艾灸足三里和梁门穴诱导热休克蛋白70抗大鼠胃黏膜氧化损伤作用

目的:观察艾灸足三里和梁门穴对应激性溃疡大鼠胃黏膜热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,探讨艾灸足阳明经穴抗胃黏膜氧化损伤的作用机制.方法:将SD大鼠60只完全随机平均分为空白组、模型组、艾灸足三里等穴组和艾灸非穴对照点组,采用水浸-束缚应激法制备应激性溃疡模型.按Guth法计算胃黏膜损伤指数(UI),用激光多普勒血流仪测定胃黏膜血流量(GMBF),用免疫组织化学法和硫代巴比妥酸染色法对处理后大鼠检测其胃黏膜HSP70的表达和丙二醛(MDA)的含量.结果:与模型组和艾灸非穴组比较,艾灸足三里等穴可使应激性溃疡大鼠胃黏膜损伤指数明显下降(14.100±5.425vs26.800±9.807,26.200±7.729,P<0.01),HSP70表达上调(0.133±0.035vs0.077±0.057,0.059±0.038,P<0.01)、血流量增高(279.827±172.862mL/minvs139.489±33.133,141.512±58.450mL/min,P<0.05)、MDA含量减少(2.586±0.252μmol/Lvs3.906±0.768,3.464±1.502μmol/L,P<0.05).结论:艾灸足三里和梁门穴能诱导胃黏膜HSP70高表达并降低MDA含量,以达到其抗氧化损伤作用,并有相对的穴位特异性.     

艾灸预处理对脑缺血大鼠HSP70蛋白及HSP70mRNA表达的影响

目的探讨艾灸预处理的预防性脑保护作用机制。方法健康Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑缺血组、脑缺血预处理组、艾灸预处理组。正常组正常饲养;假手术组仅暴露四条血管,不发生脑缺血;脑缺血组全脑缺血10min;脑缺血预处理组先缺血预处理3 min,再灌注24 h后再次全脑缺血10 min。艾灸预处理组先给予艾灸预处理7 d,再行全脑缺血10 min。各组分别于手术后24、48、72 h取脑,采用免疫组化法、原位杂交法检测海马CA1区HSP70蛋白及HSP70mRNA的表达。结果脑缺血组24 h HSP70蛋白表达达到高峰,72 h蛋白含量显著降低(P<0.01)。脑缺血预处理组、艾灸预处理组可见较多HSP70蛋白表达,较缺血组明显增高(P<0.01)。艾灸预处理组术后24、48 h HSP70蛋白的表达较缺血预处理组明显增高(P<0.01、P<0.05);72 h HSP70蛋白的表达明显降低,与缺血预处理组比较具有显著性差异(P<0.01)。结论艾灸预处理能诱导脑缺血大鼠海马CA1区HSP70 mRNA、HSP70蛋白的表达。其预防性脑保护作用可通过促进HSP70蛋白及HSP70mRNA表达高峰...     

差异性应激对青、老年大鼠海马HSP70 mRNA表达的影响

目的 观察重复低强度强迫游泳应激后青、老年大鼠海马HSP70 mRNA表达及习惯化表达;增强应激强度对青、老年大鼠海马HSP70 mRNA表达的影响.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,观察重复强迫温水游泳应激导致青年组(2个月龄)、老年组(16个月龄)大鼠海马HSP70 mRNA表达的变化和增强应激强度对HSP70 mRNA表达的影响 .结果 重复强迫温水游泳可导致两组大鼠HSP70 mRNA表达习惯化,当再给予4℃冰水游泳应激时,可引起HSP70 mRNA表达增加;老年组大鼠HSP70 mRNA表达在多时段均低于青年组大鼠(P＜0.05).结论 重复应激可以导致HSP70 mRNA表达习惯化,高强度应激可以逆转低强度应激引起的习惯化效应;老年组大鼠应激后HSP70 mRNA表达在多时段低于青年组大鼠.     

