地高辛标记核酸探针的应用

本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。     

应用地高辛标记探针鉴定军团菌

目前鉴定军团菌的方法很多，如血清学测定、生化学特性、细菌分离培养等。随着分子生物学的发展，人们不断尝试将分子生物学的诊断技术引入各学科领域。本实验通过对两株初步认定为嗜肺军团菌进行ＤＮＡ分析，着重阐述核酸杂交技术鉴定军团菌的方法及应用意义。１方法１．...     

地高辛标记核酸探针的应用

本工作中以肿瘤多药耐受基因ＭＤＲ－１的ｃＤＮＡ的限制片段（５Ａ）为模板ＤＮＡ，把模板ＤＮＡ用随机引物法标记上地高辛标记的脱氧尿苷三磷酸ＤＩＧ－ｄＵＴＰ。将此地高辛标记的核酸探针与变性的同源质粒及部分头颈肿瘤组织ＲＮＡ进行点杂交后，用抗地高辛－碱性磷酸酶及其底物进行酶联免疫分析，探讨了应用这种非放射性地高辛标记的ＤＮＡ探针及其检测系统的敏感性以及应用价值。     

地高辛素标记乙型肝炎病毒DNA探针的制备及应用

采用随机引物法以地高辛素标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(dig-II-dUTP)标记克隆的乙型肝炎病毒(HBV)DNA adw/pAM6,制得高特异性和高敏感性的HBV DNA探针。用于斑点杂交检测HBV DNA,最大敏感度为0.lpg。用于检测HBsAg阳性血清,HBV DNA阳性率为82.7％(91/110),与市售同类药盒相比,阴阳结果一致,与缺口翻译的生物索探针相比,检出率有显著提高(P<0.01)。用于肝癌组织与血清HBV DNA研究,与既往用~32P探针所得结果相符。该探针操作简单、使用方便、出结果快速、价格便宜又无需特殊设备,故适于在临床单位尤其是基层医疗单位应用推广。     

生物素标记HBVDNA分子探针临床应用研究

本文报告了生物素探针(Bio-HBV)试剂盒的临床应用研究。结果表明最低可检出0.1pgHBVDNA。Bio-HBV仅与HBVDNA杂交,不与PBR_(322)、λ、CT、HSDNA杂交。80例HBsAg献血员中,64例DNA阳性(80.0％),72例HBeAg阳性中,63例DNA阳性(87.5％)。符合率检测结果,敏感性97.4％,特异性92.3％,假阳性7.7％,假阴性2.6％,符合率98.1％,阳性预测值97.4％。Southern Blot试验表明89-1消毒剂30秒钟可杀灭200ng克隆HBVDNA。结果提示Bio-HBV可代替~(32)P HBV。     

地高辛标记探针在斑点杂交检测HBV DNA中的初步应用

应用核酸分子杂交检测血清HBV DNA已成为诊断乙肝病毒(HBV),感染及判断其复制状态的重要手段。由于同位素标记探针的半衰期短及放射性污染等缺陷,限制了该技术的推广应用。生物索标记探针的灵敏度和特异性都不十分理想。本文制备地高辛际记的HBV DNA探针,初步应用于血清斑点杂交,是一种适合临床应用的探针检测技术。     

地高辛标记探针用于肺结核病原诊断的初探

经ＰＣＲ扩增的人结核杆菌特有序列３１～１８８ｂｐ的核苷酸片段，用Ｄｉｇｘｉｇｅｎｉｎ标记此片段制成Ｄｉｇ标记探针。此探针在ＮＣ膜上与人型结核杆菌ＤＮＡ杂交检测临床肺结核患者痰ＤＮＡ，结果显示此法不仅避免了同位素探针的放射性且半衰期短的弊端，同时具有敏感性相似的特点，使肺结核的病原学诊断率从１５％提高到２８．７９％。     

