黄连解毒汤含药血清激活PPARγ诱导RAW264.7 源性泡沫细胞向M2 表型极化

目的:通过体外细胞实验观察黄连解毒汤干预RAW264.7源性泡沫细胞PPARγ表达对细胞极化的影响,探讨黄连解毒汤抗动脉粥样硬化的部分作用机制。方法:氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导RAW264.7源性泡沫细胞;油红O染色法鉴定细胞泡沫化;以一定浓度的黄连解毒汤含药血清干预细胞,流式细胞术鉴定M2型巨噬细胞表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清IL-1β、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定细胞过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ),精氨酸酶1(Arg-1)的蛋白表达水平。结果:油红O染色显示,泡沫细胞模型制备成功。含药血清干预后,与模型组相比,巨噬细胞CD206分子表达阳性数量明显升高(P0.01)。细胞上清IL-1β、TNF-α的表达下调,IL-10、TGF-β的表达明显增多(P0.05,P0.01),PPARγ、Arg-1的蛋白表达水平明显升高(P0.05,P0.01)。结论:黄连解毒汤可通过激活PPARγ促进ox-LDL诱导的RAW264.7源性泡沫细胞向M2表型极化,发挥抗炎作用,这可能是其防治动脉粥样硬化机制之一。     

Ghrelin对THP-1源性泡沫细胞ATP结合盒转运子A1和G1表达的调控作用

目的： 研究单核/巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中ghrelin对人ATP结合盒转运子A1和G1（ABCA1/ABCG1）表达的调控作用。方法: 体外培养人源单核细胞系THP-1,由佛波酯（PMA）作用使其分化为巨噬细胞,后者可在氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）存在条件下进一步转变为泡沫细胞。巨噬细胞加入不同浓度的Ghrelin预孵2 h后再加入ox-LDL作用不同时间,油红O染色法观察细胞内脂滴含量,运用PT-PCR法检测ABCA1和ABCG1 mRNA水平,Western blotting法检测ABCA1和ABCG1蛋白表达,采用酶法,通过荧光分光光度计检测细胞内外胆固醇含量并计算胆固醇流出率。结果: Ghrelin干预可明显减少细胞内脂滴的形成,显著增加胆固醇流出率,并能显著增加单核/巨噬细胞泡沫化过程中ABCA1和ABCG1 mRNA 水平和蛋白表达,且此作用呈浓度依赖性而不呈时间依赖性。结论: Ghrelin可能通过上调ABCA1和ABCG1转录翻译水平延缓动脉粥样硬化的发生。     

卡介苗诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫化与上调CD36表达有关

目的探讨卡介苗(BCG)感染对小鼠RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响以及引起RAW264.7巨噬细胞泡沫化形成的相关机制。方法培养RAW264.7巨噬细胞, 40μg/mL氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)预处理30 min,按BCG∶RAW264.7巨噬细胞=1∶1、 5∶1、 10∶1、 20∶1比例感染RAW264.7巨噬细胞24 h,油红O染色法检测不同感染比例的BCG感染对RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响,以确定BCG感染诱导RAW264.7巨噬细胞泡沫化形成的最适感染比例。接着分别用热灭活和未灭活的BCG以最适感染比例感染RAW264.7巨噬细胞,感染24h后分别对各组细胞进行油红O染色和提取RNA,探讨不同活力的BCG感染对RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响和对RAW264.7巨噬细胞脂质摄入相关受体清道夫受体A1(SR-A1)、低密度脂蛋白受体(LDLR)、 CD36的mRNA表达水平的影响。结果不同感染比例的BCG均可诱导RAW264.7巨噬细胞发生泡沫样改变,其中以10∶1的感染比例最为明显。灭活BCG与未灭活BCG均引起RAW264.7巨噬细胞泡沫化,其中未灭活的BCG感染组RAW264.7巨噬细胞泡沫化更为显著。与未感染组相比, BCG感染24 h后, CD36 mRNA的表达显著上调,且上调程度与RAW264.7巨噬细胞泡沫化程度相关。结论 BCG诱导巨噬细胞泡沫化形成可能与CD36的表达上调有关。     

沉默CXCL12抑制ox-LDL诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7泡沫化和凋亡

目的 探讨CXC趋化因子配体12(CXCL12)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7泡沫化和凋亡的作用及其机制.方法 用60 mg/L的ox-LDL诱导RAW264.7泡沫化,记为ox-LDL组,不添加ox-LDL的作为对照(NC)组;将si-con和si-CXCL12转染至RAW2...     

