组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对人骨髓瘤U266细胞生长的影响及其可能机制

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)MS-275对人骨髓瘤细胞U266的凋亡抑制基因生存素(survivin)和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 台盼蓝拒染法观察MS-275对细胞活力的影响;瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期;Western blot检测survivin、p21、细胞周期依赖激酶4(CDK4)和NF-κB的抑制蛋白(IKB-α)等的表达,以及凋亡信号通路中caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解情况.结果 MS-275抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0/G1期,呈时间-剂量依赖性.MS-275作用U266细胞48 h的IC50为1.39μmol/L.2 μmol/L MS-275作用U266细胞24 h后,G0/G1期细胞所占比例为(64.57±4.09)%;作用36 h后,G0/G1期细胞所占比例为(87.20±2.83)%;瑞氏-姬姆萨染色显示,U266细胞形态发生明显变化.Western blot检测表明,MS-275作用U266细胞后,survivin和CDK4表达下降,p21表达增加,IκB-α磷酸化水平受到明显抑制,caspase-3被裂解活化,其底物蛋白PARP发生剪切,细胞发生凋亡.结论 MS-275可诱导人骨髓瘤细胞系U266凋亡,NF-κB信号通路阻断是凋亡发生的机制之一.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275诱导骨髓瘤细胞株U266凋亡过程中Survivin的表达

背景与目的：组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histone deacetylase inhibitors,HDACi）是-类具有抗肿瘤活性的新型药物,主要通过诱导细胞凋亡发挥作用。本实验研究HDACi（MS-275）对人骨髓瘤细胞系U266细胞增殖和凋亡的影响及其与Survivin表达的关系。方法：将不同浓度的MS-275作用于U266细胞不同时间后,用台盼蓝拒染法观察药物对细胞活力的影响：通过瑞氏-姬姆萨染色观察药物作用后细胞形态学的变化;用流式细胞仪分析细胞周期;用Westernblot检测Survivin、P21和Cdk4等的蛋白表达,以及凋亡信号通路中Caspase-3活化及蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly（ADP—ribose）polymerase,PARP]的裂解情况。结果：MS-275呈时间和剂量依赖性抑制U266细胞增殖,阻断细胞周期于G0／G1期。MS-275作用U266细胞48h时的Ic50为1．39μmol／L：2μmol／L的MS-275作用U266细胞24h后,G／G,期细胞占66．39％．36h后G0／G1期细胞占89．80％。瑞氏-姬姆萨染色显示细胞形态发生明显变化。Western blot检测结果显示。MS-275作用U266细胞后,Survivin和Cdk4表达下降,P21表达增加,Caspase3被裂解活化,其底物蛋白PARP发生剪切。结论：MS-275抑制人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖并诱导细胞凋亡,可能与下调Survivin蛋白的表达有关。     

雷公藤红素对U937细胞Notch 1、NF-κB信号蛋白通路的调控作用

背景与目的:白血病是高度依赖NF-κB的恶性肿瘤,NF-κB与肿瘤的发生和转移以及肿瘤细胞的增殖、凋亡、耐药相关,现已证实NF-κB家族是Notch信号通路的一个靶基因。本研究探讨雷公藤红素对白血病U937细胞凋亡和细胞中Notch1、NF-κB表达水平的影响。方法:以不同浓度雷公藤红素(0.25～16.0μmol/L)分别作用于U937细胞12～60h,MTT法检测细胞增殖活性,透射电子显微镜、流式细胞术观察雷公藤红素对U937细胞凋亡的影响,Western blot、RT-PCR法分别检测雷公藤红素对U937细胞内Notch1通路蛋白、基因表达水平的调控作用,激光共聚焦显微技术检测细胞凋亡时NF-κB的核浆分布变化。结果:雷公藤红素能明显抑制U937细胞增殖,具有浓度依赖和时间依赖性。此外,雷公藤红素以浓度依赖性方式诱导U937细胞凋亡,并伴随明显的凋亡细胞形态学改变,而雷公藤红素的凋亡诱导效应可能与其将细胞阻滞于G0/G1期有关。雷公藤红素对Notch1通路蛋白及基因表达水平均有不同程度的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效关系。NF-κB在胞核表达减少,胞浆表达增多。与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。结论:雷公藤红素明显抑制U937细胞的增殖,并诱导其凋亡,其抗白血病效应可能与下调Notch1信号通路以及NF-κB蛋白表达有关。     

