抗流感嗜血杆菌外膜蛋白P6单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗流感嗜血杆菌外膜蛋白P6的单克隆抗体(mAb)并进行鉴定。方法以重组P6蛋白腹腔免疫BALB/c小鼠,常规细胞融合技术制备杂交瘤细胞株;间接ELISA筛选阳性细胞克隆并检测染色体数目;测定细胞培养上清的mAb效价及特异性,鉴定mAb的免疫球蛋白类、亚类及抗原结合表位。结果获得2株抗流感嗜血杆菌外膜蛋白P6的杂交瘤细胞株α2G3和γ2C4,染色体众数分别为103与95;间接ELISA结果证明细胞培养上清最高效价分别为1∶256和1∶512,未出现与其他种类细菌的交叉反应;α2G3为IgG2b、γ2C4为IgM,均为κ型;两者可能识别P6蛋白不同表位。结论成功制备了抗流感嗜血杆菌外膜蛋白P6的mAb。     

沙眼衣原体质粒蛋白pgp3单克隆抗体制备及鉴定

目的:原核表达沙眼衣原体(Ct)质粒分泌性蛋白pgp3,制备其单克隆抗体(mAbs)并鉴定其基本生物学特征。方法:构建pGEX-6p2-pgp3原核表达载体,在大肠杆菌中表达GST-pgp3融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,ELISA法筛选分泌抗pgp3蛋白mAbs的细胞株,对mAbs特异性、型别、类及亚类和效价进行鉴定。结果:GST-pgp3融合蛋白表达成功,且成功筛选出5株稳定分泌mAbs的杂交瘤细胞株,其中4株为分泌抗pgp3mAbs的杂交瘤细胞株(P1B3、P2A1、P2B6、P2C2),mAbs类型为IgG1/κ型,剩余1株为分泌抗GST蛋白的杂交瘤细胞株(P3B4),mAbs类型为IgG2b/κ型。交瘤细胞株P1B3、P2A1、P2B6、P2C2、P3B4培养上清中的mAbs效价分别为1∶6400、1∶3200、1∶12800、1∶6400和1∶6400。结论:成功制备出抗pgp3mAbs,为进一步研究Ct质粒蛋白pgp3功能及为Ct检测方法的建立奠定了基础。     

抗沙眼衣原体MIP蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的:制备小鼠抗沙眼衣原体MIP蛋白单克隆抗体并鉴定其生物学特性。方法:重组MIP蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,间接ELISA法筛选阳性克隆并进行有限稀释克隆化,建立分泌抗MIP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进一步采用ELISA法鉴定单克隆抗体的效价、类别及抗MIP蛋白特异性,IFA法鉴定单克隆抗体的衣原体种属特异性及中和能力。结果:建立了2株能稳定分泌抗MIP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1R6H6、2L9D2),ELISA法测得培养上清效价均为1:1 600,免疫球蛋白类型分别为IgG2a和IgG1;2株单克隆抗体不仅能特异性的识别MIP重组蛋白,而且能特异性识别沙眼衣原体血清型A、D、L2所编码的内源性MIP蛋白,但不识别其他衣原体优势蛋白及MoPn、AR39和6BC;体外中和试验表明,2株单克隆抗体均能有效中和衣原体的感染性。结论:获得了有活性的能特异性识别MIP蛋白的单克隆抗体,为深入研究MIP蛋白的结构和功能奠定了基础。     

泌尿生殖道沙眼衣原体检测报告

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)是引起性传播疾病的最常见病原体之一,由于该病原体无症状感染的存在和以往检测手段的匮乏,很多情况下只能用非淋菌性尿道炎(NGU)的年发病率来估计衣原体感染的发病情况.在很多国家,淋病的发病率逐渐下降,而沙眼衣原体感染的发病率逐年上升,全世界每年报道有5000万人发病,且主要集中在发达国家.美国估计每年有400万人发病,仅1993年女性就报道有29.22万人发病,比淋病多70%[1].在我国,目前尚无全国性的统计数字,各地均有不同的报告,总体认为泌尿生殖道CT感染呈上升趋势[2].为了解乌鲁木齐泌尿生殖道CT的感染水平,我们对2001年1月～2003年12月间我院门诊检测的18450例CT结果进行了统计和分析,现简要报告如下.     

