MicroRNA-212通过调控TGF-β1/Smads信号通路对积水肾纤维化进展的影响

目的：探讨microRNA-212通过调控TGF-β1/Smads信号通路对积水肾纤维化进展的促进作用。方法：24只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为Sham组、a组、b组和c组四组,每组6只。Sham组行假手术,a组行单侧输尿管结扎阻断,b组和c组假手术后即开始分别每天静脉注射从a组小鼠提取的Exo/miroRNA-212血清和生理盐水。10 d后分别提取肾脏组织行Masson染色评估肾纤维化比例(FR),免疫组化检测α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,Western Blot测TGF-β1、p-Smad3蛋白表达情况。结果：a组和b组FR、α-SMA的表达百分比、TGF-β1和Smad3蛋白表达量显著高于Sham组和c组（P<0.05）。结论：输尿管梗阻肾脏通过外泌体转运的microRNA-212上调TGF-β1/Smad3表达,从而促进肾纤维化的发生发展。     

PHD锌指蛋白14敲除促进小鼠急性损伤后肾纤维化发生

目的考察肾组织PHD锌指蛋白14(PHF14)的表达变化,探讨PHF14在急性损伤后肾纤维化中的作用。方法选用IVC级C57BL/6小鼠20只,随机分为2组:对照组(n=5)和叶酸刺激实验组(n=15),实验组又分为叶酸作用后2、14和28d3个亚组,每个亚组5只小鼠。实验组单次给予叶酸腹腔注射(250mg/kg,溶媒为0.3mol/L碳酸氢钠溶液),对照组单次给予溶媒腹腔注射。每组小鼠在预定的时间点处死,留取血清检测肌酐(SCr)和尿素氮(BUN);留取肾组织,行Masson染色验证模型,蛋白质免疫印迹法研究PHF14在急性肾损伤纤维化进程中的表达变化。利用PHF14基因敲除鼠,制作与上述相同的急性肾损伤模型,比较PHF14敲除组和未敲除组肾脏在第2、14和28天的病理变化,并行α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和collagen 1免疫组织化学染色,蛋白质免疫印迹法检测转化生长因子β(TGF-β)、α-SMA、collagen 1的表达规律。结果与对照组相比,实验组各时间点小鼠SCr与BUN变化曲线提示急性肾损伤病程;肾脏病理变化显示,随叶酸作用时间的增加,肾脏逐渐进展到纤维化,提示模型制作成功。在急性肾损伤至慢性纤维化过程中,PHF14持续高表达。与野生型小鼠相比,PHF14敲除小鼠TGF-β、α-SMA、collagen 1表达较高,肾纤维化程度更重。结论叶酸腹腔注射可成功建立急性肾损伤及损伤后肾小管间质纤维化模型,PHF14的表达在叶酸促纤维化刺激后持续上调,而PHF14敲除会加重急性损伤后肾纤维化的发生,提示PHF14对肾脏纤维化进程起抑制作用,可能是内源性肾纤维化保护因子。     

经膀胱颈部分结扎建立膀胱输尿管返流性肾损害动物模型

  目的  建立一种膀胱出口梗阻导致的返流性肾损害动物模型。  方法  取6～8周龄雄性C57BL/6小鼠60只,随机划分为对照组、假手术组和膀胱颈部分结扎（PBOO）组,每组20只,PBOO组小鼠麻醉后开腹分离膀胱颈,用0.3 mm直径的金属棒引导部分结扎膀胱颈,假手术组仅开腹分离膀胱颈,不结扎,对照组不做处理。术后7 d,每组随机挑选12只存活的小鼠,观察膀胱、输尿管、肾盂和肾脏大体变化,行经膀胱逆行性尿路造影,取肾组织进行组织病理学分析,Western blot、免疫荧光和免疫组化分别检测波形蛋白、增殖细胞核抗原（PCNA）、α平滑肌肌动蛋白 （α-SMA）表达水平。  结果  与对照组和假手术组相比,PBOO组小鼠膀胱、输尿管、肾盂明显扩张,膀胱输尿管返流明显,肾脏体积和质量增加（P<0.001）,肾实质变薄（P<0.000 1）;组织病理学检查可见肾小球萎缩,肾小管扩张,小管间质炎细胞浸润,肾小球基底膜增生,间质纤维化明显;Western blot、免疫荧光和免疫组化分别测得肾组织中波形蛋白、PCNA、α-SMA的表达水平均升高（P<0.000 1）。  结论  小鼠行PBOO术后,膀胱、输尿管、肾脏均发生明显形态改变,并出现返流性肾纤维化样损害,可以作为研究膀胱出口梗阻导致的肾纤维化病理改变机制及治疗措施的动物模型。     

