胞块EGFR基因检测相符率100％。肺腺癌31例中,EGFR基因簇状扩增4例（12．9％）,点状扩增14例（45．2％）,无扩增13例（41．9％）,肺腺癌扩增率为58．1％;肺鳞癌25例中,EGFR基因簇状扩增2例（8．0％）,点状扩增9例（36．0％）,无扩增14例（56．0％）,肺鳞癌扩增率为44．0％;其他类型NSCLC患者4例中2例点状扩增,扩增率为50％。结论：肺腺癌及肺鳞癌胸水细胞块EGFR检测结果与组织学一致,EGFR基因在肺腺癌的扩增率高于肺鳞癌。应用FISH技术检测胸水细胞块中的EGFR基因扩增情况具有临床应用价值。     

联合检测EGFR、CEA对恶性胸腔积液的诊断价值

目的:评价联合检测胸腔积液患者的胸水细胞块表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）基因拷贝数,以及胸水、血清CEA水平对良恶性胸腔积液鉴别诊断的价值。方法:应用荧光原位杂交技术（Fish法）检测恶性胸腔积液（n=35）、良性胸腔积液（n=30)组患者胸水细胞块EGFR基因拷贝数水平。采用电化学发光全自动生化分析仪检测胸水及血清中CEA水平,根据受试者工作特性曲线（ROC）选取最佳灵敏性和特异性的点作为临界值,评价CEA及联合检测EGFR基因拷贝数对良恶性胸腔积液的诊断价值。结果:35例恶性胸腔积液完成Fish检测。恶性胸腔积液中15例阴性,20例阳性,阳性率为57.1％。其中13例为EGFR基因高度多体性,7例为EGFR基因扩增。肺腺癌16例中,EGFR基因高度多体性、扩增14例,肺腺癌扩增率为87.5％;肺鳞癌14例中,EGFR基因簇状扩增3例(21.4％),点状扩增3例(21.4％),无扩增8例(57.1％),肺鳞癌扩增率为42.9％。腺癌Fish阳性率(87.5％)高于鳞癌(42.9％）,P<0．01。30例良性胸腔积液中有1例脓胸患者EGFR Fish检测阳性,阳性率为3.3%,余检测结果均阴性。恶性胸腔积液患者胸水及血清CEA分别为（220.9±71.65）ng/ml、(18.11±11.38）ng/ml,显著高于良性胸腔积液组（2.31±1.29)ng/ml、(1.67±1.06）ng/ml,差异有统计学意义（P<0.01）。其中,恶性胸腔积液胸水CEA明显高于血清CEA,而良性胸腔积液组中,胸水CEA与血清CEA无明显差异。肺腺癌所致胸水及血清CEA分别为（441.02±102.65)ng/ml、(32.87±28.66）ng/ml,鳞癌所致胸水及血清CEA分别为（28.75±21.39）ng/ml、（5.99±5.32）ng/ml,腺癌显著高于鳞癌,差异有统计学意义（P<0.01）。比较胸水EGFR、CEA对良恶性胸腔积液诊断的效能,两者之间无明显差异（P=0.453＞0.05）。Spearman相关性分析胸水EGFR同CEA之间存在显著正相关。结论:EGFR在恶性胸腔积液的形成中起重要作用,通过Fish技术检测胸水细胞块EGFR基因拷贝数可行,其敏感性为57.1%。对肺腺癌导致恶性胸腔积液的诊断敏感性为87.5%。CEA（临界值5.0ng/ml）在恶性胸腔积液及血清中显著高于良性,其中胸水CEA检测诊断敏感性为65.7%,而在腺癌中为87.5%,其在胸水及血清中的比值＞1.5有助于恶性胸腔积液的诊断。EGFR基因突变阳性与肿瘤标记物CEA阳性表达呈正相关,尤见于肺腺癌患者,两者联合检测可提高诊断性试验的准确性。     