冬凌草甲素联合地塞米松对多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨冬凌草甲素联合地塞米松对多发性骨髓瘤 U266细胞增殖与凋亡的影响及其相关分子机制。方法培养 U266细胞至对数生长期,分别采用高、中、低浓度的地塞米松、冬凌草甲素单独或联合处理 U266细胞,以二甲基亚砜（DMSO）处理为对照,于处理后24、48、72 h 利用 CCK-8法检测细胞增殖情况;应用 Annexin V-FITC／PI 标记及流式细胞术检测细胞凋亡;利用实时荧光定量 PCR 法检测细胞 Notch1、NF-κB／p65、bcl-2基因表达水平的变化;Westernblot 法分析 Notch1、cleavedNotch1、NF-κB／p65、bcl-2蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,不同剂量的药物处理组均能有效抑制 U266细胞的增殖并促进其凋亡（P＜0.05）,两种药物联合应用对 U266细胞的抑制增殖和诱导凋亡具有协同作用（P＜0.05）。 U266细胞经地塞米松处理后其 NF-κB／p65、bcl-2 mRNA 和蛋白表达水平均有所下调（P＜0.05）,冬凌草甲素处理组及联合处理组 U266细胞 Notch1、cleaved Notch1、NF-κB／p65、bcl-2蛋白表达水平均显著下调（P＜0.05）。结论冬凌草甲素联合地塞米松对 U266细胞增殖的抑制作用及凋亡诱导作用显著增强,其作用机制可能与抑制 Notch1信号通路有关。     

抑制NF-κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的:观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF-κB通路的作用,探讨NF-κB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用.方法:锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用Western Blot技术检测IKK的磷酸化.结果:蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡.24,48和72h抑制细胞活力的IC50浓度分别为26.3,7.8和2.0nmol/L.对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化.NF-κB通路的特异性抑制剂Bay 11-7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用.结论:蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF-κB通路调节相关,而且与NF-κB通路抑制剂有协同作用.     

SGPL1在神经胶质瘤组织中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨SGPL1在神经胶质瘤组织中的表达及其对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:在TCGA及PROGgene在线数据库中分析SGPL1在神经胶质瘤临床肿瘤组织及正常神经组织中的表达差异,并分析其表达与神经胶质瘤预后生存的关系;在神经胶质瘤细胞系U251和U87中分别敲降和过表达SGPL1,通过RT-qPCR和Western blot实验分别检测SGPL1的mRNA和蛋白表达水平;用CCK-8法、细胞克隆形成实验检测SGPL1敲降和过表达后细胞增殖变化;通过流式细胞术和caspase3/7酶活性试剂检测分析细胞凋亡变化,Western blot实验检测caspase3、PARP及CyclinD1等凋亡相关蛋白的表达;ELISA检测细胞内S1P含量;RT-qPCR检测S1PR5的表达水平;RNA-seq分析SGPL1在神经胶质瘤细胞中调控的信号通路;Western blot实验检测SGPL1敲降和过表达后Phospho-p38-MAPK、Phospho-ERK、Phospho-STAT3及Phospho-NF-κB(p65)的表达变化。结果:TCGA及PROGgene在线数据库分析表明SGPL1在神经胶质瘤组织中高表达并与神经胶质瘤患者的预后生存成负相关。在U251中敲降SGPL1后细胞增殖受到抑制,细胞凋亡增加;在U87细胞中过表达SGPL1后能显著促进细胞的增殖能力。SGPL1表达对S1P信号通路无明显影响;RNA-seq结果表明SGPL1在神经胶质瘤细胞内调控细胞增殖死亡信号通路,SGPL1敲降和过表达可影响p38-MAPK、ERK、STAT3及NF-κB(p65)等细胞增殖生长信号的变化。结论:SGPL1在神经胶质瘤组织中高表达并与生存预后负相关。在神经胶质瘤细胞内SGPL1可调控p38-MAPK、ERK、STAT3及NF-κB(p65)等细胞增殖生长信号通路,其表达可影响神经胶质瘤细胞的增殖和凋亡,可能是一个潜在的肿瘤标志物和治疗的分子靶点。     

