揭秘诺沃克病毒

2003年秋冬季节．香港嘉诺撒圣心学校先后有150名学生出现呕吐、腹泻和发烧的症状，学校被迫停课．继而又有其他小学校出现了类似的情况。医院化验结果证实生病的学生是感染了病毒性胃肠炎．显然．这种病毒性胃肠炎具有传染性。消息传出来以后．人们非常担心，许多人甚至推迟了去香港旅行的计划．那么这是怎么一回事呢？     

诺沃克样病毒性胃肠炎259例临床分析

目的：探讨诺沃克样病毒性胃肠炎（GNV）诊断和治疗。方法：2008年2月～2009年7月、2009年12月～2010年2月、2010年6月～2010年8月间,我院对分别接诊100例、51例、108例符合GNV诊断标准的患者259例进行回顾性总结分析。结果：GNV259例患者,其中误诊81例,误诊率为31．1％。误诊病例：腹痛待查43例（53．3％）、阑尾炎11例（13．6％）、肠痉挛8例（9．8％）、胰腺炎6例（7．4％）、肝炎5例（6．2％）、胆囊炎5例（6．2％）、脑供血不足1例、肠梗阻1例和剖腹探查1例。恶心腹痛259例,其中阵发性腹部绞痛58例（22．4％）、腹泻55例（22．2％）、低热35例（13．5％）、呕吐14例（5．4％）和上呼吸道感染症状13例（5．02％）。结论：以流行病学所提供的资料表明,该病从2008～2010年3年之中连续流行3次,推测今后还有发生流行的可能。根据流行病学特点和临床表现,可以对GNV做出正确诊断。GNV误诊病例繁多,几乎遍及腹部每个脏器,结果出现各种各样的临床症状。甲氧氯普胺对解除恶心、腹痛尤其对痉挛性腹痛有特效。     

实验小鼠感染鼠诺如病毒的检测

目的了解实验小鼠鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的携带情况及其基因特征。方法在广州某实验动物中心抽取两个种系的实验小鼠,采集其粪便标本,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测粪便标本的MNVORF2特异性基因(547bp,MNVnt5104～5650)。对阳性PCR产物进行测序并以测序结果构建基因进化树分析。结果共采集实验小鼠粪便标本20份,粪便来源的小鼠外表健康、活泼、进食正常,没有腹泻现象。MNV的阳性率为30.0%(6/20),阳性实验小鼠种类包括昆明小鼠(3/13)和NIH小鼠(3/7)。本研究检测的6个MNVs在进化树上独立一小分支,与参考株MNV2、3、4最为相近;核酸序列比较发现6个MNVs核酸序列的同源性最高,为98.3%～99.8%。结论该实验动物中心的小鼠存在较高的MNV携带状况,并可能在饲养设施内传播,有必要进一步探讨实验小鼠携带MNV的生物学意义。     

人类免疫缺陷病毒实验室检测技术研究进展

人类免疫缺陷病毒(HIV)检测的主要目的是用于获得性免 疫缺陷综合症(AIDS)即艾滋病的病原体诊断.本文就近年来 HIV检测的研究进展综述如下.     

鼠艾滋病模型血浆病毒载量荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立鼠艾滋病模型血浆病毒载量荧光定量聚合酶链（PCR）检测方法。方法将体外合成的鼠艾滋病病毒（FLV）核糖核酸（RNA）标准品稀释为10个浓度梯度，进行逆转录，PCR荧光定量检测，经批内与批间差异分析。再以PCR荧光定量检测不同倍数FLV脾悬液FLV拷贝数及相应被注射小鼠模型的血浆病毒载量，计算脾指数。结果研究设计的荧光定量PCR方法能检测到20—2×10^8copiesFLVRNA逆转录反应体系，在5个注射的FLV拷贝数范围内，血浆病毒载量与脾指数均不与初始注射的FLV拷贝数成正比，二者亦不呈现平行关系。结论研究采用的FLV荧光定量PCR方法敏感性好，特异性强，重现性好，显著提高FLV病毒的检测水平。     

重要的鼠传病毒及所致人类疾病研究进展

鼠传病毒(RBV)可以引起多种人类疾病,主要包括汉坦病毒科(Hantaviridae)、沙粒病毒科(Arenaviridae)、戊型肝炎病毒科(Hepeviridae)和痘病毒科(Poxviridae)4科23种病毒.本文就这些RBV分类及所致人类疾病进行综述.     

