3种温病治法对温病湿热证模型血脂影响的对比研究

目的：比较3种治法对温病湿热证血脂的影响，探讨温病湿热证中“湿”性致病因子的生化物质基础，探讨清热祛湿法治疗温病湿热证的作用机理。方法：采用复合因素复制新西兰兔温病湿热证模型，设清热祛湿法组（A组），清热解毒法组（B组），宣气化湿法组（C组），湿热证模型组和正常对照组，观察各组症状变化，同时检测血脂4项（TC、TG、HDL-C、LDL-C）变化。结果：A组症状表现相对较轻，TC、TG、LDL-C较湿热证模型组显著降低（P〈0．01），HDL-C升高明显（P〈0．01）。B组TG降低不显著，B组、C组HDL-C升高不明显。结论：湿热证中“湿”性致病因子的生化物质基础与血脂代谢异常有相关性，特别是与TG升高密切相关；清热祛湿法组较其它两组有更好的调脂效果。     

小鼠肝炎病毒温病湿热证模型的探讨

目的:研究拟以MHV-A59和大肠杆菌作为生物致病因子,建立两种小鼠温病湿热证动物模型,通过对比探讨小鼠肝炎病毒温病湿热证模型可行性。方法:动物随机分为3组:正常组、模型组(肥甘饮食+湿热外环境+MHV-A59造模)、肠菌组(肥甘饮食+湿热外环境+大肠杆菌造模),检测小鼠血清TG、TNF-α水平及肝组织病理切片,观察动物症状及体征。结果:与正常组比较,两种温病湿热证模型组小鼠血清TG及TNF-α水平明显升高(P<0.01),两组造模动物均不同程度出现了发热、疲倦、纳呆、腹泻、体重减少、毛发无泽等症状。结论:以MHV-A59作为生物致病因子,结合肥甘饮食及湿热外环境因素构建的动物模型,可以作为温病湿热证动物模型之一,也是一种新的病证结合模型。     

3种温病治法对温病湿热证模型血脂影响的对比研究

目的:比较3种治法对温病湿热证血脂的影响,探讨温病湿热证中“湿”性致病因子的生化物质基础,探讨清热祛湿法治疗温病湿热证的作用机理。方法:采用复合因素复制新西兰兔温病湿热证模型,设清热祛湿法组(A组),清热解毒法组(B组),宣气化湿法组(C组),湿热证模型组和正常对照组,观察各组症状变化,同时检测血脂4项(TC、TG、HDL-C、LDL-C)变化。结果:A组症状表现相对较轻,TC、TG、LDL-C较湿热证模型组显著降低(P<0.01),HDL-C升高明显(P<0.01)。B组TG降低不显著,B组、C组HDL-C升高不明显。结论:湿热证中“湿”性致病因子的生化物质基础与血脂代谢异常有相关性,特别是与TG升高密切相关;清热祛湿法组较其它两组有更好的调脂效果。     

温病湿热证湿热量化的相关性实验研究

目的;为探讨温病湿热证湿热量化的实验方法,在以往研究基础上,筛选出相关性强的量化指标。方法;通过复制湿热证动物模型,采用Bradford方法测定水通道蛋白2(AQP2)含量,放免法检测内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP),一步双抗夹心酶联免疫法检测粒细胞集落刺激因子(G-CSF),比色法检测中分子(MMS)和巯基(R-SH)物质等。结果;湿热证模型组AQP2水平较正常组明显降低,用清香散治疗后AQP2水平基本恢复正常,与正常组接近。湿热模型组ET水平较正常对照组明显升高,而CGRP较正常组降低(P<0.01)。湿热证模型大鼠血中G-CSF、MMS升高,而R-SH水平降低,经清香散治疗1周后.大鼠血中G-CSF、MMS及R-SH基本恢复正常,模型对照组G-CSF阳性率升高。结论;AQP2与ET、CGRP、G-CSF、R-SH、MMS分别可作为“湿”偏重,“热”偏重,“湿热病因”的相关性量化指标。这些技术指标对湿热定性、量化,清热祛湿药物的研究以及湿热证“证”本质的深入探讨有重要意义。     

温病湿热证模型的研究思路

标准化的动物模型的复制是保证中医药现代化研究结果的真实性、可靠性、重现性、创新性、先进性及科学性的基本前提.温病湿热证是湿热类温病的基本证型,因此建立温病湿热证动物模型对于研究湿热类温病十分重要.笔者将温病湿热证的模型进行了归纳,关于未来进一步研究温病湿热证模型提出了几点思路现介绍如下.     

