经静脉途径移植骨髓间充质干细胞修复梗死心肌的可行性与安全性研究

目的探讨经静脉注射移植同种异体骨髓来源间充质干细胞(MSC)修复损伤心肌是否可行和安全,观察移植MSC在宿主的归巢与组织学分布。方法雄性Wistar大鼠30只,分为正常大鼠MSC移植组,急性心肌梗死MSC移植组,假手术组,每组10只。结扎冠状动脉左前降支,建立大鼠急性心肌梗死模型。体外分离纯化、扩增同种大鼠骨髓MSC,于建立心肌梗死模型24h给各组大鼠经静脉输注4’6’二乙酰基2苯基吲哚(DAPI)标记的MSC,4周后处死、摘取心脏等脏器,行组织病理切片和免疫组织化学染色。结果(1)在急性心肌梗死MSC移植组,梗死区及其周边部位可见到DAPI标记的MSC;(2)在梗死心肌周边区,移植的MSC胞浆心肌特异性蛋白肌钙蛋白I和转录因子4免疫组织化学染色阳性;(3)在各组大鼠其他脏器,移植的MSC主要分布在肺脏、脾脏和肝脏;(4)细胞移植大鼠心肌组织切片未见淋巴细胞增殖,各脏器没有肿瘤形成。结论经静脉移植的MSC可归巢至大鼠梗死心肌部位,并分化为心肌细胞表型,该方法治疗缺血性心脏病安全、可行。     

微环境预处理的骨髓间充质干细胞治疗大鼠心肌梗死

目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSC)或经预处理分化的BMSC(induced BMSC,iBMSC)移植能否改善心肌梗死大鼠的心功能.方法雄性SD大鼠32只(250～300 g),分为假手术组、磷酸缓冲液(PBS)注射组、BMSC移植组和iBMSC移植组共4组,每组8只.将分离的BMSC与心肌细胞(微环境)共培养2周进行预分化,大鼠心肌梗死模型建立1周后,将BMSC或iBMSC细胞悬液注入梗死区的边缘位置.分别于细胞移植后的第1、2和4周,超声心动图检测各组大鼠心脏的左心室射血分数(LVEF),左心室舒张末期内径(LVIDd),左心室收缩末期内径(LVIDs)及短轴缩短率(FS).移植后第4周进行组织学观察,心脏组织石蜡包埋切片后采用免疫荧光技术检测移植细胞的示踪标记物及心肌标志蛋白的表达情况.结果iBMSC组LVEF在第4周时是(77.3±2.6)%,与假手术组(81.8±3.6)%比较差异无统计学意义(P＞0.05),而PBS组及BMSC组的LVEF值均低于假手术组(P均＜0.05).PBS组FS移植前后没明显变化,iBMSC组FS从移植前的(24.1±3.9)%上升到第4周的(45.1±3.1)%.M型超声心电图显示iBMSC治疗组左心室收缩能力较细胞移植前明显改善.免疫荧光分析显示,SPIO标记的移植细胞在体内表达心肌细胞标志蛋白α-辅肌动蛋白和缝隙连接蛋白43.结论经过微环境预处理的BMSC较未处理的干细胞改善心功能效果更好.这一研究为干细胞的改造与细胞移植修复心肌梗死提供了强有力的证据.     

骨髓间充质干细胞不同移植方法对心肌梗死大鼠心脏的保护作用

目的对比研究经尾静脉和心外膜直视注射移植骨髓间充质干细胞（MSCs）对心肌梗死大鼠的心脏保护作用。方法结扎左冠状动脉前降支制备大鼠心肌梗死模型,采用同种异体MSCs体外分离、纯化、培养和标记,在梗死后2周,A组经尾静脉植入MSCs,B组心外膜直视注射MSCs,C组尾静脉注入等量DMEM培养液为对照。4周后测定心功能,并行免疫组织化学检测。结果移植组心肌组织中可以观察到DAPI标记细胞存在,免疫组化显示阳性标记细胞α-Actin肌动蛋白检测阳性。与对照組相比,A和B组左心功能显著改善（P<0.05）,A和B组梗死面积明显缩小[分别为（45±2）%,（40±4）%和（41±3）%,P<0.05]。结论MSCs经静脉移植和心外膜植入都能够归巢至心肌梗死区,对梗死大鼠的心脏都具有保护作用。     

