肺癌微卫星不稳定性与错配修复基因缺陷的相关性研究

目的 通过对肺癌微卫星不稳定性(MSI)的分析与错配修复基因蛋白表达的检测,探讨肺癌发病的分子机制.方法 从50例肺癌患者的正常肺组织、癌组织中提取DNA;SSCP法检测标本中MSI发生情况;免疫组织化学法检测错配修复基因hMLH1及hMSH2在肺癌中的表达情况.结果 50例肺癌中微卫星高度不稳定(MSI-H)14例,低度不稳定(MSI-I)21例,稳定(MSS)15例,正常组织中未出现MSI,两者之间差异有统计学意义(P=0.000);免疫组化结果显示hMLH1在MSI肺癌组织中常为缺失表达,表达率为74%(37/50);hMSH2在MSI肺癌组织中也呈缺失表达,表达率为32%(16/50);而在MSS肺癌组织中均显示hMLH1、hMSH2基因蛋白表达阳性.结论 肺癌的发生可能存在MSI途径,而hMLH1、hMSH2的表达失活则可能导致MSI的发生,因此,MSI可作为肺癌诊断的指标之一.     

肺癌微卫星不稳定性与错配修复基因缺陷的相关性研究

目的 通过对肺癌微卫星不稳定性(MSI)的分析与错配修复基因蛋白表达的检测,探讨肺癌发病的分子机制.方法 从50例肺癌患者的正常肺组织、癌组织中提取DNA;SSCP法检测标本中MSI发生情况;免疫组织化学法检测错配修复基因hMLH1及hMSH2在肺癌中的表达情况.结果 50例肺癌中微卫星高度不稳定(MSI-H)14例,低度不稳定(MSI-I)21例,稳定(MSS)15例,正常组织中未出现MSI,两者之间差异有统计学意义(P=0.000);免疫组化结果显示hMLH1在MSI肺癌组织中常为缺失表达,表达率为74%(37/50);hMSH2在MSI肺癌组织中也呈缺失表达,表达率为32%(16/50);而在MSS肺癌组织中均显示hMLH1、hMSH2基因蛋白表达阳性.结论 肺癌的发生可能存在MSI途径,而hMLH1、hMSH2的表达失活则可能导致MSI的发生,因此,MSI可作为肺癌诊断的指标之一.     

肺癌微卫星不稳定性与错配修复基因缺陷的相关性研究

 目的　通过对肺癌微卫星不稳定性（MSI）的分析与错配修复基因蛋白表达的检测,探讨肺癌发病的分子机制。方法　从50例肺癌患者的正常肺组织、癌组织中提取DNA;SSCP法检测标本中MSI发生情况;免疫组织化学法检测错配修复基因hMLH1及hMSH2在肺癌中的表达情况。结果　50例肺癌中微卫星高度不稳定（MSI-H）14例,低度不稳定（MSI-I）21 例,稳定（MSS）15例,正常组织中未出现MSI,两者之间差异有统计学意义（P＝0.000）;免疫组化结果显示hMLH1在MSI肺癌组织中常为缺失表达,表达率为74 %（37／50）;hMSH2在MSI肺癌组织中也呈缺失表达,表达率为32 %（16／50）;而在MSS肺癌组织中均显示hMLH1、 hMSH2基因蛋白表达阳性。结论　肺癌的发生可能存在MSI途径,而hMLH1、hMSH2的表达失活则可能导致MSI的发生,因此,MSI可作为肺癌诊断的指标之一。     

非小细胞肺癌组织微卫星不稳定与T淋巴细胞浸润的关系

目的:分析非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织错配修复蛋白MLH1、MSH2和MSH6的表达和T淋巴细胞浸润情况,探讨微卫星不稳定(microsatellite instability,MSU与NSCLC组织T淋巴细胞浸润的关系.方法:收集天津医科大学肿瘤医院2004年至2010年NSCLC组织标本100例,应用免疫组化法检测癌组织中MLH1、MSH2和MSH6的表达,以其中1种及1种以上蛋白表达阴性者判定为MSI;同时检测T淋巴细胞浸润情况,并分析MSI与NSCLC临床病理特征的关系.结果:NSCLC组织中MSI检出率24％,少于微卫星稳定(microsatellite stability,MSS).MSI NSCLC组织中T淋巴细胞浸润明显高于MSS者.免疫组化结果显示:MSI NSCLC组织CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞浸润数目明显多于MSS NSCLC 组织,两者差异有统计学意义(P＜0.05).MSI与患者的年龄有关(P＜0.05),而与患者的性别、肿瘤组织类型、肿瘤大小、淋巴结有无转移和肿瘤有无远处转移均无关(P＞0.05).结论:MSI影响NSCLC肿瘤免疫微环境,MSI的检测可为NSCLC免疫治疗效应提供预测指标.     