维生素C对热应激小鼠肝脏HSP70 mRNA及蛋白表达的影响

目的通过对小鼠肝脏热休克蛋白70（HSP70）表达的实验研究,验证在夏季高温季节运输过程饮水中添加维生素C（VitC）对热应激缓解作用的可行性。方法昆明小鼠30只,随机分为3组,A组为常温对照组,B组为热应激组,C组为实验组（热应激＋VitC组）,B、C组在恒温箱内30℃饲养6 h,于实验后处死各组小鼠,取其肝脏组织,利用半定量法和Western blot蛋白印记技术检测HSP70的表达情况,做组间比较分析。结果 B、C组HSP70 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组（P〈0.01或P〈0.05）,且B组均高于C组（P均〈0.05）。结论饮水中添加VitC使HSP70的表达趋于正常,对热应激有一定的缓解作用。     

艾灸足三里、梁门穴对应激性溃疡大鼠胃黏膜细胞凋亡的干预作用

目的:探讨艾灸足三里、梁门穴对应激性溃疡胃黏膜细胞凋亡的影响,分析其与血浆多巴胺(DA)、胃黏膜内皮素(ET)的关系,揭示艾灸足三里、梁门穴对抗应激性损伤,进而保护胃黏膜的机制.方法:SD大鼠60只随机分为4组,即束缚对照组、模型组、艾灸足三里和梁门穴组、艾灸非穴点对照组,每组15只.束缚水浸应激法造模,免疫组化方法测定细胞凋亡指数(×10-6个/μm2).采用生物信号分析仪检测胃黏膜血流量(GMBF),高效液相色谱法测定血浆DA含量,放射免疫法测定胃黏膜ET含量.结果:预先艾灸足三里、梁门穴可显著降低随后的应激性胃黏膜损伤指数,降低胃黏膜ET和血浆DA含量,增加胃黏膜血流量,降低胃黏膜细胞凋亡指数.造模后,B组UI值(26.80±9.81vs12.00±5.94,P<0.01)、血浆DA(9.97±3.69μg/Lvs4.54±2.61μg/L,P<0.01)、胃黏膜ET(361.469±98.080ng/Lvs149.205±94.1425ng/L,P<0.01)以及凋亡指数(9.65±4.19vs4.36±2.60,P<0.01)显著高于A组,而GMBF低于A组(139.489±33.133mL/minvs377.090±85.840mL/min,P<0.01);C组UI值、凋亡指数显著低于B组和D组(UI:14.10±5.42vs26.80±9.81,26.20±7.23,P<0.01;凋亡指数:3.00±1.58vs9.65±4.19,8.20±5.17,P<0.01),而GMBF高于B组和D组(316.552±85.469mL/minvs139.489±33.133,141.512±58.450mL/min,P<0.01);C组血浆DA含量及胃黏膜ET显著低于B组(DA:4.41±2.48μg/Lvs9.97±3.69μg/L,P<0.01;148.271±69.113ng/Lvs361.469±98.080ng/L,P<0.01),但与D组比较无显著性差异(P>0.05).结论:艾灸足三里、梁门穴预处理可减轻束缚水浸应激所造成大鼠胃黏膜的损伤程度,这一作用可能是通过降低血浆DA和胃黏膜ET含量,增加胃黏膜血流量,抑制细胞凋亡实现的.     

寒冷应激对心肌细胞HSP70的影响

目的 研究寒冷应激对心肌细胞热休克蛋白-70(HSP70)功能的影响,探讨寒冷环境与冠心病关联的病理生理基础.方法 H9c2(2-1)心肌细胞株在37℃正常条件下培养,然后降低至32℃延续培养5h,结束培养后收集心肌细胞,免疫印迹杂交方法测定HSP70蛋白水平.结果 低于正常温度5℃的寒冷应激处理5h后,H9c2(2-1)心肌细胞内的HSP70蛋白水平与对照相比,升高了(95.85±32.01)％,有统计学差异(P=0.0064).结论 HSP70对于心肌细胞寒冷应激具有高度敏感性,提示其在冠心病的环境病因中具有重要的调节功能.     

热休克蛋白70系列与应激性溃疡之间的相互关系

生物细胞在受到各种理化因素刺激后,可以产生一系列的应激反应,诱导热休克蛋白(heat shock protein,HSP)表达.在众多的HSP中,HSP70家族是生物进化过程中最为保守也是目前人们研究最多的一组蛋白.应激可以诱导机体胃黏膜的损伤并可以降低胃黏膜的屏障保护作用,进而导致应激性溃疡的产生,同时加速热休克蛋白的合成,而热休克蛋白反过来又可预防应激性溃疡的发生,抑制胃黏膜细胞凋亡,促进胃溃疡的愈合.本文综述了主要的热休克蛋白分子的分类、调节以及在应激性溃疡中的表达和应用,并简要论述了通过诱导热休克蛋白表达而作为胃黏膜保护剂的几种药物.     

