缺氧诱导离体心肌细胞凋亡的动物实验研究

目的：建立一种新的SD乳鼠心肌细胞的缺氧模型,以探讨心肌细胞缺氧损伤后的细胞凋亡及其时序分布特点。方法：SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为5组：对照组,缺氧12h组(112h)、缺氧24h组(14h),缺氧48h组(148h)以及缺氧72h组(172h)。应用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳、透射电镜等多种手段检测心肌细胞凋亡的改变。结果：在本实验的心肌细胞缺氧模型中,流式细胞仪检测发现,心肌细胞缺氧后的细胞凋亡百分率迅速增高。琼脂糖凝胶电泳分析。心肌细胞在缺氧48h、72h时均出现了凋亡特异性的“梯状”电泳带。结论：本实验培养乳鼠心肌细胞缺氧模型可导致心肌细胞凋亡,凋亡程度和心肌细胞缺氧时间有关,并可导致和在体心肌缺血相似的心肌损伤。细胞凋亡在心肌缺氧心肌细胞死亡中起重要作用。     

缺血再灌注损伤诱导大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨大鼠心肌缺血再灌注后不同时相心肌细胞凋亡情况及其与缺血再灌注的关系，并进一步探讨心肌细胞凋亡在心肌缺血再灌注损伤中的可能作用。方法：64只SD大鼠随机分为5组：对照组（假手术45min、105min、165min、225min，各时间点n=8），心肌缺血45min组（I15min,n=8），心肌缺血45min后再灌注1h、2h、3h组（I／R1h、I／R2h、I／R3h，各时间点n=8），分别在各时点处死大鼠取材。应用DNA琼脂糖凝胶电泳分析与透射电镜的检测心肌细胞凋亡的改变。结果：DNA琼脂糖电泳分析显示，I／R2h组、I／R3h组出现凋亡特征性“梯状电泳带”而对照组、L45min组及I／R1h组均未见凋亡带谱。透射电镜检测显示，对照组、L45min组、I／R1h组均未见到凋亡的心肌细胞，I／R2h组、I／R3h组心肌细胞染色质凝聚、边集、核膜完整，显示出典型的凋亡特征。结论：心肌缺血再灌注可导致心肌细胞凋亡，心肌细胞凋亡因缺血再灌注不同时相而变化；心肌细胞凋亡在大鼠心肌缺血再灌注损伤的病理生理过程中起重要作用；大鼠心肌缺血后再灌注可促发或加速心肌细胞凋亡。     

SD乳鼠离体骨骼肌成肌细胞与心肌细胞间连接的初步研究

目的：探寻共同培养的骨骼肌成肌细胞与心肌细胞间连接的形态学证据。方法：将鼠心肌细胞与骨骼肌成肌细胞体外共培养,于第2、4、7、14天免疫组化染色钙粘素（Cadherin）、细胞间隙连接蛋白73（Connexin43）、神经细胞粘附分子（NCAM）3种蛋白,并行定量RT-PCR检查分组比较分析;于第4、7、10、14天透射电镜观察。结果：共同培养物中的骨骼肌成肌细胞表达Connexin43,且随时间延长而增加;Cadherin表达增加不明显;NCAM含量维持在较低水平,至2周时才表达较多;透射电镜下观察到两者间存在类似于缝隙连接的连接。结论：与心肌细胞共培养后骨骼肌成肌细胞融合、成熟延迟,Connexin43表达增多;两者间确有形成类似于缝隙连接的物质基础并可形成连接。     

caspase抑制剂对缺氧诱导的心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的 探讨caspase抑制剂对缺氧诱导的培养乳鼠心肌细胞凋亡的作用。方法 将SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为3组:对照组、缺氧72 h(I72 h)组,以及caspasee抑制剂组。应用TUNEL法及流式细胞仪分析心肌细胞凋亡的变化;借助caspase-3荧光分析试剂盒,荧光比色法检测心肌细胞凋亡过程中caspase-3活性的变化。结果 caspase抑制剂组凋亡指数(AI值)和细胞凋亡百分率分别为:(14.10±2.56)％,(14.93±2.47)％,与I72 h组(46.49±4.93)％、(48.43±4.18)％相比明显降低(P<0.01)。caspase-3活性检测显示:caspase抑制剂组的caspase-3活性比缺氧72 h组降低了52.85％(P<0.01)。结论caspase抑制剂能明显抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡,其作用机制与抑制caspase-3蛋白酶活性密切相关。     

缺氧诱导体外培养的心肌细胞凋亡及检测方法研究

为探讨缺氧诱导体外培养的心肌细胞凋亡情况，并用不同方法检测，将体外培养的不同方法检测，将体外培养的新生大鼠心肌细胞置于95%氮气及5%二氧化碳孵箱中一定时间造成缺氧损伤的心肌细胞模型，分别用HE染色，电镜，TUNEL法，流式细胞仪技术检测凋亡发生的情况，结果：均观察到缺氧诱导的心肌细胞凋亡，认为缺氧一定时间可以诱导体外培养的心肌细胞凋亡；检测心肌细胞凋亡的方法，需结合形态学及定量方法全面分析。     

