苦参碱诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡及其对细胞黏附分子表达的影响

为了探讨苦参碱诱导多发性骨髓瘤（MM）RPMI8226细胞凋亡及其对细胞黏附分子表达的影响,将苦参碱与RPMI8226细胞共培育,采用CCK-8法观察细胞生长,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,PI单染色法检测细胞周期,双染色流式细胞仪检测细胞膜表面CD44、CD44v6、CD54和CD106的表达。结果表明,苦参碱对RPMI8226细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效和时效关系;苦参碱能诱导RPMI8226细胞凋亡,其发生率随着药物浓度增加而增加;细胞周期分析显示G0/G1期细胞相对增多,S期相对减少,但G2/M期细胞数无明显改变;苦参碱作用于RPMI8226细胞48小时导致CD44和CD54表达减少,但CD44v6和CD106表达无明显改变。结论：苦参碱通过诱导凋亡和细胞周期阻滞抑制RPMI8226细胞的生长,同时降低CD44、CD54等细胞黏附分子表达。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571治疗慢性髓细胞白血病

酪氨酸激酶抑制剂STI571(signal transduction inhibitor 571,STI571)可竞争性抑制Ph阳性慢性髓细胞白血病(CML)癌基因Bcr-Abl代谢过程中ATP或底物与酪氨酸激酶催化中心结合而发挥靶向治疗作用,临床疗效确切,毒副作用轻微。本文就其在CML治疗中的药理作用与临床研究进行综述。     

酪氨酸激酶抑制剂STI1571治疗慢性髓细胞白血病

酪氨酸激酶抑制剂ST1571（signal transduction inhibitor571,STI571)可竞争性抑制Ph阳性慢性髓细胞白血病（CML）癌基因Bcr-Abl代谢过程中ATP或底物与酪氨酸激酶催化中心结合而发挥靶向治疗作用，临床疗效确切，毒副作用轻微，本文就其在CML治疗中的药理作用与临床研究进行综述。     

酪氨酸激酶抑制剂抗白血病作用研究进展

绝大多数慢性髓系白血病(CML)和部分成人急性淋巴细胞白血病(ALL)存在Ph染包怵,即9号、22号染色体易位,t(9;22)(q34;q11)。该易位产生BCR-ABL嵌合基因,中表达BCR-ABL蛋白。后者具有酪氨酸激酶活性,引起细胞恶性转化。目前认为,高酪氨酸激酶活性在白血病发生发展中起关键作用。因此针对性地研究阻断BCR-ABL蛋白激酶表达和生物学活性的药物成为白血病治疗的热点课题。本文综述近年来酪氨酸激酶抑制剂治疗进展。     

酪氨酸激酶抑制剂 Herbimycin A 联合化疗药物对 K562 细胞凋亡的影响

目的：探讨慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）细胞抗凋亡机制和诱导ＣＭＬ细胞凋亡的有效方法。方法：采用Ｋ５６２细胞培养，观察酪氨酸激酶抑制剂ＨｅｒｂｉｍｙｃｉｎＡ（ＨＭＡ）联合化疗药物对ＣＭＬ细胞凋亡的影响，探讨ＨＭＡ对ＣＭＬ细胞的作用。结果：ＨＭＡ或化疗药物单独应用可抑制Ｋ５６２细胞增殖，但不能明显诱导其凋亡。ＨＭＡ能明显增强化疗药诱导Ｋ５６２细胞凋亡。加入外源性巯基化合物阻断ＨＭＡ与酪氨酸激酶的结合可完全取消这种作用。结论：ＨＭＡ通过抑制ＣＭＬ细胞内酪氨酸激酶活性促进细胞凋亡而增加对化疗药物的敏感性，表明酪氨酸激酶抑制剂作为治疗ＣＭＬ药物具有潜在的应用价值。     

苦参碱诱导多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡的实验研究

本研究探讨苦参碱对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的作用及其机制。用不同浓度苦参碱处理RPMI8226细胞24、48小时,通过形态学观察、Annexin-V分析、DNA琼脂糖电泳、线粒体膜电位检测观察苦参碱对RPMI8226细胞的促凋亡作用。结果表明：RPMI8226细胞经苦参碱处理后,出现典型的细胞凋亡形态,凋亡早期细胞膜外翻,DNA琼脂糖电泳出现典型的梯状结构,线粒体膜电位崩塌。结论：苦参碱能有效地诱导骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞凋亡,凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖性。     

酪氨酸激酶抑制剂与费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病治疗

急性淋巴细胞白血病(ALL,acute lymphocytic leukemia)是一种常合并有细胞遗传学、分子生物学异常的恶性血液疾病,其中合并费城染色体(Philadelphia Chromosome,Ph染色体)及(或)BCR/ABL融合基因阳性的急性淋巴细胞白血病(统称为Ph+ALL)预后极差.以酪氨酸激酶抑制剂Imatinib(伊马替尼)为代表的靶向治疗联合化疗目前已成为Ph+ALL的一线治疗,其缓解率、生存率等均优于单纯化疗,且可以提高干细胞移植的疗效.本文就酪酸激酶抑制剂在Ph+ALL中的应用情况进行了综述.     