慢性温和应激后老年大鼠抑郁症状及HSP70的变化

目的探究慢性温和应激下老年大鼠热休克蛋白70(HSP70)的表达及其对抑郁症状的影响。方法采用老年期(老年组)SD雄性大鼠(n=6),对比以标准鼠龄(青年组)SD雄性大鼠(n=6),经过3 w慢性温和应激前后,进行糖水偏好实验与敞箱实验,检测大鼠的抑郁症状;分别利用Western印迹法、RT-PCR、免疫组化的方法检测大鼠海马与额叶的HSP70水平。结果老年组糖水偏好程度的下降、垂直运动指数、水平运动指数、中央格停留时间均低于青年组(P0.05);Western印迹检测显示老年组的HSP70在海马与额叶均低于青年组(P0.05);RT-PCR检测显示老年组的HSP70在海马与额叶均低于青年组(P0.05);免疫组化显示老年组的HSP70在海马与额叶也低于青年组(P0.05)。结论慢性温和应激后,老年期大鼠的抑郁症状明显增加,同时老年大鼠的HSP70在蛋白水平与RNA水平均下降,故推测老年大鼠的抑郁症状可能与HSP70水平低有关。     

丹红注射液对大鼠慢性应激反应中心肌酶和HSP70表达的影响

目的 通过心肌酶和热休克蛋白(HSP)70的表达来观察慢性应激反应中丹红注射液对大鼠心肌的保护作用。方法 将健康成年SD大鼠55只随机分为空白对照组、丹红对照组、慢性应激组和慢性应激丹红组。空白对照组不进行慢性应激处理,也不注射丹红注射液;丹红对照组不进行慢性应激处理,仅每日经腹腔注射丹红注射液10 ml/kg;慢性应激组按照慢性应激反应模型进行处理;慢性应激丹红组在按照慢性应激反应模型进行处理的同时每日经腹腔注射丹红注射液10 ml/kg。待慢性应激持续到设定时间时（3周）,剖杀4组大鼠,① 观察各组大鼠心肌酶的变化。②同时采用免疫组织化学法检测各组大鼠心肌组织中HSP70的表达情况。结果 ①与空白对照组比较,丹红对照组、慢性应激组和慢性应激丹红组大鼠乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶同工酶 （CK-MB）显著升高（P<0.01）。慢性应激组LDH和CK-MB较丹红对照组显著升高（P<0.05）,慢性应激丹红组LDH和CK-MB较慢性应激组显著降低（P<0.05）;而丹红对照组和慢性应激丹红组之间无显著性差异。②丹红对照组、慢性应激组和慢性应激丹红组心肌组织HSP70表达均强于空白对照组。丹红对照组和慢性应激组之间HSP70表达无显著性差异。慢性应激丹红组心肌组织HSP70表达强于丹红对照组或慢性应激组。结论 丹红注射液的使用可有效抑制慢性应激大鼠LDH、CK-MB的升高,还可增高慢性应激大鼠心肌组织中HSP70的表达。     

泮托拉唑对应激性溃疡患者热休克蛋白70含量的影响

目的研究泮托拉唑对应激性溃疡患者热休克蛋白70含量的影响,为探明其预防应激性溃疡的新机制提供依据。方法将符合纳入标准的62例应激性溃疡患者随机分为观察组和对照组。两组患者出现应激性溃疡时即开始用药物治疗:观察组泮托拉唑40 mg静滴,2次/d,对照组法莫替丁40 mg静滴,2次/d。疗程为开始至胃液引流液转为淡黄色并巩固1周的时间。收集3个时间点(刚出现咖啡色引流物、运用抑酸剂1周、引流胃液转黄后1周)患者的静脉血液(分别定义为U0、U1、U2期)。同时选择无消化道应激性溃疡出血10例患者作为正常组,收集其静脉血作为正常对照(相当于U0期)。观察比较观察组及对照组患者U1、U2期及正常组HSP70的表达。比较观察组和对照组患者引流胃液转为淡黄色所需平均时间。结果观察组与对照组患者U0期HSP70含量明显高于正常组,U1期明显高于U0期(P<0.05),观察组患者U1期HSP70含量明显高于对照组(P<0.05),观察组和对照组U2期HSP70含量明显低于U1期(P<0.05),观察组患者U2期HSP70含量明显高于对照组(P<0.05)。观察组引流胃液转为淡黄色所需平均时间明显短于对照组,观察组患者应激性溃疡愈合速度明显快于对照组。结论泮托拉唑能提高应激性溃疡患者热休克蛋白70表达,促进溃疡愈合速度较法莫替丁迅速,泮托拉唑愈合溃疡机制之一可能与提高HSP70表达有关。     

