砷酸钠（iAs~（5＋））染毒大鼠尿液砷形态分析测定方法探讨

目的 通过对染砷大鼠生物样品(尿液)中砷形态的分析,为进一步探讨砷代谢产物与砷毒作用机制间的关系提供基础数据,从而有助于进一步推测砷毒作用及其体内代谢机制.方法 采用高效液相-氢化物发生原子荧光光谱法(HPLC-HGAFS)测定染砷大鼠尿液中砷形态的含量.结果 尿样中iAS3+、iAS5+和DMA 3种物质的分离效果较好.该方法线性范围为20～100 μg/L,尿样中iAS3+、iAS5+和DMA的相关系数分别为0.999 6、0.985 8和0.997 8.DMA的回收率为95.3%～108.4%,尿样中iAS3+、iAS5+和DMA的最低检出浓度分别为12.03、6.67和8.66 μg/L.结论 该方法具有良好的线性关系,灵敏度高,回收率高,结果准确.因此,该方法可以用于染砷大鼠尿样中砷形态代谢产物的分析.     

A771726在大鼠尿中的代谢产物分析

目的 研究A771726在大鼠尿液中的代谢产物.方法 大鼠灌胃给药A771726(30 mg/kg),分别采集给药前及给药后0～48h尿液,用电喷雾离子阱多级质谱法(LC/MSn)对A771726及其在大鼠尿中的代谢产物进行分析.结果 大鼠灌胃给药A771726后,在尿液中可测到3种代谢产物,分别是甲基化、羟甲基化、亚甲基醇半缩甲醛化A771726.结论 A771726在大鼠尿中代谢产物以Ⅰ相代谢为主,未发现Ⅱ相代谢产物.其代谢物的结构有待于进一步分析后确定.     

BAPTA-AM在体外大鼠血浆中3个代谢产物的结构确证

目的：确证BAPTA-AM在体外大鼠血浆中3个代谢产物的结构。方法：采用碱性催化水解法，制备得到BAP-TA-AM3个降解产物，并通过NMR和MS对其进行结构解析。比较体外代谢产物和制备的对照品的色谱和质谱行为，对体外代谢产物的结构予以确认。结果和结论：BAPTA-AM在体外大鼠血浆中的3个代谢产物是：1，2-双（邻氨基酚氧基）乙烷-N,N,N′,N′-四乙酸-N-乙酰氧甲基酯、1，2-双（邻氨基酚氧基）乙烷-N，N，N′，N′-四乙酸-N,N′-二乙酰氧甲基酯和1，2-双（邻氨基酚氧基）乙烷-N,N,N′,N′-四乙酸-N，N,N′-三乙酰氧甲基酯。     

卡德沙星代谢物的合成、结构确证及其体外抗菌活性

目的:合成并确证卡德沙星两种代谢产物,初步研究其抗菌活性。方法:大鼠灌胃卡德沙星(9mg/kg)后,通过LC-MS分析,在胆汁和尿液中发现有m/z385.90的成分(M-1),在尿液中发现有m/z329.1的成分(M-2)。参考类似物的代谢方式,推测其结构分别为1-环丙基-6-氟-8-二氟甲氧基-1,4-二氢-7-(2-氨基-丙胺基)-4-氧代-3-喹啉羧酸和1-环丙基-6-氟-8-二氟甲氧基-1,4-二氢-7-氨基-4-氧代-3-喹啉羧酸。化学合成这两种物质,与卡德沙星的代谢产物进行对比,并研究体外抗菌活性。结果与结论:本文对卡德沙星代谢物的结构推断正确,它们的体外抗菌活性很弱。M-1和M-2均未见文献报道。     

HPLC测定大鼠血浆中萘哌地尔代谢产物苯羟化萘哌地尔的含量

萘哌地尔(Naftopidil,NAF)是抗高血压药物.药效学研究表明NAF的作用时间较长是因为NAF在体内产生了活性代谢产物,其中R,S-1-(2-甲氧基-4-羟基苯基)-4-[3-(萘-1-氧基)-2-羟基丙基]哌嗪(phenyl-hydroxyl-naftopidil,PHN)已被证实为NAF的活性代谢产物之一,本文以普萘洛尔为内标,建立PHN的血药浓度的测定方法,为代谢物的定量检测提供依据.     