非诺贝特治疗单侧输尿管结扎小鼠肾纤维化的机制研究

  目的  探讨非诺贝特在单侧输尿管结扎诱导的小鼠肾纤维化中的作用机制,为肾纤维化提供潜在的治疗靶点。  方法  成年雄性C57BL/6J小鼠31只,随机分为假手术组（Sham组,n=9）、单侧输尿管结扎组（UUO组,n=10）和单侧输尿管结扎+非诺贝特治疗组（UUO+Feno组,n=12）。UUO组及UUO+Feno组小鼠均结扎左侧输尿管,Sham组小鼠仅游离左侧输尿管,不做结扎处理。术后第二日起,UUO+Feno组每日给予10 mg/kg （终浓度为0.08 mg/mL）的非诺贝特溶液灌胃,持续14 d;其余两组每日灌胃等量生理盐水。术后第15 天灌胃结束后处死小鼠取材,检测血清肌酐和尿素氮,肾组织行HE染色、Masson染色和Sirius Red染色,检测肾组织羟脯氨酸含量,免疫组化染色检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（COLⅠ）蛋白表达,Western blot法检测肾组织α-SMA、COLⅠ蛋白表达变化,实时荧光定量（RT）- PCR法检测肾组织纤维化相关基因基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9、COLⅠA1、COLⅠA2、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-SMA mRNA的表达变化。  结果  与Sham组相比,UUO组小鼠血清肌酐及尿素氮水平升高（P<0.05）;与UUO组相比,UUO+Feno组小鼠血清肌酐及尿素氮水平降低（P<0.05）。HE染色、Masson染色、Sirius Red染色以及肾羟脯氨酸含量的结果均表明UUO组较Sham组胶原沉积明显增多,炎性细胞浸润明显,UUO+Feno组较UUO组胶原沉积程度显著减轻,炎性细胞浸润程度显著改善,对肾纤维化的启动阶段有抑制作用。免疫组化结果显示:与Sham组相比,UUO组 α -SMA、COLⅠ在肾组织中的表达水平升高（P<0.05）;与UUO相比,UUO+Feno组α-SMA、COLⅠ在肾组织中的表达水平降低（P<0.05）;RT-PCR和Western blot结果显示:与Sham组相比,UUO组纤维化相关因子的mRNA及α-SMA、COLⅠ蛋白表达水平均升高（P<0.05）;与UUO组相比,UUO+Feno组纤维化相关因子的mRNA及蛋白表达水平均降低（P< 0.05）。  结论  非诺贝特通过调控与肾脏纤维化相关因子的表达水平改善肾脏纤维化。     

