核酸扩增-液相杂交法检测沙眼衣原体DNA

目的：探讨用核酸扩增（PCR）－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA的效果。方法：用PCR－液相杂交法对616份临床标本进行了沙眼衣原体检测，并与培养法比较，对与培养法结果不相符合的标本及部分阴性标本进行连接酶链反应（LCR）复检。结果：PCR－液相杂交相法检测沙眼衣原体特异性良好。灵敏度达到0.1fg，临床标本沙眼衣原体DNA阳性检出率为27.6％，显著高于培养法的6.3%（P＜0.001）。以培养法为标准，此法的灵敏度为100％。以LCR法为标准，此法的灵敏度为97.2％,特异度为80.7%，2者具有较好的相符性。结论：PCR－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA操作简便，特异性强，灵敏度高，适合临床应用。     

套式PCR法检测慢性丙肝患者PBMC及血清中HCV-RNA的意义

目的 探讨慢性丙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）内HCV－RNA与血清中HCV－RNA的相互关系及其在慢性丙肝发病机制中的作用。方法 用套式PCR（RT－nested-PCR)对124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者的PBMC及血清中HCV－RNA进行检测。结果 124例抗－HCV（＋）慢性丙肝患者中,PBMC及血清中HCV－RNA阳性率分别为53．23％（66／124）和64．52％（80／124）,经χ^2检验,两者差异无显著性（P＞0．05）。各慢肝组PBMC与血清HCV－RNA阳性率相比,差异均无显著性（P＞0．05）。结论 HCV可隐匿于患者PBMC中;PBMC中HCV－RNA与血清中HCV－RNA似有一致性倾向。PBMC中HCV－RNA检测不仅是对常规血清检测的重要补充,而且是HCV肝外感染的直接证据,是导致丙型病毒性肝炎患者易于慢性化的重要原因之一。     

用PCR产物的探针杂交显色法快速检测血清中HBV DNA

0引言PCR技术已广泛应用于血清HBVDNA的检测方面，但目前所普遍采用的以琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物的方法敏感度低，要求PCR循环的次数应足够多，且操作繁琐，不适宜于大量标本的检测．我们在降低常规PCR循环次数的基础上，通过对PCR产物的酶标探针杂交及酶促显色分析，建立了特异、敏感及快速检测血清HBVDNA的PCR方法．回材料和方法1．1主要仪器及试剂ThermolyneAmplitron11PCR循环仪（美国）；DG3022型酶联检测仪（华东电子管厂）；dNTPS（Pr。mega）；TaqDNA聚合酶（Promega）；亲和素（MW：66000，原平生物工程公司…     

套式聚合酶链反应检测丙肝病毒核酸

对７０例血清谷丙转氨酶（ＡＬＴ）异常、疑是丙型肝炎（ＨＣＶ）患者血清标本，用ＨＣＶ基因５＇非编码区引物作套式聚合酶链反应（套式ＰＣＲ），扩增产物为２６０ｂｐ，结果显示５２例丙型肝炎病毒核酸（ＨＣＶ－ＲＮＡ）阳性，１８例阴性，阳性率为７４．２％。１０例助血员血样ＨＣＶ－ＲＮＡ均为阴性。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析，阳性ＰＣＲ产物为ＨＣＶ－ＲＮＡ所特异。作者认为，采用高保守区核苷酸序列引物作套式ＰＣＲ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ，可提高实验的敏感性和特异性。     

尿嘧啶DNA糖苷酶防止PCR产物污染及其对核酸杂交的影响

目的 采用ＰＣＲ微板核酸杂交ＥＬＩＳＡ分析脲嘧啶ＤＮ糖苷酶（ＵＮＧ／ＵＤＧ）防止ＰＣＲ产物污染及其对ＰＣＲ扩增效率的影响。探讨在不同Ａ／Ｔ含量的微生物中含尿嘧啶的ＰＣＲ产物对核酸杂交的影响。方法 以３组ｄＵＴＰ含量不同的ＰＣＲ产物作模板，抗污染组用ＵＮＧ处理，直接进行再次扩增。用微板核酸杂交ＥＬＩＳＡ检测第二次ＰＣＲ扩增的结果。结果 抗污染组中含ｄＵＴＰ的ＰＣＲ产物作模板，结果为阴性，而以不含ｄＵ     

应用RT－PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５′端非编码（５′ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测抗－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶＲＮＡ，更早地确诊丙型肝炎。     

聚合酶链反应对输血后丙型肝炎的诊断研究

为研究丙型肝炎病毒血症的诊断,以三组与病毒不同区段互补的引物进行反转录巢式聚合酶链反应检测输血后肝炎17例(急性期14例)。按日本毒株的引物检出35％,按非编码区序列的引物检出76％的HCV RNA,两组引物共检出94％,而按Chiron原型的引物检测6例均阴性。HCV多变异,且血清水平极低,用几组不同保守区段的引物,进行巢式PCR,可以获得较高的检出率。     