七方胃痛胶囊对实验性胃溃疡大鼠一氧化氮与热休克蛋白70的影响

[目的]探讨中药七方胃痛胶囊抗溃疡的机制及提高溃疡愈合质量(QOUH)的应用价值.[方法]40只Wistar大鼠制作乙酸诱发大鼠胃溃疡模型后第3天随机分为4组:对照组,雷尼替丁胶囊组,七方胃痛胶囊大、小剂量组.用硝酸还原酶法检测血清一氧化氮(NO).取大鼠胃组织,测量溃疡面积.以免疫组化染色切片观测溃疡边缘黏膜组织炎症细胞数、新生血管数,并测定溃疡边缘黏膜组织热休克蛋白(HSP)70的表达情况.[结果]七方胃痛胶囊组的溃疡指数明显低于雷尼替丁组和对照组(P＜0.05,＜0.01);再生黏膜的新生血管数明显高于雷尼替丁组和对照组(P＜0.05,＜0.01);固有层炎症细胞浸润数明显低于雷尼替丁组和对照组(P＜0.01,＜0.05);血清NO溃疡边缘黏膜组织的HSP70水平均明显高于雷尼替丁组和对照组(P＜0.05,＜0.01).[结论]七方胃痛胶囊抗溃疡的作用机制与提高血清NO及溃疡边缘黏膜组织HSP70水平有关,且能降低溃疡指数与炎症细胞浸润,增加再生黏膜的新生血管生成,对于提高QOUH有一定的价值.     

Overexpression of heat shock protein 70 in stomach of stress-induced gastric ulcer-resistant rats

Expression of heat shock protein 70, induced by an antiulcer drug, provides protection against gastric ulcers. However, the mechanisms responsible for this protection are not known. The expression in ulcer-resistant, spontaneously hypertensive rats was 2.8-fold higher than in normotensive rats. One hour after restraint and water immersion stress, strong nuclear immunoreactivity was observed in nuclei of surface epithelial cells at the crest of gastric mucosal folds, the first site of ulceration, only in spontaneously hypertensive rats. Heat shock cognate protein 70, which is expressed in mucus-secreting cells, was not overexpressed in spontaneously hypertensive rats. Heat shock protein 70 expression was attenuated by chemical sympathectomy, which also resulted in abolition of the increase of mucosal blood flow and aggravation of ulcers. Our results indicate that overexpression of heat shock protein 70 in the stomach seems to protect against gastric ulcers through its cytoprotective effects on gastric mucosa by increasing mucosal blood flow.     

Proteomics of the mediodorsal thalamic nucleus of rats with stress-induced gastric ulcer

BACKGROUND Stress-induced gastric ulcer(SGU) is one of the most common visceral complications after trauma. Restraint water-immersion stress(RWIS) can cause serious gastrointestinal dysfunction and has been widely used to study the pathogenesis of SGU to identify medications that can cure the disease. The mediodorsal thalamic nucleus(MD) is the centre integrating visceral and physical activity and contributes to SGU induced by RWIS. Hence, the role of the MD during RWIS needs to be studied.AIM To screen for differentially expressed proteins in the MD of the RWIS rats to further elucidate molecular mechanisms of SGU.METHODS Male Wistar rats were selected randomly and divided into two groups, namely, a control group and an RWIS group. Gastric mucosal lesions of the sacrificed rats were measured using the erosion index and the proteomic profiles of the MD were generated through isobaric tags for relative and absolute quantitation(iTRAQ) coupled with two-dimensional liquid chromatography and tandem mass spectrometry. Additionally, iTRAQ results were verified by Western blot analysis.RESULTS A total of 2853 proteins were identified, and these included 65 dysregulated(31 upregulated and 34 downregulated) proteins(fold change ratio ≥ 1.2). Gene Ontology(GO) analysis showed that most of the upregulated proteins are primarily related to cell division, whereas most of the downregulated proteins are related to neuron morphogenesis and neurotransmitter regulation. Ingenuity Pathway Analysis revealed that the dysregulated proteins are mainly involved in the neurological disease signalling pathways. Furthermore, our results indicated that glycogen synthase kinase-3 beta might be related to the central mechanismthrough which RWIS gives rise to SGU.CONCLUSION Quantitative proteomic analysis elucidated the molecular targets associated with the production of SGU and provides insights into the role of the MD. The underlying molecular mechanisms need to be further dissected.     