乳腺癌系统化疗与微卫星不稳定性的关系

目的探讨乳腺癌全身化疗与周围血微卫星不稳定的关系。方法应用PCR和免疫组化测定30例乳腺癌患者化疗前、中、后周围血单核细胞,并与正常组进行对照比较。结果90%(27/30)患者化疗后周围血中发现微卫星不稳定(microsatellitein-stability,MSI),其中6例出现杂合子丢失(lossofheterozygosity,LOH)。MSI与化疗明显相关;MSI与hMSH2呈负相关;hMSH2与治疗方法明显相关;MSI与p53、hMLH1、hPMS1和hPMS2不相关。结论化疗可导致患者周围血单核细胞MSI和LOH发生,且可能与hMSH2表达有关,从而导致部分患者发生继发血液系统异常,以及导致肿瘤基因的不稳定和增加化疗的耐药。     

大肠癌组织中p27蛋白表达与微卫星不稳定性的关系

目的探讨大肠癌组织中p27蛋白表达与微卫星不稳定(MSI)的关系。方法采用免疫组化、PCRSSCP法对53例散发性大肠癌分别进行p27蛋白表达水平和D18S34,TGFβRⅡ,APC(1),TCF2,p53(1)及Rb6个碱基序列位点的检测。结果53例大肠癌中25例存在微卫星不稳定,总阳性率为47.2%,其中23例存在2个以上位点的MSI,呈复制误差阳性(RER阳性),占43.4%。RER 者p27高表达率(82.6%)显著高于RER阴性者(43.3%),2组比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论大肠癌MSI的发生可能对p27蛋白的表达有一定的上调作用。p27等一些细胞周期负调控因子在RER阳性大肠癌中的表达水平相对上调,可能是其细胞增殖活性较低、生物学行为较好的原因。     

肺癌患者血浆游离性肿瘤DNA的研究

目的　研究肺癌患者血浆游离DNA微卫星不稳定和杂合性缺失在肺癌诊断中的价值。方法　通过PCR 银染法检测肺癌病人的 37例新鲜手术标本、94例全血标本DNA 3p部位三个微卫星位点的LOH、MSI。结果　大多数肺癌患者的血浆游离DNA的浓度在微克水平以上。联合三个位点进行LOH、MSI检测时 ,组织和血浆的阳性率均在 70 %以上。不同分期、不同病理类型之间差异不显著 ;有无淋巴结转移之间差异有显著性意义。结论　肺癌患者血浆游离DNA可以作为基因检测的新途径。     

INHBA在结直肠癌中的表达及其与微卫星状态和临床病理特征的关系

目的探讨INHBA在结直肠癌中的表达及其与微卫星状态、临床病理特征之间的关系。方法基于基因表达综合(GEO)数据库及基因表达谱交互分析(GEPIA)数据库进行生物信息学分析, 选定结直肠癌差异表达预后相关目标基因。收集2016年1月至2022年6月于锦州医科大学附属第三医院行手术治疗的107例结直肠癌患者蜡块组织, 制备组织芯片, 采用免疫组织化学法检测结直肠癌组织中微卫星状态[错配修复(MMR)蛋白MLH1、MSH2、MSH6、PMS2均为阳性表达为错配修复完整(pMMR), 代表微卫星低度不稳定或微卫星稳定;若其中任何一个指标为阴性, 则判定为错配修复缺陷(dMMR), 代表微卫星高度不稳定]和INHBA的表达情况。回顾性分析患者临床病理资料, 分析INHBA与微卫星状态及临床病理特征之间的关系。结果从GEO数据库筛选出结直肠癌3个数据集:GSE110223(13个癌组织、13个癌旁组织)、GSE110224(17个癌组织、17个癌旁组织)、GSE113513(14个癌组织、14个癌旁组织), 筛选出癌组织和癌旁组织间差异表达上调和下调的前50个基因, 经韦恩图分析3个数据集的交集...     