温病湿热证大鼠模型复制的条件探索

目的设置不同的造模(湿热环境)时间和不同的大肠埃希氏菌灌胃剂量复制温病湿热证大鼠模型,评价模型质量,探讨造模条件对模型质量的影响。方法 80只SD大鼠,随机分为正常对照组(A组)、致病菌低剂量组(B、C、D组)、致病菌中剂量组(E、F、G组)、致病菌高剂量组(H、I、J组),每个剂量组下设置3个不同造模(湿热环境)时间,B、E、H组造模21 d,C、F、I组造模25 d,D、G、J组造模28 d。参照多因素复合造模方法建立湿热证大鼠模型,比较分析大鼠体温、体质量、食量、饮水量、症状及舌苔等指标的变化,综合评价模型的质量。结果在维持灌菌后体温升高的严重程度和持续时间方面,致病菌低剂量组(B、C、D组)表现最好;在维持造模后的低饮食量和低饮水量方面,28 d造模组(D、G、J组)严重程度较高;在舌苔出现率和症状的严重程度及稳定性方面28 d造模组仍然具有明显的优势,症状出现的齐同性则为D、I、J组最好。综合评价提示:D组大鼠各项证候指标出现率、严重程度高,稳定性、齐同性好,模型质量最优。结论采用延长湿热环境造模时间至28 d及较低剂量的致病微生物灌胃的造模条件,可复制出各项症状体征明显、稳定性、齐同性好的温病湿热证大鼠模型。     

3种温病治法对温病湿热证模型血浆ETX血清TNF-α IL-1β影响的对比研究

目的:比较3种治法对温病湿热证血浆ETX(Endotoxin)、血清TNF-α(Tumor necrosis factor-a)、IL-1β(Inter Leuk in-1β)的影响,探讨清热祛湿法治疗温病湿热证的作用机理。方法:采用复合因素复制新西兰兔温病湿热证模型,设清热祛湿法组(A组),清热解毒法组(B组),宣气化湿法组(C组),湿热证模型组和正常对照组,观察各组症状变化,同时检测血浆ETX、血清TNF-α、IL-1β的变化。结果:A组症状表现相对较轻,湿热证模型组ETX含量均较正常对照组显著增高(P<0.01)。各治疗组ETX水平与湿热证模型组比较均无显著差别(P>0.05)。湿热证模型组TNF-α、IL-1β含量均较正常对照组显著增高(P<0.01)。清热祛湿法组与清热解毒法组TNF-α、IL-1β含量均较湿热证模型组显著降低(P<0.01)。结论:3个治疗组与模型对照组血浆内毒素水平并无显著差异,且批间变异较大,提示3组药物可能无直接拮抗内毒素活性或直接清除血浆内毒素的作用。清热祛湿法治疗温病湿热证的机理可能与减弱内毒素介导TNF-α、IL-1β有关。     

3种温病治法对温病湿热证模型血浆ETX血清TNF-α IL-1β影响的对比研究

目的：比较3种治法对温病湿热证血浆ETX（Endotoxin）、血清TNF-α（Tumor necrosis factor-α）、IL-1β（Inter Leuldn-1β）的影响，探讨清热祛湿法治疗温病湿热证的作用机理。方法：采用复合因素复制新西兰兔温病湿热证模型，设清热祛湿法组（A组），清热解毒法组（B组），宣气化湿法组（C组），湿热证模型组和正常对照组，观察各组症状变化，同时检测血浆ETX、血清TNF-α、IL-1β的变化。结果：A组症状表现相对较轻，湿热证模型组ETX含量均较正常对照组显著增高（P〈0．01）。各治疗组ETX水平与湿热证模型组比较均无显著差别（P〉0．05）。湿热证模型组．INF-α、IL-1β含量均较正常对照组显著增高（P〈0．01）。清热祛湿法组与清热解毒法组TNF-α、IL-1β含量均较湿热证模型组显著降低（P〈0．01）。结论：3个治疗组与模型对照组血浆内毒素水平并无显著差异，且批间变异较大，提示3组药物可能无直接拮抗内毒素活性或直接清除血浆内毒素的作用。清热祛湿法治疗湿病湿热证的机理可能与减弱内毒素介导TNF-α、IL-1β有关。     