大鼠肝脏增龄性变化和热休克蛋白70表达差异

目的 观察不同年龄大鼠肝脏的增龄性变化以及热休克蛋白70(HSP70)在肝组织中的表达,探讨HSP70在肝脏老化中的作用. 方法 雄性SD大鼠按月龄分为21 d组、3月龄组、12月龄组和18月龄组,每组各6只.进行常规血清学测试,光镜下观察肝组织结构,Real-time PCR法检测HSP70在各组大鼠肝组织中的表达. 结果 随着鼠龄增长,4组大鼠肝质量/体质量比值明显降低,分别为0.073、0.050、0.025和0.019(P=0.000);21 d组和3月龄组与12月龄组和18月龄组比较,血清白蛋白水平减低[分别为(35.0±2.7)g/L和(39.8±3.5)g/L比(27.3±9.3)g/L和(20.6±1.7)g/L,t=12.233,P=0.000];碱性磷酸酶(ALP)水平升高[分别为(68.8±23.3)U/L和(71.6±19.2)U/L比(185.9±41.5)U/L和(418.6±140.6)U/L,t=35.354,P=0.000].光镜下可见12月龄和18月龄大鼠的肝细胞排列紊乱,细胞内脂肪空泡明显增多.18月龄组大鼠肝细胞HSP70mRNA表达相对量(0.218),低于12月龄组(0.220)和3月龄组(0.230) (P=0.000). 结论 HSP70可能参与了肝细胞老化的进程,可以作为预测肝脏老化的检测指标之一.     

HSP70-GST融合蛋白表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建小鼠热休克蛋白70(HSP70)重组原核表达质粒,获取小鼠HSP70-GST融合蛋白。方法先用RT-PCR方法从小鼠脑基因组中扩增出HSP70基因cDNA序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pMD—Tvector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1 中进行表达。结果表达产物经Western Blot分析,在109 KD处有一明显特异带,与预期结果相符。结论构建重组融合表达载体pGEX—HSP70,用基因工程的方法在原核细胞中成功表达出小鼠 HSP70-GST融合蛋白。     

精氨酸加压素参与电针对大鼠应激性胃黏膜损伤的保护作用

目的：探讨精氨酸加压素(AVP)参与电针(EA)对应激性大鼠胃黏膜损伤保护作用及机制.方法：健康SD大鼠98只,随机分为模型组、电针组、生理盐水对照组、AVP 100ng组、AVP 200ng组、AVP 300ng组和AVP-V_1受体阻断剂组.采用束缚冷应激胃黏膜损伤大鼠模型,观察孤束核微量注射AVP,AVP-V_1受体阻断剂,大鼠胃黏膜血流量(GMBF)、溃疡指数(UI)、胃液酸度的变化.结果：与模型组比较,电针组大鼠UI减少(t= 7.5201,P＜0.01),GMBF(mv)增加(t=2.9606,P＜0.05),胃液酸度降低(t=4.2090,P＜0.01). AVP 100,200,300ng组分别与生理盐水对照组比较,UI明显减少(t=2.2718,t=4.9082,t =6.0413：P＜0.05-0.01),GMBF明显增加(t= 2.6845,t=3.8269,t=4.8795；P＜0.05-P＜0.01),胃液酸度明显降低(t=3.0526,t=3.8565,t= 5.6251；P＜0.05-P＜0.01),并且表现明显的剂量-效应依赖关系(r=0.9978,r=0.9980,r= 0.9829；P＜0.05).AVP-V_1受体阻断剂组与生理盐水对照组比较UI增大(t=5.6815,P＜0.01),GMBF减少(t=2.3750,P＜0.05),胃液酸度增高(t=2.2046,P＜0.05).结论：孤束核内AVP参与了电针对大鼠应激性胃黏膜损伤保护作用过程.