磷酸化JNK介导全反式维甲酸诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)抑制视网膜母细胞瘤(Rb)细胞生长并诱导其凋亡的作用及信号转导机制。方法 应用^3H—胸腺嘧啶掺人分析法观察ATRA对细胞生长的抑制作用;用流式细胞仪分析ATRA对Y79细胞周期的影响;以DNA片段凝胶电泳分析细胞凋亡;用Western blot分析c—jun氨基末端激酶(JNK)的磷酸化。结果 ATRA可明显抑制Y79细胞的生长,1μmol/L处理36h时,^3H—胸腺嘧啶掺人率下降达40％,Y79细胞被阻滞于G0／G1期,并出现Sub—G1峰。ATRA可诱导Y79细胞凋亡,此凋亡过程可被JNK的阻断剂Curcumin阻断;在此过程中,JNK被激活并磷酸化。结论 ATRA可抑制Y79细胞生长并诱导其凋亡,其过程是由磷酸化的JNK介导,提示ATRA可能是一种潜在的抗Rb化疗药物。     

bcl-xs基因对卵巢癌的作用及其凋亡机制的研究

目的：研究重组腺病毒bcl-xs基因（adv-bcl-xs)对卵巢癌细胞及其裸鼠移植腹水瘤的生长抑制作用和荷瘤裸鼠生存率的影响。同时探讨bcl-xs基因对于卵巢癌的作用机制。方法：采用扩增后的adv-bcl-xs感染卵巢癌细胞NUTU－19，观察对NUTU－19细胞的生长抑制作用并检测其病毒滴度，再将adv－bcl-xs导入人卵巢癌裸鼠移植腹水肿瘤，观察对腹水的生长抑制作用，计算裸鼠荷瘤生存时间，免疫细胞化学染色测定bcl-xs基因表达情况。终末脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL法）计数凋亡细胞检测肿瘤细胞凋亡情况。结果：adv-bcl-xs对NUTU－19有抑制和杀伤作用。在NUTU－19细胞和裸鼠体内过度表达，使裸鼠腹水形成时间和荷瘤裸鼠平均生存时间延长，有统计学意义。在NUTU－19细胞和裸鼠卵巢癌移植腹水肿瘤细胞中检测到凋亡细胞。结果：adv－bcl-xs对卵巢癌细胞有抑制作用，而且可能是通过凋亡机制发挥的。     

紫杉醇诱导视网膜母细胞瘤细胞凋亡及对磷酸化Bcl-2的影响

目的：研究紫杉醇(Tax)抑制视网膜母细胞瘤(Rb)细胞生长并诱导其凋亡及磷酸化Bc-2在其中的作用。方法：应用^3H-胸腺嘧啶掺入分析法观察Tax对细胞生长的抑制作用，以DNA片段凝胶电泳分析细胞凋亡，用Western blot分析Tax对磷酸化Bcl-2的影响，用cDNA细胞转染法观察突变型Bcl-2阻断Tax的作用。结果：Tax可明显地抑制Y79细胞的生长，1μmoL／L Tax处理24小时，^3H-胸腺嘧啶掺入率下降达55．43％，Tax可诱导Y79细胞凋亡。在此过程中，Bcl-2被磷酸化。当Y79细胞被转染突变型Bcl-2后，Tax对Y79细胞的作用被阻断。结论：Tax可抑制Y79细胞生长并诱导其凋亡，磷酸化Bcl-2参与其过程。     

全反式维甲酸对神经母细胞瘤细胞系体外生长的影响

目的　体外观察全反式维甲酸 (alltransretinoicacid ,ATRA)对神经母细胞瘤细胞系 (SK N SH)细胞生长的影响。方法　SK N SH细胞持续培养在含ATRA的 96孔板中 ,采用MTT法检测ATRA的体外抗增殖效果 ,用相差倒置显微镜及透射电镜观察细胞形态变化。结果　 0 .1～ 1μmol/L浓度的ATRA对SK N SH细胞可产生明显的抗增殖作用 ;其抗增殖作用呈时间和剂量依赖关系。 1μmol/LATRA作用 12天 ,细胞生长抑制率达 77.0 3%。ATRA能诱导SK N SH细胞分化成熟 ,先是细胞出现神经树 (轴 )突样胞突 ,培养 10天后多个细胞形成类似神经节样形态结构 ,“神经节”之间形成类神经纤维 ;电镜观察细胞核浆比例下降 ,无特征性细胞凋亡形态变化。结论　ATRA通过诱导分化作用 ,而明显抑制神经母细胞瘤细胞增殖。     