悬浮培养诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞的研究

目的:利用不加任何诱导剂的悬浮培养法,体外诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞并检测其分化效率。方法:人胚胎干细胞克隆用200U/mL胶原酶Ⅳ,370C处理10min后,挑起克隆碎片转移到低黏附性培养皿中悬浮培养以形成EB(拟胚体),4d后将EB转移到基质胶处理过的6孔板中贴壁培养(1-3EBs/cm2),显微镜下观察记录出现跳动心肌细胞的时间和跳动频率,并计算跳动克隆百分比,24孔板一组,共记录4组96孔;免疫荧光染色检测心肌细胞特异标志物cTnT;膜片钳实验检测心肌细胞自发性动作电位;跳动心肌细胞经过24h缺氧刺激后,用凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡比例。结果:在悬浮培养14d左右开始出现大量的自发跳动心肌细胞,分化出现自发跳动心肌细胞的平均时间(13.9±0.9)d,百分比为20.8%,平均跳动频率为(63.8±5.6)次/min;跳动心肌细胞cTnT染色阳性;跳动心肌细胞检测到自发性动作电位;跳动心肌细胞缺氧24h的凋亡比例为(8.1±0.4)%。结论:不加诱导剂的悬浮培养可以诱导人胚胎干细胞分化为心肌细胞,分化效率达到20.8%,分化时间14d左右。为进一步的干细胞移植治疗动物心肌梗死模型提供种子细胞。     

同种异体骨髓间充质干细胞移植对扩张型心肌病心功能衰竭大鼠左心室功能的影响

目的探讨同种异体大鼠骨髓间充质干细胞移植在阿霉素诱导的扩张型心肌病心功能衰竭大鼠心脏内存活、分化的情况及对左心室功能的影响。方法雌性Wistar大鼠55只,随机分成正常对照组(n=10)、模型组(n=15)、诱导前移植组(n=15)和诱导后移植组(n=15)。体外分离培养雄性大鼠骨髓间充质干细胞,传至一代后用10μmol/L5-氮胞苷诱导4周,DAPI标记后,诱导前移植组移植诱导前的骨髓间充质干细胞,诱导后移植组移植诱导后的骨髓间充质干细胞;4周后检测左心室功能及移植细胞存活、分化情况。结果异体骨髓间充质干细胞移植4周后可存活并分化成心肌细胞,表达心肌细胞特异性蛋白;与模型组比较,细胞移植组左心室功能明显改善,且两细胞移植组间差异无显著性。结论同种异体骨髓间充质干细胞移植4周后可存活并分化成心肌细胞,对扩张型心肌病心功能衰竭大鼠的左心室功能有保护作用。     

