鞘内注射吗啡和可乐定对切口痛大鼠脊髓背角pCREB表达的影响

目的 观察鞘内注射吗啡和可乐定对切口痛大鼠脊髓背角磷酸化环腺苷酸反应原件结合蛋白(pCREB)表达的影响.方法 选择雄性SD大鼠80只,随机均分为五组:切口痛组(A组)、鞘内注射吗啡2.5μg组(B组)、鞘内注射可乐定5μg组(C组)、鞘内注射吗啡2.5μg+可乐定5μg组(D组)和假手术组(E组).观察大鼠术后2h机械缩足反射阈值(MWT)、热缩足潜伏期(TWL)和脊髓背角pCREB表达的变化.结果 与E组比较,A、B、C、D组MWT降低,TWL缩短,脊髓背角pCREB免疫反应阳性神经元数量和pCREB蛋白表达增加(P<0.01).与A组比较,D组MWT升高,TWL延长,脊髓背角pCREB免疫反应阳性神经元数量和pCREB蛋白表达减少(P<0.01).结论 鞘内注射吗啡加可乐定可抑制大鼠切口痛,这可能与其引起的脊髓背角pCREB的表达增加有关.     

p38MAPK信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在大鼠骨癌痛中的作用.方法 雌性sD大鼠56只,体重150～170 g,随机分为4组(n=14):生理盐水对照组(NS组)、骨癌痛组(BC组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和p38MAPK抑制剂组(SB203580组).骨髓腔内注射Walker256细胞悬液制备大鼠骨癌痛模型,注射后10 d,DMSO组和SB203580组分别鞘内注射5%二甲基亚砜和SB203580(10 μg)10 μl.各组随机取8只大鼠,于注射Walker256细胞悬液前、注射后1、3、5、7、10 d,鞘内给药后1、3、6、12、24 h时采用von Frey纤维丝测定术侧后爪机械缩足反射阈值(MWT);各组余6只大鼠鞘内给药后6 h时取L_(4,5)脊髓,采用免疫组化法检测脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)的表达水平.结果 骨髓腔内注射Walker256细胞悬液后7 d大鼠术侧后爪MWT开始降低,鞘内注射SB203580提高了MWT;骨髓腔内注射Walker256细胞悬液后脊髓背角pCREB表达上调,鞘内注射SB203580后脊髓背角pCREB表达下调.结论 鞘内注射SB203580可通过抑制脊髓背角pCREB的表达减轻骨癌痛;p38MAPK信号转导通路在骨癌痛中起重要作用.     

神经病理性疼痛大鼠鞘内注射SB203580的镇痛作用

目的 观察神经病理性疼痛大鼠鞘内注射p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580的镇痛作用,探讨p38MAPK信号转导通路在慢性神经病理性疼痛中的作用。方法雄性SD大鼠,体重220～250g,建立坐骨神经结扎性损伤（CCI）疼痛模型,第一部分40只CCI大鼠,随机分为5组,对照组、SB0．1μg组、SB0．5μg组、SB2．5μg组和SB5μg组,（n=8）,CCI后7d,鞘内注射2％二甲基亚砜或不同剂量的SB203580（0．1、0．5、2．5、5μg）10μl,在给药前和给药后0．5、3、6、12、24h用von Frey丝测定大鼠术侧后爪机械缩足反射阈值（MWT）;另外36只大鼠,随机分为6组（n=6）：Sham组、CCI组、DMSO组、SB0．1、0．5、5μg组,CCI后7d鞘内注射相应剂量SB203580 10μl,给药后6h取L4.5脊髓,用免疫组织化学方法检测脊髓背角磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（pCREB）的表达。结果CCI后大鼠产生了机械痛敏。鞘内注射SB203580剂量依赖性地提高了MWT。CCI后脊髓背角pCREB阳性神经元增加,鞘内注射SB0．5、5μg抑制了CCI引起的脊髓背角pCREB表达增加（P〈0．01）。结论鞘内注射SB203580能减轻CCI引起的痛敏,抑制脊髓背角CREB的磷酸化,p38MAPK信号通路参与慢性神经病理性疼痛。     