肉毒碱棕榈酰转移酶-1活性对饱和脂肪酸诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPT-1)的活性变化在饱和脂肪酸致乳鼠心肌细胞凋亡过程中的作用。方法:应用饱和脂肪酸棕榈酸盐(palmitate)处理乳鼠心肌细胞,使用CPT-1抑制剂(perhexiline)和CPT-1辅助因子左旋肉碱(L-carnitine)进行干预,采用流式细胞术观察心肌细胞凋亡变化情况。结果:palmitate组的细胞凋亡率较对照组(0.19±0.03vs0.07±0.02,P<0.01)及L-carnitine处理组(0.19±0.03vs0.14±0.02,P<0.01)显著升高,较perhexiline处理组(0.19±0.03vs0.29±0.03,P<0.01)显著下降。结论:心肌细胞对脂肪酸利用能力下降在palmitate诱导心肌细胞凋亡过程中具有重要意义。     

彩色多普勒超声对胎鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨诊断用彩色多普勒超声是否对胎鼠心肌细胞构成影响. 方法 24只孕14天SD大鼠按彩超辐照时间不同随机等分为四组,Ⅰ组(对照组)、Ⅱ组(照射10min组)、Ⅲ组(照射20min组)、Ⅳ组(照射30min组),照射条件4V1探头,二维频率H3.0MHz,彩色频率CD=3.0MHz,软组织热指数TIS=1.8,机械指数MIcd=1.6.照射后24h剖宫取胎鼠心肌标本,HE染色光镜观察,TUNEL法检测凋亡细胞. 结果各组光镜下观察均未见异常,TUNEL法检测结果,对照组(Ⅰ)及照射10min组(Ⅱ)、照射20min组(Ⅲ)胎鼠心肌组织内仅可偶见散在凋亡细胞,荧光强度各组间无显著差异(P>0.05);照射30min组(Ⅳ)凋亡细胞较易观察到,部分区域可见较密集的凋亡细胞.照射30min组荧光强度与对照组(Ⅰ)有显著差异 (P<0.05). 结论诊断用彩色多普勒超声照射孕鼠30min以上有可能引起胎鼠心肌细胞凋亡.     

极端热环境心肌细胞损伤乳鼠心肌细胞凋亡与Bim及caspase-3蛋白的表达

背景:目前有关极端气候条件下疾病发生规律、机制及防治措施的研究,国内只有零星报道,均为病理生理表现的研究,尚未深入到分子机制的研究.目的:观察前凋亡蛋白Bim及caspase-3在极端热环境致乳鼠心肌细胞损伤中的作用.方法:体外培养1～3 d龄SD大鼠心肌细胞,建立心肌细胞热环境损伤模型(42℃,60 min).观察热处珲后恢复37℃孵育0,4,8,12,16,24 h时心肌细胞损伤情况.倒置显微镜下观测各组心肌细胞搏动频率和节律;MTS/PMS法检测细胞存活率;全自动生化分析仪测定心肌细胞培养液乳酸脱氢酶活性;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Bim及caspase-3蛋白表达.结果与结论:体外培养乳鼠心肌细胞热处理后即刻(0 h)搏动频率略有增加,并可见异常节律,此后随时间的延长心肌细胞搏动频率逐渐减慢,存活率下降(P<0.05),乳酸脱氧酶活性升高(P<0.05);恢复37℃孵育8 h时前凋亡蛋白Bim显著升高(P<0.05):caspase-3从恢复37℃孵育时表达即明显升高(P<0.05).因此,提示极端热环境使心肌细胞发生了损伤,且以凋亡为主要损伤形式,前凋亡蛋白Bim与caspase-3可能参与了极端热环境致乳鼠心肌细胞凋亡的过程.     

缺血再灌注损伤与心肌细胞凋亡研究进展

再灌注治疗是急性心肌梗死最重要的治疗方法，但再灌注的同时也出现了心肌细胞不可逆的损伤，称为缺血再灌注损伤。坏死和凋亡是缺血再灌注过程中心肌细胞的主要死亡形式，二者的共同作用造成心肌梗死面积的扩大和心功能的下降。心肌细胞凋亡主要由两大途径介导：细胞膜受体介导的外源性途径，线粒体介导的内源性途径。本文就目前有关缺血再灌注损伤中心肌细胞凋亡途径的最新研究进展和缺血后处理对心肌的保护作用进行综述。     

