细胞周期基因芯片筛选不同增殖状态下CNE-2细胞的差异表达基因

目的：了解不同增殖状态鼻咽癌细胞（CNE-2）细胞周期基因表达差异，探讨鼻咽癌放射治疗中加速再增殖的机理。方法：对不同增殖状态的CNE-2细胞，采用基因芯片技术、实时荧光定量PCR检测其细胞周期相关基因表达差异。结果：细胞增殖活性最高时相（2Gy连续照射第3天）与最低时相（2Gy连续照射第5天）表达有差异的基因有3条，为检测基因总数的3％（3／100），其中细胞增殖活性增高时上调基因为CCNE1、CUL-5，下调基因为CDKN1A。应用相对定量荧光实时PCR技术对部分差异表达在2倍以上的基因（CCNE1、CDKN1A））进行了mRNA水平的验证，结果显示实时PCR实验结果与芯片结果具有良好的一致性。结论：某些细胞周期基因如CCNE1、CUL-5、CDKN1A等可能参与了鼻咽癌放射治疗过程中发生的加速再增殖过程，有必要对这些基因功能作进一步研究，以探明照射过程中肿瘤细胞加速再增殖发生的分子机制。     

细胞周期基因芯片筛选不同增殖状态下CNE-2细胞的差异表达基因

目的:了解不同增殖状态鼻咽癌细胞(CNE-2)细胞周期基因表达差异,探讨鼻咽癌放射治疗中加速再增殖的机理.方法:对不同增殖状态的CNE-2细胞,采用基因芯片技术、实时荧光定量PCR检测其细胞周期相关基因表达差异.结果:细胞增殖活性最高时相(2Gy连续照射第3天)与最低时相(2Gy连续照射第5天)表达有差异的基因有3条,为检测基因总数的3%(3/100),其中细胞增殖活性增高时上调基因为CCNE1、CUL-5,下调基因为CDKNlA.应用相对定量荧光实时PCR技术对部分差异表达在2倍以上的基因(CCNE1、CDKNIA))进行了mRNA水平的验证,结果显示实时PCR实验结果与芯片结果具有良好的一致性.结论:某些细胞周期基因如CCNE1、CUL-5、CDKN1A等可能参与了鼻咽癌放射治疗过程中发生的加速再增殖过程,有必要对这些基因功能作进一步研究,以探明照射过程中肿瘤细胞加速再增殖发生的分子机制.     

沉默CDKN1A基因对鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞放射敏感性的影响

目的：探讨CDKN1A基因的表达与鼻咽癌放射敏感性的关系。方法构建慢病毒表达载体LV-CDKN1A-RNAi并转染鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞,设转染LV-CDKN1A-RNAi慢病毒的CNE-2R细胞为实验组,转染阴性对照慢病毒的CNE-2R细胞为阴性对照组,未转染的CNE-2R细胞为空白对照组。用CCK-8法、细胞克隆形成实验及流式细胞术分别检测各组细胞增殖、放射敏感性及细胞周期的变化。结果成功构建了CDKN1A基因沉默的CNE-2R细胞,CCK-8法检测显示实验组CNE-2R细胞在照射6 Gy后生长受到抑制,且随时间延长其抑制作用更为明显。细胞克隆形成实验显示实验组CNE-2R细胞放射敏感性增强（放射增敏比为SER=1.24）。流式细胞术检测显示实验组与对照组细胞相比, G0/G1期和G2/M期细胞分布在X射线照射6 Gy前后明显改变（P约0.05）。结论 CDKN1A基因沉默能增强鼻咽癌放射抗拒性CNE-2R细胞的放射敏感性,CDKN1A基因的表达可能与鼻咽癌放射敏感性相关,有望成为鼻咽癌治疗的新靶点。     

GADD45A在肿瘤中的研究进展

GADD45A是细胞生长阻滞和DNA损伤修复基因,在基因组稳定性维持、细胞周期阻滞和细胞凋亡中起着重要的作用,与肿瘤的发生有密切的关系,其表达高低与肿瘤预后有关.本文对GADD45A的结构和功能以及其在肿瘤中的作用进行综述.     

