大蒜素对人胃癌细胞BGC823 cyclin D1和p27Kip1表达的影响

背景与目的：在研究大蒜素抑制人胃癌细胞BGC823恶性增殖,将其阻滞于G1期并诱导BGC823细胞凋亡的分子机制及其靶基因过程中,我们发现cvclin D1和p27^Kip1。蛋白在G1期阻滞中起重要作用。本实验从mRNA和蛋白水平探讨大蒜素对人胃癌细胞BGC823 cvclin D1和p27^Kip1表达水平的影响。方法：用25μg／ml大蒜素处理BGC823细胞,并分别提取对照组和大蒜素处理组的总RNA和总蛋白,然后采用RT-PCR和Western blot法检测大蒜素处理前后cvclin D1和p27^Kip1 mRNA和蛋白的变化。结果：经25μg／ml大蒜素处理BGC823细胞24h,cyclin D1蛋白表达下调,p27^Kip1蛋白表达上调,处理48h,上述变化更明显。而mRNA水平未见明显改变。结论：大蒜素可影响cyclin D1和p27^Kip1蛋白的表达,而不影响mRNA的转录。     

miR-27a下调肾癌细胞FOXO1表达并促进其细胞增殖

目的 探讨microRNA-27a(miR-27a)在肾癌细胞中的作用及调控机制.方法 应用miR-27a反义寡核苷酸(ASO)在体外转染786-O和Caki-1细胞;qRT-PCR法检测miR-27a及FOXO1 mRNA的表达情况,Western blot检测FOXO1蛋白的表达水平;CCK8检测miR-27a ASO对细胞增殖的影响.结果 786-O和Caki-1细胞中miR-27a表达高于HK2正常肾小管上皮细胞(P<0.05);利用miR-27a ASO抑制786-O和Caki-1细胞miR-27a表达后,发现两个细胞株FOXO1 mRNA和蛋白表达的升高及增殖能力的降低(P<0.05).结论 miR-27a 可能通过调控FOXO1表达在肾癌中起致癌作用.miR-27a ASO可抑制肾癌细胞的增殖,因此miR-27a有可能作为肾癌基因治疗的候选靶点.     

miR-27a下调肾癌细胞FOXO1表达并促进其细胞增殖

目的：探讨microRNA-27a（miR-27a）在肾癌细胞中的作用及调控机制。方法：应用miR-27a反义寡核苷酸（ASO）在体外转染786-O和Caki-1细胞;qRT-PCR法检测miR-27a及FOXO1 mRNA的表达情况,Western blot检测FOXO1蛋白的表达水平;CCK8检测miR-27a ASO对细胞增殖的影响。结果：786-O和Caki-1细胞中miR-27a表达高于HK2正常肾小管上皮细胞（P〈0.05）;利用miR-27a ASO抑制786-O和Caki-1细胞miR-27a表达后,发现两个细胞株FOXO1 mRNA和蛋白表达的升高及增殖能力的降低（P〈0.05）。结论：miR-27a可能通过调控FOXO1表达在肾癌中起致癌作用。miR-27a ASO可抑制肾癌细胞的增殖,因此miR-27a有可能作为肾癌基因治疗的候选靶点。     

miR-143对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡及其靶点HIF-1α的影响

目的 探讨miR-143对肾癌GRC-1细胞增殖凋亡及其靶点缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的影响。方法 转染miR-143的模拟物于肾癌细胞株GRC-1细胞,采用实时定量PCR（qPCR）法检测转染的效果,根据实验将GRC-1细胞分为3组：未转染组、miR-143对照组和miR-143转染组,采用MTT法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;qPCR及Western blotting检测各组细胞的HIF-1α mRNA和蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-143与HIF-1α基因间的靶向关系。结果 miR-143转染组的miR-143水平高于未转染组和miR-143对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）;与其余两组比较,miR-143转染组的增殖率降低而凋亡率升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;瞬时过表达miR-143可降低GRC-1细胞的HIF-1α mRNA和蛋白水平（P＜0.01）,双荧光素酶报告基因实验证明HIF-1α是miR-143的直接作用靶点。结论 miR-143可以调控肾癌GRC-1细胞的增殖凋亡,而HIF-1α是miR-143的直接靶点。     