氢气预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的:探讨氢气对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及其机制。方法:原代培养的SD乳鼠心肌细胞,随机分3组即对照组、缺氧/复氧组、氢气预处理组。对照组常规培养;缺氧/复氧组预先在100%N2环境中培养60min,复氧30min;氢气预处理组预先在2%H2+98%N2环境中培养60min,复氧30min。采用TUNEL法、MDA试剂盒法和MTT法分别检测乳鼠心肌细胞细胞凋亡率、丙二醛(MDA)含量和细胞活力。结果:氢气预处理能够降低乳鼠心肌细胞的凋亡率(P<0.05),减少MDA的生成(P<0.05),增强细胞活力(P<0.05)。结论:氢气预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,可能机制是抗脂质过氧化抑制细胞凋亡提高细胞活力。     

缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的观察缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法将SD大鼠分为两组:缺血预处理组(PI)及单纯缺血组(CI),采用尼龙线栓法制作了大鼠局灶性脑缺血模型,通过免疫组化染色技术及原位末端标记技术(TUNEL)检测大鼠大脑皮质bcl-2蛋白的表达和细胞凋亡情况。结果PI组较CI组缺血皮层bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.01)。PI组缺血皮层凋亡细胞较CI组明显减少(P<0.05)。结论缺血预处理使缺血脑组织bcl-2蛋白表达增强,抑制凋亡细胞产生,说明缺血预处理对再次脑缺血有保护作用。     

微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的：以人成骨肉瘤细胞系为研究对象，探讨微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡及其适宜作用剂量、作用时间。方法：以微波不同作用剂量和时间，作用于人成骨肉瘤细胞。采用形态学观察，四唑兰显色法．软琼脂集落形成实验，FCM等方法观察微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡。结果：寻找到了微波诱导成骨肉瘤细胞凋亡的最佳作用剂量和时间，分别为100W／m^2和1h。结论：微波辐射可诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

缺氧对心肌细胞DNA链损伤的体外实验研究

目的 :研究缺氧条件下对体外培养的心肌细胞DNA链的损伤及其探讨损伤机制。方法 :利用单细胞电泳技术结合激光扫描共聚焦显微镜来观察乳鼠心肌细胞的DNA损伤 ,以慧星样细胞出现率、慧尾长度和尾距 (尾部DNA占总DNA的百分比与头尾部中心间距的乘积 )来评价心肌细胞DNA的损伤程度。结果 :缺氧 12h后 ,心肌细胞DNA发生了损伤 ,慧星样细胞出现率、慧尾长度和尾距均增加 ,与对照组有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;并随缺氧时间的延长 ,DNA的损伤程度和慧星样细胞的出现率均随之增加 ,呈现明显的时间———效应趋势。结论 :单细胞电泳可快速、灵敏地检测缺氧引起的心肌细胞DNA损伤。缺氧导致细胞的DNA损伤可能是诱导心肌细胞凋亡发生的重要机制之一。     

乌司他丁对大鼠肝脏缺血再灌注损伤后炎性反应的影响

目的:探讨乌司他丁(ulinastatin,UTI)预处理对大鼠肝脏缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)损伤后炎性反应的影响,并研究高迁移率蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)在UTI预处理机制中的作用。方法:采用SD大鼠70%肝脏IR损伤模型,即在肝脏缺血45min后再灌注2h。将40只大鼠随机为4组,分别为0.9%氯化钠对照组(对照组,n=10)、UTI预处理组(UTI组,n=10)、UTI+HMGB1拮抗剂组(UTI+Anti-HMGB1组,n=10)和乌司他丁+HMGB1诱导剂组(UTI+rHMGB1组,n=10)。比较各组大鼠在IR后血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)的水平;采用酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor-alpha,TNFα)和白细胞介素1(interleukin 1,IL1)的水平;对各组大鼠的肝组织进行HE染色观察其病理学改变;采用免疫组织化学染色方法检测各组大鼠肝组织中HMGB1蛋白的表达水平。结果:与对照组相比,UTI组在IR后血清中ALT、AST均显著降低(P<0.05)。UTI+rHMGB1组IR后血清TNFα、IL1水平与对照组相比无显著差异(P>0.05);UTI组和UTI+Anti-HMGB1组IR后血清TNFα、IL1水平与对照组相比均显著降低(P<0.05)。肝组织病理显示,UTI组和UTI+Anti-HMGB1组的肝细胞坏死和中性粒细胞浸润显著轻于对照组和UTI+rHMGB1组。免疫组织化学染色显示,UTI组和UTI+Anti-HMGB1组肝细胞HMGB1表达程度显著低于对照组(P<0.05)。结论:UTI预处理可以显著抑制大鼠肝IR损伤后肝细胞中HMGB1的表达水平以及下游炎症因子的水平,从而减轻IR损伤;HMGB1诱导剂可逆转UTI的肝保护作用。     