丹参酮体外诱导分化作用及其机制的研究

本实验在体外细胞培养的基础上，通过细胞形态学，细胞增殖动力学，癌基因表达及裸鼠成功瘤性的研究，观察丹参酮对人宫颈癌细胞株的体外诱导分化作用。结果表明；经无毒剂量的丹参酮和维甲酸处理后，细胞形态趋向良性分化，生长减慢，集落形成率和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺和率明显降低。     

全反式维甲酸体外诱导神经母细胞瘤细胞分化研究

[目的]观察全反式维甲酸（all trans retinoic acid,ATRA)体外对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长的影响并对其作用机制进行初步探讨。[方法]SK-N-SH细胞经ATRA处理后，采用相关显微镜，神经纤维银染法，透射电镜观察，逆转录PCRmRNA检测等手段，观察ATRA对SK-N-SH细胞生长的影响。[结果]ATRA作用SK-N-SH细胞12天后，细胞形态发生显著变化。表现为明显分化；出现神经原性表型，多个细胞形成神经节，节间形成粗而长的类神经纤维；尼氏小体和银染法亦证明SK-N-SH细胞产生显著分化，透射电镜观察结果表明，ATRA对该细胞无明显凋亡诱导作用，ATRA对SH细胞的维甲酸受体-β（RARβ）表达水平有上调作用。[结论]ATRA对神经母细胞瘤细胞体外能产生明显诱导分化作用，此作用与ATRA上调细胞的RARβmRNA水平有关。     

全反式维甲酸对人肺癌细胞诱导凋亡的作用

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对肺癌细胞生长的影响及其凋亡作用.方法:应用MTT法检测ATRA对体外培养人肺癌细胞株细胞A549的抑制率,光镜及透射电镜、流式细胞仪等检测ATRA对A549细胞诱导凋亡的作用.结果: 不同浓度的ATRA对A549细胞的增殖均有抑制作用,且量效关系明显.但大剂量主要导致细胞死亡,以10-5mol*L-1的ATRA作用效果最好,经10-5mol*L-1 ATRA作用7d后,A549细胞增殖抑制率达到60%.光镜及透射电镜下可见细胞恶性表型向正常表型发生逆转,并可观察到凋亡小体.流式细胞仪分析结果显示,ATRA处理组细胞周期延迟,G1期比例明显升高,S、G2期比例下降.结论:ATRA可抑制肺癌细胞的增殖,并诱导癌细胞凋亡.     

全反式维甲酸诱导人卵巢癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察全反式维甲酸(A11一trans retinoic acid，ATRA)诱导人卵巢癌细胞CAOV3产生凋亡。方法：应用扫描电镜、透射电镜、DNA断裂分析及流式细胞术观察ATRA诱导人卵巢癌细胞CAOV3凋亡。结果：ATRA作用后电镜下细胞逐渐变圆，细胞表面微绒毛消失，核染色质更加致密，浓缩分块，胞质中有空泡形成，细胞表面出泡，脱落形成膜包裹的凋亡小体。流式细胞术不同浓度ATRA对CAOV3细胞凋亡作用的结果显示在DNA直方图上均出现低于G1期二倍体DNA含量的亚二倍体峰，随药物浓度增加，亚二倍体细胞从10^-8mol／L ATRA时的18．7％增加到10^-6mol／L的37．4％；10^-6mol／LATRA作用24h即诱导CAOV3细胞产生典型的梯形DNA条带(DNAlallder)，大小约180bp的整数倍递增，随ATRA作用时间延长而逐渐加强；结论：ATRA可以诱导卵巢癌细胞产生细胞凋亡，呈时间和浓度依赖性。     

全反式维甲酸联合细胞因了对NB4细胞增殖分化作用的体外研究

目的：探讨新的药物协同ＡＴＲＡ诱导早幼粒白血病细胞分化作用,降低临床ＡＴＲＡ剂量提高ＡＴＲＡ疗效。方法：ＮＢ４细胞株为实验模型,采用细胞生物学研究方法,体外研究ＩＦＮγ、ＴＮＦ和Ｇ－ＣＳＦ各结合ＡＴＲＡ对ＮＢ４分化的作用。结果：在诱导分化和抑制白血病克隆增中,ＩＦＮγ和ＴＮＦ具协同作用,以ＩＦＮγ作用最明显,在ＡＴＲＡ浓度为１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ时,比较各细胞因子联合ＡＴＡ对ＮＢ４细胞作用后ＮＢＴ的     