乳铁蛋白对神经病理性痛大鼠脊髓背角PKG活性的影响

目的 探讨乳铁蛋白对神经病理性痛大鼠脊髓背角cGMP依赖性蛋白激酶(PKG)活性的影响.方法 雄性SD大鼠32只,体重200～250 g,随机分为4组(n=8):假手术组仅分离坐骨神经,不结扎,鞘内注射生理盐水10μl+50%二甲基亚砜(DMSO)10μl;余3组采用结扎坐骨神经的方法制备大鼠神经病理性痛模型,神经病理性痛组鞘内注射生理盐水10μl+50%DMSO10μl;乳铁蛋白组鞘内注射乳铁蛋白100μg+50%DMS010μl;PKG抑制剂KT5823组鞘内注射乳铁蛋白100μg+KT582310μl.给药后180 min内每隔30 min以热刺激法测定大鼠缩爪潜伏期,随后处死大鼠取脊髓背角,采用免疫荧光法检测PKG活性,并行定量分析.结果 与神经病理性痛组和KT5823组相比,乳铁蛋白组缩爪潜伏期延长,乳铁蛋白组脊髓背角PKG活性升高(P＜0.05);神经病理性痛组与KT5823组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 乳铁蛋白可通过抑制脊髓背角PKG活性减轻大鼠神经病理性痛.     

鞘内注射KN-93对神经病理性疼痛大鼠热痛觉过敏和脊髓背角pCREB的影响

目的 观察KN-93对神经病理性疼痛大鼠热痛阈和脊髓背角神经元磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)的影响.方法 雌性Wistar大鼠32只随机均分为四组:A组,坐骨神经结扎损伤(CCI)+KN-93组,于术前15 min内注射KN-93 10 μl(50 μg溶于5%DMSO);B组,CCI+二甲基哑矾(DMSO)组.手术前15 min鞘内注射5%DMSO 10μl;C组,假手术+KN-93组,假于术前15 min鞘内注射KN-93 10μ1(50 μg溶于5%DMSO);D组,假于术+DMSO组,假手术前15 min鞘内注射DMSO10μI.各组分别在术前和术后3、7、10 d用热痛刺激仪测定各组大鼠术侧热痛敏实验潜伏期(PWL)及基础值.术后4 d和10 d各组随机处档死4只人鼠,取大鼠L4～5脊髓段进行免疫组织化学染色.对脊髓背角pCREB染色阳性神经元进行记数分析.结果 各组术后热痛敏阈值Lj术前基础础值比较均有不同程度减少(P＜0.05).术后3,7、10 d B组PWL值明显比其他三组减少(P＜0.05);术后7 d与10 d B组脊髓背角pCREB表达明、显强于其他三组(P＜0.05).结论 KN-93在脊髓水平介导神经病理性疼痛的作用与促进脊髓背角pCREB的释放有关.     

鞘内注射U0126对神经痛大鼠脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白表达的影响

目的观察鞘内单次注射U0126(有丝分裂素激活蛋白激酶激酶的阻滞剂)对大鼠脊髓背角磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响,探讨细胞外信号调节激酶(ERK)-CREB信号传递通路在神经痛中的作用。方法第一部分40只坐骨神经慢性损伤(CCI)模型大鼠随机分为5组(n=8):U1组、U2组、U3组和U4组分别鞘内注射0.2、0.5、1、和5μgU0126,C组(模型对照组)单次鞘内注射5%二甲基亚矾10μl,另取8只正常大鼠鞘内注射5.0μgU0126作空白对照组。采用vonFrey纤维丝及热痛刺激仪测定大鼠术侧后肢的机械性缩爪阈值和热刺激缩爪阈值。第二部分50只CCI模型大鼠随机分为5组(n=10):T1、T2、T3、T4组分别在鞘内注射5.0μgU0126后0.5、2、6、12h处死,CCI组为模型对照组,另取10只正常大鼠作对照组。采用免疫组织化学方法测定术侧脊髓背角pCREB免疫反应阳性神经元数量,采用免疫印记法测定脊髓背角pCREB表达。结果第一部分空白对照组注射U01265.0μg对机械性缩爪阈值和热刺激缩爪阈值没有影响。与C组比较,U1组注药后各时点及u2组注药后2、6、12、24h时大鼠术侧机械性刺激缩爪阈值及热刺激缩爪阈值差异无统计学意义(P>0.05),U2组注药后0.5h及U3组、U4组注药后0.5、2、6、12h时大鼠术侧机械性刺激缩爪阈值和热刺激缩爪阈值延长或增加(P     