Myocardial Injury Induced by Ultrasound-Targeted Microbubble Destruction: Evidence for the Contribution of Myocardial Ischemia

Ultrasound-targeted microbubble destruction (UTMD) can cause left ventricular (LV) dysfunction and tissue alterations in rats when high ultrasound (US) energy and long duration of imaging are used. However, the mechanism underlying these alterations remains unclear. The aim of the present work was to investigate the possible role of ischemia in the pathogenesis of the UTMD-induced LV damages in rats. To address this issue, rat hearts were exposed in situ to perfluorocarbon-enhanced sonicated dextrose albumin (PESDA) and US at peak negative pressures of 0.6, 1.2 or 1.8 MPa for 1, 3, 9, 15 or 30 min. Blood pressure and electrocardiogram were continuously recorded during insonation. LV function was assessed before and immediately after US exposure, as well as at 24 h and 7 d. At each time point, groups of rats were euthanized and their hearts were harvested for morphologic analysis. Rats exposed to either PESDA alone or US alone showed no functional or morphologic abnormalities. By contrast, rats exposed to both PESDA and US exhibited transient LV dysfunction, transient ST-segment elevation, premature ventricular contractions, microvascular ruptures, contraction band necrosis and morphologic tissue damage. These bio-effects were spontaneously and completely reversible by one week, except in the groups exposed to the highest peak negative pressure for the longest duration, in which mild dysfunction persisted and interstitial fibrosis developed. In conclusion, simultaneous exposure of rat hearts to PESDA and US in vivo results in significant bio-effects that are similar to myocardial ischemia, including transient regional LV dysfunction, transient ST-segment elevation and myocyte contraction band necrosis. (E-mail: vanoverschelde@card.ucl.ac.be)     

车前子对晶状体氧化损伤所致LEC凋亡抑制作用的实验研究

目的　研究归肝经明目中药车前子对实验性晶状体氧化损伤所致晶体上皮细胞 (LEC)凋亡及其凋亡小体形成的影响。方法　将SD大鼠的透明晶状体温育在含有 3 0 0 μmol/L过氧化氢的培养液中复制LEC凋亡的模型 ,同时加入终浓度为 15 %的车前子水提液共同孵育 2 4h后 ,取晶状体前囊膜采用TUNEL法 (末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素化脱尿苷三磷酸末端标记 )检测LEC凋亡率 ;透射电子显微镜观察LEC超微结构改变和凋亡小体形成。结果　车前子可明显抑制LEC凋亡 ,且抑制能力均强于白内停。过氧化氢对照组LEC凋亡率 (92± 2 .5 5 )显著高于空白对照组 (3 .5± 1.84) ,(t =62 .97,P <0 .0 1) ;车前子组LEC凋亡率为 16± 2 .8与过氧化氢组有非常显著差异 (t=62 .2 6,P <0 .0 1)。透射电镜观察到过氧化氢组绝大多数LEC均处于细胞凋亡的各阶段。车前子组多数晶状体上皮细胞呈凋亡早期改变 ,少数晶状体上皮细胞呈凋亡改变 ,未见有凋亡后继发性坏死的LEC。结论　车前子可明显抑制LEC凋亡 ,其显著抑制LEC凋亡的作用可能是其防止和延缓白内障发生发展的细胞学机制。     

不同频率诊断超声对小鼠早孕胚胎组织细胞凋亡影响的对比研究

目的 检测诊断超声不同频率，相同时间照射后对早孕小鼠胚胎组织细胞凋亡影响的差别。方法 应用频率3．5MHz和频率6．5MHz的探头固定持续照射孕鼠腹部，不同频率的照射组又分为0min组，5min组，15min组，30min组，24小时后取出标本，琼脂糖凝胶电泳观察不同频率照射后DNA片段情况。结果 频率为3．5MHz探头照射组，均出现凋亡梯形，且随时间的延长，梯形越明显；频率为6．5MHz照射组，15min照射组开始出现凋亡梯形，30min照射组凋亡梯形更趋明显。结论 不同频率诊断超声持续照射小鼠胚胎可引起不同程度的胚胎组织细胞凋亡，预测使用经阴道高频超声探头检查在诊断中相对更安全。     

诊断超声对大鼠睾丸生殖细胞凋亡的研究

目的 检测诊断超声不同时间照身后对大鼠睾丸组织细胞凋亡的影响。方法 应用ＨＰ８５００彩色多普勒诊断仪（探头频率７．５ＭＨｚ,超声输出功率６．８Ｗ,空间平均时间平均声强（Ｉｓａｔａ）３．４ｍＷ／ｃｍ＾２）固定特续照射大鼠睾丸组织,分为５分钟组、１０分钟组、２０分钟组,３０分钟组和空照组。照射后２４小时取睾丸,应用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（ＴＵＮＥＬ）技术检测上述各组凋亡细胞。结果 超声持续照射５