同种异体骨髓间充质干细胞在大鼠心脏的迁移及分化特点

目的探讨同种异体骨髓间充质干细胞(MSCs)在大鼠心脏定居存活情况、同种异体移植是否可行?正常心脏微环境与梗死心脏微环境对骨髓间充质干细胞(MSCs)迁移、分化的影响.方法将体重200～250g雌性大鼠35只随机分为4组①正常心脏+rMSCs移植组(Control+rMSCs,n=10)正常大鼠接受同种异体rMSCs移植治疗(5×106MSCs/100 ul,分4点注入);②急性心肌梗死对照组(AMI,n=10)大鼠心肌梗死后注射等量培养基;③心肌梗死+rMSCs移植组(AMI+rMSCs,n=10)大鼠心肌梗死后1～3h接受同种异体rMSCs移植治疗(5×106MSCs/100ul,分4点注入);④单个核细胞治疗组(n=5)大鼠心肌梗死后1-3h接受同种异体单个核细胞移植治疗(5×106MSCs/100μl,分4点注入).结扎左冠状动脉前降支造成心肌梗死模型.用比重1.073的Percoll分离液分离来自雄性Wistar大鼠骨髓MSCs,经贴壁、及时传代纯化MSCs;用FITC或PE标记的表面分子CD34、CDlla、CD71、CD29抗体对二代MSC进行流式细胞术鉴定;采用01ivette方法结扎冠状动脉建立急性心肌梗死模型,经DAPI标记移植细胞(MSCs、单个核细胞),分别置入到各组大鼠心脏组织,模拟同种异体细胞移置治疗.于细胞移植后10周取心脏,荧光显微镜下直接观察植入细胞迁移分布;免疫荧光检测心肌特异蛋白(肌钙蛋白、转录因子4和连接蛋白43)抗原表达.结果(1)采用密度为1.073的percoll分离液分离MSCs,形态呈较均一的长梭形,由原代的(5.0±0.21)×105个MSCs,经扩增16代后可获得(4.0±0.36)×1012个细胞,扩增约(6.8±0.45)×106倍,形态均一并保持原有特性.(2)流式细胞术鉴定,扩增二代的MSCs强表达CD90(动物干细胞表面标志),其阳性达97.27%,不表达CD45(白细胞分化抗原)和CD31(内皮细胞表面标志),CD44(黏附分子)仅有微弱表达(2,72%),这表明MSCs是骨髓中区别于造血干细胞的一群处于未分化状态的非定向干细胞.(3)经纯化的大鼠MSCs在同种异体大鼠心脏可定居、生存,而未经纯化的单个核细胞移植在同种异体大鼠心脏未见存活;(4)在正常心脏微环境中,带蓝色荧光的供体MSCs细胞核呈小岛屿状分布,与宿主心肌纤维排列无关;而在心肌梗死模型大鼠心脏微环境中,蓝色细胞核分布广泛,形态呈椭圆形类似心肌细胞核,并与宿主心肌纤维排列方向一致,免疫组化检测胞浆心肌特异蛋白染色阳性.结论及时传代可避免大鼠MSCs自身分化,也是纯化大鼠MSCs的重要因素之一;纯化的MSCs具有免疫耐受特性,无需加用免疫抑制剂,可进行同种异体移植;同种异体MSCs在正常心脏微环境中不发生迁移、分化;而在急性梗死大鼠心脏中具有向缺血梗死区迁移并分化为心肌样细胞的特点.针对慢性心肌梗死瘢痕的治疗,Bittira发现移植诱导后的MSCs较未诱导的MSCs更利于瘢痕局部心肌分化,今后需要阐明MSCs定向分化的分子机制,还需要在增加移植细胞存活率、心肌细胞分化率及功能化研究等方面取得突破,推动MSCs治疗心肌梗死、慢性心功能不全的研究工作,对未来MSCs移植应用于临床具有十分重要的意义.     

同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究

目的探讨同种异体骨髓间充质干细胞(BMMSCs)移植对急性心肌梗死(AMI)大鼠心脏结构和功能的影响及其作用机制。方法采用Wistar大鼠30只,随机分成BMMSCs移植组、培养液注射组(开胸后在梗死区周围注射等量细胞培养液);体外分离纯化、扩增BMMSCs,4,6二脒基-2-苯吲哚(DAPI)标记。BMMSCs移植组于造模后1周经心肌直接注射MSCs,培养液注射组注射同等剂量的细胞培养液。造模后4周测定心功能并行免疫组织化学检测。结果造模后4周,与培养液注射组比较,BMMSCs移植组左室射血分数明显增加,左室收缩末期内径和舒张末期内径显著降低(P均<0.05);心肌梗死区毛细血管密度明显增高(P<0.05);BMMSCs移植组大鼠梗死心肌中可见DAPI标记阳性细胞;与培养液注射组比较,BMMSCs移植组可以显著减少非梗死区心肌细胞的凋亡(P<0.05)。结论 BMMSCs移植能够提高AMI梗死区毛细血管密度,改善大鼠的心功能。     