复方肾怡治疗狼疮肾炎小鼠的疗效及对补体旁路途径激活的研究

背景 狼疮肾炎（LN）是系统性红斑狼疮严重并发症之一,相关研究表明中药复方肾怡（SY）可以调节机体免疫及抑制肾脏纤维化。目前运用复方SY治疗LN的疗效及机制尚不清楚。 目的 探究复方SY对LN小鼠的治疗作用及补体旁路途径激活的影响。 方法 2021年4—7月,选取35只SPF级MRL/lpr小鼠（8周龄）、6只SPF级C57BL/6J小鼠（8周龄）进行实验。将MRL/lpr小鼠依据随机数字表法分为MRL/lpr组（n=8）及SY低剂量组（n=9）、SY中剂量组（n=9）、SY高剂量组（n=9）,C57BL/6J小鼠为正常对照组（n=6）。SY低、中、高剂量组分别以15.34、46.02、92.04 g/kg剂量进行复方SY汤剂灌胃,正常对照组及MRL/lpr组以0.5 ml 0.9%氯化钠溶液灌胃。从小鼠12周龄开始干预,1次/d,持续14周。观察各组动物体征,检测尿蛋白与肌酐比值（UPCR）,血清抗双链DNA抗体（anti-dsDNA）、抗核抗体（ANA）水平,肾脏组织病理情况,肾脏组织C3、免疫球蛋白G（IgG）、C5b-9免疫沉积情况,肾脏组织α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）、Fibronectin及补体蛋白水平。 结果 截至干预结束,正常对照组6只小鼠存活,MRL/lpr组3只小鼠存活,SY低、中、高剂量组分别有5、7、9只小鼠存活。（1）正常对照组、SY中剂量组、SY高剂量组小鼠体征量化分值均低于MRL/lpr组（P<0.05）。（2）正常对照组、SY各剂量组小鼠干预第9、10、11、12、13周UPCR均低于MRL/lpr组（P<0.05）。（3）正常对照组、SY低剂量组、SY高剂量组小鼠干预14周后血清anti-dsDNA水平低于MRL/lpr组（P<0.05）;正常对照组、SY各剂量组小鼠干预14周后血清ANA水平低于MRL/lpr组（P<0.05）。（4）干预14周后,HE染色可见MRL/lpr组小鼠肾小球内有免疫复合物沉积,PAS染色可见肾小球内有新月体形成;HE染色可见SY各剂量组小鼠肾小球大致正常,而PAS染色可见SY中、高剂量组小鼠肾小球内有系膜细胞增生,伴少量炎细胞浸润。（5）正常对照组、SY各剂量组小鼠干预14周后肾脏组织C3、C5b-9沉积低于MRL/lpr组（P<0.05）;SY低剂量组、SY高剂量组小鼠干预14周后肾脏组织IgG免疫沉积低于MRL/lpr组（P<0.05）。（6）SY高剂量组小鼠干预14周后肾脏组织CollagenⅠ、Fibronectin 、C3、C5、CD35蛋白水平低于MRL/lpr组（P<0.05）;SY低、中剂量组小鼠干预14周后肾脏组织Fibronectin、C3、C5、CD35蛋白水平低于MRL/lpr组（P<0.05）;正常对照组小鼠干预14周后肾脏组织Fibronectin蛋白水平低于MRL/lpr组（P<0.05）。 结论 复方SY可改善MRL/lpr小鼠狼疮肾脏损伤,延缓疾病进展,其作用机制可能是通过抑制补体旁路途径的激活。     

六味地黄丸抑制巨噬细胞激活抗肾纤维化实验研究

目的 研究六味地黄丸对单侧输尿管结扎（Unilateral ureteral obstruction,UUO）致肾纤维化过程中巨噬细胞激活的影响。 方法 24只C57BL/6小鼠随机分为假手术组（8只）和结扎组（16只）,结扎小鼠随机分为模型组和六味地黄丸组,每组8只。造模开始给予六味地黄丸（0.617 1 g/kg）灌胃给药至2周末,实验结束留取肾组织样本,检测肾组织病理学。免疫组化检测平滑肌肌动蛋白（Alpha-sooth muscle actin,α-SMA）和人磷酸化信号转导分子-2（p-Smad2）,以及肾组织F4/80表达。实时定量PCR测定TNF-α mRNA表达,Western blot检测趋化因子11（Chemokine (C-X-C motif) ligand,CXCL11）和CD68蛋白表达。 结果 UUO造模2周肾脏间质纤维化形成,六味地黄丸显著抑制肾纤维化形成。假手术组α-SMA表达较低,模型组α-SMA染色阳性表达显著增强,主要分布在肾小管上皮细胞和增宽的肾间质;与模型组相比,六味地黄丸组α-SMA表达显著降低。假手术组F4/80表达较低,UUO造模2周,F4/80表达显著升高,促炎症因子及趋化因子等表达显著升高,而六味地黄丸显著抑制F4/80及促炎症因子和趋化因子表达。 结论 六味地黄丸显著抑制巨噬细胞激活可能是其有效抑制肾纤维化的作用机制,为其治疗肾纤维化提供基础依据。      