岭南温病湿热证小鼠模型的建立及肠道菌群的研究分析

目的:通过建立不同病机引起的两种湿热模型,探索湿热证的肠道菌群组成变化规律。方法:将BALB/c小鼠分成正常组、LPS组、模型A组、模型B组4组;模型A、B组给于高蛋白饲料饲养、20%蔗糖水饮用,置于设定温度为(35±0.15)℃,湿度为80%~90%的人工气候箱中模拟外湿热环境,模型A组给于花生油脂+白酒灌胃、模型B组给于20%番泻叶药液+白酒灌胃42 d致脾虚;于造模56 d LPS组、模型A、B组给于1mg/kg剂量的脂多糖LPS工作液腹腔注射完成湿热模型造模,于注射LPS工作液后6 h取材进行相关指标检测。结果:模型A、B组均出现了湿热证类似的临床表现、体征和相关炎症因子的改变,干扰素γ(INF-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平均出现升高;两种湿热模型肠道菌群大肠杆菌属、肠球菌属、梭菌属均出现不同程度的含量增加;双歧杆菌属、乳杆菌属在模型A组中含量增加而在模型B组中含量减少。结论:温病湿热证存在肠道菌群结构失调,湿热证模型出现大肠杆菌属、肠球菌属、梭菌属等条件致病菌过度增长;而双歧杆菌属、乳杆菌属等益生菌的含量受湿热发病机制的影响出现含量表达的差异,脾阳虚为内湿基础的湿热证双歧杆菌属、乳杆菌属含量减少,湿邪困扰为内湿基础的湿热证双歧杆菌属、乳杆菌属含量增多。     

清热化湿法对温病湿热证大鼠MTL GAS影响的研究

目的:采用复合因素造模法建立大鼠湿热证模型。在此基础上研究清热化湿法(复合治法)对该湿热证模型的影响。并同时进行清热解毒(分治法)、宣气化湿法(分治法)的对比研究,探讨清热化湿等法治疗大鼠湿热证模型胃肠动力紊乱的机理。方法:观察清热化湿法对温病湿热模型大鼠的影响,采用肥甘饮食、高温高湿及外加感染鼠伤寒杆菌等复合因素模拟建立温病湿热证大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组、湿热模型组、清热化湿(A)法治疗组、清热解毒(B)法治疗组、宣气化湿(C)法治疗组、阳性对照(D)治疗组。放免法检测各组大鼠血及胃窦组织中胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)水平。结果:清热化湿法具有增加湿热模型大鼠血及胃窦组织中MTL、GAS含量的作用。     

清热化湿法对温病湿热证大鼠胃窦SP表达的影响

1 实验材料 1.1 动物 清洁级Wistar雄性大鼠,体重200g±20g,购于华中科技大学同济医学院实验动物学部,动物合格证号TJLA-2004,107.肥甘饮食:以常规饲料加20%油脂、10%蜂蜜配制.     

藏茵陈对MHV - A59病毒感染湿热证小鼠肝脏损伤的干预作用

目的 应用藏茵陈对MHV - A59病毒感染湿热证小鼠模型进行治疗,通过实验初步探讨该药对小鼠病毒性肝炎的干预机制.方法 将32只小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组和藏茵陈组.分别在造模前后测定小鼠的肛温和体重,并在造模后分别用试剂盒测定小鼠血清肝功能两项、小鼠肝匀浆MDA含量和SOD活性,通过HE染色后光镜观察小鼠肝脏病理变化.结果 与正常组相比,模型组的各项指标均有所改变,差异有显著统计学意义（P＜0.01）,肝脏病理切片显示损害明显;用药后与模型组比较,藏茵陈组ALT、AST及MDA含量均有所下降,超氧化物歧化酶(SOD)活性有所升高,各指标两组间差异均有统计学意义(P＜0.01),而两药物组的肛温有回归正常范围趋势,但无统计学意义,藏茵陈组小鼠体重与模型组相比有所下降,差异有统计学意义（P=0.013）;两药物组的肝脏病理切片结果显示均有所改善,以藏茵陈组较明显.结论 初步判断藏茵陈对于MHV - A59病毒感染湿热证的治疗主要通过抗病毒、抗脂质过氧化发挥作用,但用药后小鼠体重有所下降,可能与藏茵陈的苦寒导致脾胃功能损伤有关,可继续探索藏茵陈的最佳用药配伍及用药方式.     