经静脉和经梗死心肌周边移植自体骨髓间质干细胞对心肌梗死后心功能影响的比较研究

目的比较经静脉移植和心肌移植骨髓间质干细胞(MSCs)对心肌梗死后心功能的影响。方法结扎30只日本大耳兔的冠状动脉左前降支,建立急性心肌梗死模型后分成3组:损伤对照组、静脉移植组和心肌移植组。5周后检测各移植组抗DAPI染色及心脏的结构和功能。结果静脉移植组、心肌移植组在移植区均可检测到大量DAPI阳性标记的细胞,与损伤对照组相比,二者的左室结构与功能均明显改善(P<0.05);而心肌移植组对心功能的改善优于静脉移植组,二者的差异有统计学意义(P<0.05)。结论经静脉移植的MSCs能够在心肌局部分化成为类心肌细胞,并有效改善心脏功能;经心肌移植MSCs对心功能的改善更为有效。     

骨髓间充质干细胞静脉移植对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的探讨静脉途径移植骨髓间充质干细胞(MSCs)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能的影响。方法雄性SD大鼠20只,分为干细胞移植组(10只)和对照组(10只)。结扎大鼠左冠状动脉建立心肌梗死模型。同种异体大鼠MSCs体外分离、纯化、扩增,4’,6-二脒-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)标记,并通过尾静脉于心肌梗死后1周移植入AMI大鼠体内,对照组则注射等量培养液。4周后测定心功能,并行免疫组织化学检测。结果心肌梗死4周后,干细胞移植组心肌组织冷冻切片中可以观察到DAPI标记细胞存在,免疫组织化学显示阳性标记细胞a-Actin肌动蛋白检测阳性。干细胞移植组心功能较对照组有明显改善(P<0.05)。结论MSCs经静脉移植可以归巢至梗死心肌处,并能改善受损的心功能。     

脂肪间充质干细胞移植治疗扩张型心肌病大鼠的研究

目的 脂肪间充质干细胞（ADMSCs）移植对扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌损伤及心功能的影响。方法 80只健康Wistar大鼠腹腔注射阿霉素建立DCM大鼠模型，按随机数字表法分为治疗组和对照组，各35只（建模中死亡5只，建模后又处死5只）。将体外分离培养的ADMSCs移植入治疗组DCM大鼠，同时将以相同体积的IMEM培养基移植入对照组DCM大鼠。术后4周，处死动物留取心脏，于荧光显微镜下观察ADMSCs植入后存活及分化情况。于细胞移植术前、术后4周，将两组大鼠进行超声心动图、血流动力学检查，测定、比较心功能的指标。结果 ①注药4周后，根据留取大鼠心脏的大体形态、病理切片及心功能指标，提示DCM大鼠模型建立成功。②移植术后4周，于移植部位可见DAPI标记的ADMSCs，同时，免疫组织荧光染色发现部分DAPI阳性细胞，TnT染色也为阳性，且排列方向与心肌细胞一致。③移植术后4 周, 对照组与ADMSCs治疗组比较，左心室舒张末容积（LVEDV）及左心室收缩末容积（LVESV）明显减少(P<0.01)；左心室每搏量(SV)、心脏射血分数(EF)、左心室收缩压(LVSP)、左心室室内压最大上升/下降速率（±dp/dtmax）均明显增加(P<0.05,P<0.01)。结论 ADMSCs移植可在心肌内存活,并可分化为心肌细胞, 改善DCM大鼠的心脏功能。     

