反义人IGF—I基因转移预防血管损伤后新生内膜增殖的实验研究

目的：观察人反应ＩＧＦ－Ｉ基因转移对抑制血管平滑肌细胞增殖的效果。方法：将反义ＩＧＦ－Ｉ基因转录导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中，２１天后观察其对新生内膜形成的影响。结果；与对照组相比，损伤血管新生内膜／中层面积比降低了４１％。结论：反义人ＩＧＦ－Ｉ基因治疗可能对血管成形术后再狭窄有一定的预防作用。     

腺病毒载体介导的大鼠反义血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ_B基因转移对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增殖的影响

目的探讨腺病毒载体介导的大鼠反义血管紧张素Ⅱ受体ⅠＢ（ＡＴ１Ｂ）ＲＮＡ转移对大鼠颈动脉损伤后新生内膜的影响。方法利用重组腺病毒载体将大鼠反义ＡＴ１ＢＲＮＡ转移至大鼠颈动脉球囊损伤模型中，２１天后观察其对新生内膜形成的影响。结果用腺病毒载体转导大鼠反义ＡＴ１ＢＲＮＡ至大鼠球囊损伤的颈动脉，２１天后，与对照组相比，损伤血管新生内膜／中层面积比降低了４７％（Ｐ＜０．００１）。结论反义ＡＴ１ＢＲＮＡ对血管成形术后再狭窄可能有一定的预防作用     

P53、Rb、IGF-I、AT1B基因转移对血管新生内膜增殖的影响

目的观察和比较人野生型ｐ５３基因、Ｒｂ基因、反义ＩＣＦ－Ｉ基因与大鼠反义ＡＴ１Ｎ基因对大鼠颈动脉损伤后新生 内膜增殖的影响。方法通过病毒载体介导,将上述４种基因分别转导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中,２１ｄ后 观察并比较其对新生内膜形成的影响。结果与对照组相比,ｐ５３基因、Ｒｂ基因治疗组及反义ＩＧＦ－Ｉ基因治疗组的动脉 血管新生内膜／中层面积比均显著降低（ｐ＜０．０１）;与ＡｄＶβ ｇａｌ组相比,反义ＡｄＶＡＴ１Ｂ基因组的动脉血管新生内膜／中 层面积比显著降低（Ｐ＜０．０１）．而ｐ５３基因治疗组、Ｒｂ基因治疗组、反义ＩＧＦ－Ｉ基因组及反义ＡｄＶＡＴ１Ｂ基因组之间无显 著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论上述４种基因对血管成形术后再狭窄可能均有一定的预防作用。     

IGF-Ⅰ及其基因多态性与婴儿生长发育的关系

目前有关生长发育调节进展研究较多的是胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）轴。IGF-Ⅰ对婴儿出生前和生后的发育具有重要的调控作用。而个体间IGF-Ⅰ水平的差异很大程度上是由基因决定的,目前对IGF-Ⅰ基因微卫星多态性的研究是大量国外研究的热点。本文从IGF-Ⅰ水平及基因多态性探讨与胎儿、生后生长发育的关系等方面进行阐述。     

腺病毒介导的TIMP-4基因转染抑制血管损伤后新生内膜形成

目的 :应用腺病毒介导的转基因方式转染人组织型金属蛋白酶抑制剂 4 (TIMP 4 )基因 ,以观察TIMP 4对球囊损伤后新生内膜形成的影响。方法 :体外培养血管平滑肌细胞 (VSMC)并转染含有TIMP 4基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdTIMP 4 ) ,采用单层培养细胞刮片法 ,观察TIMP 4对细胞迁移的影响 ;以大鼠颈总动脉球囊损伤模型为研究对象 ,损伤后即刻经血管外膜分别转入盐水、空载腺病毒载体和含有TIMP 4基因的腺病毒载体 ,观察细胞迁移和新生内膜形成情况。结果 :培养的VSMC转染AdTIMP 4后 ,细胞迁移明显受到抑制 ,与对照组相比抑制率为 6 3.9% (P <0 .0 1) ;在大鼠颈总动脉球囊损伤模型中 ,转基因后 4d时生理盐水组、空载腺病毒组和转染AdTIMP 4组内弹力板内的细胞数依次为 (32 .5± 4 .8)个细胞、(33.8± 7.0 )个细胞和 (8.2± 2 .4 )个细胞 ,转染TIMP 4可以显著抑制血管损伤后细胞向内膜的迁移 ;血管损伤后 2 8d时 ,转染TIMP 4组新生内膜面积与中膜面积比值与对照组相比降低了 6 6 .5 % (P <0 .0 1) ,空载腺病毒组与生理盐水组之间差异无显著性。结论 :TIMP 4可以抑制培养的VSMC的迁移 ,局部干预可以明显抑制大鼠颈总动脉球囊损伤后细胞的迁移和血管新生内膜的形成。     