四川地区非小细胞肺癌患者EGFR基因突变分型与临床病理特征的相关性分析

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者EGFR基因突变状态及其与临床病理特征的关系。方法 收集2015年1月至2017年12月成都市第三人民医院确诊的NSCLC病理标本203例,其中石蜡切片113例,新鲜组织41例,胸腔积液49例。采用突变扩增阻滞系统（ARMS）-Taqman探针法检测EGFR基因外显子突变状态,分析其与临床病理特征的关系。采用Logistic回归分析影响NSCLC患者发生EGFR突变的因素。结果 203例NSCLC患者中,有97例检测到EGFR突变（47.8％）,其中TKIs药物敏感性突变82例（L858R突变44例,19-del突变35例,G719C/G719S突变1例,L861Q/S768I突变2例）,TKIs耐药性突变7例,另有8例为多位点突变。多位点突变中携带T790M突变率高（87.5%）,以男性、Ⅳ期、腺癌患者为主。EGFR突变主要发生在女性、无吸烟史、腺癌患者;19-del和L858R突变在女性中占的比例更高,分别为57.1％和54.5％,而其他突变类型在男性中占的比例更高（72.2％）。Logistic回归分析显示,无吸烟史患者的EGFR突变率更高（HR=4.146,95%CI：1.802～9.536）。结论 四川地区NSCLC患者EGFR基因突变以L858R和19-del突变为主,女性、无吸烟史、肺腺癌患者更易发生EGFR突变,吸烟状态是预测EGFR突变的独立因素。     

HRM法检测肺癌EGFR基因突变

目的：HRM法检测中国不同区域肺癌患者的EGFR基因突变,统计突变类型间比率,为临床EGFR-TKI分子靶向治疗提供依据,并验证HRM法的临床适用性。方法：收集2010年手术切除的肺癌石蜡标本253例,HRM法检测EGFR基因突变情况,并用基因测序法进行验证。结果：在253例肺癌标本中,HRM法检测出EGFR基因突变率为42%,与基因测序法检测出的突变率40%无显著性差异,并检测出2例T790M突变,11例多点突变和2例E18新位点突变。将本实验中收集的东部地区和非东部地区肺癌患者的EGFR基因突变率相比较,无显著性差异。经实验验证,HRM法的灵敏度高于基因测序的灵敏度,且HRM法的特异性为100%。结论：HRM技术具有高灵敏度、高特异性和高准确率等特点,且比基因测序法更简单方便,成本更低,适合在临床开展。明确EGFR突变类型十分必要,可以为临床可否运用EGFR-TKI分子靶向治疗提供重要依据。本实验中收集的肺癌标本EGFR基因突变不存在地域差异。     

High sensitivity detection of epidermal growth factor receptor mutations in the pleural effusion of non-small cell lung cancer patients

Epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations are a strong determinant of tumor response to gefitinib in non-small cell lung cancer (NSCLC). We attempted to elucidate the feasibility of EGFR mutation detection in cells of pleural effusion fluid. We obtained 24 samples of pleural effusion fluid from NSCLC patients. The pleural effusion fluid was centrifuged, and the cellular components obtained were used for detection. EGFR mutation status was determined by a direct sequencing method (exons 18-21) and by the Scorpion Amplified Refractory Mutation System (ARMS) method. EGFR mutations were detected in eight cases. Three mutations were detected by both methods, and the other five mutations were detected by Scorpion ARMS alone. The mutations were detected by both methods in all four partial responders among the seven patients who received gefitinib therapy. Direct sequencing detected the mutations in only two of four cases with partial response. These results suggest that the DNA in pleural effusion fluid can be used to detect EGFR mutations. The Scorpion ARMS method appears to be more sensitive for detecting EGFR mutations than the direct sequencing method.     