亚砷酸钠染毒大鼠肝脏组织砷形态分析前处理方法的研究

目的 探讨亚砷酸钠染毒大鼠脏器组织砷形态代谢产物分析的前处理方法,并建立肝脏砷形态代谢产物的定量分析方法,从而为阐明体内砷代谢和砷毒作用机制间的关系奠定基础.方法 采用快速溶剂萃取(ASE)、超声溶剂提取(SON)和盐酸浸提(HCl)3种不同的前处理方法在亚砷酸钠高、中、低剂量组大鼠肝脏中,提取组织中的砷形态,并分别采用氢化物发生原子荧光光谱法(HGAFS)测定肝脏组织中的砷总量及采用高效液相色谱(HPLC)与氢化物发生原子荧光光谱法(HGAFS)联用技术分析砷形态.结果 快速溶剂萃取法提取大鼠肝脏砷形态提取效率最高,超声溶剂提取效率次之,盐酸浸提法提取效果最差.初步建立了iAs3+、二甲基砷酸(DMA) 2种砷形态的萃取方法及分离分析方法.亚砷酸钠各剂量组DMA的平均加标回收率为98.9%～102.9%.结论 快速溶剂萃取法对于提取染砷大鼠肝脏组织中的砷形态代谢产物效果较好,同时发现脏器组织中的砷主要以DMA形式存在.     

大鼠灌胃灯盏花素后血浆、胆汁、尿液以及粪便中代谢产物的鉴定

目的对大鼠灌胃灯盏花素后收集的血浆、胆汁、尿液以及粪便中存在的灯盏乙素的代谢产物进行鉴定。方法通过使用HPLC结合光电二极管阵列检测器(DAD),采用梯度洗脱的方法,对比分析给药组大鼠和空白组大鼠的血浆、胆汁、尿液以及粪便样品,并且在相同的液相色谱条件下与对照品的保留时间和紫外吸收特征进行对照来鉴定主要代谢产物。结果从大鼠ig 20、200 mg/kg灯盏花素的血浆中鉴定了代谢产物野黄芩素-6-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6-O-β-D-glucuronide,M5);从大鼠ig 20、200 mg/kg灯盏花素的胆汁中鉴定了代谢产物野黄芩素-6,7-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6,7-di-O-β-D-glucuronide,M1)、6-O-甲基-灯盏乙素(6-O-methyl-scutellarin,M3)、野黄芩素-6-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6-O-β-D-glucuronide,M5)和灯盏乙素(黄芩素苷,scutellarin,M7),从大鼠ig 20 mg/kg灯盏花素的尿液中鉴定了代谢产物野黄芩素-6,7-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6,7-di-O-β-D-glucuronide,M1),从大鼠ig 200 mg/kg灯盏花素的尿液中鉴定了代谢产物野黄芩素-6,7-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6,7-di-O-β-D-glucuronide,M1)、野黄芩素(scutellarein,M2)和灯盏乙素(scutellarin,M7);从大鼠ig 200 mg/kg灯盏花素的粪便中鉴定了代谢产物野黄芩素(scutellarein,M2)。结论灯盏乙素在大鼠体内发生了广泛的代谢,并且主要以其代谢产物的形式存在;灯盏乙素在大鼠体内产生的代谢产物主要通过尿液和胆汁排泄。     