KIF3A在单侧输尿管梗阻小鼠肾脏中的表达及意义

目的 通过研究KIF3A在单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠和TGF-β1诱导的NRK-52E细胞中的表达情况,探讨KIF3A在肾间质纤维化中的作用。方法 将36只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组（Sham, n=18）和单侧输尿管梗阻组（UUO, n=18）,分别于术后7、14、21 d 处死小鼠。苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）三色法染色和天狼星红（Sirius Red）染色观察小鼠肾间质纤维化程度,RT-PCR、免疫组织化学（IHC）和免疫印迹（Western blot）检测小鼠肾组织KIF3A的表达和分布。免疫印迹检测小鼠肾组织KIF3A、E-cadherin 和α-SMA 蛋白的表达。TGF-β1诱导NRK-52E细胞转分化后,免疫印迹检测KIF3A、E-cadherin 、α-SMA、Wnt4和β-catenin 蛋白的表达。结果 与Sham组相比,UUO小鼠肾间质纤维化程度随着梗阻时间延长而增加,表明造模成功。同时,KIF3A mRNA和蛋白表达均增高,于21 d达到高峰,α-SMA蛋白表达显著上调,E-cadherin蛋白表达明显降低。NRK-52E细胞发生转分化时,KIF3A蛋白的表达增多（P<0.001）,同时wnt/β-catenin信号通路中Wnt4和β-catenin蛋白表达增加（P<0.05,P<0.0001）。结论 KIF3A可能通过wnt/β-catenin信号通路介导的上皮细胞-间充质转化参与肾纤维化的发生发展过程。     

PPARα转基因对小鼠的生理、生化等影响研究

目的 通过与正常C57BL/6小鼠作对照,在不同月龄分析PPARα转基因小鼠生理、生化等数据,比较其差异性,观察PPARα基因对小鼠的生理、生化是否会产生影响.丰富转基因小鼠数据库内容,为该模型实际应用于临床前药物评价提供理论依据.方法 实验分为4组,分别为PPARα雄性组、PPARα雌性组、C57BL/6雄性组和C57BL/6雌性组,9只/组.在动物10周龄、14周龄、18周龄、22周龄、34周龄分别检测血常规、血生化指标,在动物26周龄时观察其心、肝、肾脏器病变情况,并观察动物的一般生长情况.结果 PPARα转基因小鼠与C57B L/6小鼠比较①体重：6周龄到23周龄的PPARα转基因小鼠体重与C57BL/6小鼠体重比较差异无显著性（P＞0.05）.②血常规：10周龄PPARα雌性转基因小鼠红细胞计数（RBC）、嗜碱性粒细胞百分比（BAS％）、淋巴细胞百分比（LYM％）明显高于C57BL/6雌性小鼠,差异有显著性（P＜0.01）.14周龄PPARα雄性转基因小鼠白细胞计数（WBC）、淋巴细胞百分比（LYM％）明显高于C57BL/6雄性小鼠,差异有显著性（P＜0.05）.③血生化：10周龄PPARα雄性小鼠血尿素氮（BUN）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）明显高于C57BL/6雄性小鼠,差异有显著性（P＜0.05）.14周龄PPARα雄性小鼠天冬门氨酸氨基转移酶（AST）、甘油三酯（TG）明显低于C57BL/6雄性小鼠,差异有显著性（P＜0.05）.④组织病理：26周龄PPARα转基因小鼠与C57BL/6小鼠比较,心脏无明显的改变,但肝细胞出现透明病变,肾小管上皮细胞出现脂肪变性.结论 系统收集了PPARα转基因小鼠的体重、血常规、血生化、病理等背景资料,成功分析了其与野生型C57BL/6小鼠之间的差异,为该模型的应用提供参考数据.     

叉状头/翅膀状螺旋转录因子在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达

目的观察叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)在BXSB狼疮小鼠肾脏中的表达,探讨Foxp3在狼疮性肾炎中可能的免疫耐受诱导作用及机制。方法选取8周龄及16周龄雄性BXSB小鼠各6只,以8周龄C57BL/6雄性小鼠6只为正常对照,用免疫组织化学及实时荧光定量PCR方法,检测Foxp3在小鼠肾脏中的表达。结果正常对照组C57BL/6小鼠肾组织Foxp3阳性表达,细胞呈深棕色着色,广泛分布于肾小管;8周龄及16周龄BXSB小鼠肾脏组织Foxp3弱阳性表达,细胞呈浅棕色着色,分布于肾小管。8、16周龄BXSB组小鼠肾组织内Foxp3mRNA表达水平[(0.55±0.06),(0.51±0.07)]均较正常对照组(1.02±0.08)降低,差异有统计学意义(均P<0.01);16周龄BXSB组小鼠的Foxp3mRNA表达水平较8周龄BXSB组降低,但差异没有统计学意义(P>0.05)。结论 BXSB小鼠狼疮肾炎的发病机制可能与调节性T细胞的Foxp3表达下调相关。     