骨髓间充质干细胞移植对心力衰竭大鼠心功能的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）对心衰大鼠心功能的影响及其机制。方法腹腔注射阿霉素（2mg／kg,每周1次,连续6周）至近交系F344大鼠体内,建立心衰大鼠模型。存活大鼠（32只）随机分为2组：心衰组（16只）和细胞移植组（16只）。分离纯化大鼠MSCs进行体外培养,予4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）进行标记;经股静脉注射MSCs或DMEM至心衰大鼠体内。细胞移植后4周,应用多导生理记录仪测量大鼠心功能;通过免疫组织荧光及化学染色,观察移植细胞存活情况,并计算血管数量;通过天狼猩红染色计算心肌胶原容积分数（CVF）和血管周围胶原面积（PVCA）。结果移植后4周,细胞移植组大鼠心肌组织见到DAPI标记的移植细胞存活,并表达心肌特异性抗原心肌肌球蛋白重链（β—MHC）。与心衰组相比,细胞移植组最大左室收缩末压（LVSP）、左室内压最大（最小）变化速率（LV＋dp／dtmax）均明显升高（P〈0．05）,而左室舒张末压（LVDP）明显下降（P〈0．05）;细胞移植组左室血管数量明显高于心衰组[（11．83±1．40）个比（7．78±1．39）个,P〈O．05],细胞移植组左心室内膜CVF及PVCA明显低于心衰组（4．53±1．98比7．79±1．99,10．91±2．31比14．17±2．49,P〈0．05）。结论MSCs移植可改善心衰大鼠心功能,其机制可能与MSCs归巢至心脏,分化为心肌样细胞,并且促进血管新生、抑制心肌纤维化有关。     

骨髓间充质干细胞移植对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质神经元核抗原和神经元素1表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cell,BMSC）移植对局灶性脑缺血大鼠缺血皮质神经元核抗原（neuronal nuclei,NeuN）和神经元素l（neurogeninl,Ngnl）的影响。方法64只健康雄性成年Sprague—Dawley大鼠随机分为正常对照（normal,N）±磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution,PBS）组、大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）±PBS组、正常对照＋BMSC组和MCAO＋BMSC组,每组16只。线栓法制作大鼠MCAO模型。体外培养BMSC,在模型制作后24h进行脑内移植。采用MRI活体检测脑梗死体积,NeuN／DAPI和Ngn1／DAPI免疫荧光双标法以及蛋白印迹法检测缺血周围脑组织NeuN和Ngnl表达。结果移植后14d,MCAO组大鼠T1和T2加权成像均可见大脑皮质和纹状体存在异常信号区,MCAO＋BMSC组脑梗死体积显著性小于MCAO＋PBS组（32．5％±4．2％对47．9％±7．9％;P〈0．001）。免疫荧光双标染色显示,MCAO±PBS组NeuN^＋／DAPI^＋[（976．2±87．5）个／mm^2对（1908．3±127．8）个／mm^2;P〈0．01]和Ngn1^＋／DAPI^＋[（251．6±23．1）个／mm^2对（285．1±25．2）个／mm^3;P〈0．01]细胞数量均显著性少于N±PBS组,但MCAO±BMSC组NeuN’／DAPI^＋[（1439．9±101．7）个／mm^2;P〈0．01]和Ngn1^＋／DAPI^＋[（356．3±35．6）个／mm^2;P〈0．01]显著性多于MCAO±PBS组。蛋白质印迹分析显示,MCAO±PBS组NeuN（0．69±0．06对0．91±0．09;P〈0．01）和Ngn1（0．53±0．05对0．62±0．07;P〈0．01）蛋白表达水平显著性低于N＋PBS组,但MCAO±BMSC组NeuN（0．82±0．07;P〈0．01）和Ngn1（0．77±0．09;P〈0．01）蛋白表达水平显著性高于MCAO＋PBS组。结论BMSC移植可促进NeuN和Ngnl表达,减轻MCAO脑损伤。     