全反式维甲酸对阿糖胞苷诱导HL—60细胞凋亡的影响

目的：探讨ＨＬ－６０细胞经全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）作用后对化疗药物阿糖胞苷（ＡＲＡ－ｃ）诱导凋亡敏感性的变化。方法：应用光镜检查凋亡细胞形态,ＤＮＡ电泳检查梯状条带及流式细胞周期分布、凋亡细胞率和ｂｃｌ－２蛋白表达的阳性细胞率和相对荧光强度（ＭＦＩ）。结果：ＡＴＲＡ０．３ｍｇ／Ｌ作用ＨＬ－６０细胞７２ｈ后,Ｓ期细胞显著减少至３２．９％（Ｐ〈０．０５）,Ｇ０／Ｇ１期细胞明显增加到５８．５％（Ｐ〈０．０５）,ｂｃｌ－２阳性细胞率和ＭＦＩ分别下降至１８％和０．６３（Ｐ〈０．０５）;Ａｒａ－Ｃ１．５ｍｇ／Ｌ作用ＨＬ－６０细胞４ｈ,凋亡细胞率为５５．１％,ＤＮＡ电泳风明显的梯状条带。当ＨＬ－６０细胞经ＡＴＲＡ０．３ｍｇ／Ｌ作用７２ｈ手中Ａｒａ－Ｃ１．５ｍｇ／Ｌ继续培养４ｈ,细胞凋亡率明显减少至３４．４％（Ｐ〈０．０５）,     

白藜芦醇对人食管癌EC109细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

背景与目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)抑制人食管癌EC109细胞生长、诱导凋亡的作用机制.材料与方法:不同浓度Res作用EC109细胞后,采用MTF法检测Res对人食管癌EC109细胞生长的抑制作用;Hoechst33258荧光染色和倒置相差显微镜观察EC109细胞的形态学改变;流式细胞术分析细胞周期分布和细胞凋亡.结果:Res(15.62～500 μmol/L)可以抑制人食管癌EC109细胞的生长,且具有时间和剂量依赖性(r=0.918,0.996,P＜0.05、0.01),500 μmol/L Res作用72 h后对细胞的生长抑制率可达87.43%.500 μmol/L Res作用48 h,荧光染色及相差显微镜下可见典型凋亡细胞形态学改变.细胞周期分析显示Res能诱导EC109细胞在S期停滞,抑制细胞DNA的合成并可明显诱导EC109细胞凋亡,凋亡率最高为62.3%.结论:Res可抑制人食管癌EC109细胞生长,引起细胞周期的S期阻滞,并诱导细胞凋亡.     

Bcl-2基因家族相关蛋白在人卵巢癌耐药细胞凋亡中的作用

[目的]探讨bcl-2基因家族相关蛋白在卵巢癌耐药细胞SKOV3／ADM发生凋亡中的作用。[方法]用免疫细胞化学法测定SKOV3和SKOV3／ADM细胞的bcl-2蛋白；以不同浓度的阿霉素作用于SKOV3/ADM细胞，用流式细胞仪动态分析细胞周期和凋亡，并在不同时间点观察其bcl-2、bax、bad和p21蛋白变化。[结果]SKOV3/ADM细胞的bcl-2蛋白显著高于SKOV3（P〈0．01）；大剂量阿霉素（10μg／ml和40μg/ml）作用3h后，能明显下调SKOV3／ADM的bcl-2蛋白和增加bad蛋白；小剂量（0．5μg／ml）阿霉素作用（24、48、72h）后，SKOV3/ADM细胞的凋亡发生率（10．08％、30．53％和33．7％），显著低于SKOV3（40．01％、65.38％和77．65％）（P〈0．01）；SKOV3／ADM细胞p21、bad蛋白增加，bcl-2蛋白下降。[结论]SKOV3／ADM细胞bcl-2高表达能拮抗化疗剂诱导凋亡的作用，bcl-2基因家族相关蛋白与卵巢癌耐药细胞凋亡密切相关。     