GADD45A靶向抑制p38 MAPK通路逆转宫颈癌细胞获得性耐药的实验研究

目的 探究生长阻滞和DNA损伤诱导45A(GADD45A)对宫颈癌细胞顺铂(DDP)获得性耐药的影响及可能的分子机制.方法 体外培养HeLa细胞,通过DDP诱导建立HeLa耐药细胞HeLa/DDP,实时荧光定量PCR(qPCR)检测GADD45A表达.将HeLa/DDP细胞分为空白对照组(细胞不做任何处理)、阴性对照组...     

GADD45g 通过抑制E2F1在急性髓系白血病中发挥抑癌作用

[摘要] 目的：检测转录因子E2F1 与生长阻滞和DNA损伤诱导蛋白45g（GADD45g）基因在急性髓系白血病（AML）患者中表达的相关性,探讨GADD45g 是否通过抑制E2F1 诱导AML细胞DNA损伤、凋亡、衰老、周期阻滞和提高药物敏感性。方法：选取2013 年1 月至2016 年12 月中国医学科学院血液病医院初诊为AML患者32 例骨髓标本及AML细胞系U937、HL60、THP-1和Molm-13,用qPCR检测组织和细胞中GADD45g 和E2F1 mRNA的表达水平,并分析其相关性。构建E2F1 过表达载体,并制备重组慢病毒在过表达GADD45g 的Molm-13 和THP-1 细胞中过表达E2F1,通过彗星实验、Annexin V/7AAD流式细胞术、β-半乳糖苷酶染色和PI 染色流式细胞术等确定GADD45g 是否通过抑制E2F1 对AML细胞发挥抑癌作用。结果：AML患者骨髓和细胞系中GADD45g 和E2F1 mRNA的表达呈显著负相关（r=–0.663,P<0.01）。GADD45g 在AML细胞系中过表达显著抑制了E2F1的表达（均P<0.01）。成功构建同时过表达GADD45g 和E2F1 的Molm-13 和THP-1 细胞,与对照组比较,过表达组细胞GADD45g和E2F1 蛋白表达水平均显著升高（均P<0.01）。与过表达GADD45g 的细胞相比,同时过表达GADD45g 和E2F1 细胞的凋亡、衰老率和DNA损伤水平均显著降低（均P<0.01）;在过表达GADD45g 的细胞中过表达E2F1 逆转了GADD45g 诱导的周期阻滞（均P<0.01）,进而降低了过表达GADD45g 对化疗药物的敏感性（均P<0.01）。结论：GADD45g 通过抑制E2F1 在AML中发挥抗肿瘤作用。     

GADD45蛋白在肿瘤中的作用北大核心

GADD45蛋白是参与DNA损伤修复的重要基因之一,在响应毒性和非毒性应激过程中可快速上调,并在细胞周期调控、DNA损伤修复及细胞信号转导过程中发挥重要作用。研究显示,GADD45蛋白在组织及细胞中广泛表达,其表达异常与肿瘤发展息息相关,在肿瘤进展过程中,GADD45蛋白连接多种细胞信号模块,参与调节包括细胞增殖、侵袭与迁移以及血管生成等在内的肿瘤生长;影响肿瘤的放疗抵抗及化疗耐药;同时也影响肿瘤患者的总体生存率。本文就近年来GADD45蛋白在肿瘤中的作用进行了总结。     