脊髓背角COX-1和COX-2在p38MAPK诱发大鼠切口痛中的作用

目的 评价脊髓背角环氧化酶-1(COX-1)和COX-2在p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)诱发大鼠切口痛中的作用.方法 雄性SD大鼠,体重250～300 g,选择鞘内置管成功的大鼠112只,随机分为4组(n=28):假手术组(S组)、切口痛组(IP组)、二甲基亚砜组(DMSO组)和p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(SB203580组).S组鞘内注射0.9%生理盐水20 μl后,吸入异氟烷(呼气末浓度1.4%)min,不做手术;IP组术前10 min鞘内注射0.9%生理盐水20 μl;DMSO组和SB203580组术前10 min分别鞘内注射2%DMSO(SB203580的溶媒)10 μl和SB203580 30 μg(10 μl),然后用0.9%生理盐水10 μl冲洗导管.于鞘内置管后5 d,制备大鼠左后足切口痛模型.各组于术前1 h、术后2、3、6 h和1、2、3、5 d时,测定机械缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL).各组于术后2、3、6 h和1、2、3、5 d痛阈测定结束后各处死4只大鼠,采用Western blotting法测定脊髓背角COX-1和COX-2的表达水平.结果 与S组比较,IP组和DMSO组术后2 h～2 d时MWT降低,术后2 h～3 d时TWL缩短,IP组、DMSO组和SB203580组术后3 h～3 d脊髓背角COX-1表达上调(P<0.05);与IP组和DMSO组比较,SB203580组术后2 h～1 d时MWT升高,术后2 h～2 d时TWL延长,术后6 h～2 d脊髓背角COX-1表达下调(P<0.05);4组术后各时点脊髓背角COX-2表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 p38MAPK诱发大鼠切口痛与脊髓背角COX-1有关,与COX-2无关.     

T型钙通道在鞘内注射利多卡因致大鼠脊髓神经毒性中的作用

目的 评价T型钙通道在鞘内注射利多卡因致大鼠脊髓神经毒性中的作用.方法 鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠48只,体重230～ 270 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):二甲基亚砜组(D组)、10％利多卡因组(L组)、米贝地尔+利多卡因组(M组)和生理盐水+利多卡因组(N)组,另取12只大鼠作为正常对照组(C组).D组和L组分别鞘内注射二甲基亚砜和10％利多卡因20 μl,M组和N组分别鞘内注射米贝地尔200 μg/10μl和生理盐水10μl后鞘内注射10％利多卡因20μl.于鞘内给药前、给药后2、4、8、12 h、1、2、3、4和5 d(T0-9)时测定大鼠后肢机械缩足反应阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL).于T6时每组随机取4只大鼠处死取脊髓腰膨大,光镜下观察病理学结果.结果 与C组比较,D组各时点MWT和TWL差异无统计学意义(P＞0.05),L组和N组T1-8时MWT升高,T1-7时TWL延长,M组T1-6时MWT升高,TWL延长(P＜0.05);与L组和N组比较,M组T1-4时MWT降低,TWL缩短(P＜0.05).M组较L组和N组脊髓病理学损伤减轻.结论 T型钙通道参与了鞘内注射利多卡因致大鼠脊髓神经毒性的过程.     

鞘内注射右美托咪定对坐骨神经结扎损伤模型大鼠的镇痛作用

目的观察鞘内注射右美托咪定对坐骨神经结扎损伤(CCI)模型大鼠的镇痛作用。方法雄性SD大鼠36只,随机均分为假手术组(S组)、手术对照组(C组)和右美托咪定组(D组)。于CCI前、鞘内给药前和鞘内给药后1、2、3、4、5d时采用BME-410A型热痛刺激仪和37400-002型接触刺激仪,分别测定大鼠热刺激缩足反射潜伏期(TWL)和机械刺激缩足反射痛阈值(MWT)。于鞘内给药5d后取脊髓L4～L5节段,采用免疫组织化学法观察脊髓背角FLI-N(c-fos免疫阳性反应神经元)数目。结果与S组比较,给药前、给药后各时点C组和D组TWL和MET均明显降低(P<0.05);与C组比较,给药后各时点D组TWL延长和MWT均明显升高(P<0.05);与S组比较,C组脊髓背角FLI-N明显增多(P<0.05),与C组比较,D组脊髓背角FLI-N明显减少(P<0.05)。结论鞘内注射右美托咪定可减轻CCI引起的痛敏,可能与其抑制脊髓背角c-fos蛋白表达有关。     