普伐他汀联合罗格列酮上调冠心病患者单核细胞ABCA1表达

高密度脂蛋白(HDL)通过参与胆固醇反转运发挥抗动脉粥样硬化作用,ATP结合盒转运体A1(ABCA1)的作用是调节巨噬细胞胆固醇平衡的重要蛋白质.肝X受体/维甲酸类受体(LXR/RXR)二聚体及过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)能调节ABCA1的表达.     

冠蛋白1参与分枝菌酸诱导巨噬细胞的泡沫化

目的研究巨噬细胞冠蛋白1(coronin-1)与分枝菌酸(MA)诱导巨噬细胞泡沫化的相关性及其可能机制。方法根据冠蛋白1表达水平的差异,实验分为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7和RAW264.7-Cor.Minus三组。各组细胞经100μg/m L MA包被的聚苯乙烯微球作用24 h后提取总蛋白,用Western blot法检测细胞冠蛋白1的表达水平。分别用(0、25、50、75、100)μg/m L MA包被聚苯乙烯微球作为吞噬颗粒,在2μmol/L松胞菌素D(cty D)处理前、后,分别吞噬24 h~8 d,用总胆固醇(TC)酶法测定试剂盒、游离胆固醇(FC)酶法测定试剂盒分别检测各组细胞TC、FC,再通过胆固醇酯(CE)和CE/TC比值定量评估巨噬细胞泡沫化水平。将cty D处理细胞(RAW264.7-cty D、RAW264.7-cty D-MA)及其对照组分别用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽(FITC-phalloidin)染色,计算纤维型肌动蛋白(F-actin)重排率。结果各组细胞受MA诱导后,其冠蛋白1的表达量显著高于相应对照组,其表达量从高至低依次为RAW264.7-Cor.Plus、RAW264.7、RAW264.7-Cor.Minus。表达不同水平冠蛋白1的各组细胞的泡沫化水平与MA包被剂量和MA作用时间呈正比;冠蛋白1表达量最高的RAW264.7-Cor.Plus细胞泡沫化水平最高,冠蛋白1表达量最低的RAW264.7-Cor.Minus细胞泡沫化水平最低;cty D抑制巨噬细胞F-actin显著降低MA诱导的细胞泡沫化水平,但抑制F-actin对冠蛋白1与MA诱导细胞泡沫化的正相关性并无显著影响;经鬼笔环肽染色后,MA诱导组细胞的F-actin重排率显著高于非MA诱导的对照组细胞。结论 MA可诱导巨噬细胞冠蛋白1的表达,其表达水平与MA诱导的细胞泡沫化呈正相关,F-actin参与MA诱导的细胞泡沫化过程,但F-actin并非冠蛋白1调控MA诱导细胞泡沫化的关键和唯一途径。     

甲基莲心碱对RAW264.7巨噬细胞泡沫化的影响

目的探讨甲基莲心碱(Nef)对巨噬泡沫细胞形成的作用及机制。方法采用体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,ox-LDL诱导建立泡沫细胞模型,用Nef进行干预。油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶比色法定量细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,免疫荧光和流式细胞术分析CD36受体蛋白表达,RT-PCR检测CD36受体mRNA表达。结果与ox-LDL诱导组相比,Nef保护组巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内脂质含量均显著减少;同时CD36受体蛋白和mRNA表达明显降低。结论Nef可抑制ox—LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞泡沫化,该作用可能与Nef下调巨噬细胞CD36受体表达,从而减弱巨噬细胞对ox—LDL的摄取有关。     