姜黄素增强人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1放射敏感性的研究

目的 研究姜黄素对人乳头瘤状甲状腺癌细胞TCP-1放射敏感性的影响,并探索姜黄素可能作用的信号通路,为甲状腺癌放射增敏剂的开发提供新的思路。方法 使用姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1,CCK-8法检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,western blot检测p50、p65、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达变化。使用NF-κB信号通路抑制剂PDTC抑制NF-κB信号通路活性,检测细胞增殖、克隆形成和凋亡变化。结果 姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1后,细胞增殖率下降,克隆形成减少,凋亡上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,并呈浓度依赖性。这些结果表明姜黄素可增加TPC-1细胞的放射敏感性。碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路活化,姜黄素可以抑制碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路的激活。使用抑制剂抑制NF-κB通路的活性,细胞增殖下降,克隆形成减少,凋亡上升,放射敏感性升高。结论 姜黄素可能靶向NF-κB信号通路,通过抑制NF-κB信号通路活性调节甲状腺癌细胞的放射敏感性。     

乙肝病毒X蛋白对不同肝细胞系凋亡的诱导作用

目的:研究乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBX)通过核转录因子NF-κB信号通路对不同肝细胞系凋亡的诱导作用。方法:建立稳定转染PEGFP-N1-HBX质粒的人正常肝细胞系L02(L02/HBX)和人肝癌细胞系HepG2(HepG2/HBX),用特异性NF-κB阻断剂吡咯二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)阻断NF-κB信号通路,流式细胞术检测PEGFP-N1-HBX转染前后及加入PDTC前后L02和HepG2细胞的细胞周期与凋亡,Western blotting检测NF-κB的表达。结果:成功构建了稳定转染PEGFP-N1-HBX的L02/HBX和HepG2/HBX细胞。与对照组L02细胞相比,L02/HBX细胞凋亡率明显增加[(31.31±0.51)%vs(14.05±0.09)%,P<0.05];其G0/G1期细胞比例显著增加,S期和G2/M期细胞比例减少。与对照组HepG2细胞相比,HepG2/HBX细胞凋亡率显著降低[(1.21±0.04)%vs(10.26±0.10)%,P<0.05];其G0/G1期细胞比例显著减少,S期和G2/M期细胞比例增加。PDTC作用后,L02/HBX/PDTC组凋亡率[(40.33±0.07)%]及G0/G1期细胞比例较L02/HBX组显著增加,G2/M期细胞比例明显减少,而HepG2/HBX/PDTC组凋亡率[(5.45±0.07)%]及G0/G1期细胞比例较HepG2/HBX组显著增加,S期和G2/M期细胞比例明显减少,但其凋亡率仍低于对照HepG2细胞。West-ern blotting结果显示,L02/HBX细胞NF-κB表达显著下调,而HepG2/HBX细胞NF-κB表达显著增加,L02/HBX/PDTC和HepG2/HBX/PDTC细胞NF-κB几乎不表达。结论:HBX可下调正常肝细胞L02 NF-κB蛋白的表达,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡;而HBX可增加肝癌细胞系HepG2中NF-κB蛋白的表达,加速细胞周期,抑制肝癌细胞凋亡。     

组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂MS-275对胃癌细胞增殖的影响

目的：探讨组蛋白去乙酰化转移酶抑制剂MS-275对胃癌细胞（MKN-45）和人正常胃黏膜细胞（GES-1）及张氏肝细胞（changliver）生长及凋亡的影响。方法：用不同浓度的MS-275分别处理体外培养的胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞及张氏肝细胞,用水溶性四唑盐（WST-1）法检测对细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果：MS-275可明显抑制胃癌细胞的生长且呈时间和浓度依赖性,细胞凋亡率明显增加,但对正常细胞没有促凋亡作用。低浓度的MS-275能诱导MKN-45细胞发生G0/G1期阻滞,随着药物处理时间的延长,可以明显检测到G0/G1期比例增大。结论：去乙酰化转移酶抑制剂MS-275对胃癌细胞MKN-45具有选择性细胞毒作用,为其临床应用提供了有价值的实验依据,有望成为新的抗胃癌药物。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂诱导脑胶质瘤细胞凋亡及其机制的研究