野生型Rb基因转移预防血管成形术后再狭窄的实验研究

目的：探讨人野生型Rb基因转移对预防血管成形术后再狭窄的作用。方法：通过逆转录病毒载体介导，将野生型Rb基因转导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中，21天后观察其对新生内膜形成的影响，并检测Rb蛋白表达水平。结果：成功地构建和包装了人野生型Rb基因的重组逆转录病毒载体，并在体外细胞中成功表达；免疫组化检测表明转导血管局部表达人野生型Rb蛋白，与对照组相比，损伤血管新生内膜／中层面积比降低了49％。结论：人野生型Rb基因治疗时血管成形术后再狭窄有一定的预防作用。     

IGF-Ⅰ及其基因多态性与婴儿生长发育的关系

目前有关生长发育调节进展研究较多的是胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)轴。IGF-Ⅰ对婴儿出生前和生后的发育具有重要的调控作用。而个体间IGF-Ⅰ水平的差异很大程度上是由基因决定的,目前对IGF-Ⅰ基因微卫星多态性的研究是大量国外研究的热点。本文从IGF-Ⅰ水平及基因多态性探讨与胎儿、生后生长发育的关系等方面进行阐述。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸抑制大鼠子宫内膜异位种植的实验研究

目的了解血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对大鼠子宫内膜异位种植的抑制作用。方法用外科自体移植术建立SD大鼠右侧壁腹膜上子宫内膜异位症模型,在建模同时分别腹腔注射不同剂量的VEGF反义寡核苷酸(1 000μmol/L,2 000μmol/L)或生理盐水100μl,隔日1次,共4周。观察VEGF反义寡核苷酸对SD大鼠异位症建模成功率、移植物、在位内膜和卵巢的组织学变化及血清E2,P水平的影响。结果VEGF反义寡核苷酸腹腔注射使大鼠异位症模型的建模成功率明显降低,移植物体积均显著下降(P<0.01)。对照组建模成功的SD大鼠腹膜上的移植物囊肿内壁的上皮、固有膜以及固有膜的基质细胞、腺体样结构都和成熟大鼠的子宫内膜相似,移植物被覆的结缔组织及与其相连的腹膜表面都有丰富的血管形成。而用药组建模成功的SD大鼠移植物腔内面上皮不发达,固有膜较薄,固有膜的基质细胞、腺体样结构减少,移植物被覆的结缔组织及与其相连的腹膜血管稀少。各组血清E2,P水平差异无显著性(P>0.05)。结论VEGF反义寡核苷酸腹腔注射可以抑制大鼠子宫内膜的异位种植和生长,但不影响卵巢功能。     

应用PTCA导管制作大鼠颈总动脉新生内膜增殖模型

应用PTCA导管建立了SD大鼠颈总动脉球囊损伤后新生内膜增殖模型，通过光镜、电镜及α-actin免疫组化证明用PTCA导管建立的大鼠颈总动脉新生内膜增殖模型与国外用2FFogarty导管制作的大鼠颈总动脉模型的一致性，满足了研究血管损伤反应和PTCA术后再狭窄的需要。     

人工反义寡核苷酸对人Ⅰ型胶原基因体外转录体系的抑制作用

目的和方法 过量Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积是增生性瘢痕组织和瘢痕疙瘩形成的重要原因。采用 两个自行构建的ＳＰ６体外转录系统，通过掺入同位素（α３２ＰＧＴＰ）进行放射自显影，探讨不同反义寡核苷酸对Ⅰ型胶原基因体外转录的抑制作用。结果和结论位于ＳＰ６转录起始位点区域的寡核苷酸能够有效抑制体外转录反应；而位于ＳＰ６转录起始位点下游约２００bp的寡核苷酸和作为对照的随机寡核苷酸对转录的抑制作用不明显。     