C57BL/6J-HBV转基因小鼠血清生化与性别年龄的关系

目的观察C57BL/6J-HBV乙型肝炎病毒转基因小鼠血清总胆红素（T-BIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）与性别和年龄的关系，以及与遗传背景相同的C57BL/6J小鼠的差异。方法选取8周龄和24周龄的C57BL/6J-HBV转基因小鼠及C57BL/6J小鼠的血清测定T-BIL、ALT、AST、TP和ALB值。结果C57BL/6J-HBV转基因小鼠与同周龄、同性别的C57BL/6J小鼠相比，T-BIL、ALT、AST、TP和ALB差异均存在显著性（p〈0.05）；24周龄的C57BL/6J-HBV转基因小鼠ALT和AST与其8周龄鼠相比差异均存在显著性（p〈0.05）。结论C57BL/6J-HBV转基因小鼠T-BIL、ALT、AST、TP和ALB值显著高于C57BL/6J小鼠；且C57BL/6J-HBV转基因小鼠ALT和AST值与年龄有关，与性别无关。     

糖尿病肾组织TGF-β／Smads信号通路的活化和α-SMA上调表达

目的：探讨TGF-β／Smads信号通路在糖尿病小鼠肾组织中的活化及作用,从信号转导角度探讨糖尿病肾病。肾纤维化的发病机制。方法：取雄性C57BL／6小鼠36只,随机分为模型组（30只）和对照组（6只）。模型组采用链脲佐菌素[STZ,50mg／（kg&;#183;d）]连续5d腹腔注射诱导糖尿病模型,对照组用枸橼酸缓冲液腹腔注射。血糖超过16．7mmol／L为糖尿病诊断标准,观察16周,分别在造模后0、4、8、12、16周处死小鼠。用免疫组化方法检测肾组织TGF-β、磷酸化Smad2／3和α-SMA的表达。结果：对照组小鼠肾组织有基础的TGF-β和磷酸化Smad2／3的表达。糖尿病形成后4周．TGF-β和磷酸化Smad2／3表达明显增加,第12周达高峰,第16周表达减少,但仍高于对照组。对照组小鼠肾组织仅血管平滑肌有α-SMA表达,糖尿病形成后4周肾小球系膜区、肾小管-间质α-SMA的表达显著增加,并持续增加到12周,第16周表达下调．但仍高于对照组。糖尿病肾组织TGF-β、磷酸化Smad2／3及α-SMA的表达时相一致且呈明显正相关。结论：糖尿病小鼠肾组织TGF-β／Smads信号通路被高度活化,可能通过诱导α-SMA的上调表达参与糖尿病肾病肾纤维化的过程。     

骨髓间充质干细胞对肾缺血再灌注损伤后肾功能及氧化应激水平的改善作用

目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）促肾缺血再灌注损伤修复的能力,为肾脏疾病治疗提供新的思路。 方法：健康3周龄C57BL/6J小鼠的骨髓细胞悬液进行BMSCs体外扩增培养。8周龄C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、平行对照组和细胞移植组,每组16只小鼠。建立肾缺血-再灌注损伤模型,将BMSCs通过尾静脉注射到细胞移植组小鼠中,平行对照组注射生理盐水。检测肾功能指标血尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平变化、损伤肾组织自由基--羟自由基和超氧阴离子自由基变化和肾形态学变化。结果：①分离培养的BMSCs增殖旺盛,纯度较高,且均质性和稳定性好。②平行对照组小鼠整体状态差,肾功能指标、氧化应激指标明显升高,组织形态学出现肾小球崩解,肾小管结构消失,肾间质见大量炎性细胞浸润。而细胞移植组小鼠整体状态良好,肾功能指标和氧化应激指标得到明显改善（P<0.05）,组织形态学未出现明显病理性改变。结论：BMSCs在体外易分离培养,具有旺盛的增殖能力;移植BMSCs后,通过抑制氧自由基的生成来促进肾缺血-灌注损伤后小鼠的恢复。     