牛磺酸对乳腺癌大鼠肿瘤生长、血浆代谢产物及相关基因表达的影响

目的 探讨牛磺酸对乳腺癌大鼠肿瘤生长、血浆代谢产物及相关基因表达的影响.方法 将30只雌性SD大鼠随机分为对照组、7,12-二甲基苯蒽(DMBA)致癌组、牛磺酸干预组,每组10只.对照组给予花生油(0.1 ml/kg)灌胃,DMBA致癌组、牛磺酸干预组给予1.5 mg/ml DMBA溶液(0.1 ml/kg)灌胃,牛磺酸干预组于日常饮水中加入6%的牛磺酸.观察3组大鼠乳腺肿瘤发生情况,检测大鼠血浆代谢产物并进行代谢组学分析,用荧光定量PCR技术检测大鼠乳腺癌或正常乳腺组织乳腺癌相关基因表达.结果 与DMBA致癌组比较,牛磺酸干预组大鼠乳腺肿瘤数较少,潜伏期延长(P<0.05).代谢组学分析显示牛磺酸干预组与DMBA致癌组之间的差异代谢产物主要涉及糖代谢和氨基酸代谢通路.与对照组比较,DMBA致癌组胰岛素样生长因子受体1(Igf1r)、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(Pten)表达降低,胰岛素样生长因子1(Igf1)基因表达升高(P<0.05);与DMBA致癌组比较,牛磺酸干预组Pten、Igf1r基因表达增加,Igf1基因表达降低(P<0.05).结论 牛磺酸对DMBA诱导的乳腺癌大鼠的肿瘤生长有抑制作用,这种作用很可能与牛磺酸通过调节相关代谢通路及基因表达从而降低能量代谢和核酸代谢有关.     

(2S,3R)-1-二甲氨基-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基戊-3-醇的合成工艺研究

目的 对(2S,3R)-1-二甲氨基-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基戊-3-醇合成工艺进行研究。方法 以3-戊酮为起始原料,经Mannich反应、手性拆分、Grignard反应等步骤合成(2S,3R)-1-二甲氨基-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基戊-3-醇,并对化学拆分进行工艺优化。结果 合成(2S,3R)-1-二甲氨基-3-(3-甲氧基苯基)-2-甲基戊-3-醇,总收率为30.6%。结论 工艺改进后提高了目标产物的收率,同时也减少了原料的浪费。     

LC-MSn鉴定大鼠体内SIPI的代谢产物

目的 考察SIPI在大鼠体内的代谢转化.方法 采用液相色谱-质谱(LC-MSn)联用技术,检测在单剂量静脉注射给予SIPI后大鼠尿,粪及胆汁中的SIPI及代谢物.色谱柱为Diamonsil C18柱;流动相为甲醇-水-甲酸(40∶60∶0.5),流速为0.5mL&#183;min-1;质谱仪离子源为电喷雾离子源(ESI),正离子方式检测.代谢物经LC-MSn方法分离和分析,通过质谱和色谱行为推测其结构.结果 在大鼠尿样中共检测到8种代谢物,在大鼠粪样中共检测到4种代谢物,在大鼠胆汁样品中共检测到3种代谢物.结论 SIPI在大鼠体内广泛代谢,形成多种代谢产物.     

微粒团毛细管电泳层析测定尿液中咖啡因代谢物──人群N－乙酰化表型研究

采用微粒团毛细管电泳层析（ＭＥＣＣ）法同时测定尿液中咖啡因的代谢物５－乙酰氨基－６－甲酰氯基－３－甲基尿嘧啶（ＡＦＭＵ）、５－乙酰氨基－６－氨基－３－甲基尿嘧啶（ＡＡＭＵ）、１－甲黄嘌呤（１Ｘ）和１－甲基尿酸（１Ｕ），以探讨测定人群Ｎ－乙酰化表型的方法学。取尿样直接或去蛋白处理后，用ＭＥＣＣ法和用高压液相层析（ＨＰＬＣ）法测定的ＡＦＭＵ／１Ｘ或（ＡＡＭＵ＋ＡＦＭＵ）／１Ｘ（峰高比）结果一致。碱性条件下，ＡＦＭＵ完全降解为ＡＡＭＵ时，则用ＡＡＭＵ／１Ｘ，当ＡＦＭＵ部分降解时，根据（ＡＡＭＵ＋ＡＦＭＵ）／１Ｘ确定Ｎ－乙酰化表型结果更准确。用咖啡因作代谢探针，微粒团毛细管电泳层析法可用于人群Ｎ－乙酰化表型临床常规测定或群体调查。     