金雀异黄素对胃癌细胞iNOS表达影响与抑癌作用研究

目的　研究金雀异黄素 (Genistein ,Gen)对人胃腺癌细胞SGC 790 1增殖影响和对诱导型一氧化氮合酶 (inducednitricoxidesynthase ,iNOS)基因表达的影响。 方法　应用分裂指数法观察Gen抑制癌细胞生长 ,WesternBlot及RT PCR方法检测iNOS的表达情况。结果　Gen显著抑制了SGC 790 1细胞的增殖 ,并可显著诱导iNOSmRNA转录、增加iNOS蛋白表达 ,呈剂量效应和时间效应关系。结论　Gen抑制胃癌细胞增殖的机制之一可能与其上调iNOS基因表达有关。     

lncRNA SNHG1通过抑制p27kip1促进胃癌细胞的增殖作用

目的:确定长链非编码RNA SNHG1（lncRNA SNHG1）在胃癌中的表达，并探讨其在胃癌细胞增殖中的作用。方法:通过原位杂交及实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测26例胃癌患者肿瘤组织及相应癌旁组织中SNHG1的表达。同时通过RT-qPCR检测正常胃上皮细胞及胃癌细胞系中SNHG1的表达情况。为评估SNHG1对胃癌细胞增殖能力的影响，向胃癌细胞系中转染shRNA或pcDNA调控SNHG1表达，并通过CCK-8法、流式细胞术及克隆形成实验检测细胞活力、细胞周期与细胞形成集落的能力。通过相关性分析、免疫组化、RT-qPCR及Western blot等方法检测了胃癌组织及细胞中p27kip1的表达，并进一步研究其与SNHG1的关系。结果:lncRNA SNHG1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织，尤其是在肿瘤中晚期。SNHG1可明显促进胃癌细胞的增殖，缩短细胞周期，增强肿瘤细胞的集落形成能力。同时胃癌组织及细胞系中p27kip1与SNHG1存在相关性，上调SNHG1可以抑制胃癌细胞中p27kip1的表达，反之亦然。上调p27kip1可以拮抗SNHG1对胃癌细胞增殖能力的促进作用。结论:lncRNA SNHG1通过抑制p27kip1促进胃癌细胞增殖，表明SNHG1可能成为胃癌的潜在治疗靶点。     

百合多糖联合金雀异黄素对人类乳腺癌细胞增殖的影响

目的:研究百合多糖(LP-1)联合金雀异黄素对人类乳腺癌细胞增殖的影响。方法:培养MCF-7细胞,加入不同浓度的LP-1和金雀异黄素,应用MTT法检测百合多糖对MCF-7细胞增殖的影响;用流式细胞技术(FCM)检测细胞周期。放射性配体结合法检测化合物与雌激素受体(estrogenic receptor,ER)的亲和力。结果:LP-1对MCF-7细胞增殖和细胞周期没有显著影响,和高浓度金雀异黄素合用可以增强金雀异黄素对MCF-7细胞的抗增殖作用,并将细胞周期阻滞在G2期。LP-1对ERα和ERβ均无亲和力,金雀异黄素对ERα和ERβ均有亲和力,IC50分别(3.51×10-5)mol/L和(2.12×10-7)mol/L。结论:百合多糖与金雀异黄素合用可能通过不同途径影响MCF-7细胞增殖和凋亡,发挥协同作用。     