鞘内注射GABA转运体-1抑制剂NO-711对CCI大鼠脊髓背角pERK表达的影响

目的 观察γ-氨基丁酸(GABA)转运体-1(GAT-1)抑制剂NO-711对坐骨神经慢性松结扎(OCI)大鼠机械和热痛阈及脊髓背角神经元磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)表达的影响,探讨NO-711在脊髓水平抗痛敏的机制.方法 雄性SD大鼠126只,随机均分为六组(n=21):CCI+NO-711 50μg组(N50组)、CCI+NO-711 100 μg组(N100组)、CCI+NO-711 200 μg组(N200组)、CCI+生理盐水组(CN组)、CCI组、假手术组(S组).CCI组和S组在术前、术后1、3、5、7、14、21 d测定大鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩腿潜伏期(TWL);其余各组大鼠在手术前5 d先进行鞘内置管,CCI手术后5 d鞘内注射不同剂量的NO-711或生理盐水,测定给药前、给药后30 min、1、2、4、8 h大鼠MWT、TWL及脊髓背角pERK表达的变化.结果 CCI组MWT和TWL术后3 d后各时点较术前2 d均降低和缩短、且相应时点均低于和短于S组(P＜0.01);与给药前比较,CN组大鼠各时点MWT和TWL,差异无统计学意义,而NO-711各剂量组大鼠给药后MWT和TWL均呈剂量依赖性增加;与CCI组和NS组比较,NO-711对脊髓背角pERK表达呈剂量依赖性抑制.结论 鞘内注射NO-711能明显抑制CCI大鼠机械痛敏和热痛敏及脊髓背角pERK表达,提示pERK介导NO-711在脊髓水平具有抗痛敏效应.     

Role of protein phosphatases in genitourinary cancers

The prevalence of genitourinary cancers has been increasing rapidly worldwide over the past 10 years. Advances in diagnosis and treatment have improved the oncological outcomes of patients with genitourinary cancer. However, the precise mechanisms of cancer development are largely unknown. Among various biological mechanisms, reversible phosphorylation is crucial for regulating the activities of many proteins in cancer cells. In contrast to protein kinases, the roles of cellular protein phosphatases have not been fully elucidated. However, emerging evidence suggests that various protein phosphatases are involved in genitourinary cancer development and have potential for cancer treatment. In the present review, we focus on recent progress in protein phosphatases regarding genitourinary cancers. We also explore the development of new strategies for cancer therapy using protein phosphatase and related molecules.     

酶制剂在蛋白质加工行业的应用

蛋白质的加工是食品行业中发展最快的领域之一，蛋白质加工的主要用酶是蛋白质水解酶，以蛋白质加工和研究的几个热点领域，如大豆分离蛋白、米蛋白、谷朊蛋白等为例，对酶制剂在蛋白质加工中的应用进展情况进行了回顾并对未来发展进行了展望。     

C-Reactive Protein in Semen and Serum of Men with Chronic Prostatitis

Qualitative determination of C-RP in semen and serum of men with and without prostatitis showed that, the protein is present mostly in semen only in cases with prostatitis and with a significantly higher percentage incidence in the infertile than the fertile.     

血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除

目的 建立血清蛋白质组学研究中高丰度蛋白的去除方法并观察其去除效果.方法 应用Agilent公司去除人14种高丰度蛋白的多重亲和排除系统(Human 14 Multiple Affinity RemovalSystem),去除血清中自蛋白、IgG和抗胰蛋白酶等14种高丰度蛋白,并用SDS-PAGE评价去除的效果.结果 建立血清中高丰度蛋白的去除方法,可去除白蛋白等14种高丰度蛋白.SDS-PAGE图谱中去除高丰度蛋白后条带更清晰,部分低丰度蛋白得以显现.结论 成功建立血清中高丰度蛋白的去除方法,可为下游的蛋白质组学技术奠定基础.

Abstract：

Objective To establish the method for removing high-abundance proteins in serum proteomics research and evaluate the removal efficiency of the high-abundance proteins. Methods Human 14 Multiple Affinity Removal System of Agilent Technologies was applied to eliminate the high-abundance proteins in serum, such as albumin, IgG and α-l-antitrypsin, etc. The efficiency of removal was evaluated by 1-dimensional sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Results The method for removing serum high-abundance proteins was established. The protein lanes of SDS-PAGE map were clearer and some low-abundance proteins were visualized after depletion. Conclusion An effective method of removing high-abundance proteins in serum is established, which provids basis for further strategies in proteomics research.     