泌尿生殖道支原体、衣原体感染的研究

支原体、衣原体虽可存在于正常人群中 ,但在泌尿生殖道及附件的致病作用愈来愈受到人们的重视。自 195 4年shepard首先从非淋病性尿道炎分泌物中分离解脲脲原体以来 ,相继得到许多学者的证实。衣原体引起泌尿生殖系统感染的发病率已超出淋病感染 ,成为性传播性疾病中最多见的一种病原体我们收集泌尿生殖道炎症、不孕症等方面标本 10 2 0份 ,进行支原体、衣原体分离 ,现就此类微生物的检查情况以及在各种疾病之间的分布报道如下 :1　材料与方法1.1　检测对象　 10 2 0例门诊患者 ,其中非淋病性尿道炎2 12例 ,不孕症 2 2 2例 ,前列腺炎 112例 …     

抗金属硫蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

抗金属硫蛋白单克隆抗体的制备与鉴定张亨山②赵金垣张振龙③王春荣③刘采云③陈晓龙③刘宏马东星史德林③倪道明③黄文萱③（北京医科大学第三附属医院职业病研究中心，北京１０００８３）金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）是一种广泛分布、富含巯基的金...     

PC-1蛋白单克隆抗体制备和鉴定

为获得高效价PC-1蛋白的鼠单克隆抗体(mAb),用于PC-1功能的实验,采用纯化的PC-1蛋白与GST的融合蛋白(GST-PC-1)为抗原,免疫小鼠和骨髓瘤细胞进行细胞融合,用直接ELISA法进行克隆化筛选,mAb的染色体分析及亚类鉴定及初步应用.结果表明细胞融合和ELISA筛选后,获得2株抗鼠PC.1蛋白mAb,两株PC-1 mAb效价分别为1:25600,1:13600,抗体亚型为IgG1,Western blot证实其特异性识别PC-1蛋白.该mAb可以用于测定PC-1蛋白.     

pICln蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备特异性的抗plCln蛋白的单克隆抗体(McAb),为plCln的纯化及检测等提供必要的工具.方法:以pICln的合成肽为免疫原,对BALB/c小鼠注射免疫,将免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合,用显微镜下挑选单个克隆的克隆化方法克隆化,用间接ELISA检测法进行筛选.单抗的效价、亚型及特异性用ELISA、免疫双向扩散实验和Western blot等检测.结果:获得了稳定的分泌型杂交瘤细胞株大2B7和4A3,2B7培养上清液单抗效价为1:64,属IgGl亚型,其腹水抗体效价及纯化抗体的效价分别为1:1.28×104、1:6.4×103,Westem blot及免疫耗竭实验呈现一条约40 kD)的特异性带,免疫组织化学染色显示在细胞核和细胞质中呈现阳性反应.结论:本次制备的单抗具有特异性、高效价,可应用于plCln蛋白的纯化及检测等研究.     

人胎盘层粘连蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得能特异性识别人层粘连蛋白（hLN）的单克隆抗体（McAb）。方法用纯化的人层粘连蛋白（hLN）作抗原免疫Balb/C小鼠,以细胞融合、酶联免疫吸附实验（ELISA）筛选和克隆化技术获得抗hLN的杂交瘤细胞株;用生物学方法鉴定杂交瘤细胞,用免疫学方法鉴定McAb的特异性。结果获得4株稳定分泌抗人LN的杂交瘤细胞株（2A1、3B5、2C4、4D1）,培养上清的ELISA效价分别为：1∶512、1∶1024、1∶512、1∶256;腹水效价分别为：1×10^6、1×10^7、1×10^6、1×10^5;采用ELISA相加法表明2A1、4D1与3B5、2C4识别的hLN上的抗原决定簇和识别的不同,4株单抗均属实IgG。结论成功建立了4株稳定分泌抗人LNMcAb的杂交瘤细胞株,它们分别识别hLN上2个不同的抗原位点,有望作为hLN定量检测的特异性抗体。     

沙眼衣原体血清型特异性和血清组特异性主要外膜蛋白决定簇的保护性单克隆抗体

作者介绍了表现有沙眼衣原体血清型特异性(血清型A、B-Ba 或C)和血清组特异性(B、中间或C 血清组)的单克隆抗体的制造和定性。衣原体在HeLa229细胞中生长,原生小体(EB)用Renografin 密度梯度离心纯化。用活EB 为抗原作斑点免疫印迹测定筛选杂交瘤上清。用Western 印迹筛选证实其与主要外膜蛋白(MOMP)结合时为阳性上清。选取在两种测定中表现免疫反应性的单克隆抗体(McAb)。然后测定McAb 中和衣原体对小鼠毒性的能力。将5μ1McAb(100μg蛋白)与悬浮在1ml 蔗糖-磷酸盐-谷氨酸     

