血红素氧合酶-1对人肝癌SMMC-7721细胞5-FU化疗敏感性的影响

目的:探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对人肝癌SMMC-7721细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)化疗敏感性的影响及其可能的机制.方法:应用不同浓度锌原卟啉(ZnPP)、氯化血红素(Hemin)单独或联合5-FU作用于人肝癌SMMC-7721细胞不同时间,MTT法观察药物对细胞生长抑制作用;蛋白质印迹法分析细胞HO-1蛋白表达变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;Caspase-3活性检测试荆盒分析其凋亡机制.结果:ZnPP和5-FU均可明显抑制SMMC-7721细胞生长,呈剂量依赖性.5-FU联用ZnPP(20 μmol/L)显著增加细胞生长抑制率和凋亡率,P=0.000;而联用Hemin(10/μmol/L)显著降低细胞生长抑制率和凋亡率,P=0.000.SMMC-7721细胞中可见HO-1表达,应用Hemin和5-FU均能使其表达增强,联用ZnPP可逆转此现象.应用5-FU细胞内Caspase-3活性明显增高,约0.553±0.024,P=0.000;联用znPP后可进一步提高细胞内Caspase-3活性,达1.190±0.091,P=0.000.而联用Hemin后细胞内Caspase-3活性水平显著降低,约0.321±0.024,P=0.000.结论:阻断HO-1的表达可增强人肝癌SMMC-7721细胞对5-FU化疗敏感性,而诱导HO-1表达则降低人肝癌SMMC-7721细胞时5-FU化疗敏感性,这一作用机制可能与影响细胞Caspase-3活性有关.     

血红素加氧酶-1在前列腺癌中的表达

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在人前列腺癌组织中的表达,以及HO-1活性对体外培养的前列腺癌细胞(PC3)的影响。方法　收集我院2000年1月至2007年4月前列腺癌根治性手术标本30例,前列腺增生开放手术大体标本30例。行RT-PCR检测HO-1的mRNA表达,免疫组化检测HO-1的表达。应用ZnPP、CoPP干预体外培养的PC3细胞,24h后,RT-PCR检测HO-1 mRNA的表达,MTT法酶标检测仪检测细胞A570nm值,流式细胞术检测细胞凋亡。结果人前列腺癌组织HO-1的mRNA表达明显高于良性增生前列腺组织;免疫组化前列腺癌中HO-1表达阳性率为76.9%,良性前列腺组织仅少许有微弱表达。应用ZnPP、CoPP干预PC3细胞后,RT-PCR可见ZnPP抑制PC3细胞HO-1表达,且随浓度增加抑制作用增加;CoPP可诱导HO-1表达,随浓度增加表达增强。MTT检测显示,ZnPP组PC3细胞A值随浓度增加而减少,而CoPP组随浓度增加A值增加,呈现浓度依赖性(P<0.05)。流式细胞技术结果显示,ZnPP可诱导PC3细胞凋亡,CoPP可保护细胞减少凋亡。结论人前列腺癌组织中HO-1基因表达及蛋白水平均显著高于良性前列腺组织;体外细胞实验证实,ZnPP可抑制前列腺癌PC3细胞系HO-1活性,抑制其增殖,诱导其凋亡。而CoPP可诱导前列腺癌PC3细胞系HO-1表达,抑制其凋亡,诱导其增殖。     

吉非替尼对肝癌Bel7402细胞株放射增敏作用的实验研究

目的:观察不同浓度的吉非替尼(gefitinib)联合不同剂量放疗对人肝癌Bel7402细胞株的放射增敏作用。方法:采用MTT法测定浓度分别为0、1、2.5、5、10、20、40和80μmol/L Gefitinib对肝癌Bel7402细胞株的生长抑制率;克隆形成实验测定SF(存活分数),观察放射敏感性,计算细胞生存率,拟合生存曲线并计算放射增敏比,观察放射增敏作用。结果:MTT实验结果表明,Gefitinib单独作用于肝癌Bel7402细胞株具有对细胞生长抑制作用,其IC50(半数抑制浓度)为7.26μmol/L。不同浓度的Gefitinib与不同剂量照射人肝癌Bel7402细胞株,SF与单纯放射治疗相比其差异均有统计学意义,P<0.05。多靶单击模型,拟合生存曲线为人肝癌Bel7402细胞株R(放疗)+0.1×IC50Gefitinib、R+0.2×IC50Gefitinib生存分数其放射增敏比(SER)分别为1.237 5和1.345 6。结论:Ge-fitinib对肝癌Bel7402细胞株有抑制增殖作用,其IC50值为7.26μmol/L。Ge-fitinib对肝癌Bel7402细胞株有放射增敏作用,...     

