干扰素-γ对肾小管上皮细胞转分化的作用

目的 应用转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化(TEMT),研究干扰素-γ(IFN-γ)对肾小管上皮细胞的表型重塑的作用和机制.方法 将正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白组、诱导组(TGF-β13 ng/mL)、药物组(IFN-γ1000 IU/mL)及阻断组(TGF-β13 ng/mL IFN-γ200、400、600、1000、2000、3000 U/mL),培养72 h后,观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及结缔组织生长因子(CTGF)的表达;测量α-SMA阳性细胞百分数和平均荧光强度(MCF),α-SMA mRNA,CTGF mRNA的表达;并测定上清液中胶原Ⅲ的含量.结果 ①诱导组细胞转分化为肌成纤维细胞样细胞,α-SMA阳性细胞百分数及MCF均明显增加(P<0.05);α-SMA mRNA和CTGF mRNA表达也明显增加(P<0.05);胶原Ⅲ含量升高(P<0.05).②药物组的细胞形态、α-SMA mRNA、CTGF mRNA表达及胶原Ⅲ含量等与空白组的差异无统计学意义(P>0.05);⑨阻断组IFN-Υ明显抑制了TGF-β1诱导的转分化,且呈剂量依赖;并抑制胶原Ⅲ合成P<0.05.结论 IFN-Υ能够负性调控TGF-β1诱导的TEMT,减少胶原Ⅲ分泌;IFN-Υ对TEMT的负性词节作用可能是通过减少CTGF表达来实现的.     

CTGF反义寡核苷酸对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的研究结缔组织生长因子（CTGF）反义寡核苷酸（ASODN）对人肾小管上皮细胞（HKC）转分化的影响。方法用巨噬细胞趋化因子-1（MCP-1）和马兜铃酸Ⅰ（AAⅠ）联合诱导HKC转分化模型。实验设空白对照组、模型对照组、PEI组、CTGFASODN10ng/mL组和CTGF ASODN100ng/mL组,分别采用WST-8法、流式细胞术、RT-PCR法、细胞免疫组织化学法检测不同浓度的CTGF ASODN对HKC转分化模型细胞增殖和细胞周期的影响,以及α-SMA mRNA表达和α-SMA、TGF-β1、Fibronectin（FN）蛋白表达的变化。结果 100ng/mL的CTGF ASODN对MCP-1和AAⅠ联合诱导HKC转分化细胞具有促进细胞增殖的作用,并可减少实验模型导致的细胞S期阻滞,降低α-SMA mRNA表达,减少α-SMA、TGF-β1和FN蛋白的表达。结论 CTGFASODN能够抑制MCP-1和AAⅠ导致的人HKC转分化。     

CTGF反义寡核苷酸对人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ASODN)对人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响.方法 用巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)和马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)联合诱导HKC转分化模型.实验设空白对照组、模型对照组、PEI组、CTGF ASODN 10 ng/mL组和CTGF ASODN 100 ng/mL组,分别采用WST-8法、流式细胞术、RT-PCR法、细胞免疫组织化学法检测不同浓度的CTGF ASODN对HKC转分化模型细胞增殖和细胞周期的影响,以及α-SMA mRNA表达和α-SMA、TGF-β1、Fibronectin(FN)蛋白表达的变化.结果 100 ng/mL的CTGF ASODN对MCP-1和AAⅠ联合诱导HKC转分化细胞具有促进细胞增殖的作用,并可减少实验模型导致的细胞S期阻滞,降低α-SMA mRNA表达,减少α-SMA、TGF-β1和FN蛋白的表达.结论 CTGF ASODN能够抑制MCP-1和AAⅠ导致的人HKC转分化.     