酪氨酸激酶抑制剂在急性白血病靶向治疗中的研究进展

酪氨酸激酶(TK)系调控蛋白质磷酸化和去磷酸化的一组蛋白激酶,是细胞信号传导的主要成分。根据结构及功能的不同分为受体型TK和非受体型TK两大类。TK中发生突变者绝大多数是Ⅲ型受体TK超家族成员,其中最常见的受体型TK突变是FLT3、c-kit突变。激活或功能性突变的TK与急性白血病的发生发展有关。因此以TK为靶点,合成特异性TK抑制剂对AL进行靶向治疗具有一定的发展前景。本文对此研究进展进行综述。     

正常人骨髓成纤维样基质细胞对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖的影响

为了观察正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL对多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226增殖的影响，建立了RPMI8226细胞和HFCL细胞共培养体系，用MTT法测粘附率，台盼蓝拒染法测定生长曲线；流式细胞术(FCM)检测细胞周期的变化，瑞氏—吉姆萨染色后进行分裂指数(MI)测定，Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果显示，与HFCL细胞共培养1小时后，RPMI8226细胞的粘附率为29．4％；生长曲线显示直接接触组RPMI8226细胞生长受抑，而非直接接触组(transwell组)无变化；RPMI8226细胞与HFCL细胞共培养后，直接接触组G1期细胞增高，S期细胞减少；其分裂指数表现为单独骨髓瘤细胞组大于与HFCL直接接触组；直接接触组PCNA表达下调。结论：正常人骨髓成纤维样基质细胞HFCL能抑制骨髓瘤细胞系RPMI8226的增殖，阻止其细胞周期的运行。     

慢性髓细胞白血病的酪氨酸激酶抑制剂耐药机制

近年,慢性髓细胞白血病(CML)的治疗方法不断取得进展,包括药物化疗、脾切除术、干扰素治疗、造血干细胞移植(HSCT)等方法.第一代酪氨酸激酶抑制剂(TKI)伊马替尼,可使CML患者的总体生存(OS)率与无事件生存(EFS)率均显著提高,已成为CML的一线治疗药物.然而,部分CML患者出现原发性或继发性TKI耐药,成为导致CML患者治疗失败的主要原因.探索TKI耐药机制、寻找应对TKI耐药的新策略成为CML相关研究热点.TKI耐药的机制复杂,与多种基因产物与细胞内信号分子相关,主要分为断裂点簇集区/Abelson白血病病毒(BCR/ABL)依赖途径与非BCR/ABL依赖途径,而这些耐药机制可以单独或同时存在于同一例CML患者.随着相关研究的深入,对CML患者TKI耐药机制的研究取得较大进展,笔者拟就相关研究进展进行综述.     

mdr1及bcr-abl阳性白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI571耐药的逆转

为了探索bcr—abl和mdr-1阳性的白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI571是否有交叉耐药及其逆转方法，采用MTT法检测STI571对K562-n／VCR细胞的抑制作用，采用多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA)、他莫西芬(TAM)、α-干扰素(IFN—α)单用及CsA与IFN—α联合应用研究对STI571耐药的逆转作用。结果表明：K562-n／VCR细胞对STI571有交叉耐药性。CsA，IFN-α，TAM3种逆转剂对其均有不同程度的逆转作用，逆转倍数分别为5．18倍、1．67倍及1．82倍。而半量CsA IFN—α对K562-n／VCR细胞STI571的逆转倍数为34．87倍。结论：多药耐药基因mdrl的扩增可以导致bcr—abl阳性白血病细胞对STI571的耐药。多药耐药逆转荆CsA，TAM和IFN-α对STI571耐药有明显的逆转作用，CsA与IFN—α半量联合对K562-n／VCR细胞的杀伤作用显超过全量CsA或IFN—α的逆转耐药作用。本研究结果提示对STI571发生耐药的患加用CsA和IFN-α可能会提高其疗效。     