荧光定量聚合酶链反应检测HCV-RNA

丙型肝炎病毒 (HCV)是引起输血后肝炎的主要致病因子 ,在血中含量极微 ,免疫学标志仅有抗 HCV一项 ,而且抗 HCV出现较晚或不出现 ,所以单凭血清学诊断是不够的。为此 ,采用荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测血清中HCV RNA ,是确诊HCV感染的有效方法之一 ,可为制订治疗方案及疗效观察提供确切依据。1　材料与方法1 1　材料1.1.1　标本 :88份血清标本来源于哈尔滨医科大学第一临床医学院临床确诊的丙型肝炎患者。1.1.2　试剂 :①丙型肝炎 (HCV)核酸扩增 (PCR)荧光检测试剂盒 ,包括 :引物序列、荧光探针序列、RNA提取液、逆转录…     

抗-HCV与HCV-RNA检测结果不一致原因分析

目的 :探讨抗 HCV和HCV RNA结果不一致的原因。方法 :应用ELISA法和FQ PCR法同步检测 380例患者血清中抗 HCV和HCV RNA。结果 :在 2 80例抗 HCV阳性中有 10 6例HCV RNA为阴性 ,有 3例抗 HCV阴性患者HCV RNA却为阳性。结论 :同步检测抗 HCV和HCV RNA可提高肝病患者HCV感染的检出率 ,为其诊断和治疗提供指导。     

微孔板固相杂交法检测丙型肝炎病毒

目的 寻找一种快速、准确、简便的丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）RNA逆转录-聚合酶链反应产物的检测方法。方法 所有标本均作逆转录-套式聚合酶链反应，其产物分别以微孔板固相杂交法及聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测，对结果可凝及阴性者均以HCV Amplification KIT对其血清再作扩增并检测，并以此为金标准进行比较。结果 144份血清（其中抗-HCV阳性64例），微孔板固相杂交法阳性70例，灵敏度97.18%，特异度98.63%，聚丙烯酰胺凝胶电泳法阳性61例，灵敏度81.69%，特异度95.89%，取同一份产物倍比长稀释后再作检测，前者可检测出2^-9稀释度，后者检测出2^-7稀释度。结论 微孔板固相杂交法检测丙型肝炎病毒快速、准确、简便，并且可定量，尤其适用于大批量标本的检测，但于基层推广。     

实时荧光定量PCR检测丙型肝炎病毒

目的探讨实时荧光定量PCR（FQ—PCR）技术检测丙型肝炎病毒（HCV）RNA载量与抗-HCV及丙氨酸氨基转移酶（ALT）异常的相关性。方法用FQ—PCR检测115份疑似HCV感染的病人血清HCV—RNA，ELISA法检测抗-HCV，全自动生化分析仪测定ALT。结果以80拷贝／ml血清为标准，115份标本中HCV—RNA阳性率为54．8％（63／115）；抗-HCV阳性率为53．9％（62／115）；ALT异常率为40．9％（47/115）。HCV—RNA载量与抗-HCV（＋）例数呈正相关（r=0．986，P〈0．01）。HCV—RNA载量与ALT异常例数（r=0．94，P〈0．01）、含量（r=0．624，P〈0．01）呈正相关。结论HCV—RNA载量升高，抗-HCV阳性率相应增加，ALT高于正常值（40U／L）的异常率和浓度也增高，均呈正相关。FQ—PCR法可作为临床检测丙型肝炎的确诊方法之一。     

3种国产丙型肝炎病毒核酸定量与罗氏试剂检测性能的初步评价

目的评价3种国产丙型肝炎病毒核酸（HCV RNA）定量试剂检测性能。方法应用已批准上市占国内市场50%以上的3种国产HCV RNA定量检测试剂,瑞士Roche公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Test定量试剂,分别检测经Ortho和DiaSorin公司抗-HCV EIA试剂,CHIRON公司RIBA HCV 3.0SIA及MP Biomedicals Asia Pacific Pte公司确证试剂检测判定的139份抗-HCV阳性及165份抗-HCV阴性血浆样本。采用SPSS 16.0统计学软件,用χ2检验对4种HCV RNA定量试剂阳性检出率进行分析。结果 304份临床样本检测中,3种（A、B、C）国产HCV RNA定量试剂的阳性检出率显著低于瑞士Roche公司的HCV RNA定量试剂阳性检出率（11.51%、12.83%、14.80%vs 26.97%,χ2值分别为23.38、19.08、13.63,P〈0.01）,国产A、B、C试剂的阳性检出率较为一致（χ2值为1.47,P〉0.05）。国产HCV RNA定量试剂漏检样本的HCV RNA载量小于50IU/ml。以罗氏试剂检测HCV RNA水平为依据,国产试剂检测抗-HCV阴性样本的检出与HCV RNA水平不相关（即高值和低值均有检出）。结论应提高国产HCV RNA定量试剂的灵敏度和线性检测范围。     