白细胞介素-18促肾小管上皮细胞转分化的机制研究

目的探讨白细胞介素-18（IL-18）诱导体外培养的人近端肾小管上皮细胞转分化的细胞内信号的转导机制。方法应用细胞培养技术培养HK-2细胞。予不同浓度的p38MAPK通路特异性阻断剂SB203580预孵育细胞30min后,再加入IL-18共同培养。应用RT—PCR方法检测α-SMA mRNA的表达水平,ELISA方法测定细胞胞浆中α—SMA的表达水平。结果SB203580可呈剂量依赖性地抑制IL—18诱导的HK-2细胞α-SMA基因和蛋白的表达。结论阻断p38MAPK信号通路可明显抑制IL—18诱导的HK-2细胞转分化作用：p38MAPK通路可能是调控IL-18诱导的HK-2细胞转分化的主要信号通路之一。     

环孢素A对肾小管上皮细胞转分化及CTGF表达的影响

目的 观察环孢素A(CSA)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)细胞转分化(EMT)及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,探讨其致肾间质纤维化作用的可能机制.方法 用相差显微镜观察不同浓度(0.5～25.0mg/L)CsA作用下HK-2细胞形态的变化;免疫荧光、RT-PCK、Western Blot分别检测5mg/LCsA刺激细胞不同时间(24～72h)α-SMA在细胞内的表达和分布以及α-SMA、CTGF mRNA和蛋白的表达.结果 显微镜下可见,HK-2细胞随CsA刺激浓度的增加由立方形铺路石样逐渐转变为梭形长条样.免疫荧光显示,随CsA刺激时间的延长细胞质中α-SMA表达逐渐增强.RTPCR和Western Blot显示,CsA呈时间依赖性上调α-SMA、CTGF mRNA和蛋白的表达,24h表达即明显增加,72h增加更为显著(P<0.01);CTGF与α-SMA表达的时间效应一致.结论 环孢素A可上调CTGF的表达、诱导肾小管上皮细胞转分化,进而促进肾间质纤维化.     

姜黄素对肾小管上皮细胞转分化smad信号转导途径的影响

目的 探讨姜黄素(Cur)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(EMT)smad信号转导途径的干预作用.方法 以10 μg/L的TGF-β1作用人近端肾小管上皮细胞(HK-2)不同的时间(0、12、24、48和72h),以Western印迹方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏蛋白(E-cadherin)的表达.用递增浓度的Cur(1、5、10μmoL/L)预处理HK-2细胞24 h, 加入含TGF-β1(10 μg/L)培养液继续培养细胞48h后,收获细胞提取蛋白和mRNA,以Western印迹方法检测smad3、p-smad2/3、smad7、TFβR-II的表达;以RT-PCR方法检测ColⅠ、ColⅢmRNA的表达.结果 TGF-β1诱导HK-2细胞内smad2/3磷酸化的现象,既早于E-cadherin蛋白的下调,更先于新蛋白α-SMA的合成;姜黄素干预后,可明显抑制TFβR-II蛋白的表达、smad2蛋白磷酸化及ColⅠ、ColⅢmRNA的表达,增强抑制因子smad7的表达.结论 姜黄素可干预TGF-β1 /smads信号转导途径的多个位点,从而阻断EMT过程.     

外源性结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质合成的作用

目的:探讨外源性结缔组织生长因子(CTGF)在人肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质合成中的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞HK2分为三组:对照组;CT-GF小剂量组(终浓度为2.5 μg/L);CTGF大剂量组(终浓度为20 μg/L).用倒置显微镜观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTr)法检测细胞增殖活性;RT-PCR检测HK2细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),纤连蛋白(FN)和胶原ⅠαmRNA水平的变化;免疫组织化学方法观察HK2细胞FN和胶原Ⅰ的表达.结果:CTGF刺激使HK2细胞由椭圆形变为梭形,同时促进HK2细胞增殖.不同浓度的CTGF作用于HK2细胞48 h后,α-SMA和FN mRNA水平显著升高(P＜0.05),E-钙黏蛋白mRNA的表达显著下降(P＜0.05);大剂量CTGF刺激HK2细胞48 h后胶原ⅠαmRNA水平显著升高(P＜0.05).小剂量CTGF组HK2细胞胞质FN表达水平显著增加(P＜0.05),大剂量CTGF组HK2细胞胞质表达FN和胶原Ⅰ均显著增加(P＜0.05).结论:CTGF在体外能够诱导人肾小管上皮细胞转分化,并促进FN的合成,大剂量的CTGF可以增加其胶原Ⅰ的合成.     