L6565小鼠白血病病毒诱发小鼠白血病

为探讨病毒与白血病发生的关系 ,我们用Ｌ65 65小鼠白血病病毒 (Ｌ65 65ＭＶＬ)悬液感染乳鼠 ,每周观察小鼠的发病情况及病理变化 ,并用逆转录一聚合酶链反应 (ＲＴ -ＰＣＲ)动态检测小鼠体内病毒核酸的分布。结果发现 :小鼠感染病毒后 3～ 5周 ,其脾脏和淋巴结呈早期白血病的病理改变。至第 1 0～ 1 2周小鼠发生淋巴细胞白血病 ,表现出耸毛、活动减少、腹膨胀等症状。病毒核酸于感染后第 2周首先在小鼠胸腺、脾脏检测到 ,随时间延长、病毒核酸广泛分布在外周血、胸腺、脾脏、淋巴结等多种脏器组织中。本实验表明Ｌ65 65小鼠白血病可诱发小…     

季节性流感病毒H1N1 BALB/c鼠肺适应株的建立及其分子机制

目的 建立季节性流感病毒H1N1的鼠肺适应株,并对适应的分子机理进行研究。方法 以病毒滴鼻感染小鼠,通过在BALB/c小鼠肺组织中连续传代,观察小鼠存活情况及肺病理改变,来获得季节性流感病毒H1N1的鼠肺适应株。结果 季节性流感H1N1 A/Brisbane/59/2007病毒野生型毒株,经过在小鼠体内进行8次传代后,毒力逐渐增强,从无致病力到致死率达到100%,对鼠肺适应株与野生型毒株进行基因比对,发现适应株HA基因发生了3个有义突变。结论 野生季节性低致病力H1N1流感病毒可经在小鼠中经过多次传代而获得高致病力H1N1鼠肺适应株,HA蛋白89位Thr至Ile的突变对毒力的增强起决定性作用。     

鼠诺如病毒的体外分离与鉴定

目的体外分离出小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)毒株,并对其进行鉴定。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对小鼠进行MNV筛查,将检测出的MNV阳性小鼠的盲肠内容物经过处理接种至鼠源巨噬细胞系RAW264.7细胞,培养一段时间后用RT-PCR法扩增测序。结果成功通过传代RAW264.7细胞分离出MNV,并经过鉴定确认,对RT-PCR扩增序列进行初步分析,与韩国MNV4 S18株同源性最高,达99%。结论 MNV在体外的复制成功,为MNV的生物学特性、致病机制和诊断试剂等方面的研究提供了基础,同时作为人诺如病毒研究的理想模型,对人诺如病毒的研究也有重大意义。     

乙型肝炎病毒的核酸检测技术

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）是乙型肝炎的病原体,自1965年Blumberg等发现“澳大利亚抗原”,1970年Dane等在电镜下鉴定了Dane颗粒,即HBV颗粒,从而阐明了颗粒的表面成分,病毒表面抗原（HBsAg）、核壳成分HBcAg和HBeAg。HBV属嗜肝DNA病毒,是不完全环状双链DNA病毒,全长约3．2kb,是目前已知对人类致病的最小双链DNA病毒,严重威胁着人类生命健康。我国HBV的人群携带率约10％,每年新发病例50万,而目前我国仍以HBsAg阳性与否作为筛查献血者HBV感染的指标,     

小鼠诺如病毒间接免疫荧光检测方法的建立

目的建立小鼠诺如病毒(MNV)的间接免疫荧光试验(IFA)的检测方法。方法将MNV-1接种RAW264.7细胞,培养36 h收集病毒培养物及未感染细胞培养物,点制抗原玻片;以107TCID50的MNV-1灌胃接种BALB/c小鼠,收集感染血清做阳性对照血清。收集人工感染后不同时间点的血清样品,以1:10的稀释度使用IFA法测定感染血清MNV抗体滴度。选取80份送检小鼠血清样品,以IFA和ELISA方法测定,差异样品使用Western blot方法进行验证。结果 MNV-1感染RAW264.7细胞(36~48)h,细胞感染率为60%,以36 h感染细胞状态为佳;IFA法测定感染小鼠血清,小鼠感染1周后抗体水平逐渐提高,在4周时抗体滴度达到最高值,之后维持稳定,采集感染4周的动物血清做IFA方法的阳性质控品;80份血清中,IFA法测定阳性27份,阴性53份,ELISA法测定阳性32份,阴性48份;Western blot方法对差异样品验证,其中阳性3份,阴性2份,IFA法和ELISA法检测符合率分别为96.0%和97.5%。结论 IFA方法检测小鼠诺如病毒基本可以反应小鼠的感染情况,偶有假阴性的出现,可以选择IFA方法和ELISA方法作为初筛,差异样品用Western blot方法验证。     