老年心肌梗死患者循环血内皮祖细胞数目和功能的变化及其对心功能的影响

目的 比较不同年龄组心肌梗死患者循环血内皮祖细胞（EPCs）数目及功能的差异,分析蛋白激酶B（Akt）和间质细胞源因子1（SDF-1）表达的差异,探讨老年患者EPCs修复梗死心脏功能的可能机制及临床意义.方法 抽取老年心肌梗死患者（n=26）和中青年心肌梗死患者（n=24）动脉血8 ～10 ml,流式细胞仪检测各组EPCs含量,酶联免疫吸附法检测Akt及SDF-1表达变化情况;利用冠状动脉左前降支结扎术制备大鼠心肌梗死模型后,尾静脉注射老年EPCs、中青年EPCs（1×107/200 ml）或等体积盐水（PBS组）,观察终点时间为28 d,超声心动评价心脏功能,荧光显微镜下观察EPCs在梗死心脏的归巢情况,免疫荧光法计数缺血心肌局部血管数量.结果 老年心肌梗死患者循环血EPCs数量明显少于中青年组（47.23％±14.92％比89.76％ ±7.27％,P＜0.001）;心肌梗死后老年组Akt磷酸化水平和SDF-1表达水平明显低于中青年组（Akt：19.04％±6.41％比43.96％±15.91％;SDF-1：25.81％ ±6.32％比64.04％±16.35％,均为P＜0.001）.将EPCs移植至梗死大鼠后,移植的老年EPCs在梗死心脏的归巢数量明显少于移植的中青年EPCs（3.69±1.97/mm2比12.01 ±5.44/mm2,P ＜0.001）.移植老年EPCs的大鼠梗死心脏的血管密度明显少于移植中青年EPCs的大鼠（42±9/mm2 比96±15/mm2,P ＜0.001）.移植老年EPCs组心功能指标[左心室射血分数（LVEF）和左心室缩短分数（LVFS）]显著低于移植中青年EPCs组（LVEF：58.1％±5.0％比73.8％±7.9％;LVFS：35.4％±3.8％比59.0％±7.6％.均为P＜0.001）.结论 老年心肌梗死患者的循环血EPCs数量及其修复功能均不如中青年患者,可能与Akt-SDF-1信号通路受损有关.     

Dedifferentiated fat cells convert to cardiomyocyte phenotype and repair infarcted cardiac tissue in rats

Adipose tissue-derived stem cells have been demonstrated to differentiate into cardiomyocytes and vascular endothelial cells. Here we investigate whether mature adipocyte-derived dedifferentiated fat (DFAT) cells can differentiate to cardiomyocytes in vitro and in vivo by establishing DFAT cell lines via ceiling culture of mature adipocytes. DFAT cells were obtained by dedifferentiation of mature adipocytes from GFP-transgenic rats. We evaluated the differentiating ability of DFAT cells into cardiomyocytes by detection of the cardiac phenotype markers in immunocytochemical and RT-PCR analyses in vitro. We also examined effects of the transplantation of DFAT cells into the infarcted heart of rats on cardiomyocytes regeneration and angiogenesis. DFAT cells expressed cardiac phenotype markers when cocultured with cardiomyocytes and also when grown in MethoCult medium in the absence of cardiomyocytes, indicating that DFAT cells have the potential to differentiate to cardiomyocyte lineage. In a rat acute myocardial infarction model, transplanted DFAT cells were efficiently accumulated in infarcted myocardium and expressed cardiac sarcomeric actin at 8 weeks after the cell transplantation. The transplantation of DFAT cells significantly (p < 0.05) increased capillary density in the infarcted area when compared with hearts from saline-injected control rats. We demonstrated that DFAT cells have the ability to differentiate to cardiomyocyte-like cells in vitro and in vivo. In addition, transplantation of DFAT cells led to neovascuralization in rats with myocardial infarction. We propose that DFAT cells represent a promising candidate cell source for cardiomyocyte regeneration in severe ischemic heart disease.     