Stimulation of Protein Synthesis in Pachytene Primary Spermatocytes from the Human Testis by Pyruvate

A sequential enzymatic incubation in collagenase and trypsin was carried out to yield a suspension of viable single cells from the seminiferous epithelium of adult human testis. The cell suspension predominantly consisted of pachytene primary spermatocytes (15%), round spermatids (32%), and condensing spermatids and residual bodies (21%). Human pachytene spermatocytes were isolated by unit gravity sedimentation using the methods originally developed for murine tissue. The spermatocyte-enriched fraction was 79% pure. When the effect of energy sources on protein synthesis by spermatocytes was examined, the highest rate of protein synthesis with pyruvate was found among four kinds of substrates added at a concentration of 10 mM. As shown with murine spermatocytes, the rate of protein synthesis by the human spermatocytes is probably regulated by pyruvate.     

风疹病毒结构蛋白的分子生物学研究进展

风疹病毒(RV)是TORCH综合征病原体之一,是重要的胎儿致畸因子,开展RV感染的筛查对育龄妇女有重要意义。目前,RV感染的筛查主要基于ELISA法,故用于ELISA检测的RV抗原的特异性十分重要。RV的抗原性主要与其3个结构蛋白——包膜糖蛋白E1和E2、衣壳蛋白C有关,为此,本文对这3种结构蛋白的结构特点、免疫学特性和重组蛋白的研究进展进行了综述。     

C-reactive protein in the monitoring of acute rejection after heart transplantation

Histological examination of endomyocardial biopsy (EMB) is the main technique for rejection surveillance after heart transplantation. This technique is elaborate, inconvenient for the patient, and not without complications. We prospectively analyzed whether the measurement of C-reactive protein (CRP), an acute phase protein that quickly rises when there is inflammation, can serve as a marker for immunological quiescence and as an indicator for withholding EMB. During a 6-month period, CRP was measured in all patients referred for EMB as part of the routine follow-up after heart transplantation. Acute rejection in patients with a follow-up of more than 1 year was rare (1/76). In the majority of cases, EMB was taken within the 1-year post-transplantation (170/246 = 69 %). In 71/170 biopsies (42 %), CRP was ≤ 1; in the other 99/170 (58 %), CRP was ≥ 2. When CRP was ≤ 1, acute rejection was diagnosed in 12/70 cases (17 %). In contrast, acute rejection was found in 28/99 cases (28 %) with CRP ≥ 2 (P = 0.1). Although CRP is elevated more often in the presence of acute rejection, its sensitivity does not allow CRP to replace the routine performance of EMB for monitoring rejection after heart transplantation. We did, however, find a prognostic significance with regard to the effect of rejection treatment: in all acute rejections with a CRP ≤ 3 (n = 11), steroids were effective. Received: 6 January 1998 Received after revision: 7 April 1998 Accepted: 20 April 1998     

肝细胞肝癌中Hedgehog信号通路效应蛋白的功能分析

目的 探讨Gli1、Gli3蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义.方法 免疫组化法检测36例肝细胞癌组织及其癌旁肝组织中Gli1、Gli3蛋白的表达,并与临床因素进行相关性分析.结果 在肝细胞癌组织及癌旁肝组织中Gli1的阳性表达率分别为75％和36.1％,Gli3的阳性表达率分别为58.3％和30.6％.Gli1和Gli3在肝细胞癌组织中的阳性表达率显著高于癌旁肝组织(P＜0.05).Gli1和Gli3两种蛋白的表达呈正相关(r=0.423,P＜0.05).Gli3的表达与临床指标(年龄、肿瘤大小、分化和淋巴结转移)无关.Gli1的表达与年龄、肿瘤大小无关,但与肿瘤分化程度和淋巴结转移相关(P＜0.05).结论 Gli1、Gli3蛋白在肝细胞癌组织中有较高的阳性表达率且具有相关性,且Gli1的表达率与肿瘤分化程度和淋巴结转移相关.检测Gli1、Gli3蛋白表达有助于肝细胞癌的诊断,可能作为判断肝细胞癌恶性程度及预后的指标.