基因芯片检测HBV DNA聚合酶区基因多态性

目的 :建立基因芯片检测HBVDNA聚合酶区基因多态性。方法 :PCR扩增HBVDNAP区nt45 5～ 796片断 ,与预制的基因芯片杂交 ,运用激光共聚焦荧光检测系统扫描芯片分析基因突变类型。结果 :芯片检测HBVDNAP区变异具有较好的特异性和准确性 ;初步应用显示 :慢性乙肝组nt5 2 8和nt5 5 2位点突变率分别为 8.6%和 9.6% ,而无症状肝炎组和重症肝炎组突变率均为 0 ;拉米夫定治疗组与非拉米夫定治疗组比较 ,nt5 2 8突变率分别为 10 .5 %和 8.1% ,nt5 5 2突变率分别为 15 .8%和 8.1%。结论 :HBVDNA聚合酶区基因多态性分布与病情轻重无关 ,而与病程慢性迁延有关 ;拉米夫定在耐药突变中发挥了重要作用 ;基因芯片检测乙肝患者耐药基因有其临床应用价值。     

丙肝病毒核心抗原检测在丙肝病毒感染诊断中的作用研究

目的探讨丙肝核心抗原检测在丙肝感染诊断中的作用。方法收集175例丙肝抗体检测标本同时检测HCVAb、HCV游离抗原、HCV总抗原、HCVRNA。结果 75例HCVAb阳性反应标本,检出HCV游离抗原阳性17例,HCV总抗原阳性54例,HCVRNA阳性50例;100例HCVAb阴性反应标本,检出HCV游离抗原阳性1例,HCV总抗原阳性2例,HCVRNA阳性1例。结论 HCV核心抗原是HCV早期感染的标志之一,检测HCV核心抗原有利于HCV感染的早期诊断。     

重组丙型肝炎病毒基因载体的构建与表达

应用基因重组技术。从载体ＣＤＺ２酶切获得１．７３ｋｂＤＮＡ片段（含１６ｄ９３ｂｐ的ＨＣＶ结构区ｃＤＮＡ，其特异性已为ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实）。将ＨＣＶｃＵＮＡ片段插入载体ｐｃＤＮＡ３，构建ＨＣＶ重组体。经在大肠杆菌中表达，筛选、酶切分析，获得重组ＨＣＶ（ＰｃＤＮＡ３－ＨＣＶ）。以重组质粒转染Ｈ９细胞（ＣＤ淋巴细胞系），用Ｇ４１８筛选出抗性细胞。经ＲＴ－ＰＣＲ、ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ验证表明，ｐｃＤＮＡ３－ＨＣＶ能在Ｈ９细胞中进行复制、转录和表达。这为丙型肝炎发病机理的研究提供了一个有用模型。     

HCV无症状感染者外周血中病毒载量的检测分析

目的　了解丙型肝炎病毒(HepatitisCvirus, HCV) 无症状感染者病毒载量分布以及与ALT水平的相关性。方法　采用荧光定量PCR检测80例HCV无症状感染者外周血中HCVRNA, 同时进行重组免疫印迹试验和血清丙氨酸转氨酶(ALT) 水平测定。结果　80例HCV无症状感染者外周血HCVRNA含量在102 1 ~105 8拷贝/ml, 其中82.5% (66 /80) 在104 0 ~105 8拷贝/ml。RIBA不同反应组HCVRNA含量间差异无显著性意义(P>0.05), ALT异常升高组HCVRNA含量与ALT正常组之间差异无显著性意义(P>0.05)。结论　HCV无症状感染者病毒载量处于相对低水平, 病毒载量与RIBA抗体反应模式和ALT水平的关系有待进一步研究。     

北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测与基因分型的研究

目的:探讨北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA定量检测和HCV基因分型的相关性。方法:用荧光定量PCR法检测310例北京地区慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA标本,应用RT-PCR和型特异性引物法对310例标本进行基因分型。结果:在310例标本中,HCV1b型有217例(70%),2a型74例(23.9%),2b型8例(2.6%),1b/2a混合型5例(1.6%),未分型6例(1.9%)。对299例HCV单基因型患者的基因型与性别的相关性进行统计学分析,结果显示没有统计学差异(χ2=0.028,P<0.978)。299例患者的首次血清病毒RNA定量测定与基因型之间有明显的统计学差异(F=16.525,P<0.01)。结论:北京地区丙型肝炎病毒感染以1b型为主,基因型在性别上的分布没有差异。治疗前HCV基因型与体内病毒的含量密切相关。     

肝癌组织中丙型肝炎病毒RNA的研究

对３０例原发性肝癌患者手术切除的癌及癌旁组织（共３８份标本）用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５＇端非编码区（５＇－ＮＣ区）ＲＮＡ。结果，１０例（３３．３％）肝癌患者被ＨＣＶ感染，２３例（７６．７％）患者被乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染。用酶切分析可见，肝癌组织中的ＨＣＶ是ＩＩ、ＩＩＩ型。对部分标本用ＰＣＲ直接测定核苷酸序列，ＨＣＶ５＇－ＮＣ区相当保守，差异无显著意义。因１０例ＨＣＶ感染的肝癌患者中８例同时有ＨＢＶ感染，因此可能ＨＣＶ及ＨＢＶ构成的双重慢性感染是导致肝癌发生的因素之一。