微环境中人骨髓间充质干细胞向心肌细胞表型分化的实验研究

目的 探讨人骨髓间充质干细胞(hBMSC)在非接触共培养的微环境中向心肌细胞分化的能力.方法 密度梯度离心法分离培养hBMSC,用流式细胞仪鉴别其表面标记特征.采用transwell按1:10的比例共同培养hBMSC和SD乳鼠心室肌细胞.用聚合酶链反应检测心肌转录因子GATA4的基因表达水平.免疫细胞化学、免疫荧光检测横纹肌α-辅肌动蛋白、结蛋白、肌钙蛋白(cTn)T和cTnI等心肌细胞标志蛋白的表达.结果 hBMSC的标志物主要为CD29(98.64%±0.80%)和CD44(96.70%±1.50%),而极少表达CD105(2.21%±0.60%)、CD11b(0.80%±0.05%)、CD45(1.39%±0.13%)和CD34(1.73%±0.08%).与心肌细胞共培养后第7天可在hBMSC细胞中观察到少量搏动的细胞,随着诱导时间的增加,细胞的搏动更规则、有力.与心肌发育有关的转录因子GATA4基因在诱导后1、2、3周均有表达.共培养后2周,检测的心肌标志蛋白均有阳性表达,分别是结蛋白,α-辅肌动蛋白,cTnI和cTnT.荧光标记也检测到cTnT和cTnI的阳性表达.结论 hBMSC具有向心肌细胞分化的潜能,在共培养的微环境中,可以分化成心肌细胞表型,其机制是通过心肌细胞的旁分泌作用,而不需要hBMSC与心肌细胞的直接接触.     

冠状静脉逆行灌注碱性成纤维细胞生长因子对骨髓间充质干细胞向心肌内归巢的影响

目的 探讨经冠状静脉逆行灌注碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对骨髓间充质干细胞（MSCs）心肌内归巢的影响.方法 杂种犬12只,体重20～25（22.4±1.8）kg,采用开胸结扎法建立急性心肌梗死模型.1周后将存活犬（n=ll）随机分为MSCs组（n=5）和bFGF＋MSCs组（n=6）.采用密度梯度离心与贴壁培养法在体外分离、培养MSCs,移植前对MSCs进行4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）孵育标记.逆行灌注实验后1周,免疫荧光法比较两组梗死心肌内DAPI阳性细胞数,评价逆行灌注bFGF对MSCs归巢的影响.结果 采用密度梯度离心和贴壁培养法成功分离并富集MSCs,77.19％以上的细胞都处于G0/G1期,强表达CD44,阳性率为95.8％;MSCs体外DAPI标记率高,初始标记率达99.6％.免疫荧光显示,bFGF＋MSCs组DAPI阳性细胞数明显高于MSCs组[（325±106）/mm2比（186±67）/mm2,P＜0.05],联合组MSCs分布更为均匀;部分MSCs与心肌细胞共定位.结论 经冠状静脉逆行灌注bFGF能更有效地促进MSCs归巢至梗死心肌;同时,MSCs在心肌内的分布也更为均匀.     

Stem cells in cardiac repair

Myocardial infarction is the leading cause of death among people in industrialized nations. Although the heart has some ability to regenerate after infarction, myocardial restoration is inadequate. Consequently, investigators are currently exploring the use of human embryonic stem cells (hESCs), skeletal myoblasts and adult bone marrow stem cells to limit infarct size. hESCs are pluripotent cells that can regenerate myocardium in infarcted hearts, attenuate heart remodeling and contribute to left ventricle (LV) systolic force development. Since hESCs can form heart teratomas, investigators are differentiating hESCs toward cardiac progenitor cells prior to transplantation into hearts. Large quantities of hESCs cardiac progenitor cells, however, must be generated, immune rejection must be prevented and grafts must survive over the long term to significantly improve myocardial performance. Transplanted autologous skeletal myoblasts can survive in infarcted myocardium in small numbers, proliferate, differentiate into skeletal myofibers and increase the LV ejection fraction. These cells, however, do not form electromechanical connections with host cardiomyocytes. Consequently, electrical re-entry can occur and cause cardiac arrhythmias. Autologous bone marrow mononuclear cells contain hematopoietic and mesenchymal stem cells. In several meta-analyses, patients with coronary disease who received autologous bone marrow cells by intracoronary injection show significant 3.7% (range: 1.9-5.4%) increases in LV ejection fraction, decreases in LV end-systolic volume of -4.8 ml (range: -1.4 to -8.2 ml) and reductions in infarct size of 5.5% (-1.9 to -9.1%), without experiencing arrhythmias. Bone marrow cells appear to release biologically active factors that limit myocardial damage. Unfortunately, bone marrow cells from patients with chronic diseases propagate poorly and can die prematurely. Substantial challenges must be addressed and resolved to advance the use of stem cells in cardiac repair including identifying the optimal stem cell(s) that permit transplantation without requirements for host immune suppression; timing of stem cell transplantation that maximizes chemoattraction of stem cells to infarcts; and determining the optimal technique for injecting stem cells for cardiac repair. Techniques must be developed to enhance survival and propagation of stem cells in the myocardium. These studies will require close cooperation and interaction of scientists and clinicians. Cell-based cardiac repair in the 21st century will offer new hope for millions of patients worldwide with myocardial infarctions who, otherwise, would suffer from the relentless progression of heart disease to heart failure and death.     