BCR-ABL抑制剂STI571对慢性髓系白血病细胞株K562中SARI基因表达影响的研究

为了探讨抑癌基因SARI(suppressor of AP-1 regulated by IFN)在慢性髓系白血病(CML)中表达调控可能的分子机制,收集了46名CML患者和40名健康志愿者外周血样品,使用实时定量PCR技术检测2组人群中SARI基因的相对表达水平.在体外以CML细胞株K562为研究模型,使用BCR-ABL抑制剂STI571(imatinib)处理K562细胞,用实时定量PCR技术检测SARI基因的相对表达水平.结果表明,CML患者外周血中SARI mRNA相对表达量明显低于健康志愿者,2组间具有明显的统计学差异(P<0.001).使用STI571(2.5 μmol/L)处理K562细胞24小时后SARI mRNA相对表达量明显高于未处理K562细胞,两组间差异具有显著性(P<0.001).结论:CML患者外周血SARI mRNA表达水平降低可能与该疾病的发生发展过程相关联,而且SARI基因表达下调与BCR-ABL抑制作用有关.本研究为CML患者基因治疗的研究提供了新线索.     

ST1571诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡信号通路的研究

本研究应用基因芯片探讨酪氨酸激酶抑制剂（STI571）对K562细胞生长、增殖的影响，研究STI571诱导细胞凋亡过程中基因表达的变化及STI571诱导K562细胞凋亡的机制。用RD—PCR技术制备基因芯片探针，然后制成飚62细胞表达谱芯片；用相差显微镜观察K562细胞在STI571处理前后的形态变化；用MIT法检测K562细胞的凋亡，用制备的K562细胞表达谱芯片分析基因表达水平。结果表明，在体外培养条件下用1．0μmol／L的STI571处理K562细胞达到一定时间（24小时）后，K562细胞生长明显变缓，出现凋亡细胞的特征。用自制的l（562细胞基因表达谱芯片检测显示，STI571诱导K562细胞凋亡前后的基因表达有差异。杂交检测后发现，经STI571诱导后基因表达下调的基因有9个，表达上调的基因有4个。这些表达变化的基因主要包括细胞周期相关基因、细胞代谢通路相关基因、信号转导和转录调节相关基因及抗凋亡基因。结论：STI571能有效抑制K562细胞生长，诱导K562细胞凋亡；筛选获得的靶基因在K562细胞恶性转化过程中发挥了重要作用，这为药物靶基因的筛选提供了理论基础。     

蛋白酶体抑制剂诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡及对Notch 1和NF-κB表达的影响

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）的发生、发展与骨髓微环境关系密切，有多种信号通路参与。Notch信号是造血微环境调节造血细胞增殖分化的重要信号通路，其中Notch1与血液肿瘤的发生、发展较为密切。骨髓瘤是高度依赖NF-κB的恶性肿瘤，后者与肿瘤细胞的发生和转移、增殖和凋亡、耐药相关。已证实NF—KB2家族是Notch信号通路的一个靶基因。蛋白酶体抑制剂Bortezomib已获美国FDA批准用于治疗难治及复发多发性骨髓瘤，但其诱导骨髓瘤细胞凋亡的机制尚未完全明确。本研究探讨bortezomib诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡和对Notch1、NF-κB表达水平的影响，采用透射电子显微镜检、流式细胞术及原位缺口末端标记技术观察药物对MM细胞凋亡的影响．用RT—PCR法和免疫荧光细胞化学染色分析分别检测细胞凋亡时Notch1及NF—κB的表达情况。结果表明：RPM18226细胞高表达Notch1和NF—κB；随着bortezomib作用浓度的增高，RPM18226细胞出现典型的凋亡改变，Notch1的表达逐渐降低，NF-κB在胞核表达减少，胞浆表达增多。这种改变在浓度升高到一定数值时与对照相比具有显著性差异（P〈0．05）。结论：bortezomib治疗多发性骨髓瘤机制中有Notch1和NF—κB两条通路的参与．二者可能存在一定的联系，提示Notch1信号可能作为MM治疗的潜在靶点，为相关新药的研发提供一定实验基础。     

TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226黏附和凋亡的影响及其作用机制的初步探讨

本研究探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞系RMPI8226的生长抑制作用,对细胞黏附和凋亡的影响及其作用机制。用MTT法检测TRALL对RPMI8226黏附功能和生长的影响;用AnnexinⅤ/PI检测细胞凋亡;流式细胞学检测细胞表面黏附分子的表达;RT-PCR法测定凋亡相关基因表达水平和Western blot法检测凋亡相关蛋白表达。结果表明:TRAIL抑制RPMI8226细胞生长;可诱导RPMI8226细胞凋亡,并伴有抗凋亡基因Mcl-1、XIAP、cFLIP、CARP1、CARP2和Bcl-2mRNA表达水平下降,促凋亡基因Bax mRNA表达水平升高;RPMI8226细胞内的凋亡执行蛋白caspase-3和NF-κB P65(RelA)表达水平随TRAIL浓度的增加而下降。此外,TRAIL明显上调了RPMI8226细胞表面黏附分子CXCR4的表达。结论TRAIL上调人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞表面的黏附分子CXCR4表达水平。TRAIL可诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226凋亡。在一定的浓度范围内,TRAIL对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的生长抑制呈时间-剂量依赖性。     