蒿芩清胆汤对温病湿热证动物模型影响的实验研究

目的:探讨蒿芩清胆汤对温病湿热证的作用机理。方法:利用饮食因素、气候环境因素与生物因子因素对大鼠进行湿热造模,观察蒿芩清胆汤对温病湿热证的药效学作用。结果:蒿芩清胆汤能显著降低湿热证大鼠的体温,增加其饮食饮水量,对血液流变学有显著改善作用。结论:蒿芩清胆汤对温病湿热证大鼠有明显的影响作用。     

温病湿热证大鼠模型LBPmRNA、NF—κBp动态表达的对比研究

目的：通过多因素复合造模方法，观察模型大鼠内毒素特异性爱体LBPmRNA及NF—κBp65表达变化，探讨湿热致病机制。方法：分为正常组、湿热模型组（高脂＋高温高湿＋大肠杆菌）、模型对照组（高脂＋高温高湿）；采用逆转录-聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测肝巨噬细胞LBPmRNA，免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活化。结果：在感染6小时、12小时、24小时等不同时相点湿热模型组LBPmRNA、NF-κB表达与模型对照组、正常组比较均有非常显著增强；湿热模型组在6小时、12小时．24小时等不同时相点LBPmRNA、NF-κB表达逐渐增强。之间比较均有显著性差异。结论：靶细胞LBPmRNA适量表达及NF—κB激活既是湿热病证的主要致病机理，又是湿热病证的相关性指标。     

2种不同生物致病因子致温病湿热证动物模型分子免疫学特征研究

目的：复制温病湿热证模型,比较2种不同生物致病因子所致温病湿热证动物模型的分子免疫学特征。方法：结合高脂饮食及湿热环境建立MHV—A59病毒、大肠杆菌感染导致的温病湿热证小鼠模型,将24只BALB／c小鼠随机分为4组各6只,正常组（A）;单纯湿热因素组,即湿热组（13）;病毒感染湿热组,即湿热加病毒组（C）;细菌感染湿热组,即湿热加肠菌组（D）,检测相关免疫及炎症指标。结果：造模后C、D组小鼠肛温较造模前升高,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）。造模后A、B组小鼠体重较造模前增加（P〈0．05）;而C组小鼠体重较造模前降低（P〈0．01）。造模后c组外周血CD8’值较A、B、D组降低（P〈0．01）;CD4^＋／CD8^＋比值升高（P〈0．05）。造模后C组肝脏组织核因子KB（NF_KB）表达较A、B、D组升高（P〈0．01）。造模后C、D组血清转化生长因子-α（TNF—α水平升高,与A、B组比较,差异有非常显著性意义（P〈0．01）;C组TNF—α水平升高较D组更为显著（P〈0．01）。造模后B、C、D组吖干扰素（IFN-1）水平较A组有不同程度的升高,差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05,P〈0．01）。造模后C、D组IFN-1／白细胞介素-4（IL-4）比值较A组升高,差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05,P〈0．01）。造模后B、D组小鼠胃黏膜水通道蛋白4（AQP4）表达OD值升高,与A、C组比较,差异有非常显著性意义（P〈0．01）。结论：病毒作为特殊生物致病因子引入温病湿热证模型的构建,是一种新的病证结合模型;其免疫学特征是以病原微生物感染导致的系列免疫炎性反应为主。     

两种温病湿热证模型的TNF-α与TG水平研究

目的:通过对小鼠肝炎病毒(MHV-A59毒株)与大肠杆菌导致的两种小鼠温病湿热证模型TNF-α与TG水平的研究,从炎症因子和血脂水平的角度评价两种温病湿热模型特征;方法:将18只小鼠随机分为正常组、病毒组、肠菌组,造模成功后分别取小鼠血液和提取血清,用ELISA法和磷酸甘油氧化法分别测试各组的TNF-α与TG水平,数据分析采用单因素方差分析,组间用q检验,两组间采用t检验,P0.05为显著性差异,P0.01为非常显著性差异。结果:病毒组与肠菌组血清TNF-α水平明显增高,且病毒组比肠菌组升高显著;两种模型小鼠TG水平虽有升高但组间变化无差别。结论:"内湿"的形成可能主要与肥甘饮食、湿热外环境有关,MHV-A59作为生物致病因子所致的湿热证模型炎症反应更加剧烈。     