Bcl-2基因家族相关蛋白在人卵巢癌耐药细胞凋亡中的作用

[目的]探讨bcl-2基因家族相关蛋白在卵巢癌耐药细胞SKOV3／ADM发生凋亡中的作用。[方法]用免疫细胞化学法测定SKOV3和SKOV3／ADM细胞的bcl-2蛋白；以不同浓度的阿霉素作用于SKOV3/ADM细胞，用流式细胞仪动态分析细胞周期和凋亡，并在不同时间点观察其bcl-2、bax、bad和p21蛋白变化。[结果]SKOV3/ADM细胞的bcl-2蛋白显著高于SKOV3（P〈0．01）；大剂量阿霉素（10μg／ml和40μg/ml）作用3h后，能明显下调SKOV3／ADM的bcl-2蛋白和增加bad蛋白；小剂量（0．5μg／ml）阿霉素作用（24、48、72h）后，SKOV3/ADM细胞的凋亡发生率（10．08％、30．53％和33．7％），显著低于SKOV3（40．01％、65.38％和77．65％）（P〈0．01）；SKOV3／ADM细胞p21、bad蛋白增加，bcl-2蛋白下降。[结论]SKOV3／ADM细胞bcl-2高表达能拮抗化疗剂诱导凋亡的作用，bcl-2基因家族相关蛋白与卵巢癌耐药细胞凋亡密切相关。     

促黄体生成激素释放激素激动剂对卵巢上皮性癌增殖影响

了解促黄体生成激素释放激素激动剂（丙氨瑞林）对人卵巢上皮性癌HO－8910细胞的作用。方法：用MTT比色法和计细胞分裂指数方法，检测与不同浓度丙氨瑞林（0．1－1000nmol／L）共同培养48小时后的人卵巢上皮性癌HO－8910细胞。结果：丙氨瑞林可抑制癌细胞的增殖，使核分裂指数明显降低，与对照比较P＜0．01，MTT比色结果显示抑制作用存在着量效关系，10nmol／L浓度的丙氨瑞林可明显抑制HO－8910细胞的增殖，与对照比较差异有显著性意义（P＜0．05）。结论：丙氨瑞林在体外可明显抑制HO－8910细胞的增殖。     

三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞凋亡机制的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (arsenictrioxide ,As2 O3 )诱导人卵巢癌细胞株 3AO细胞凋亡的机制。方法 :以人卵巢癌细胞株 3AO细胞为体外实验对象。通过台盼蓝染色法 ,测定不同浓度As2 O3 作用不同时间对 3AO细胞的生长抑制率 ;采用流式细胞仪检测法 ,通过碘化丙啶 (PI) /罗丹明 12 3(Rho damine12 3,Rh12 3)双重染色测定 3AO细胞线粒体跨膜电位 (△Ψm) ;通过吖啶橙染色 ,荧光显微镜观察As2 O3 作用后 3AO细胞的形态变化。结果 :As2 O3 对 3AO细胞的生长具有明显的抑制作用 ,且具有时间与剂量依赖性 (P <0 0 5 ) ;3 0 μmol/L的As2 O3 作用 4 8h后 3AO细胞中PI- Rh12 3- 细胞与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;As2 O3 作用后 ,3AO细胞呈现典型的凋亡细胞形态特征。结论 :As2 O3 通过诱导凋亡来抑制人卵巢癌细胞株细胞的生长 ,其机制与线粒体跨膜电位△Ψm下降有关。     

蛴螬粗提物对人宫颈癌HeLa细胞诱导凋亡作用及其机制

 目的 研究蛴螬粗提物对人宫颈癌HeLa细胞诱导凋亡作用，并探讨其作用机制。方法 采用流式细胞仪检测HeLa细胞的细胞周期分布相和细胞凋亡率；末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）介导的脱氧核苷酸缺口末端标记（TdT mediated dUTP nick end labeling）TUNEL法检测凋亡细胞；通过免疫细胞化学SP法测定凋亡相关基因产物p53、Fas、bcl 2、Bax蛋白的表达情况。结果 (1)蛴螬粗提物可以诱导HeLa细胞发生凋亡，加药组出现亚二倍体峰，并且G0/G1期细胞比例显著增加（P＜0.01），而S期和G2/M期细胞比例则明显下降,将细胞阻滞在G0/G1期；（2）蛴螬粗提物作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多，凋亡指数与药物处理呈时间依赖性和剂量依赖性；(3)蛴螬粗提物作用后bcl 2、p53蛋白随提取物浓度表达均下降，Bax、Fas蛋白表达上升，四种蛋白表达各组间比较差异均有具有统计学意义（P<0.01）。结论 (1) 蛴螬粗提物对人宫颈癌HeLa细胞具有诱导凋亡作用；(2)蛴螬粗提取物诱导凋亡作用机制可能与细胞周期发生G0/G1期阻滞有关；并且通过下调bcl 2、p53蛋白表达,上调Bax、Fas蛋白表达，经由细胞凋亡的死亡受体通路和线粒体通路完成凋亡的启动和执行。     

Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV-3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响

目的探讨Genistein对耐药卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响。方法采用MTT法检测Genistein单用及合用顺铂对细胞增殖的影响,流式细胞仪分析Genistein及Genistein联合顺铂对细胞周期和凋亡的影响。结果Genistein对SKOV3细胞增殖表现出浓度依赖性的抑制作用,并显著提高了其对顺铂的敏感性(P<0.05);0.625～5μg/ml顺铂与2.5～10μg/mlGenistein合用基本表现为协同作用。5、10μg/mlGenistein均可将细胞阻滞于G2/M期并诱导一定程度的凋亡,10μg/mlGenistein还可进一步的干扰S期进程;当顺铂与Genistein合用时,两种药物在干扰SKOV3细胞周期和诱导凋亡方面表现为显著的协同效应。结论Genistein能够抑制耐药卵巢癌细胞SKOV3的增殖,并显著增强该细胞对顺铂的敏感性。     

MTA1在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞侵袭转移影响的研究

  目的  研究转移相关基因1(metastasis-associated-gene1, MTA1)表达与卵巢癌发生发展转移的关系, 研究MTA1对卵巢癌侵袭转移能力的影响, 并探讨抑制卵巢癌侵袭转移的潜在靶点。  方法  免疫组织化学法检测110例卵巢癌组织中MTA1的蛋白表达水平, 分析MTA1蛋白表达与卵巢癌分化程度、临床分期及与腹腔转移的关系。并通过脂质体介导方法, 将特异性siRNA表达载体psilenter2.0-MTA1-siRNA转染入人卵巢癌细胞系HO-8910PM, 采用RT-PCR以及Western blot检测特异性siRNA对MTA1mRNA及蛋白表达的抑制效果。应用划痕损伤实验及Transwell实验检测MTA1对卵巢癌细胞侵袭转移能力的影响。  结果  MTA1随卵巢癌组织学分化程度的升高而降低, 呈负相关, MTA1的表达随着FIGO分期期别的增加而增加, 呈正相关, MTA1的表达随卵巢癌腹腔转移而增加, 呈正相关。RT-PCR及Western blot结果显示, siRNA成功抑制卵巢癌细胞系HO-8910PM中MTA1的表达。划痕损伤实验显示转染后划痕损伤愈合明显减慢, 迁移率明显降低, Transwell体外侵袭实验结果显示, 转染后穿膜细胞百分率显著降低(P < 0.05)。  结论  MTA1表达水平的增高与卵巢癌的分化程度、临床分期及远处转移密切相关, 体外研究显示抑制MTA1在卵巢癌细胞中的表达, 使细胞生长、侵袭及转移能力均受到抑制, 提示MTA1在卵巢癌的远处侵袭转移过程中发挥重要作用, 可能成为卵巢癌基因治疗的潜在靶点。      

沉默EZH2基因表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的 研究RNA干扰靶向沉默EZH2基因表达对ACHN肾癌细胞株增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 应用Western blot法检测EZH2蛋白在人正常近端肾小管上皮细胞株HK-2和肾癌细胞株786-0和ACHN中的表达。脂质体法介导化学合成EZH2 siRNA转染ACHN细胞株,Western blot法检测转染后ACHN细胞EZH2蛋白的表达情况,CCK-8法检测转染后ACHN细胞增殖率,流式细胞术检测转染后ACHN细胞周期分布和凋亡情况。结果 肾癌细胞株786-0和ACHN中EZH2蛋白的表达水平明显高于人正常近端肾小管上皮细胞HK-2。RNA干扰EZH2基因可成功地敲减ACHN细胞EZH2蛋白的表达。EZH2-siRNA干扰后,实验组ACHN细胞生长明显受抑制,在转染后48和72 h细胞增殖受抑制效应著（P＜0.05）。细胞周期分析显示：siEZH2转染组G1期ACHN细胞比例呈增加趋势,而S期和G2期细胞比例呈减少趋势,其中在转染后48h G1期ACHN细胞比例显著增加,而S期和G2期细胞比例明显下降（P＜0.05）;凋亡分析显示：siEZH2转染组ACHN细胞凋亡率随转染后时间的延长而呈增加趋势,在转染后48和72 h细胞凋亡率增加最显著（P＜0.05）。结论 沉默EZH2基因表达可靶向肾癌ACHN细胞周期中G1/S限制点而阻滞细胞周期进展,同时可有效抑制肾癌细胞增殖和促进细胞凋亡。