输尿管结扎预适应通过上调热休克蛋白27的表达减轻肾脏缺血再灌注损伤

目的探讨热休克蛋白27（HSP27）在通过输尿管结扎（UO）预适应减轻小鼠肾脏缺血再灌注（IR）损伤中的作用及其机制。方法实验动物为雄性C57BL/6小鼠,①将小鼠随机分为3组,每组30只,对照组为正常C57BL/6小鼠,UO＋IR组小鼠经左侧输尿管结扎24 h后再通,再通48 h后行IR处理,non-UO＋IR组除不结扎左输尿管其余操作同UO＋IR组。比较3组小鼠再灌注后血清肌酐（Cr）水平,肾组织内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）mRNA表达情况。②取C57BL/6小鼠随机分为UO组与non-UO组,每组20只,UO组予以左侧UO处理24 h,再通48 h后检测左肾组织HSP27蛋白表达,并与non-UO小鼠对比。③取C57BL/6小鼠随机分为两组,每组50只,一组予以小鼠左肾注射包装有干扰HSP27表达的短发夹RNA的重组腺病毒100μL靶向抑制HSP27的表达,将该组设为HSP27干扰组,另一组小鼠予以注射空病毒100μL作为对照组,每组取10只小鼠验证HSP27干扰成功后,每组再随机分为UO＋IR及non-UO＋IR两个亚组（每个亚组20只小鼠）,观察HSP27对IR损伤和UO效应的影响,比较各组Cr水平,检测肾组织内TNF-α和IL-6 mRNA,以及凋亡效应蛋白胱天蛋白酶-3的表达水平。结果①UO＋IR组Cr水平较non-UO＋IR组显著降低（P〈0.05）,TNF-α及IL-6mRNA的表达明显低于non-UO＋IR组（P〈0.05）。②较non-UO组,UO组肾组织HSP27表达明显上调（P〈0.05）。③相对于non-UO＋IR处理,UO＋IR不能降低HSP27干扰组小鼠Cr水平（P〉0.05）、TNF-α和IL-6 mRNA的表达（P〉0.05）及胱天蛋白酶-3的表达（P〉0.05）,却可显著降低空病毒对照组小鼠以上各指标表达;且相对于空病毒对照组中UO＋IR亚组,HSP27干扰组中UO＋IR亚组以上各指标仍高表达（P〈0.05）。结论 UO通过上调HSP27表达减轻小鼠肾脏IR损伤,其机制可能与HSP27抑制炎性反应、减少细胞凋亡的作用有关。     

黄芪甲苷对糖尿病KKAy小鼠肾组织TGF-β1、SMAD2/3及α-SMA表达的影响

目的 观察黄芪甲苷对糖尿病KKAy小鼠肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、SMAD2/3、q-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其延缓肾脏纤维化的可能机制.方法 雄性C57BL/6J小鼠10只作为对照组,20只2型糖尿病模型KKAy小鼠予以高脂饮食至14周,随机数字法分为模型组和黄芪甲苷组,每组10只,黄芪甲苷组给予黄芪甲苷40 mg·kg-·d-1,模型组与对照组给予等量生理盐水.实验期间,各组动物自由饮食、饮水.血糖仪测量16、20、24周龄时各组小鼠的血糖水平.24周时处死,观察各组小鼠肾的病理学变化,免疫组织化学法测定TGF-β1、SMAD2/3、α-SMA的表达.结果 (1)血糖:与对照组相比,14周龄的KKAy小鼠血糖明显升高,模型组血糖在16、20、24周时血糖明显升高(P＜0.05),黄芪甲苷组与其相比,血糖下降(P＜0.05).(2)肾组织形态学:对照组肾小球及肾小管结构清晰,未出现肾间质纤维化,模型组肾小球系膜基质增宽,系膜细胞增多,肾小管上皮细胞细胞质空泡样变性,肾间质炎性细胞增多,黄芪甲苷组肾小管上皮细胞细胞质较少,未呈现明显的纤维化.(3)肾组织TGF-β1、SMAD2/3、α-SMA的表达:对照组TGF-β1表达微弱,而模型组TGF-β1显著表达于肾小管上皮细胞细胞质(P＜0.01);与模型组相比,黄芪甲苷组TGF-β1、α-SMA表达明显下调(P＜0.05);对照组肾小管与肾小球细胞核有少量磷酸化的SMAD2/3表达,模型组表达增加(P＜0.01),与模型组相比,黄芪甲苷组表达减少(P＜0.05).结论 黄芪甲苷通过影响TGF-β/SMADS信号通路,下调TGF-β1、α-SMA表达,改善糖尿病小鼠肾脏纤维化.     