反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染对人肝癌细胞增生及凋亡的影响

为研究胰岛素样生长因子 I(IGF I)反义寡核苷酸转染对人肝癌细胞增生、分化及凋亡的影响 ,探讨寡核苷酸转染治疗肝癌的可行性 ,利用反义核酸技术 ,合成针对IGF I的寡核苷酸片段 ,利用脂质体包裹反义IGF I寡核苷酸片段瞬时转染人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞 ,MTT法检测细胞增生 ;放免法检测培养细胞上清中AFP、CEA的分泌量 ;采用末端标记 (Tunel)法检测细胞凋亡的变化。结果发现转染反义IGF I寡核苷酸可使人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞增生下降 ,AFP、CEA表达降低 ,凋亡细胞数量增多。反义IGF I寡核苷酸转染人肝癌细胞系BEL 74 0 2细胞可以降低细胞增生、减少细胞去分化并诱导肝癌细胞凋亡     

子宫内膜异位症患者腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的测定及相关性研究

目的 检测子宫内膜异位症( EMs)患者和对照组腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的水平变化及相关性,探讨其在子宫内膜异位症发病机制中的作用.方法 采用酶联免疫吸附法( ELISA)检测39例内异症患者（EMs组）及25例非内异症患者（对照组）腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A水平.结果 ①EMs组中,IGF-Ⅰ和PAPP-A水平分别为(117.1±36.6)ng/L、( 2.85±0.56) ng/mL,均高于对照组的(79.5±18.7 )ng/L、( 1.93±0.56) ng/mL(P＜0.05);②Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中IGF-Ⅰ水平为(126.5±39.1 )ng/L高于Ⅰ～Ⅱ期患者的(107.3±32.0) ng/L(P＞0.05),而Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中PAPP-A水平为(3.15±0.50) ng/mL高于Ⅰ～Ⅱ期患者的（2.55±0.45）ng/mL(P＜0.05),且PAPP-A水平与r-AFS评分呈正相关;③EMs患者腹腔液中PAPP-A和IGF-Ⅰ水平无显著相关性(P＞0.05).结论 腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的增高可能与内异症的发病有关;PAPP-A与疾病的严重程度有关.     

核转录因子NF-κB对大鼠血管球囊损伤后新生内膜形成的作用

目的 探讨核因子κBp65亚基的反义和诱骗性寡核苷酸单独或联合作用对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和细胞基质金属蛋白酶的影响.方法 建立SD大鼠颈动脉球囊损伤模型.随机分为7组,每组分为6个时相点(6 h和1、3、5、7、14 d),每个时相点3只大鼠.结果 球囊损伤后7 d,模型组、正义组、诱骗对照组血管内膜/中膜比达到高峰,较正常组、反义组、诱骗组、反义+诱骗组显著升高(P＜0.05).球囊损伤后第3天,免疫组化检测细胞增殖标记物BrdU的掺入,与模型组相比,反义组、诱骗组、反义+诱骗组BrdU标记指数明显降低(P＜0.05).Western blot印迹法显示核因子κBp65蛋白表达在血管损伤后7 d达高峰.大鼠颈动脉损伤后7 d,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)蛋白表达在反义组、诱骗组、反义+诱骗联合治疗组均较各自对照组降低.结论 球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖在不同时相点有动态变化;核因子κB反义和诱骗性寡核苷酸可抑制MMP-9的表达.     

核转录因子NF-κB对大鼠血管球囊损伤后新生内膜形成的作用

目的探讨核因子κBp65亚基的反义和诱骗性寡核苷酸单独或联合作用对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和细胞基质金属蛋白酶的影响。方法建立SD大鼠颈动脉球囊损伤模型。随机分为7组,每组分为6个时相点(6h和1、3、5、7、14d),每个时相点3只大鼠。结果球囊损伤后7d,模型组、正义组、诱骗对照组血管内膜/中膜比达到高峰,较正常组、反义组、诱骗组、反义 诱骗组显著升高(P<0.05)。球囊损伤后第3天,免疫组化检测细胞增殖标记物BrdU的掺入,与模型组相比,反义组、诱骗组、反义 诱骗组BrdU标记指数明显降低(P<0.05)。Westernblot印迹法显示核因子κBp65蛋白表达在血管损伤后7d达高峰。大鼠颈动脉损伤后7d,基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达在反义组、诱骗组、反义 诱骗联合治疗组均较各自对照组降低。结论球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖在不同时相点有动态变化;核因子κB反义和诱骗性寡核苷酸可抑制MMP-9的表达。     