温病湿热证大鼠模型脂质代谢变化的对比研究

目的探讨多因素复合造模方法对模型大鼠脂质代谢指标HDL—c、LDL—c的影响。方法分为正常组、湿热模型组（高脂＋高温高湿＋大肠杆菌）、模型对照组（普食＋高温高湿＋大肠杆菌）；运用直接法测定HDL—c、LDL—c的变化。结果湿热模型组血浆HDL-c、LDL—c含量均非常显著增高（P〈0．01）；对照组LDL—c非常显著的增高（P〈0．01）；模型组与对照组比较：血浆HDL显著增高（P〈0．05）。结论不论是否高脂饮食，均有脂质代谢异常，说明了血脂代谢异常是湿热证模型的病理基础之一，明确了高脂饮食不是湿热证形成的重要因素。     

清热化湿法对温病湿热证大鼠MTL GAS影响的研究

目的；采用复合因素造模法建立大鼠湿热证模型。在此基础上研究清热化湿法（复合治法）对该湿热证模型的影响。并同时进行清热解毒（分治法）、宣气化湿法（分治法）的对比研究，探讨清热化湿等法治疗大鼠湿热证模型胃肠动力紊乱的机理。方法：观察清热化湿法对温病湿热模型大鼠的影响，采用肥甘饮食、高温高湿及外加感染鼠伤寒杆菌等复合因素模拟建立温病湿热证大鼠模型。将大鼠随机分为正常对照组、湿热模型组、清热化湿（A）法治疗组、清热解毒（B）法治疗组、宣气化湿（C）法治疗组、阳性对照（D）治疗组。放免法检测各组大鼠血及胃窦组织中胃动素（MTL）、胃泌素（GAS）水平。结果：清热化湿法具有增加湿热模型大鼠血及胃窭组织中MTL、GAS含量的作用。     

蒿芩清胆汤对流感病毒性湿热证NF-кB表达的影响

目的:应用蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热症模型进行治疗,并探索其中可能存在信号通路,为评价其作用打下实验基础。方法:将小鼠随机分为正常组、病毒组(单纯病毒感染)、模型组(高脂饮食+湿热环境+病毒感染)、阳性药物组(模型组+病毒唑)、蒿芩清胆汤组(模型组+蒿芩清胆汤)。造模成功后取小鼠肺组织,用免疫组织化学法检测肺组织切片NF-κB阳性光密度值;提取小鼠腹腔巨噬细胞用RT-PCR的方法检测其NF-κBmRNA的表达,测定各组小鼠肺指数并计算肺指数抑制率,再进行比较。结果与模型组相比,蒿芩清胆汤组的小鼠肺病变程度明显好转,肺组织NF-κB的阳性表达及腹腔巨噬细胞NF-κBmRNA的表达均明显降低,差异具有显著性(P<0.05)。结论:蒿芩清胆汤对流感病毒性肺炎湿热症疗效显著,而它是通过下调NF-κB的表达来干预肺泡内炎症反应,减少肺组织损伤从而达到治疗的目的。     

清肾颗粒对慢性肾功能衰竭湿热证患者NF-κB信号通路的干预作用

目的观察清肾颗粒对慢性肾功能衰竭(chronic renal failure,CRF)湿热证患者核转录因子(NF-κB)信号转导通路中NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)表达的影响,探讨清肾颗粒治疗CRF患者的作用机制。方法 68例CRF湿热证患者,按随机数字表法分为对照组和治疗组,每组34例,实际完成63例,治疗组32例,对照组31例,并设正常组20名。治疗组与对照组均给予西医基础治疗及中药保留灌肠,治疗组加服清肾颗粒,每日3次,每次1袋,疗程均为8周。观察患者临床疗效、治疗前后血肌酐(SCr)、肾小球滤过率估算值(e GFR)以及外周血中NF-κB p65、p-IκBα的水平变化及其与正常组比较。结果治疗组临床疗效和中医证候疗效总有效率为84.38%(27/32)和81.25%(26/32),优于对照组的54.84%(17/31)和51.61%(16/31),差异有统计学意义(P0.01)。与本组治疗前比较,治疗后治疗组SCr水平明显下降(P0.01),e GFR水平明显升高(P0.01),且优于对照组同期(P0.05)。与正常组比较,治疗组和对照组治疗前NF-κB p65、p-IκBα水平升高(P0.01);与本组治疗前比较,治疗后治疗组NF-κB p65、p-IκBα水平均明显降低(P0.01),且均优于对照组同期(P0.01)。结论清肾颗粒能改善CRF湿热证患者的临床症状,降低SCr、升高e GFR水平,具有保护肾功能的作用,其作用机制可能与降低外周血中NF-κB p65、p-IκBα水平有关。