黄芪注射液对KKA~y小鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨黄芪注射液治疗肾间质纤维化的作用机制,为临床中药治疗糖尿病肾间质纤维化提供实验依据。方法将16只2型糖尿病模型KKAy小鼠随机分为模型组和黄芪注射液治疗组,另取8只C57BL/6J小鼠作为正常组,治疗组小鼠14周龄开始腹腔注射黄芪注射液。于24周龄处死小鼠,取肾脏分别观察肾组织病理形态学变化,免疫组织化学法检测小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白、钙依赖性跨膜糖蛋白和转化生长因子β1的表达。结果可见模型组发生明显的纤维化改变,而经黄芪注射液治疗后,小鼠肾间质基质轻度增多,病变较轻微。治疗组KKAy小鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1的表达较模型组减少,钙依赖性跨膜糖蛋白的表达增多。结论黄芪注射液可在一定程度上减少α-平滑肌肌动蛋白的表达,抑制KKAy小鼠肾脏组织中转化生长因子β1表达,上调钙依赖性跨膜糖蛋白的表达水平,阻断并逆转肾小管上皮-间质转化的过程,延缓肾小管上皮细胞转分化的发生发展进程。     

脱水穿心莲内酯对四氯化碳诱导的肝纤维化模型小鼠肝细胞凋亡的抑制作用及其机制

目的：探讨脱水穿心莲内酯（DA）对四氯化碳（CCl₄）诱导的肝纤维化模型小鼠肝细胞凋亡的抑制作用,并阐明其可能的作用机制。方法： 30只6~8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组10只。除正常对照组外其余2组小鼠采用20% CCl₄ 2.0 mL·kg^-1腹腔注射,每周3次,制备肝纤维化模型,对照组小鼠给予等量的橄榄油。治疗组小鼠按100 mg·kg^-1 DA灌胃给药,每周3次,对照组和模型组小鼠灌服等体积生理盐水。给药4周,末次给药后24 h摘眼球取血,断髓,取肝脏。检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性;检测各组小鼠肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平;HE染色和天狼猩红染色观察各组小鼠肝脏病理学表现;Western blotting法检测各组小鼠肝组织中8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶1（Ogg1）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）蛋白水平;免疫组织化学法检测各组小鼠肝组织中转化生长因子β1（TGF-β1）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白表达水平。结果：与对照组比较,模型组小鼠血清中ALT和AST活性及肝组织中MDA水平均明显升高（P<0.05）,肝组织中SOD活性明显下降（P<0.05）;与模型组比较,治疗组小鼠血清中ALT和AST活性及肝组织中MDA水平明显降低（P<0.05）,肝组织中SOD活性明显升高（P<0.05）。HE染色和天狼猩红染色,与模型组比较,治疗组小鼠肝组织中炎性细胞浸润和胶原沉积程度明显改善。与对照组比较,模型组小鼠肝组织中Ogg1、Caspase-3、Bax、TGF-β1、α-SMA和Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,治疗组小鼠肝组织中Ogg1、Caspase-3、Bax、TGF-β1和α-SMA蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论： DA对CCl₄导致的肝纤维化小鼠具有保护作用,其机制可能与降低氧化应激损伤、抑制肝细胞凋亡和减少肝星状细胞活化有关。     

MRL/lpr 鼠部分病理指标动态变化及SIGIRR表达与狼疮肾炎相关性研究

目的观察MRL／lpr鼠病理指标动态变化,研究MRL／lpr小鼠肾组织单个免疫球蛋白区白介1相关受体（single IgIL-1-related receptor,SIGIRR）的表达是否随病理分级加剧而变化,以提示TLR4／NF-κB通路是否参与了狼疮肾炎（iupus nephritis,LN）的发生发展。方法对照组C57BL／6小鼠和模型组MRL／lpr小鼠各12只,分别检测12、15、18、21周龄时小鼠胸腺指数、脾指数、尿蛋白,血清尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、抗核抗体（antinuclear antibodies,ANA）;对肾组织切片进行苏木素依红（hematoxylin and eosin,HE）和马松（Masson）染色,观察模型鼠狼疮肾炎发病情况,采用免疫印迹（westernblot）和免疫组化（immunohistochemistry,IHC）方法观察不同周龄小鼠肾脏SIGIRR的表达情况。结果MRL／lpr小鼠12、15、18、21周龄时与同龄C57BL／6鼠相比其尿蛋白水平随周龄增加而升高,血清尿素氮以及抗核抗体和对照组相比无明显差异,HE、Masson染色显示模型鼠从12周开始即表现出肾小球肾炎,血管周围炎细胞浸润,之后逐渐间质纤维化,肾小球系膜和基底膜增厚,甚至出现肾小球纤维化和硬化。Westernblot和IHC结果显示,21周龄时MRL／lpr小鼠肾组织SIGIRR蛋白表达增加,与同龄C57BL／6相比有显著性差异。结论SIGIRR蛋白表达随MRL／lpr小鼠狼疮肾炎加重而增加,其可能与TLR4／NF-κB（Toll-like receptor 4／nuclear factor-kappa B,Toll样受体4／核因子κB）通路相关。     