黄芪注射液对肾小管上皮细胞转分化的影响

目的观察黄芪注射液对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化(EMT)过程的影响,揭示黄芪注射液治疗肾间质纤维化(RIF)的具体作用机制。方法以正常培养的HK-2细胞为正常组,TGF-β1(8×10-9mg/L)刺激48 h为模型组,TGF-β1(8×10-9mg/L)与黄芪注射液(8×10-6mg/L)共培养48 h为治疗组。倒置相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫组化染色法观察细胞内E-钙依赖黏附素(E-cadherin)和a-平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达变化。结果倒置相差显微镜下观察发现模型组细胞形态经历了由上皮细胞样转变为成纤维细胞样的改变,而治疗组中成纤维细胞数目较模型组减少,并可见大量的上皮样细胞;免疫组化显示模型组细胞中a-SMA的表达较正常组增多,E-cadherin的表达减少,而治疗组细胞中E-cadher-in的表达较模型组增多,a-SMA的表达降低。结论黄芪注射液可在一定程度上抑制由TGF-β1诱导的体外培养HK-2细胞的表型改变,减少细胞内a-SMA的表达,增加E-cadherin的表达,阻断或逆转其EMT的进程。     

益气活血法对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

[目的]观察益气活血法中药方剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad2/3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调节,探讨其对肾小管上皮细胞转分化的影响。[方法]采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型。将30只大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、中药大剂量组、中药中剂量组、中药小剂量组、西药组。术后14d,观察梗阻肾组织病理改变,用免疫组化方法检测肾组织TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结果]益气活血法能减轻肾间质纤维化程度,并能下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达。[结论]益气活血法可通过下调TGF-β1、Smad2/3和α-SMA的表达,从而抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

肾小管上皮细胞转分化的信号转导途径

肾小管间质纤维化是各种慢性肾脏疾病进展为终末期肾功能衰竭的共同途径.近年来研究发现,肾小管上皮细胞转分化(tubular epithelial to mesenchymal transdifferentiation,TEMT)是肾小管间质纤维化发生和进展的重要机制.     

Epithelial to mesenchymal transition in the progression of tubulointerstitial fibrosis

Objective To review the mechanisms of epithelial to mesenchymal transition (EMT) and its role in the progression of tubulointerstitial fibrosis.Data sources The data used in this review were obtained mainly from the studies of EMT reported from 2000–2006.Study selection Relevant articles on studies of EMT in tubulointerstitial fibrosis were selected. Data were mainly extracted from the 45 articles listed in the reference section of this review.Results The process of EMT has gained wide recognition as candidate mechanism in progression of chronic fibrotic disorders. New markers were identified and facilitate the observation of EMT. EMT is regulated by many factors through activation of kinase-dependent signaling cascades. Recent findings suggest that EMT is a reversible process, which can be controlled by factors for their epithelial inducing activities. Conclusion Remarkable progresses of EMT research have been made recently. Preventing or reversing EMT is a promising strategy against renal fibrosis.     

The Effect of Connective Tissue Growth Factor on Human Renal Tubular Epithelial Cell Transdifferentiation

Summary To investigate the role of connective tissue growth factor (CTGF) in transdifferentiation of human renal tubular epithelial cell (HKC),in vitro cultured HKC cells were divided into 3 groups: negtive control, low dose CTGF-treated group (rh CTGF, 2.5 ng/ml) and high dose CTGF-treated (rhCTGF, 5. 0 ng/ml). Then the expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) were assessed by indirect immuno-fluorescence, and the percentage of α-SMA positive cells were assessed by flow cytometry. RT-PCR were also performed to examine the mRNA level of α-SMA. Upon the stimulation of different concentrations of rhCTGF, the expression of α-SMA were markedly stronger than that in negative controls. The percentages of α-SMA positive cells were significantly higher in the stimulated groups than that of negative controls (38.9%, 65.5% vs 2.4%,P<0.01). α-SMA mRNA levels were also up-regulated by the stimulation of rhCTGF (P<0.01). These results suggest that CTGF can promote the transdifferentiation of human renal tubular epithelial cells towards myofibroblast (Myo-F). ZHANG Chun, male, born in 1977, M. D., Ph. D. This work was supported by a grant from the Science & Technology Foundation of Hubei Province (No. 2003AA301C14).     