索拉非尼逆转肝癌细胞株HepG2/GEM耐药作用的实验研究

目的:探讨索拉非尼能否逆转人肝癌细胞株HepG2/GEM的耐药性及可能机制.方法:以药物大剂量冲击法建立耐药细胞模型HepG2/GEM,MTT法检测索拉非尼对HepG2、HepG2/GEM的抑制率及索拉非尼处理前后2株细胞对GEM敏感性的变化,RT-PCR法检测MDR-1及ERK、VEGFR-2 mRNA水平的变化,蛋白质印迹法检测P-gP、VEG-FR-2蛋白水平的变化.结果:建立了人肝癌HepG2/GEM耐药细胞模型,耐药倍数11.63倍.经1 mg/L的索拉非尼处理后,GEM对HepG2/GEM细胞株的IC50明显下降,逆转倍数为3.08倍,相对逆转率为73.87%,P=0.019.1 mg/L的索拉非尼能够降低HepG2/GEM细胞MDR-1、ERK、VEGFR-2 mRNA表达(P=0.033),并可明显抑制P-gP、VEGFR-2蛋白的表达,P=0.007.结论:经GEM大剂量间断冲击后,HepG2细胞株对GEM产生了耐药性.索拉非尼具有体外部分逆转HepG2/GEM细胞株耐药性的作用.可能与抑制VEGFR-2、ERK1/2信号传导通路,从而下调MDR-1有关.     

槐耳颗粒在乳腺癌综合治疗中的作用及其机制

目的探讨金克-槐耳颗粒在乳腺癌综合治疗中的作用及其机制,并对其临床疗效进行观察.方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定药物的细胞毒性、耐药倍数和逆转倍数;应用荧光分光光度计测定细胞内ADM药物浓度;荧光定量PCR仪测定药物对细胞内MDR-1 mRNA表达水平的影响.结果 (1)0.01 mg/ml剂量的槐耳颗粒能显著降低化疗药物ADM对人乳腺癌耐药细胞株MCF-7/A的IC50(3.95 μg/ml),与逆转前耐药细胞株MCF-7/A的IC50(17.67 μg/ml)相比,差异有显著性(P<0.05),其逆转倍数为4.5倍,耐药倍数为21.7倍.(2)0.01 mg/ml槐耳颗粒能显著增加耐药细胞内ADM浓度,实验组与对照组相比,差异有显著性(P<0.01).(3) 人乳腺癌敏感细胞株MCF-7/S无MDR-1 mRNA表达,低毒剂量和非细胞毒性剂量的槐耳颗粒使MCF-7/A细胞的耐药基因MDR-1表达水平下调,与对照组相比差异有显著性(P<0.01).(4)临床观察发现,槐耳颗粒在乳腺癌综合治疗中对化疗有增敏作用.结论金克-槐耳颗粒具有逆转MCF-7/A细胞耐药性的作用,逆转机制是使耐药基因MDR-1表达水平下调.槐耳颗粒在乳腺癌综合治疗中具有双效性,一是抗肿瘤活性,二可作为耐药逆转剂.     

载体介导的RNA干扰技术抑制肝癌耐药细胞MDR1表达的研究

目的 :构建含多药耐药基因MDR1的短发夹状RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)表达质粒 ,观察对肝癌耐药细胞Bel 740 2 /R的MDR1mRNA的抑制作用。方法 :利用分子克隆技术 ,将含MDR1的双链DNA ,与经双酶切后的载体PGE 1连接 ,构建pshRNA MDR1重组质粒 ,在脂质体的介导下转染肝癌耐药细胞株Bel 740 2 /R ;RT PCR分析MDR1mRNA的表达 ,MTT法检测细胞对药物的敏感性 ,流式细胞仪检测细胞内罗丹明 12 3 (Rh12 3 )的潴留和P gp的表达。结果 :PCR和DNA测序证实了表达质粒构建成功 ,并能明显地抑制MDR1mRNA的表达 ;对盐酸表柔比星和顺铂的半数抑制浓度IC50明显降低 ,P <0 0 5 ;P gp的表达阳性率降低了 5 7 3 % ;细胞内Rh12 3的浓度显著增高 ,P <0 0 5。结论 :构建的pshRNA MDR1表达质粒能有效地降低肝癌耐药细胞MDR1mRNA和P gp的表达。     