IL-17A通过上调ABCA1的表达减少RAW264.7巨噬细胞脂质的积聚

目的:探讨白细胞介素17A(IL-17A)对RAW264. 7巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法:用不同浓度及的IL-17A处理小鼠RAW264. 7细胞6 h或24 h,或用同一浓度IL-17A处理RAW264. 7细胞不同时间;采用RT-qPCR及Western blot法检测细胞ABCA1的mRNA和蛋白表达情况;采用NBD-胆固醇法检测细胞胆固醇流出情况;采用油红O染色法测定细胞脂质蓄积情况。结果:与对照组相比,IL-17A可以增加RAW264. 7巨噬细胞ABCA1蛋白的表达水平,但不影响ABCA1 mRNA的表达。经IL-17A干预,RAW264. 7巨噬细胞内胆固醇向Apo A-1流出增多,同时细胞脂质蓄积显著减少(P 0. 01)。结论:IL-17A可以增加RAW264. 7巨噬细胞ABCA1的表达水平,其机制并不是通过转录水平实现的,这种影响可能与其抗动脉粥样硬化作用有关。     

ARIP2在小鼠巨噬细胞系RAW264.7中对IL-1β分泌的抑制作用

研究ARIP2在巨噬细胞中对IL-1β分泌的调节作用,探讨激活素A与巨噬细胞活化的可能关系及其作用机制。为了分析ARIP2在小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中的表达及其生物学作用,实验采用RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中ARIP2 mRNA的表达,ELISA方法观察过表达ARIP2对RAW264.7细胞分泌IL-1β的影响。RAW264.7细胞能够表达特异性ARIP2 mRNA,其RNA表达受激活素A刺激呈剂量依赖性增加。ELISA检测结果显示过表达ARIP2可以抑制RAW264.7细胞分泌IL-1β。上述资料提示ARIP2不仅具有抑制激活素诱导的特异基因转录活性,其自身也具有多种生物学活性,可能在激活素A抑制LPS活化巨噬细胞分泌IL-1方面,发挥关键性信号转导调控作用。     

阿托伐他汀对巨噬细胞肝X受体表达及胆固醇外流的影响

目的:他汀类药物是目前治疗脂代谢的有效药物,通过研究阿托伐他汀对巨噬细胞的肝X受体(LXR)及其下游的一些目的基因的表达和胆固醇外流的影响,探讨他汀类药物对LXR信号系统的作用。方法:分离人外周血的单核细胞,并转化为巨噬细胞。在阿托伐他汀的作用下,观察巨噬细胞的aopA-I介导的胆固醇外流的变化和LXR以及其下游目的基因ABCA1、SREBP2、CETP、PLTP、apoE、MMP-9和MIP-1α的mRNA及蛋白LXRα、ABCA1、MMP-9和MIP-1α的表达。结果:阿托伐他汀上调LXRα、ABCA1、SREBP2、CETP、PLTP基因的表达,而下调MMP-9和MIP-1α基因的表达,同时增强aopA-I介导的胆固醇外流。结论:巨噬细胞在阿托伐他汀的作用下,胆固醇外流增强,这种效应与阿托伐他汀上调LXR及其下游的影响胆固醇代谢的目的基因有关,同时,也抑制一些炎症反应的基因的表达。提示他汀类药物的治疗作用,与其影响巨噬细胞LXR信号途径有关,从而影响泡沫细胞的形成。     

阿魏酸钠对高脂血症致动脉粥样硬化过程中胆固醇和甘油三酯代谢的影响

目的：观察阿魏酸钠(SF)对高脂血症引起的动脉粥样硬化(AS)过程中胆固醇和甘油三酯代谢的影响，进一步探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法: 高胆固醇喂养复制AS动物模型；以氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）与小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞体外共培养，诱导建立泡沫细胞模型，与人肝母细胞瘤细胞株HepG2细胞体外共培养，建立损伤细胞模型；分别给予SF进行干预。检测实验动物AS斑块面积和血脂水平，油红O染色观察RAW264.7细胞内脂质堆积情况，高效液相色谱定量分析RAW264.7细胞内胆固醇的含量，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定HepG2细胞肝脂酶（HL）mRNA的表达水平。结果: (1)与高脂组相比，高脂+SF组动物主动脉粥样斑块面积明显减小（P<0.01），血浆甘油三酯水平显著降低（P<0.01），但血浆胆固醇水平无明显改变（P>0.05）；(2) 与ox-LDL组相比，ox-LDL+SF处理组中HepG2细胞HL mRNA表达水平显著增加（P<0.01），但RAW264.7细胞内胆固醇含量无明显改变（P>0.05）。结论: SF能降低高胆固醇导致的AS斑块面积，具有抗动脉粥样硬化的作用，其作用机制可能与上调HL mRNA表达水平从而降低血浆甘油三酯水平有关，而与血浆胆固醇水平和ox-LDL诱导的巨噬泡沫细胞形成无关。提示血浆甘油三酯升高是AS的独立危险因素，HL介导的甘油三酯代谢途径可能是AS治疗的潜在靶点。     