针对CTGF的shRNA抑制TGFβ1诱导人肾小管上皮细胞合成胶原

目的研究针对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞株(human renal tubular epithelial cell,HKC)合成胶原的抑制作用.方法设计和构建带有U6启动子的能产生针对CTGF的shRNA的RNA干扰表达质粒,转染至受TGF β1刺激的HKC,以RT-pCR和Western blot检测HKC转染前后CTGF表达,以3H脯氨酸掺入法检测总胶原合成量.结果和仅受TGFβ1刺激组相比,转染了RNA干扰表达质粒的受TGFβ1刺激的HKC CTGFmRNA和蛋白表达明显减弱,总胶原合成量下降(P＜0.01).结论针对CTGF的短发夹RNA能明显抑制TGF β1诱导HKC合成胶原.     

白藜芦醇对胶质瘤U87细胞上皮-间质转化的抑制作用

目的：探讨白藜芦醇（Res）对胶质瘤U87细胞上皮-间质转化（EMT）、迁移和侵袭能力的调控作用,阐明Res对胶质瘤细胞EMT的抑制作用。方法：将胶质瘤U87细胞分为对照组（不做处理）、EMT组（TGF-β1诱导EMT）和Res处理组（Res处理EMT）。应用Western blotting法检测各组细胞中间质标志物（N-钙黏蛋白、β-连环蛋白和波形蛋白）、诱导EMT的转录因子（Snail、Slug和Twist1）以及基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9的蛋白表达水平。划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果：与对照组比较,EMT组胶质瘤U87细胞的间质标志物（N-钙黏蛋白、β-连环蛋白和波形蛋白）、诱导EMT的转录因子（Snail、Slug和Twist1）和MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与EMT组比较,Res处理组上述蛋白表达水平明显下调（P<0.05和P<0.01）;40 μmol·L^-1 Res处理组效果较20 μmol·L^-1 Res处理组更明显（P<0.05）。EMT组细胞迁移率和侵袭率明显高于对照组（P<0.01）,而Res处理组胶质瘤细胞迁移率和侵袭率明显低于EMT组（P<0.01）。结论：Res能抑制胶质瘤U87细胞EMT,降低细胞的迁移和侵袭能力。     

结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞株生物学特性的影响

目的:观察重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)对人肾小管上皮细胞株(HK-2)的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞分为三组:对照组、rhCTGF 5.0 ng/ml, rhCTGF 10.0 ng/ml.应用MTT法检测CTGF对HK-2增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学的变化;间接酶标免疫组织化学方法检测E-钙粘蛋白(E-Cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术检测α-SMA阳性的HK-2细胞百分数.结果:在一定的浓度范围内,CTGF能促进HK-2细胞的增殖, CTGF促使HK-2细胞由椭圆形转变为梭形状,可下调E-Cadherin,上调α-SMA, 流式细胞测得三组细胞阳性百分率依次为1.54%,10.24%,25.8%(P＜0.05).结论:CTGF在体外促进HK-2转分化的同时促进HK-2的生长.     