血红素加氧酶-1与肿瘤的研究进展

血红素加氧酶-1(HO-1)是一种重要的抗炎、抗凋亡、抗氧化及耐药相关基因。在生理状态下,人体正常组织中的HO-1蛋白呈低表达。在遭受酒精、辛辣及热烫等持续刺激时,其表达升高。HO-1的表达异常与肿瘤的生物学行为密切相关。近年来研究发现,其基因多态性及分解血红素产生的代谢产物(胆红素、Fe²⁺、CO)参与的多条信号通路的激活,并影响多种肿瘤疾病的发生、发展。另外,在许多肿瘤中HO-1表达水平上调,不仅影响肿瘤微环境中氧化应激水平对肿瘤细胞生长及增殖的调节,而且还能诱导肿瘤细胞产生耐药性。因此,HO-1表达异常可能参与了肿瘤的发生发展。     

慢病毒介导的miRNA逆转胃癌细胞耐药性研究

目的:利用慢病毒介导的RNA干扰技术(RNAi),沉默SGC-7901/DDP胃癌耐药细胞株的多药耐药基因1(MDR-1)表达,逆转该细胞株对顺铂(DDP)的耐药性.方法:将前期筛选获得的MDR-1基因最佳干扰片段构建慢病毒表达载体,包装成慢病毒,感染SGC-7901/DDP耐药株,通过逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法验证干扰效果后进行DDP药物敏感度实验和细胞凋亡检测.结果:慢病毒介导的基因沉默效果较前期干扰质粒效果更明显,MDR-1mRNA表达抑制率为(51±3)％,且P糖蛋白表达下调至(47±8)％,干扰后的SGC-7901/DDP细胞IC50值下降至1.1 μg/mL,并且细胞株的凋亡率显著增加.结论:慢病毒介导的RNAi可有效抑制SGC-7901/DDP胃癌耐药细胞株的MDR-1基因表达,实现其DDP耐药性逆转.     

FZD1基因对小细胞肺癌多药耐药作用研究

目的:探讨FZD1在小细胞肺癌多药耐药中的作用。方法:运用QRT-PCR和蛋白质印迹法,分别从基因和蛋白水平检测小细胞肺癌敏感细胞株H69及耐药细胞株H69AR中FZD1的差异表达,同时运用QRT-PCR检测化疗敏感及耐药患者血液标本中FZD1的差异表达;采用siRNA抑制耐药细胞株H69AR中FZD1的表达,通过CCK8检测细胞对各种化疗药物(ADM,DDP,Vp-16)敏感性的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果:无论是基因水平还是蛋白水平,FZD1在H69AR细胞中的表达明显高于H69细胞,差异有统计学意义,P值分别为0.003和<0.001;FZD1在化疗耐药患者血液标本中的表达较化疗敏感者明显增高,差异有统计学意义,P<0.001。下调H69AR细胞株中FZD1的表达能够增加细胞对化疗药物的敏感性,差异有统计学意义,P=0.020;H69AR细胞组的凋亡率为(2.037±0.49)%,较H69细胞组(9.63±0.67)%明显降低,差异有统计学意义,P=0.002。下调H69AR细胞中FZD1的表达后,H69ARSi-FZD1组细胞的凋亡率为(17.093±0.904)%,明显高于空白对照H69AR及阴性对照H69AR-NC组的(2.25±0.967)%,差异有统计学意义,P=0.007。结论:FZD1参与调节小细胞肺癌的多药耐药,下调FZD1基因的表达能够增加细胞对化疗药物的敏感性,FZD1可能通过抑制细胞凋亡而影响小细胞肺癌的多药耐药。     

HO-1与MRP2在原发性胆囊癌组织中的表达和意义

目的:检测血红素加氧酶-1(heme oxygenase,HO-1)与多药耐药相关蛋白2 (multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)在原发性胆囊癌组织中的表达,探讨其与胆囊癌发生、发展的关系.方法: 采用免疫组化SP法检测67例原发性胆囊癌患者中HO-1和MRP2的表达水平.结果: 原发胆囊癌组织HO-1和MRP2表达的总阳性率分别为73.1%、77.6%.其中腺癌的阳性率为76.7%和80%.依据病理分级,HO-1和MRP2表达水平由高到低分别为III级>II级>I级,且具有统计学差异(P=0.028,P=0.023);HO-1、MRP2的阳性表达与年龄、性别等临床特征无相关性;HO-1和MRP2表达之间具有良好的相关性(r=0.324,P=0.005).结论: HO-1和MRP2在原发性胆囊癌组织高表达,对胆囊癌的发生、发展提供有利条件,二者之间表达具有良好的相关性.     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。