GADD45A 基因在人贲门腺癌组织中的异常甲基化和表达及其临床意义

目的： 探讨生长阻滞和DNA损伤诱导45A（growth arrest and DNA-damage-inducible 45 alpha, GADD45A ）基因在贲门腺癌（gastric cardia adenocarcinoma,GCA）中的异常甲基化及表达,并探讨其临床意义。 方法: 选取河北医科大学第四医院2004-2007年期间GCA患者组织标本（138例）。分别应用亚硫酸氢盐测序法（bisulfite sequencing,BS-Seq）、亚硫酸氢盐转换-甲基化特异性聚合酶链式反应（bisulfite conversion-methylation specific polymerase chain reaction,BS-MSP）、RT-PCR和免疫组织化学法检测 GADD45A 基因在GCA组织及癌旁正常组织中的甲基化、 GADD45A mRNA及蛋白表达的情况。 结果: GADD45A 远端启动子区的4个CpG位点在GCA组织中的甲基化率\[44.93% (62/138）\]显著高于癌旁正常组织\[0.00% (0/138）\]（P<0.01）,且在Ⅲ期和Ⅳ期GCA组织中的甲基化率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期GCA组织（P<005）,但 GADD45A 在GCA组织中的甲基化与患者的年龄、性别及病理分化程度无关（P>0.05）。 GADD45A 近端启动子（region 2）及第一外显子区（region 3）的CpG岛在GCA及癌旁组织中均未检测到甲基化。GCA组织中 GADD45A mRNA和蛋白阳性表达率显著低于癌旁正常组织\[(0.35±0.15) vs (0.78±0.26),42.75% vs 71.01%,均P<0.05\],且与其远端启动子区4个CpG位点的甲基化状态之间有明显的相关性（r=-0.52,P<0.01）。 结论: GADD45A 基因远端启动子区的4个CpG位点的高甲基化导致的基因沉默可能与GCA中 GADD45A 基因表达降低有关。     

鼻咽癌细胞株CNE-2连续照射期间细胞增殖状况的研究

目的：了解鼻咽癌细胞（CNE-2）照射过程中的增殖情况，探讨鼻咽癌放射治疗巾加速再增殖的时机，为临床上进行鼻咽癌后程加速超分割放射治疗提供理论依据。方法：对接受^60Co-γ射线2Gy／天，每天1次，连续照射5天期间的CNE-2细胞，每天分别采用四氮唑兰比色分析法（MTT法）检测CNE-2细胞仔活率、细胞分裂指数法检测细胞分裂指数、流式细胞术检测照射后细胞周期分布情况。结果：MTT法、细胞分裂指数法和流式细胞术均检测出CNE-2细胞在连续照射的第3天增殖速度最快，增殖最旺盛；在第5灭细胞增殖速度最缓慢，增殖活性最低。结论：鼻咽低分化鳞癌细胞连续分割照射中后期存在加速增殖现象。     

DNA-PKcs 表达与鼻咽癌细胞株放射敏感性的关系

 目的 探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1（鼻咽高分化鳞癌细胞株）和CNE-2（鼻咽低分化鳞癌细胞株）中DNA依赖蛋白激酶（DNA-PK）的催化亚基DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法 通过克隆形成实验测定CNE-1、CNE-2不同剂量的存活分数，并用线性二次模型拟合剂量存活曲线求出放射生物学参数α、β,SF2、MID值，以及四氮唑蓝比色分析法（MTT法）检测60Co-γ线4Gy照射后12h细胞的存活率，以评价两株细胞的放射敏感性。逆转录实时荧光定量PCR技术（RTrFQPCR）检测照射前、后不同时间及不同剂量CNE-1、CNE-2细胞mRNA水平DNA-PKCS基因的定量表达。结果CNE-1在各个剂量点的存活分数均比CNE-2高，MID值分别为2．78、1．61，SF2值分别为0．627、0．341；4Gy照射后12h的存活率分别为88．2％、72．3％；RT-FQPCR显示两株细胞中均有DNA-PKCS基因的表达，其相对表达量之比为7．54±2．71（t=4．17，P=0．014），表达差异有统计学意义，DNA-PKCS基因在CNE-2细胞中存在时间、剂量依赖关系。结论实验验证了CNB2比CNE-1对射线更敏感，DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞的放射敏感性有关。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。