人工反义寡核苷酸对人Ⅰ型胶原基因体外转录体系的抑制作用

目的和方法过量Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积是增生性瘢痕组织和瘢痕疙瘩形成的重要原因。采用两个自行构建的ＳＰ６体外转录系统,通过掺入同位素（ａ３２ＰＧＴＰ）进行放射自显影,探讨不同反义寡核苷酸对Ⅰ型胶原基因体外转录的抑制作用。结果和结论位于ＳＰ６转录起始位点区域的寡核苷酸能够有效抑制体外转录反应;而位于ＳＰ６转录起始位点下游约２００ｂｐ的寡核苷酸和作为对照的随机寡核苷酸对转录的抑制作用不明显。     

铜绿假单胞菌LasⅠ基因反义核酸载体的构建及生物学作用研究

目的 构建LasⅠ基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasⅠantisense,转化入铜绿假单胞菌并分析其生物学作用.方法 PCR扩增LasⅠ基因序列,反向克隆法构建LasⅠ基因的反义核酸原核表达载体pUCP18/lasⅠantisense,并转化铜绿假单胞菌.通过检测转化菌的LasB和LasR基因表达,测定外毒素的活性和绿脓菌素的表达等指标,分析pUCP18/lasⅠantisense的生物学作用.结果 成功构建pUCP18/lasⅠantisense并转化铜绿假单胞菌,且有效表达,转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素和绿脓菌素表达水平均降低.结论 pUCP18/lasⅠantisense可以降低铜绿假单胞菌毒力因子表达,提示LasⅠ基因可作为医院内铜绿假单胞菌感染治疗的一个新的靶点.     

垂体瘤转化基因反义寡核苷酸抑制胶质瘤增殖的实验研究

目的 观察垂体瘤转化基因(pituitary tumortr ansforming gene,PTTG)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)对恶性胶质瘤增殖的抑制作用.方法 将C6胶质瘤细胞接种于大鼠右侧尾状核.按照不同的PTTG反义寡核苷酸浓度在选定的时间点立体定向原位注射于肿瘤区域.3周后处死大鼠,取标本做GFAP、PTTG、PCNA免疫组化染色.结果 不同浓度的PTTG-ASODN对C6胶质瘤模型的增殖抑制呈时间、浓度依赖性,而且高浓度,早期应用,反复应用PTTG-ASODN抑制胶质瘤模型肿瘤增殖的效果明显.结论 PTTG-ASODN可以抑制胶质瘤的增殖,有望成为胶质瘤基因治疗的一种新策略.     

肾癌IGF-ⅠmRNA表达及与浸润转移的关系

目的探讨IGF-Ⅰ在肾癌组织中的表达状况.方法采用RTPCR方法检测25例肾癌及其癌周组织IGF-ⅠmRNA的表达.结果25例肾癌组织中,IGF-ⅠmRNA无表达2例,低表达13例,中等表达10例;癌旁组织无表达8例,低表达13例,中等表达4例.癌组织表达强度明显高于癌周组织(P＜0.05).16例Ⅰ、Ⅱ期癌,IGF-ⅠmRNA无表达2例,低表达11例,中等表达3例;9例Ⅲ、Ⅳ期癌,低表达2例,中等表达7例.Ⅲ、Ⅳ期癌表达强度明显高于Ⅰ、Ⅱ期癌(P＜0.05).结论IGF-Ⅰ能够促进肾癌细胞的转移.     

大鼠颈动脉损伤后内膜增生的计算机图像分析

目的 利用计算机图像处理分析系统对局部应用反义寡脱氧核苷靶（ＯＤＮｓ）对大鼠颈动脉损伤后内膜增生抑制作用进行定量分析方法 将大鼠随机分成６组（即反义组Ａ、正义组Ｂ、错配组Ｃ、对照组Ｄ、脂质体组Ｅ、假手术组Ｆ），进行大鼠颈动脉损伤后内膜增生的形态参数测定。结果 Ａ组管腔面积大于Ｂ、Ｃ、Ｄ及Ｅ组（Ｐ〈０．０５）且小于Ｆ组（Ｐ〈０．０５）；Ａ组的内膜面积、内膜／中膜面积比值最大内膜厚度、内膜／中膜厚率比