促进细胞内胆固醇流出抑制单核细胞源性泡沫细胞凋亡

目的：研究细胞内胆固醇流出对单核细胞源性泡沫细胞凋亡的影响。 方法： 用50 mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育建立泡沫细胞模型，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率，油红O观察细胞内脂滴的形成情况，用［3H］-胆固醇标记法检测细胞内胆固醇流出率，HPLC检测细胞内胆固醇含量。 结果： 用50 mg/L ox-LDL与RAW264.7细胞共同孵育48 h后，细胞内形成大量脂滴，细胞内胆固醇酯含量由(6.8±3.6)mg/g升至(101.7±4.5)mg/g,细胞凋亡率由8.14%升至42.6%（P<0.05）。HDL3处理组和β-环糊精处理组细胞内仅见少量脂滴，胆固醇流出率由（5.2±2.1）%分别升至（36.7±4.6）%和（42.2±3.1）%，细胞凋亡率由42.6%分别降至14.3%和12.0%（P<0.05）。 结论： HDL3、β-环糊精均可通过促进巨噬细胞内胆固醇流出从而抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞凋亡。     

大蒜素通过抑制caspase-12减轻巨噬源性泡沫细胞凋亡

目的:研究大蒜素对巨噬源性泡沫细胞凋亡和内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡通路关键分子半胱天冬酶-12(caspase-12)的影响,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,分别给予大蒜素(12.5、25和50 mg/L)和4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;4 mmol/L)预处理1 h后,加入氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL;100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)处理24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况;采用相应的试剂盒测定细胞内caspase-3和培养液中乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)的活性;采用Western blot技术检测caspase-12的表达变化;油红O染色检测细胞内脂质蓄积;酶比色法测定细胞内总胆固醇含量。结果:与ERS抑制剂PBA相似,大蒜素可减轻oxLDL所致的巨噬细胞损伤,表现为细胞活力增加、LDH漏出减少、细胞凋亡率和caspase-3活性降低(P0.05);ERS诱导剂TM可导致巨噬细胞活力下降,LDH漏出增多及细胞凋亡率升高(P0.05),大蒜素可明显阻断TM的上述作用;大蒜素明显抑制ox-LDL所致的caspase-12活化(P0.05);与TM组相比,大蒜素也可显著抑制TM所诱导的caspase-12活化(P0.05)。另外,大蒜素还可显著抑制ox-LDL所诱导的巨噬细胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成(P0.05)。结论:大蒜素可减少ox-LDL所致的巨噬源性泡沫细胞凋亡,其机制可能与抑制caspase-12活化有关。     

槲皮素对ox-LDL所致的小鼠巨噬细胞脂质蓄积和过氧化的影响

 目的：研究槲皮素(quercetin,QUE)预处理对氧化低密度脂蛋白 (oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)所致小鼠巨噬细胞脂质蓄积和过氧化的影响,并探讨可能的分子机制。方法：体外培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,给予20、40和80 μmol/L QUE预处理30 min,再加入ox-LDL (100 mg/L)继续培养24 h。采用油红O染色检测细胞内脂质蓄积,测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,以评价细胞膜完整性和脂质过氧化程度。分别采用real-time PCR和免疫印迹技术检测清道夫受体CD36 mRNA和蛋白表达变化。结果：QUE (20,40和80 μmol/L)预处理显著抑制ox-LDL所诱导的巨噬细胞内脂质蓄积和泡沫细胞形成,且呈浓度依赖性。ox-LDL组细胞LDH释放增加,而QUE预处理则显著抑制ox-LDL的上述细胞毒性。与ox-LDL组比较,QUE预处理组细胞内ROS含量和培养液中MDA水平明显降低。另外QUE预处理在mRNA和蛋白水平均明显抑制ox-LDL所诱导的CD36表达上调。结论: QUE可减轻ox-LDL所诱导的小鼠巨噬细胞脂质蓄积和过氧化,其机制可能部分是通过下调CD36表达实现的。     