金雀异黄素拮抗生长因子对HCE16／3细胞的生长刺激作用

研究金雀异黄素影响生长因子（ＫＧＦ和ＥＧＦ）对ＨＰＶ１６型ＤＮＡ－永生化人宫颈角质细胞（ＨＣＥ１６／３细胞）的生长调节。方法使用［３Ｈ］－胸苷掺入试验,ｕＰＡ分泌的检测和酪氨酸蛋白激酶试验,分析金雀异黄素影响生长因子对培养的ＨＣＥ１６／３细胞的生长调节。结果在无血清培养的条件下,生长因子刺激ＨＣＥ１６／３细胞的生长,但金雀异黄素不仅抑制生长因子对ＨＣＥ１６／３细胞的生长刺激,而且抑制ＫＧＦ对ＨＣＥ１６／３细胞ｕＰＡ分泌的刺激作用,这种抑制效应可能与它抑制生长因子受体的酪氨酸蛋白激酶活性有关。结论金雀异黄素对人体内某些肿瘤具有潜在的防治价值     

p27KIP1基因过表达诱导人胃癌细胞的凋亡

目的:研究p27KIP1基因对胃癌细胞凋亡的潜在调节作用。方法:采用脂质体转染法将p27KIP1全长cDNA转入胃癌细胞系SGC7901中,通过免疫印迹及RNA斑点杂交检测p27KIP1基因在蛋白质和mRNA水平的表达;通过DNA电泳、TUNEL染色、流式细胞仪及透射电镜等方法,观察目的基因对细胞凋亡的影响。结果:转染p27KIP1的SGC7901细胞在mRNA和蛋白质水平均有高水平p27KIP1的表达。诱导p27KIP1表达后,SGC7901细胞出现凋亡细胞所拥有典型的梯状DNA和超微结构改变,其凋亡指数也显著增加(P<0.01),并且p27KIP1的过表达使G1期前出现一个亚二倍体的凋亡峰,占14.68%。结论:p27KIP1基因能够诱导胃癌SGC7901细胞的凋亡。     

SKA1对肾细胞癌细胞增殖凋亡的影响及其分子机制研究

目的 研究SKA1在肾细胞癌中的表达情况,探讨其表达对肾细胞癌细胞增殖凋亡的影响及其分子机制。方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库收集肾细胞癌数据集,分析SKA1在肾细胞癌组织和正常肾组织中的表达差异及其与临床病理特征的关系和对预后的影响。收集2016年1月—2018年9月在新疆医科大学附属肿瘤医院就诊的72例肾透明细胞癌患者切除的肿瘤组织及癌旁组织,利用实时荧光定量PCR法检测SKA1的表达水平。体外培养的人肾细胞癌细胞系786-O和ACHN分别用shSKA1干扰慢病毒和对照病毒载体感染。CCK-8法检测细胞增殖活性;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;Annexin V-FITC检测细胞凋亡率。运用IPA@在线生物信息学软件,对基因表达谱芯片检测的差异基因进行信号传导通路及生物学功能分析。Western blot法检测各组细胞TNF-α、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 9、p-Akt、p-mTOR蛋白水平变化。结果 在各病理亚型肾细胞癌组织中SKA1的表达水平明显高于正常肾组织(P＜0.01),与肾透明细胞癌和肾乳头状细胞癌患者的T、N、M(TNM)及AJCC分期有关(P＜0.01)。SKA1高表达患者总生存期明显短于低表达患者(P＜0.001)。组织样本研究结果证实,SKA1在肾透明细胞癌组织中表达水平高于癌旁组织,与TCGA数据库分析结果一致。与对照组相比,感染shSKA1慢病毒的肾细胞癌细胞增殖能力明显下降,凋亡细胞比例增加(P＜0.01)。IPA@分析发现,生物功能富集排名第一的是细胞生长与增殖,TNF被强烈激活,PI3K/Akt/mTOR通路信号分子被显著抑制。Western blot实验结果证实,SKA1干扰组中TNF-α、Caspase 3和Caspase 9表达水平显著上升,而与细胞增殖相关的通路信号分子Akt和mTOR的磷酸化表达水平显著下调,与富集分析结果相一致。结论 SKA1是肾细胞癌预后不良因素。降低肾细胞癌中SKA1表达能减弱肾细胞癌细胞增殖,同时促进凋亡,其机制可能与TNF-α激活和PI3K/Akt/mTOR通路分子磷酸化水平抑制有关。     