南瓜蛋白抑制骨髓瘤细胞系RPMI8226 Notch信号表达

本研究探讨南瓜蛋白（cucurmosin,CUS）在体外对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖抑制的分子机制.用Western blot法检测不同浓度CUS作用骨髓瘤细胞后Notch信号通路Notch1、Jagged-2、P-Akt和NF-kB的表达水平,结果显示,CUS可以下调骨髓瘤细胞中Notch1、Jagged-2和NF-kB蛋白的表达并呈时间和浓度依赖性,同时降低BCL-2和P-Akt的表达.结论：CUS对体外培养的RPMI8226细胞具有明显的增殖抑制作用,并且能明显下调Notch信号及其下游靶基因的表达水平,因此Notch信号通路可能作为多发性骨髓瘤治疗的新靶点,而CUS也可能成为潜在的调控Notch信号通路的新药之一.     

三氧化二砷诱导人骨髓瘤细胞RPMI8226发生Caspase非依赖性细胞凋亡的实验研究

本研究探讨三氧化二砷(As2O3)作用于骨髓瘤细胞RPMI8226引起非Caspase依赖性细胞凋亡。用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测RPMI8226细胞的凋亡率,Western blot方法检测细胞BCL-2及Caspase-3蛋白表达水平。结果表明,As2O3(0.1-20μmol/L)作用于人骨髓瘤细胞RPMI8226 24,48,72 h显示出明显的增殖抑制作用(P<0.05),呈浓度和时间依赖性。与As2O3(10μmol/L)单独处理组相比,zVAD-fmk(20μmol/L)与As2O3联合处理组的凋亡率未见明显变化。与As2O3(10μmol/L)单独处理组比较,zVAD-fmk与As2O3联合处理组Caspase-3、BCL-2蛋白表达明显升高。结论:As2O3对RPMI8226细胞的增殖有明显的抑制作用。As2O3可诱导RPMI8226细胞发生凋亡,其凋亡过程中可能存在Caspase非依赖性细胞凋亡程序。     

雷帕霉素对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖、凋亡及趋化因子受体CXCR4表达的影响

本研究探讨雷帕霉素对骨髓瘤细胞系RPMI8226体外增殖、凋亡、细胞周期及对趋化因子受体CXCR4表达的影响。不同浓度雷帕霉素作用于RPMI8226细胞不同时间,应用MTT检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,半定量PCR检测雷帕霉素干预RPMI8226后细胞周期蛋白D1（cyclinD1）、CXCR4mRNA表达,荧光定量PCR检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）mRNA表达的影响。结果表明：雷帕霉素对RPMI8226细胞有增殖抑制作用,细胞周期显示细胞阻滞于G0／G1期,G2／M期比例降低,cyclinD1、CXCR4和mTORmRNA表达下调。结论：雷帕霉素呈时间一剂量依赖性抑制RPMl8226细胞增殖,诱导细胞凋亡,并通过下调mTOR及cyclinD1表达,使细胞周期阻滞于G0／G1期,同时通过下调细胞CXCR4的表达,减少骨髓瘤细胞与基质细胞间的黏附及趋化作用达到抗肿瘤的效果。     

蛋白激酶抑制剂Go6976增强慢性髓系白血病细胞对三氧化二砷化疗敏感性的研究

研究Go6976是否能去除As2O3引起的G2/M周期阻滞,增加慢性髓系白血病(CML)细胞株(K562细胞)对As2O3的敏感性.K562细胞经不同浓度的Go6976及和As2O3(5μmol/L)作用后,流式细胞术检测细胞周期,台盼蓝排斥试验检测细胞活力,四唑盐(MTT)比色试验分析细胞的生长增殖.结果表明,流式细胞术细胞周期检测发现K562细胞经As2O3作用24小时和48小时后,G2/M期细胞比例分别为(38.02±7.70)%和(32.58±7.43)%,未出现明显凋亡;50nmol/LGo6976与As2O3联合作用后,G2/M期细胞分别减少至(23.24±2.93)%和(16.18±1.60)%,subG1期细胞分别增加至(11.82±2.31)%和(27.80±2.89)%;且其变化随Go6976浓度及作用时间而增加.同时台盼蓝排斥试验及MTT试验观察到Go6976与As2O3联合作用能明显降低细胞活力、抑制其生长,但Go6976本身无明显作用.结论Go6976可能通过去除G2/M期阻滞,有效增强了K562细胞对As2O3化疗的敏感性.