BMP-7介导的间叶-上皮转化与器官纤维化研究进展

纤维化是各种器官慢性损伤的共同结果。研究发现上皮-间叶转化(EMT)可能是导致多种器官纤维化的潜在机制。目前认为转化生长因子-β1(TGF-β1)能诱导EMT,促进器官纤维化,而骨形态发生蛋白-7(BMP-7)可通过拮抗TGF-β的作用,诱导间叶-上皮转化,改善多种器官纤维化。然而,至今BMP-7的抗纤维化分子机制仍不清楚,对其进行深入研究具有重要意义,可能提供一种纤维化疾病的新治疗手段。     

肝细胞生长因子对高糖及结缔组织生长因子培养的肾小管上皮细胞纤维化的影响

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）对高糖及结缔组织生长因子（CTGF）诱导肾小管上皮细胞（HKC）纤维化的影响.方法：体外培养HKC,分别在高糖及CTGF环境下加入不同浓度人重组肝细胞生长因子（rhHGF）,以RT-PCR检测转化生长因子β1（TGF-β1）、CTGF、以及纤维化指标Ⅳ型胶原（COL4A1）、纤连蛋白（FN）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等的基因表达.结果：高糖及CTGF刺激下,细胞因子和纤维化指标表达均不同程度增加,其中,CTGF作用下,COL4A1表达明显低于高糖组（P＜0.01）.高糖及CTGF环境下加入rhHGF后,纤维化指标显著降低（P＜0.01）,其中高糖＋rhHGF组,CTGF表达减少,TGF-β1表达无明显改变（P＞0.05）.结论：HGF可通过抑制TGF-β下游因子CTGF的表达,发挥抗肾小管上皮细胞纤维化作用,但CTGF并不是其惟一的阻断途径.     

三七总皂苷对大鼠肾小管上皮间充质转化过程的影响

目的研究三七总皂苷(PNS)对大鼠肾小管上皮间充质转化及肾间质纤维化的作用。方法建立大鼠肾纤维化的动物模型,将30只SD大鼠随机分为正常对照组、梗阻组和梗阻+PNS组,各10只。分别进行相应的处理后,观察其肾组织的间质纤维化情况,进行波形蛋白、小鼠抗大鼠细胞角蛋白(CK)、小鼠抗大鼠-平滑肌肌动蛋白(-SMA)和小鼠抗大鼠转化生长因子-1(TGF-1)的检测,并进行Gremlin检测。结果梗阻组和梗阻+PNS组大鼠肾组织均出现间质纤维化,但梗阻组的程度比梗阻+PNS组要明显。梗阻组、梗阻+PNS组中细胞角蛋白表达低于正常对照组,波形蛋白、-SMA和TGF-1以及Gremlin的表达显著高于正常对照组;而梗阻组中细胞角蛋白表达低于梗阻+PNS组,波形蛋白、-SMA和TGF-1以及Gremlin的表达则高于梗阻+PNS组,差异均有统计学意义(均<0.05)。结论三七总皂苷可能通过下调TGF-1、Gremlin等的表达,抑制肾小管上皮间充质转化,阻断了肾间质纤维化。     

Role of Connective Tissue Growth Factor in Extracellular Matrix Degradation in Renal Tubular Epithelial Cells

In order to investigate the effects of connective tissue growth factor (CTGF) antisense oligodeoxynucleotide (ODN) on plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) expression in renal tubular cells induced by transforming growth factor β1 (TGF-β1) and to explore the role of CTGF in the degradation of renal extracellular matrix (ECM), a human proximal tubular epithelial cell line (HKC) was cultured in vitro. Cationic lipid-mediated CTGF antisense ODN was transfected into HKC. After HKC were stimulated with TGF-β1 (5 μg/L), the mRNA level of PAI-1 was detected by RT-PCR. In-tracellular PAI-1 protein synthesis was assessed by flow cytometry. The secreted PAI-1 in the media was determined by Western blot. The results showed that TGF-β1 could induce tubular CTGF and PAI-1 mRNA expression. The PAI-1 mRNA expression induced by TGF-β1 was significantly inhib-ited by CTGF antisense ODN. CTGF antisense ODN also inhibited intracellular PAI-1 protein syn-thesis and lowered the levels of PAI-1 protein secreted into the media. It was concluded that CTGF might play a crucial role in the degradation of excessive ECM during tubulointerstitial fibrosis, and blocking the biological effect of CTGF may be a novel way in preventing renal fibrosis.