小鼠诺瓦克病毒研究现状

诺瓦克病毒（Norwalk virus,NV）,也称为诺如病毒（norovirus,NV）,是引起人类非细菌性胃肠炎的主要病原体,此外,在牛、猪和小鼠也发现了诺瓦克病毒的存在.该病毒可分5个基因型（GⅠ～Ⅴ）,鼠诺瓦克病毒（Murine norovirus,MNV）属于GV,是一种新发现的感染实验小鼠的病毒,并且被认为是目前小鼠中最流行的一种病毒.MNV是诺瓦克病毒中在细胞内有效复制的病毒,被作为研究诺瓦克病毒复制分子机制的模型,同时MNV与人诺瓦克病毒（Human noroviruses,HuNV）有许多相似的分子生物学特点,也被认为是研究人诺瓦克病毒的理想病毒模型.     

两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA提取效能的比较

目的 比较两种核酸提取方法对小鼠诺如病毒RNA的提取效能.方法 用Trizol提取法和QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法分别提取感染小鼠诺如病毒(Murine Norovirus,MNV)的小鼠小肠组织样品RNA和细胞培养物RNA,测定RNA浓度;用MNV特异的引物对分离的核酸样品进行一步法RT-PCR扩增.结果 Trizol提取法提取小肠组织的RNA浓度高于QIAamp Viral RNA Mini Kit提取法;QIAamp Viral RNA Mini Kit提取得到的细胞培养物RNA浓度高于Trizol提取法.经QIAamp Viral RNA Mini Kit提取的两种核酸样品均能扩增出特异条带,而Trizol提取的核酸样品未见特异条带.结论 在MNV的检测中,QIAamp Viral RNA Kit更适合组织样品中MNV病毒核酸的提取.     

小鼠诺如病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)实时荧光定量PCR检测方法,为建立MNV规范化检测方法提供依据。方法根据NCBI公布的60个MNV病毒株核酸序列设计特异性引物,构建标准阳性质控品,建立MNV实时荧光定量PCR方法,并进行特异性、灵敏度、重复性及稳定性评价。用该方法对766只送检小鼠的盲肠内容物样品进行检测,初步了解北京地区实验小鼠MNV感染状况。结果成功建立MNV实时荧光定量PCR检测方法,该方法特异性好,与同种属人类诺如病毒(Hu No Vs)、猫杯状病毒(FCV)均无交叉反应,检测灵敏度可达101copies/μL。批内及批间CT值变异系数均小于2%。应用该方法在766份小鼠盲肠内容物样品中检出301份MNV核酸阳性样品,阳性率39.3%。结论建立的MNV实时荧光定量PCR检测方法特异性好,灵敏度高,重复性好,可以用于MNV的快速定量检测。     

广东省实验小鼠自然感染鼠诺如病毒的调查

目的了解广东省实验小鼠自然感染小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况。方法随机抽取广东省7个繁育设施的小鼠206只,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其感染MNV的情况。结果共检测小鼠盲肠内容物206份,阳性样本为77份,阳性率为37.38%。3个设施的小鼠感染MNV,各品系小鼠易感性差异无显著。结论证实广东省小鼠存在MNV感染,部分设施小鼠MNV感染率很高,需加强动物的饲养管理。RT-PCR方法可以应用于MNV感染检测。     

一起水源性诺如病毒感染性腹泻爆发的调查

目的了解一起社区感染性腹泻爆发的特点和流行原因,探讨爆发疫情调查处理的经验并为制定防治对策提供科学依据。方法采用现场流行病学调查分析和实验室检测方法。结果2月11日至18日,该社区发生感染性腹泻病例173例,罹患率为2.40%,病例最小1岁,最大89岁,男女性别比为1.25∶1,发病最多的为40～49岁组,所有病例均为居住或工作在该社区的人员,工厂、居家均有病例出现,居家病例呈一定的家庭聚集性,病例的临床表现基本相同,以腹泻、腹痛、恶心、呕吐和发热等症状为主,大部分症状较轻,病程1～3 d。从病人粪便标本中检测到诺如病毒抗原,采取改善饮用水、隔离治疗病人和健康教育等综合措施后,疫情迅速得到控制。结论本次疫情为一起诺如病毒感染性腹泻爆发,爆发原因可能是该社区水厂供水系统被污染。社区小水厂卫生安全存在诸多薄弱环节,建议完善水厂卫生管理制度,落实水质消毒措施,尽快改用市政自来水供水。     