五味子乙素抗肾纤维化作用及机制研究

目的探讨五味子乙素对肾纤维化的改善作用及其机制。方法以分别不同剂量的五味子乙素给缺血再灌注（I/R）模型小鼠灌胃。通过Masson染色对各组小鼠肾纤维化进行评价,免疫组织化学染色检测各组小鼠肾组织α- 平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）的表达;Western blot 法检测各组小鼠肾组织α-SMA、CollagenⅠ、上皮性钙粘蛋白（E-cadherin）、转化生长因子β1（TGF-β1）和p-Smad3 的表达水平。结果Masson染色结果显示,五味子乙素治疗组较I/R组小鼠肾间质纤维化及小管萎缩减轻;免疫组织化学染色结果显示,治疗组较I/R组α-SMA 和CollagenⅠ蛋白表达减少;Western blot 检测结果显示,治疗组较I/R 组E-cadherin表达增高,α-SMA、CollagenⅠ、TGF-β1和p-Smad3 表达均下降,且呈现出剂量效应。结论五味子乙素具有抗肾纤维化的作用,其机制可能与抑制TGF-β/Smad 信号通路有关,提示五味子乙素有望成为抗肾纤维化的临床治疗药物。     

2型糖尿病小鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制物-1表达

目的探讨2型糖尿病动物模型KKAy小鼠肾脏纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)和组织纤溶酶原激活物(tPA)mRNA表达与肾脏细胞外基质蓄积的关系.方法选取8周龄雄性KKAy小鼠和C57BL-J小鼠,分别于16、20和24周处死.采用发色底物法检测不同周龄的KKAy小鼠及参照组C57BL/J小鼠的血浆PAI-1活性,RT-PCR法检测小鼠肾皮质tPA mRNA表达,原位杂交法检测肾皮质PAI-1 mRNA水平,免疫组织化学和免疫印迹法检测肾皮质层粘连蛋白表达.结果不同周龄KKAy小鼠肾皮质层粘连蛋白表达均高于同龄对照组(P＜0.05).2型糖尿病KKAy小鼠与C57BL/J小鼠血浆PAI-1活性的差异没有显著性(P＞0.05);但肾皮质tPA mRNA水平却显著降低,以16周时最为显著,仅为C57BL/J小鼠的47%,随周龄的增加,其差异逐渐减小.原位杂交显示KKAy小鼠PAI-1mRNA可在肾脏多部位表达,并以近端小管上皮细胞内的表达为主,且明显高于同龄C57BL小鼠.结论2型糖尿病KKAy小鼠早期肾病时,细胞外基质蛋白的蓄积可能和tPA mRNA表达下调及PAI-1 mRNA表达上调所致的纤溶酶降解细胞外基质作用降低有关.     

C57BL/6J-HBV转基因小鼠血清生化指标与性别年龄的关系

目的观察C57BL/6J-HBV乙型肝炎病毒转基因小鼠血清总胆红素（T-BIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）与性别和年龄的关系，以及与遗传背景相同的C57BL／6J小鼠的差异。方法选取8周龄和24周龄的C57BL／6J-HBV转基因小鼠及C57BL／6J小鼠的血清测定T-BIL、ALT、AST、TP和ALB值。结果C57BL／6J-HBV转基因小鼠与同周龄同性别的C57BL／6J小鼠相比，T-BIL、ALT、AST、TP和ALB均存在显著差异（P〈0．05）；24周龄的C57BL／6J-HBV转基因小鼠ALT和AST与其8周龄鼠相比均存在显著差异（P〈0．05）。结论C57BL／6J-HBV转基因小鼠T-BIL、ALT、AST、TP和ALB值显著高于C57BL／6J小鼠；且C57BL／6J-HBV转基因小鼠ALT和AST值与年龄有关，与性别无关。