Genistein对人尿道鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察Genistein(GEN)对人尿道鳞癌细胞系HUS-98细胞增殖和凋亡的影响.方法MTT法检测细胞增殖,碘化丙啶(PI)和Annexin V-FITC双染色的流式细胞分析方法检测凋亡,台盼蓝拒染法测定淋巴细胞活力,免疫细胞化学检测雌激素受体(ER)蛋白的表达.结果低浓度(1×10-111～1×10-8mol/L)GEN促进HUS-98细胞的生长,处理3 d时,1×10-8mol/L组的细胞数比对照组的增加9%(P＜0.01);高浓度(1×10-7mol/L～5×10-4mol/L)GEN则浓度依赖性地引起HUS-98细胞数目逐日减少,但是除5×10-4mol/L外的其余浓度对正常淋巴细胞的生长没有影响.1×10-6mol/L GEN作用于HUS-98细胞24～48 h,凋亡细胞和坏死细胞的比率均增加,且有时间依赖性.HUS-98细胞表达ER蛋白.结论高浓度GEN具有抑制ER阳性的人尿道鳞癌细胞的生长和诱导凋亡及坏死的作用,为今后用于尿道鳞癌的治疗提供了实验依据.     

miR-196a调控p27kip1促进非小细胞肺癌细胞增殖的机制研究

目的 探讨miR-196a在非小细胞肺癌（NSCLC）组织及细胞系中的表达,以及抑制或过表达miR-196a对NSCLC细胞增殖能力的影响及其作用的靶基因。方法 实时定量PCR（QPCR）技术检测NSCLC组织及细胞系中miR-196a的表达水平,通过转染miR-196a inhibitors及miR-196a mimics抑制或上调miR-196a的表达水平,并通过QPCR检测转染效率。用MTT和克隆形成实验检测上调或下调miR-196a对SPC-A1或A549细胞增殖能力的影响;生物信息学及Western blotting方法分析验证miR-196a对靶基因p27kip1的调控作用。结果 与正常肺组织及细胞相比,在NSCLC组织和细胞中miR-196a的表达出现显著上调,SPC-A1细胞和A549细胞中转染miR-196a inhibitors或miR-196a mimics能显著抑制或上调miR-196a的表达;抑制miR-196a的表达能降低SPC-A1细胞增殖能力,而上调miR-196a的表达则能促进A549细胞增殖。miR-196a能够负性调控p27kip1的表达。结论NSCLC组织及细胞中miR-196a的表达上调能够抑制p27kip1的表达,并显著促进NSCLC细胞增殖,影响NSCLC的发生与发展。     

木黄酮作用于K562细胞机制的初步研究

目的：探讨酪氨酸激酶抑制剂木黄酮（Genistein)作用于慢性粒细胞性白血病（CML）的机制。方法：通过细胞增殖、活力检测、形态学观察、半固体集落培养及DNA凝胶电泳和流式细胞术,观察木黄酮对K562细胞生长的影响。结果：（1）经≥5mg/L木黄酮处理2d的K562细胞,增殖抑制率达到50％以上,且与作用剂量和时间呈正相关;形态渐趋向凋亡但体积涨大;(2)K562细胞集落抑制达50％时的木黄酮浓度为10mg/L,也与时间和剂量呈正相关;（3）K562细胞经10mg/L木黄酮处理4d,DNA凝胶电泳可见清晰的梯状条带;（4）K562细胞分别经2．5mg/L、5mg/L和10mg/L木黄酮处理1d和2d后,流式细胞术检测细胞凋亡率分别为0．62％、1．64％、2．71％和0．68％、4．09％、8．4％;2d后G2期细胞分别占总细胞数的17％、34．5％和79．5％,而G1期和S期细胞逐渐明显减少。结论：木黄酮对K562细胞具有显的抑制增殖作用,其机制与诱导凋亡有关。     