腹泻患儿诺如病毒和轮状病毒感染96例临床特点分析

目的分析2007年和2008年9～12月昆明地区部分婴幼儿秋冬季腹泻散发病例中诺如病毒（norovirus,NoV）感染,诺如病毒和轮状病毒（rotavirus,RV）混合感染情况及其临床特点.方法收集2007年9～12月及2008年9～12月在昆明医学院第一附属医院儿科住院的腹泻患儿的粪便标本96份,其中2007年有46份,2008年有50份.用＂胶体金法＂检测A群轮状病毒（RV）抗原.应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增标本中诺如病毒核酸.结果 96份标本共有60份检出RV阳性,阳性检出率为62.5%;12份检出NoV阳性,阳性检出率为12.5%,其中5例同时两种病毒阳性,混合感染的阳性检出率为5.2%.结论昆明地区秋冬季腹泻病原以轮状病毒多见,诺如病毒次之,也出现两种病毒的混合感染.混合感染时临床症状加重,病程延长,并发症增加.     

一起福利院诺如病毒感染性腹泻疫情的调查分析报告

目的调查本起疫情发生及迅速控制的原因,为控制同类疫情提供依据。方法根据病人的症状、流行病学调查资料和PCR方法检验结果确定本起疫情。采取隔离病人,加强病房消毒,限制探视等方法控制疾病的流行。结果累计发生19例诺如病毒感染性腹泻病例,平均罹患率为5·67%(19/335),其中住院老人为6·69%(16/239),护理人员为3·13%(3/96)。疫情历时11d,高峰期在1月16日,病例分布在三、四和八楼,患者全部是女性;患者的临床表现为腹泻100%,恶心占89·47%,呕吐占78·95%,腹胀占84·21%,腹痛占52·63%,没有人出现寒战、咳嗽以及卡他症状。结论该病例为一起诺如病毒引起的感染性腹泻疫情,日常生活接触是疫情传播的主要方式。及时报告疫情、病房消毒和病人隔离是控制疫情的关键。     

急性腹泻患儿诺如病毒检测和分型

目的了解苏州地区急性腹泻患儿诺如病毒的分子特征和基因型别。方法收集苏州地区2009年9月-2010年3月共153份5岁以下急性腹泻患儿粪便或肛拭标本,用多重RT—PCR方法检测诺如病毒,选择部分阳性扩增片段进行基因序列测定,并对序列进行系统进化分析。结果急性腹泻患儿诺如病毒检出率为16．34％（25／153）,均为诺如病毒Ⅱ型,且诺如病毒基因型别均为GⅡ-4／2006b变异株。结论诺如病毒是2009～2010年引起苏州地区急性腹泻患儿重要的病原之一,诺如病毒GⅡ-4／2006b变异株或类似株可能是2009～2010年苏州地区流行的优势株。     

一起幼儿园诺如病毒感染暴发疫情的调查

目的 查明荆州市某乡镇某幼儿园一起腹泻暴发疫情的致病因子、传染源和传播途径。方法 制定病例定义开展病例搜索,通过面访和电话调查开展现场流行病学调查,采用回顾性队列研究进行分析。开展现场卫生学调查,利用RT-PCR方法对病例标本、环境标本进行检测。结果 疫情从2月13开始至2月18日结束,共发生诺如病毒感染病例91例,罹患率为18%（91/520）。回顾性队列研究未发现可疑餐次。幼儿园对呕吐物未采取消毒措施,也未采用人员疏散措施。检出7份老师肛拭子、2份幼儿肛拭子、1份食堂工作人员（帮厨）肛拭子和1份环境标本（幼儿用碗）为诺如病毒GII型核酸阳性。结论 本次疫情为一起由诺如病毒引起的腹泻暴发,可疑传染源为首发病例,传播途径主要为接触传播。