SARS冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备SARS冠状病毒(SARS-CoV)N蛋白特异性单克隆抗体(McAb)，为SARS的快速诊断及致病机制的研究提供实验材料。方法 用纯化的重组SARS-CoVN蛋白免疫BALB/c小鼠，经细胞融合和亚克隆后获得分泌针对N蛋白的杂交瘤细胞株，用Western blot和间接免疫荧光法检测这些细胞株分泌的单克隆抗体特异性，并将N蛋白分3段表达初步定位单克隆抗体识别表位所在区域。结果 通过细胞融合和3轮克隆化，筛选出分泌抗N蛋白的6个杂交瘤细胞株。Western blot及免疫荧光显示，获得的McAb可与SARS-CoVN蛋白及SARS-CoV发生特异性反应，有4个细胞株分泌的抗体的识别位点位于N蛋白N端，2个位于C端。结论 获得了SARS-CoV特异性单克隆抗体并进行了初步定位，可用于SARS的早期诊断及致病机制研究。     

小鼠抗天花粉蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

<正> 天花粉蛋白Tian Hua Fen,THF或Trichosanthin Protein是从葫芦科植物栝楼根Trichosanthes Kirilowii Maxim中提取的有效引产成份,对所有滋养叶细胞来源的疾病也有治疗作用。近年来还发现该蛋白     

抗人F蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

Ｆ蛋白是存在于哺乳动物肝细胞质中的一种水溶性不稳定的单链蛋白质,相对分子质量（Ｍｒ）为４４０００。正常人肝组织中大约含Ｆ蛋白２７４ｍｇ／ｇ〔１，２〕,而血清中仅含０．２ｍｇ／Ｌ,提示血清Ｆ蛋白作为判断肝损伤程度的可能性。为对Ｆ蛋白进行深入研究,并提高对其检测的灵敏度,１９９５年以来,我们先后制备了３株抗人Ｆ蛋白的单克隆抗体（ｍＡｂ）,并进行了初步鉴定。１材料和方法１．１材料人Ｆ蛋白抗原的制备〔３〕：取肝外伤手术切除的新鲜肝组织５０ｇ,剪成约５ｍｍ３的组织碎块后,置于含有１ｇ／ＬＩＶ型胶原酶（Ｓｉｇｍａ）…     

小鼠肝炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

[目的]制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb).[方法]以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb的杂交瘤细胞系.并用Western blot和IFA方法对所获得的mAb进行鉴定.[结果]共获得4株稳定分泌抗N蛋白mAb的杂交瘤细胞系,其亚类鉴定2株为IgG2a,1株为IgG2b,1株为IgG1,轻链均为k型.经鉴定4株mAb均能与重组N蛋白发生特异性反应.[结论]成功获得了特异性抗MHV N蛋白的mAb,为进一步研究N蛋白的结构功能及建立诊断学方法奠定了基础.     

红细胞分化相关蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

应用杂交瘤技术和电泳迁移超滞留技术筛选和制备红细胞分化相关蛋白单克隆抗体，以阐明此类蛋白的生物学功能。用杂交瘤技术制备了５８０株针对终末分化期红细胞，包括人胚肝中，晚幼红细胞和氯高铁血红素诱导分化的人红白血病细胞核蛋白的单克隆抗体。     

孕酮单克隆抗体的制备与鉴定

孕酮是一个重要的女性激素,在生殖周期及早娠维持中起重要的作用。利用杂交瘤的技术制备孕酮单克隆抗体不仅将为孕酮的免疫测定法提供大量高特异性的匀质抗体,而将有助于进一步研究孕酮在生殖过程中的作用。并将促进我们了解甾体与大分子蛋白作用时结构与功能的关系。 我们用孕酮牛血清白蛋白做为抗原,免疫BALB/C小鼠。用聚乙二醇1500将脾细胞与NS_1细胞融合。在HAT选择性培养液培养约20天后。76％的孔有杂交瘤生