微卫星不稳定结直肠癌临床病理特征及生存预后

目的 国内外已有学者提出微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)状态可能是影响结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者预后的因素,同时提出微卫星不稳定结直肠癌患者存在较为特殊的临床病理特征,本研究旨在探讨微卫星不稳定CRC的临床病理特征及生存预后.方法 应用免疫组织化学方法检测2010-03-24-2015-12-24济南市第四人民医院60例CRC组织中人MutL蛋白同系物1(human mutl homologue 1,hMLH1)、人MutS蛋白同系物2(human muts homologue 2,hMSH2)及人MutS蛋白同系物6(human muts homologue 6,hMSH6)3种DNA错配修复蛋白表达缺失情况,判断肿瘤微卫星不稳定状态,并分析高度微卫星不稳定(microsatellite instability-high,MSI-H)和低度微卫星不稳定(microsatellite instability-low,MSI-L)/微卫星稳定(microsatellite stable,MSS)不同组别间的临床病理特征及生存预后情况;应用Cox风险比例模型对可能影响CRC患者预后的因素进行多因素分析.结果 60例CRC患者的肿瘤组织中MSI-H为40.0%(24/60),MSI-L为31.7%(19/60),MSS为28.3%(17/60).MSI-H的CRC患者,与MSS和MSI-L患者相比,好发于右半结肠(χ2=6.279,P=0.043),黏液腺癌多见(χ2=6.025,P=0.049);3组在性别、年龄、分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移和分化程度差异无统计学意义.MSI-H患者的中位无病生存期(disease-free survival,DFS)为21个月,明显长于MSS的11个月及MSI-L的13个月,χ2=7.994,P=0.018.多因素Cox分析结果显示,淋巴结转移(P=0.013)和MSI(P=0.018)为CRC患者DFS的独立预后因素.结论 MSI-H的CRC患者与MSI-L及MSS相比,具有独特的临床病理特征且预后相对较好.检测MSI状态对提高CRC治疗水平,及改善预后有重要的临床意义.     

人剪切修复基因XPD转染对人肝癌细胞SMMC-7721的生物学影响

目的 将人剪切修复基因XPD稳定转染人SMMC-7721肝癌细胞,观察转染后细胞内野生型p53、XPD、周期素依赖性蛋白激酶(CDK)7、c-myc等基因表达的变化以及对细胞生长的影响,探讨野生型XPD基因与p53、CDK7、c-myc的相互作用及细胞凋亡机制.方法 将表达绿色荧光蛋白并含有人类全长野生型XPD的pEGFP-N2-XPD重组体质粒稳定转染人SMMC-7721肝癌细胞中,选择培养基筛选单克隆稳定转染重组质粒的人SMMC-7721肝癌细胞(SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD)和稳定转染空载质粒的人SMMC-7721肝癌细胞(SMMC.7721-pEGFP-N2),并将人SMMC-7721肝癌细胞作为空白对照,利用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westem blot法检测转染XPD基因后细胞内XPD、p53、CDK7、c-myc的表达量变化,并用细胞增殖力检测(MTT)法及流式细胞仪分别检测细胞增殖及凋亡和细胞周期变化.结果 ①免疫荧光显微镜下,SMMC.7721.pEGFP.N2.XPD和SMMC-7721-pEGFP-N2细胞中观察到绿色荧光蛋白表达,说明pEGFP-N2-XPD重组质粒和pEGFP-N2空载质粒成功转染.②RT-PCR检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD中p53 mRNA、XPD mR-NA表达量与SMMC-7721-pEGFP-N2和SMMC-7721相比均明显增高(P<0.01),CDK7 mRNA、c-myc mRNA在SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD的表达量比两对照组明显降低(P<0.01),而两对照组各个基因的表达没有明显差异(P>0.05).③Western blot检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞的p53、XPD蛋白表达最较两对照组升高(P<0.01),CDK7、c-myc的蛋白相对表达量比两对照组降低(P<0.01),两对照组差异没有统计学意义(P>0.05).④M1Tr检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD的细胞增殖力较对照组减弱(P<0.05),两对照组筹异没有统计学意义(P>0.05).⑤流式细胞仪检测:SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞进入s期出现障碍,停滞在G1期的细胞增多.结论 将XPD成功稳定转染到人SMMC-7721肝癌细胞中,XPD、p53在转录和蛋白水平的表达明显升高,CDK7、c-myc表达明显降低,野生型XPD基因的过表达可能抑制CDK7、c-myc表达,改变细胞周期,并促进p53抑制肝癌细胞增长,促进细胞凋亡.