福建地区汉族人群N-乙酰基转移酶基因多态性

目的 探讨福建地区汉族人群N—乙酰基转移酶(NAT2)基因多态性分布规律。方法 应用自动实时荧光Light—Cycler技术，对168名福建地区汉族健康人NAT24个位点的基因多态性进行检测，并与其它人群比较。结果 NAT2多态位点各基因型频率分别为：NAT2*4／NAT2*4(39．2％)，NAT2*4／NAT2*6A(28．0％)，NAT2*6A／NAT2*7A／B(14．3％)，NAT2*4／NAT2*7A／B(10．7％)，NAT2*4／NAT2*5A(3．6％)，NAT2*6A／NAT2*6A(3．0％)，NAT2*7A／B／NAT2*7A／B(1．2％)。等住基因频率分别为：NAT2*4(60．4％)，NAT2*6A(24．1％)，NAT2*7A／B(13．7％)，NAT2*5A(1．8％)；未检测到NAT2*5A纯合变异体和NAT2*14A突变等位基因。结论 福建地区汉族人群N-乙酰基转移酶(NAT2)基因多态分布与日本人接近，与欧美人显著不同。     

Relationship between metabolic phenotype of N-acetylation and bladder cancer

ＮａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎｗａｓｐｒｏｐｏｓｅｄａｓａｄｅｔｏｘｉｆｉｃａｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｆｏｒａｒｙｌａｍｉｎｅｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓＰｈａｒｍａｃｏｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓｏｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｂｌａｄｄｅｒｃａｎｃｅｒｉｎｄｕｃｅｄｂｙａｒｙｌａｍｉｎｅｈａｖｅｓｈｏｗｎｔｈａｔｔｈｅｓｌｏｗａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎｐｈｅｎｏｔｙｐｅｐｌａｙｓａｃｒｕｃｉａｌｒｏｌｅｉｎｇｅｎｅｔｉｃｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎｔｏｄｅｖｅｌｏｐｔｈｉｓｄｉｓｅａｓｅ1Ｈｏｗｅ…     

Relationship between metabolic phenotype of N-acetylation and bladder cancer

Objective To study the relationship between metabolic phenotype of acetylation and bladder cancer.
Methods Totally 203 healthy volunteers and 67 patients with bladder cancer were investigated with caffeine as a metabolic probe.Urine samples were collected in 2-6 hours after a cup of 140 mg coffee was taken, and the caffeine metabolites, 5-acetylamino-6-formylamino-1-methyluracil (AFMU) and 1-methylxanthine (1X) were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC).The frequency histogram and probit plot were constructed to select the critical value which was used to assess slow and fast acetylation status both in healthy volunteers and patients with bladder cancer.
Results The peak height ratios of AFMU and 1X (AFMU/1X) were from 0.06 to 6.50 for healthy volunteers and 0.10 to 6.31 for patients with bladder cancer, both with the critical value of 1.10. Of 203 healthy volunteers involved in this study, 26.3% were slow acetylacors, as compared to 46.3% with slow acetylacors in patients with bladder cancer.The odds ratio is 2.376, and the gene frequency for healthy volunteers and patients with urinary bladder cancer were 0.5218 and 0.6804, respectively.
Conclusions N-acetylation status in the Chinese population is polymorphic and completely concordant with that determined with other metabolic probes.Slow acetylators are significantly associated with bladder cancer.      

人类N-乙酰化酶2蛋白质分子的计算机三维模拟

目的：对人类N-乙酰化酶2（NAT2）蛋白质分子进行计算机三维模拟。方法：将下载的蛋白质序列结合计算机三维模拟技术对NAT2进行三维模拟，并对其进行物理、化学、生物学等特征分析，初步判断蛋白质分子的部分化学和物理学性质，对其某些功能作出预测。结果：利用蛋白质序列分析软件包ANTHEPORT 5．0模拟出NAT2可能的结构；预测到NAT2的蛋白等电点（pHi）=5．495，相对分子质量=33544以及NAT2的滴定曲线和物理化学特征性曲线；对NAT2第282个氨基酸位点附近的片段绘制出Helical Wheel图。结论：能利用计算机模拟出NAT2的可能结构，并可作出一定的分析和预测，此种方法可用于NAT2基因多态性的分析。     

异烟肼、利福平治疗肺结核致肝毒性易感基因的研究

目的：探讨N-乙酰基转移酶(NAT2)基因型与异烟肼、利福平治疗肺结核致肝毒性的相关性。方法：通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR—RFLP)技术分析67例经利福平、异烟肼治疗后发生或未发生肝功能异常的肺结核患者NAT2基因多态性的部位、性质及发生率。结果：病例组和对照组857位密码子多态性分别是20．3％和7．1％，两组差异显著。结论：NAT2基因型与异烟肼和利福平所致肝毒性关系密切，其中857位密码子点突变可能是结核患者发生肝毒性的易感基因型之一。     