肌钙蛋白T联合血清氨基末端脑钠肽诊断儿童心衰的价值

目的：研究血浆肌钙蛋白T （cTnT）与 N 末端 B型利钠肽原（NT-proBNP）联合检测诊断儿童心力衰竭（HF）的价值。方法：选择我院73例儿童 HF患者为心衰组,另选儿童保健门诊75例健康儿童为健康对照组。检测两组的 cTnT、NT-proBNP浓度及左室射血分数（LVEF）,并比较。应用受试者工作特性曲线（ROC）分析 cT-nT和 NT-proBNP联用的诊断敏感度和特异度。结果：与健康对照组相比,心衰组 NT-proBNP [（2486.7±87.5） pmol/L比（3573.8±98.2）pmol/L]、cTnT [（0.03±0.01）ng/ml 比（0.35±0.09）ng/ml]浓度显著升高, LVEF [（70.8±5.2）％比（42.6±3.8）％]显著降低,P 均＜0.05;多元 Logistic回归分析显示,NT-proBNP为HF患童 LVEF的独立相关因素（OR＝1.006,P＝0.012）;NT-proBNP取值3200pmol/L、cTnT取值0.08ng/ml联合诊断儿童 HF的敏感性为89.5％,特异性为85.7％,ROC曲线下面积为0.795。结论：N末端 B型利钠肽原与心肌肌钙蛋白T联合检测对于儿童心力衰竭有较高的诊断价值。     

FK506结合蛋白12.6基因转染对心力衰竭心室肌细胞钙通道和钠-钙交换器电流的影响

目的探讨钙释放通道稳定蛋白FK506结合蛋白12.6(FKBP12.6)基因转染对心力衰竭(简称心衰)心室肌细胞钙通道(ICaL)和钠-钙交换电流(INCX)的影响。方法用携带FKBP12.6基因的重组腺病毒Ad.FKBP12.6-GFP感染分离的心衰心室肌细胞,通过免疫荧光及激光共聚焦技术检测转基因的表达;采用全细胞膜片钳技术记录ICaL和INCX。结果①心衰心室肌细胞的FKBP12.6蛋白表达显著下调,Ad.FKBP12.6-GFP感染细胞的FK-BP12.6蛋白表达水平显著高于Ad.GFP感染细胞;②Ad.GFP组心室肌细胞的ICaL密度峰值较正常对照组显著降低(6.81±0.83pA/pFvs11.43±1.14pA/pF,P<0.01),而FKBP12.6基因转染细胞电流密度峰值较Ad.GFP组显著升高(9.60±1.09pA/pFvs6.81±0.83pA/pF,P<0.01);③Ad.GFP组心室肌细胞的INCX较正常对照组明显升高(P<0.01),FKBP12.6基因转染使心衰心室肌细胞的INCX显著降低(P<0.05)。结论FKBP12.6基因转染显著升高心衰心室肌细胞ICaL,并显著降低INCX,从而逆转心衰时上述离子通道电流的改变。