广西南宁地区非小细胞肺癌EGFR基因突变分析

目的:分析广西南宁地区非小细胞肺癌(NSCLCs)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的情况。方法:采用突变特异性扩增系统(Amplification Refractory Mutation System,ARMS)检测604例NSCLCs EGFR基因第18-21号外显子的突变,同时分析其突变与临床特征的关系。结果:604例NSCLCs共检出242例EGFR基因突变（40.1％）,其中外显子19和21 L858R突变各占突变总数的 50.0％（121/242）和45.5%（110/242）;腺癌和腺鳞癌基因突变率分别为46.0%（203/441）和49.1%(26/53);女性EGFR基因突变率（53.1%,119/224）显著高于男性(32.4%,123/380）。结论:广西南宁地区NSCLCs患者EGFR基因突变主要见于女性、腺癌和腺鳞癌,突变类型以外显子19的缺失突变和外显子21的L858R突变为主。     

非小细胞肺癌胸腔积液与配对肿瘤组织中EGFR基因突变检测的比较

目的:探讨非小细胞肺癌胸腔积液与配对肿瘤组织标本中EGFR基因突变检测结果的一致性,评价胸腔积液标本检测EGFR基因突变的应用价值.方法:收集非小细胞肺癌患者胸腔积液与配对肿瘤组织样本72例,采用ARMS方法,检测样本中EGFR基因第18~21外显子突变情况.结果:细胞学样本和组织学样本中EGFR基因突变阳性率分别为48.61%和51.39%,两者差异无统计学意义(P>0.05),二者一致率为92.11%,不一致率为7.89%.结论:二者的一致率较高,恶性胸水可以作为无法获得肿瘤组织的晚期非小细胞肺癌EGFR基因检测的有效样本.     

非小细胞肺癌驱动基因检测及其与临床病理特征的相关性

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)驱动基因的变化情况及其与临床病理特征的相关性。方法:回顾性分析我院2016年01月至2020年07月NSCLC患者607例临床及病理学特征资料,采用扩增阻滞突变系统(ARMS)荧光PCR法检测EGFR突变,RT-PCR法检测ALK、ROS1基因融合,荧光原位杂交法（FISH）检测MET基因扩增。结果:607例NSCLC组织中325例(53.5%,325/607)检测到基因改变,分别为EGFR突变（45.5%,276/607）、ALK融合（5.1%,31/607）、ROS1融合（1.3%,8/607）和MET扩增（2.8%,17/607）,EGFR双位点突变15例（2.5%,15/607）,双驱动基因改变7例（1.2%,7/607）,其中EGFR突变与ALK融合阳性共存3例,EGFR突变与ROS1融合阳性共存2例,EGFR突变与MET扩增阳性共存2例。EGFR在女性、非吸烟、腺癌患者中突变率更高（P＜0.05）,EGFR突变更容易发生在以贴壁为主型、腺泡为主型、乳头为主型、微乳头为主型腺癌中（P＜0.05）;ALK融合多见于女性、年轻、非吸烟、实性为主型的腺癌患者（P＜0.05）;MET基因扩增在老年男性患者中发生率更高（P＜0.05）。结论:在NSCLC中EGFR突变率较高,驱动基因联合突变不容忽视,基因分型对临床治疗具有重要指导意义。     

EGFR mutation status in tumour-derived DNA from pleural effusion fluid is a practical basis for predicting the response to gefitinib

Epidermal growth factor receptor (EGFR) mutations are strong determinants of tumour response to EGFR tyrosine kinase inhibitors in non-small-cell lung cancer (NSCLC). Pleural effusion is a common complication of lung cancer. In this study, we assessed the feasibility of detection of EGFR mutations in samples of pleural effusion fluid. We obtained 43 samples, which was the cell-free supernatant of pleural fluid, from Japanese NSCLC patients, and examined them for EGFR mutations. The epidermal growth factor receptor mutation status was determined by a direct sequencing method (exons 18-21 in EGFR). EGFR mutations were detected in 11 cases (E746_A750del in seven cases, E746_T751del insA in one case, L747_T751del in one case, and L858R in two cases). The EGFR mutations were observed more frequently in women and non-smokers. A comparison between the EGFR mutant status and the response to gefitinib in the 27 patients who received gefitinib revealed that all seven patients with partial response and one of the seven patients with stable disease had an EGFR mutation. No EGFR mutations were detected in the patients with progressive disease. The results suggest that DNA in pleural effusion fluid can be used to detect EGFR mutations and that the EGFR mutation status may be useful as a predictor of the response to gefitinib.