龙葵碱对人肝癌HepG2细胞N-乙酰基转移酶活性的影响

目的探讨龙葵碱对HepG2细胞N-乙酰基转移酶(NAT)活性的影响。方法采用HPLC方法,以2-氨基芴(2-AF)为底物,以2-AF被NAT乙酰化为2-乙酰氨基芴(2-AAF)的量来反应NAT的活性。结果龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT的活性,作用具有剂量依赖性。结论龙葵碱通过抑制HepG2细胞NAT的活性发挥细胞毒作用。     

毒物代谢酶基因多态性与阿尔茨海默病遗传易感性的相关研究

目的 探讨细胞色素P450 1A1基因和N-乙酰基转移酶基因多态性与阿尔茨海默病的关系.方法 采取病例对照研究方法及聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术分析135例散发性AD与138例正常健康对照组的细胞色素P450 1A1基因MSP1位点及NAT2基因型在阿尔茨海默病患者与正常人之间的分布差异.结果 细胞色素P450 1A1各基因型在两组中分布差异无显著性意义;NAT2基因慢乙酰化型基因型在AD组中的分布频率(21.5%)明显高于对照组(12.3%),OR值达1.947.结论 细胞色素P450 1A1基因MSP 1的多态性与阿尔茨海默病的遗传易感性无关;N-乙酰基转移酶基因多态性与AD的遗传易感性相关.     

HPLC法间接测定肿瘤患者外周血DPD的活性

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)间接测定肿瘤患者外周血二氢尿嘧啶脱氢酶(DPD)活性的方法.方法 采用HPLC法测定肿瘤患者血浆中内源性物质二氢尿嘧啶(H2U)和尿嘧啶(U)的比值,间接估算DPD的活性.色谱柱:Xterra RPC18 (250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钠(pH4.0),比例为5∶95;流速为1.0 mL/min,H2U和U检测波长分别为204 nm、260 nm.结果 H2U线性范围为62.5 ～2 000μg/L,线性方程为:Y=7.48×10 -4X+ 1.24×10-1,r=0.999 7(n=6),批内RSD小于7.7％,批间RSD小于13.8％,方法学回收率为99.63％ ～ 103.02％;U线性范围为15.625 - 500 μg/L,线性方程为:Y=3.42×10-3X+2.58×10-2,r=0.999 3(n=6),批内RSD小于8.3％,批间RSD小于13.4％,方法学回收率为98.38％～109.08％.结论 本方法可用于肿瘤患者外周血DPD活性的常规监测.     

两点采样法评估人体NAT2酶的基因型与异烟肼代谢表型、肝功能异常之间的关系

目的 通过两点采样法评估NAT2酶的基因型与异烟肼的乙酰化率、肝损害之间的关系。方法 选取口服异烟肼达到稳态的患者共57例,分别于服药后2、4 h采取末梢血样。采用超高效液相色谱质谱联用设备（UPLCMS）测定其中的异烟肼和乙酰异烟肼的药物浓度,计算二者的比率值。任意时间点低于1的比值定义为慢代谢临床表型,其余为中间代谢表型和快代谢临床表型。同时对血样标本提取核酸,测定的N-乙酰转移酶-2(NAT2)的rs1041983点位的SNP情况。根据SNP结果,将基因型分为慢代谢组（TT）、中间代谢组（CT）和快代谢组（CC）。将基因型与代谢表型、肝功能损害发生之间分别进行比对,判断NAT2的药物代谢表型与基因突变类型之间的关系。结果 慢代谢与快代谢人群中,两个时间点的药物浓度均有高低,两者之间的可信区间有重叠,无法明确区分。单点代谢产物之间的比值不能全部区分出慢代谢人群。而两个时间点的代谢产物之间的比值可以完全区分快慢代谢人群的基因型。慢代谢基因型人群发生肝功能异常的发生率约84.6%,快代谢人群发生率仅29.5%,两者差异有统计学意义（χ2=12.485, P<0.001）。结论 N...