乳腺癌组织p27Kip1的表达及其与细胞增殖的关系

目的:研究乳腺癌组织中细胞周期抑制剂p27Kip1的表达及其意义,并探讨其与细胞增殖的关系.方法:应用免疫组化SP法检测80例乳腺癌和20例癌旁正常组织中p27Kip1和增殖细胞核抗原(pro-liferative cell nuclear antigen,PCNA)的表达.结果:乳腺癌组织中p27Kip1高表达率为53.75%(43/80),明显低于癌旁正常组织(P<0.01).p27Kip1表达与组织学分级、TNM分期及淋巴结转移均相关,P<0.05.乳腺癌组织中p27Kip1的表达与PCNA LI呈负相关,r=-0.372,P<0.05.p27Kip1高表达的乳腺癌术后5年无病生存率(DFS)明显高于p27Kip1低表达者(P<0.05).结论:p27Kip1表达缺失可促进肿瘤细胞增殖,是判断乳腺癌发生、发展及预后的有效生物学指标.     

槲皮素通过调控p21/cip1和p27/kip1蛋白的稳定性抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖

目的:探究槲皮素通过调控p21/cip1和p27/kip1蛋白的稳定性对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响.方法:CCK-8试剂盒检测口腔鳞状细胞癌细胞(SCC-15)增殖情况;流式细胞术检测SCC-15细胞周期分布;Western blot检测CyclinD1/CDK复合体、p21/cip1、p27/kip1、p-GSK3...     

热疗联合紫杉醇对人舌鳞癌细胞系CAL-27增殖、凋亡和周期影响

目的:观察热疗联合紫杉醇对人舌鳞癌细胞系CAL-27增殖、凋亡和周期的影响并探讨其机制。方法:CCK-8法确定紫杉醇工作浓度,将体外培养CAL-27细胞分为对照组、紫杉醇组、42℃热疗组和联合治疗组。克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡,蛋白印迹法检测AKT、p-AKT、Bcl-2、Bax蛋白表达...     

肾透明细胞癌组织SMO表达与肾癌细胞增殖和凋亡的相关性

目的 Hedgehog信号通路参与了肿瘤的发生发展,本研究探讨该通路关键信号分子Smoothened(SMO)在肾透明细胞癌中的表达及对肾癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 选取2012-01-01-2013-06-30青岛大学附属医院泌尿外科,行手术治疗的80例肾透明细胞癌患者的临床及病理资料,采用免疫组织化学方法检测SMO在肾透明细胞癌组织中的表达并分析其与临床病理特征间的关系.采用小干扰RNA下调SMO在人肾癌细胞786-O中的表达,分别应用CCK-8法、流式细胞术及蛋白质印迹法检测下调SMO表达对细胞增殖、凋亡及Gli1和Gli2表达的影响.结果 SMO在73例(91.25％)肾透明细胞癌组织中有表达,其在高级别肾癌中表达(80.49％)较低级别(56.41％)显著升高,x2 =5.39,P=0.02.RT-PCR 检测结果显示,SMO在人肾癌细胞系786-O中表达量为0.704±0.059;蛋白质印迹结果显示,SMO在786-O中表达量为0.651±0.074.在786-O细胞中应用小干扰RNA沉默SMO表达后,实验组细胞相较于对照组其活力百分比在48、72和96 h分别为92.7％、80.9％和79.9％,3个时间点差异有统计学意义(P=0.003),细胞凋亡显著增加,t=-29.2,P＜0.001;与空白对照组和阴性对照组相比,其下游分子Gli1和Gli2蛋白表达明显减少(Gli1:3.2 vs 2.9 vs1;Gli2:2.5 vs 2.1vs 1).结论 SMO可能通过调控细胞增殖和凋亡,以及调节Gli蛋白表达参与了肾癌的发生发展.