地高辛标记DHBVDNA探针的制备及应用

采用随机引物法制备地高辛标记含鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）基因片段的质粒ＰＢＲ３２２作为探针，建立ＤＨＢＶＤＮＡ斑点杂交试验，结果：探针可检出１．０ｐｇ同源ＤＮＡ片段，不与人乙肝病毒（ＨＢＶ）及鸭肝细胞ＤＮＡ发生杂交，与￣３５Ｓ－ＤＨＢＶＤＮＡ探针的灵敏度相似。该探针检出重庆地区２－３月龄麻鸭血清ＤＨＢＶ自然感染率为２５．４８％；用ＤＨＢＶ血清经腹腔感染１－２日龄雏鸭，１周后阳性感染率为８２．９０％，并可持续感染至少２月。     

HBVDNA探针

DNA是由很多核苷酸所组成,每一个核苷酸都有一个硷基:为腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)中之一种,当核苷酸结合时,其硷基必须是配对的,即A与T,C与G,否则不能结合。将已提纯的HBVDNA的两条链分开,再标以32p就是探针。检测时,先将血清固定在硝酸纤维膜上,使其中     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＥＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射生标记制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶ ＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｍｇ ＨＣＭＶ ＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。     

随机扩增多态DNA技术在地高辛标记HCMV DNA探针中的应用研究

应用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术结合地高辛非放射性标记系统制备了人巨细胞病毒ＤＮＡ探针，并与常规随机引物法进行对照。ＲＡＰＤ－ＰＣＲ制备的ＨＣＭＶＤＮＡ探针长度呈多态性，扩增过程中不需合成特异引物，探针特异性强，产量高，用５０ｎｇＨＣＭＶＤＮＡ模板即可制备８．０μｇ探针；标记体系中ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法Ｄｉｇ－ｄＵＴＰ浓度为５．２％。表明ＲＡＰＤ－ΡＣＲ技术可用于少量ＤＮＡ模板制备大量ＤＮＡ探针，适用于原位杂交等需高浓度探针的核酸杂交及临床大量标本的测试，是一种经济方便的探针制备技术     

地高辛标记探针原位杂交在人巨细胞病毒感染鼠脑神经元研究中的应用

目的　建立一种适用于检测人巨细胞病毒（ Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ）感染新生乳鼠大脑皮质神经元原代培养物中病毒 Ｄ Ｎ Ａ 的原位杂交法。方法　制备和培养新生乳鼠大脑皮质神经元并进行病毒感染;在感染后的第３ ,５ 天及第１ ～４ 周连续取样用地高辛标记的 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 即刻早期抗原（ Ｍ Ｉ Ｅ） 和晚期抗原（ Ｌ Ａ） 寡核苷酸特异性探针分别进行核酸原位杂交,检测受染神经元内相应病毒核酸及分布。结果　 Ｍ Ｉ Ｅ 寡核苷酸探针可在 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 感染后第４ ～７ 天检出神经元核内 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ;而 Ｌ Ａ 寡核苷酸探针则可稳定地检出感染后第７ ～２８天细胞培养物中的相应病毒核酸;并显示： Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 杂交阳性信号在感染的早期主要分布在核内,呈灶性;而在感染的晚期,杂交阳性信号均匀分布于受染神经元的核内及胞浆内。结论　地高辛标记的 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ Ｍ Ｉ Ｅ 和 Ｌ Ａ 寡核苷酸探针在病毒感染机制研究以及临床诊断等方面,具有广泛的应用前景。     

地高辛素标记HBV—DNA探针的临床应用

应用地高辛素标记HBV－DNA探针进行斑点杂交，检测130例慢性乙型肝炎患者血清HBV－DNA结果表明，HBsAg、HBeAg、抗HBc同时阳性者，HBV－DNA检出率为96％；HBsAg、抗He同时阳性者HBV－DNA检出率为505；HBsAg、抗HBc同时阳性者HBV－DNA检出率为60％；在6例抗HBs、抗HBC同时阳性血清中，发现1例为HBV－DNA阳性，认为，随着HBV－DNA检测方法学的改进，敏感性的提高，对原有HBV血清免疫学标志应有新的认识。