依泽替米贝对泡沫细胞胆固醇转运的影响

目的：建立一种新的诱导巨噬细胞泡沫化的模型，并用这个模型探讨依泽替米贝对泡沫细胞胆固醇转运的影响。方法：用不同浓度（0，5,10,15,25,35,45和55μg/mL）的Chol:MβCD孵育巨噬细胞株RAW264.7细胞72h；并选用45μg/mLChol:MβCD孵育RAW264.7细胞0，12，24，48，60，72h。进一步在加入Chol:MβCD的同时加入ezetimibe和阳性对照药物lovastatin孵育。用HPLC检测细胞内游离胆固醇和总胆固醇含量，油红O染色观察细胞荷脂情况，用Western印迹法检测SREBP-1和caveolin-1蛋白的表达。结果：细胞内游离胆固醇、总胆固醇含量随Chol:MβCD浓度的增加，孵育时间的延长，呈浓度和时间依赖性地升高，分别在45μg/mL和72h时达到峰值。Chol:MβCD 45μg/mL处理RAW264.7细胞72h和用经典方法50μg/mL ox-LDL处理48h，比较二种方法细胞内游离胆固醇、总胆固醇含量以及油红O染色显示的细胞内荷脂的情况均无明显差别。在加入45μg/mL的Chol:MβCD处理RAW264.7细胞的同时加入不同浓度依泽替米贝（3,10,30μmol/L）以及阳性对照药lovastatin，结果显示依泽替米贝和lovastatin均能显著降低细胞内胆固醇水平，且依泽替米贝的这一作用有剂量依赖性。Western印迹结果显示，Chol:MβCD诱导的模型组SREBP-1和caveolin-1的表达增加，而依泽替米贝和lovastatin能够逆转这种效应，且依泽替米贝的这一作用呈剂量依赖性。结论：Chol:MβCD能诱导RAW264.7细胞转化成为泡沫细胞。依泽替米贝能抑制Chol:MβCD诱导RAW264.7细胞形成泡沫细胞，其机制可能与通过下调SREBP-1表达进而下调caveolin-1的表达，抑制胆固醇的摄取有关。     

葛根素对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇摄取及外排功能的影响

目的:探讨葛根素(puerarin,Pur)对RAW264.7源性泡沫细胞胆固醇摄取及外排功能的影响。方法:以氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导RAW264.7源性泡沫细胞。细胞经处理后,利用荧光探针Di I-ox-LDL检测泡沫细胞摄取ox-LDL的能力,NBD标记胆固醇外排实验检测泡沫细胞的胆固醇外排功能,Western blot法检测LC3II、P62、CD36、ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、溶酶体酸性脂肪酶(lysosomal acid lipase,LAL)以及p-AMPK的蛋白水平。结果:RAW264.7源性泡沫细胞经Pur处理后胆固醇摄取减少、胞内胆固醇外排增加并且自噬相关蛋白LC3II表达增加,P62表达减少,脂质吸收相关蛋白CD36表达减少,胆固醇外排相关蛋白ABCA1和LAL表达增加,其变化与自噬激动剂雷帕霉素处理后改变类似。Pur与自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤共处理后,胆固醇摄取增加、胆固醇外排功能减弱,并且ABCA1、LAL和p-AMPK的蛋白水平减少,但CD36表达未有明显改变。结论:Pur可使得泡沫细胞LAL和ABCA1介导的胆固醇外排能力有所增强,其机制可能是通过AMPK通路增强自噬对胆固醇外排的调控;又可通过对CD36负向调节而使得泡沫细胞对脂质的摄取减少。     

Chlamydia pneumoniae--induced macrophage foam cell formation is mediated by Toll-like receptor 2

Chlamydia pneumoniae induces macrophage foam cell formation, a hallmark of early atherosclerosis, in the presence of low-density lipoprotein (LDL). This study examined the role that Toll-like receptor 2 (TLR2) and TLR4 may play in pathogen-induced foam cell formation. Murine macrophage RAW 264.7 cells either infected with C. pneumoniae or treated with the TLR4 ligand E. coli lipopolysaccharide (LPS) or the TLR2 ligand Pam(3)-Cys-Ala-Gly-OH (Pam) became Oil Red O-stained foam cells and showed increased cholesteryl ester (CE) content when cocultured with LDL. In macrophages from TLR2(-/-) mice, foam cells were induced by Escherichia coli LPS but not by C. pneumoniae or Pam. Conversely, C. pneumoniae or Pam, but not E. coli LPS, induced foam cells in the TLR4-deficient GG2EE macrophage cell line, suggesting that C. pneumoniae elicits foam cell formation predominantly via TLR2. Enhancing cholesterol efflux using the liver X receptor (LXR) agonist GW3965 significantly decreased the CE content of cells exposed to each of the three TLR ligands (C. pneumoniae, Pam, and E. coli LPS). Overall, our results suggest that activation of the LXR signaling pathway may affect potentially atherogenic processes modulated by the TLR ligands.     

Liver X receptor and retinoic X receptor mediated ABCA1 regulation and cholesterol efflux in macrophage cells-messenger RNA measured by branched DNA technology

ABCA1 is an ATP binding cassette transporter that plays an essential role in cholesterol and phospholipid efflux and HDL biogenesis. ABCA1 expression in macrophage cells is subject to regulation by cAMP, cholesterol loading, and ligands of the nuclear receptors liver X receptor (LXR) and retinoid X receptor (RXR). We report here the development of a rapid and high volume branched DNA (bDNA) method to measure ABCA1 mRNA. By using the bDNA method, we show that both LXR and RXR ligands effectively regulate ABCA1 expression in three macrophage cell types: mouse RAW264.7 cell line, mouse peritoneal macrophage cells, and human macrophage THP-1 cells and their regulation is additive. Furthermore, by using a radiolabeled cholesterol efflux assay, we show that both LXR and RXR ligands are sufficient to mediate cholesterol efflux in macrophage cells and their efficacy correlates with ABCA1 regulation. These studies strengthen further the notion that LXR and RXR mediate ABCA1 expression and cholesterol efflux in macrophage cells as a permissive heterodimer and development of small molecule ligands of these nuclear receptors may represent a promising approach to modulating cholesterol efflux and plasma HDL cholesterol level in humans.     

miRNA-33对Hcy干预RAW264.7巨噬细胞衍生的泡沫细胞表达ABCA1/ABCG1的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)是否通过微小RNA-33 (miRNA-33)抑制三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)的表达,从而降低胆固醇逆转运(RCT)效率。方法:复制RAW264.7巨噬细胞经氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导为泡沫细胞的模型,油红O染色确定模型是否复制成功,用LipofectamineTM2000将miRNA-33 mimics和miRNA-33 inhibitor分别转染入细胞内,再给予5 mmol/L的Hcy干预24 h后进行实验;用油红O染色观察细胞内脂滴情况;real-time PCR和Western blot检测ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达水平;液体闪烁计数法检测细胞内胆固醇流出率;高效液相色谱分析细胞内胆固醇含量。结果:(1)与空白对照组相比,miRNA-33 mimics组细胞内脂滴含量增加,ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达量降低(P 0.05),细胞内胆固醇含量逐渐增加(P 0.05),细胞内胆固醇流出率逐渐减少(P 0.05);(2)与空白对照组相比,miRNA-33 inhibitor组检测结果与miRNA-33 mimics组的结果相反,差异具有统计学意义(P 0.05);(3)空白对照组、miRNA-33 mimics-NC组和miRNA-33 inhibitor-NC组3组间相比,所有检测结果的差异均无统计学显著性。结论:Hcy可间接通过诱导miRNA-33表达而抑制ABCA1和ABCG1的蛋白表达,降低RCT效率。