背景与目的:使用分子靶向药物治疗胶质瘤是神经肿瘤领域的研究热点。本文探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法:以不同药物浓度梯度与U251细胞分别共培养24、48和72h后,应用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,Transwell法检测药物作用前后U251细胞迁移能力的变化,Annexin V-FITC/PI法经流式检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测IκB-α的RNA含量,免疫印迹检测IκB-α蛋白、磷酸化IκB-α蛋白和聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达。结果:MS-275能显著抑制U251细胞的增殖。MS-275药物浓度40nmol/mL,与U251共培养72h,细胞增殖抑制率为(79.0±1.7)%;经药物作用72h后,U251细胞凋亡率为(29.000±2.306)%;实时定量PCR检测IκB-α的RNA含量随药物作用时间的延长而降低,免疫印迹检测提示IκB-α蛋白表达水平降低,IκB-α蛋白磷酸化被抑制,PARP被剪切。结论:MS-275对胶质瘤细胞的增殖和迁移抑制作用具有浓度和时间依赖性,其机制是通过抑制IκB-α蛋白磷酸化诱导凋亡实现的。     

TNF-α通过NF-κB信号通路调控宣威肺癌恶性生物学行为

摘 要：［目的］ 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）通过影响核因子-κB（NF-κB）信号通路对宣威肺癌恶性生物学行为的调控。［方法］ ELISA检测临床收集宣威肺癌、非宣威肺癌及正常人血清样本中TNF-α水平。RT-qPCR、Western blot检测人支气管上皮样细胞16HBE、人肺腺癌细胞A549及宣威肺癌细胞XWLC-05中TNF-α;CCK-8检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;Transwell检测细胞迁移能力;Western blot检测NF-κB经典及非经典信号通路相关蛋白水平。［结果］ TNF-α在宣威肺癌患者血清及细胞中显著性高表达,差异均有统计学意义（P<0.05）。沉默TNF-α不仅阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,并促进凋亡（P<0.05）;也抑制NF-κB经典信号通路。XWLC-05被外源性TNF-α促进的恶性生物学行为可被NF-κB信号通路抑制剂扭转（P<0.05）。［结论］ TNF-α通过激活NF-κB经典信号通路促进宣威肺癌细胞恶性生物学行为。     

Gambogic Acid通过影响NF-κB信号通路诱导A549细胞凋亡

目的:研究Gambogic Acid（GA）对人非小细胞肺癌A549细胞系中NF-κB信号通路的影响及其对细胞凋亡的促进作用。方法:Western blot法和共聚焦显微镜成像技术检测GA对NF-κB的信号通路的影响,MTT及流式细胞（FCM）术检测GA对A549细胞的促凋亡作用。结果:Western blot发现GA能显著抵抗TNF-α诱导导致的IκB磷酸化水平上升及IκB的降解;共聚焦显微镜成像进一步发现GA有效阻止了NF-κB入核;MTT结果显示GA能显著抑制A549细胞的增殖,当药物浓度为5.0μmol/L时抑制率可达到（93.5±6.5）％（P<0.05),IC50值为1.2±0.4 μmol/L;凋亡检测结果显示A549细胞在0.0、0.5、1.0、2.0、3.0及5.0 μmol/L药物处理下细胞凋亡率分别是（6.0±0.7）%、（15.5±2.3）%、（35.0±3.6）%、（43.5±2.7）%、（43.0±3.8）%及（53.7±2.6）%（P<0.05);结论:实验表明,GA能有效地抑制A549细胞增殖和诱导其凋亡,其机制可能是通过影响NF-κB信号通路而发生作用。     

RNA干扰NF-κBp65基因表达对胃癌细胞株SGC-790增殖、凋亡的影响

摘 要：［目的］探讨RNA干扰NF-κBp65基因表达对胃癌细胞株SGC-790增殖、凋亡的影响。［方法］ 培养SGC-790胃癌细胞株,分为阴性对照组、siRNA-NC组、NF-κBp65-siRNA转染组。检测不同组细胞增殖抑制率及凋亡率,采用Western blot检测STAT3信号通路相关蛋白表达水平。［结果］ （1）MTT检测发现,在48h及72h时,NF-κBp65-siRNA组的细胞抑制率显著高于空白组与siRNA-NC组（P均<0.05）。（2）流式细胞术检测发现,48h时,空白组、siRNA-NC组、NF-κBp65-siRNA组的细胞凋亡率分别为5.85%±0.25%、6.13%±0.39%、16.05%±0.14%,NF-κBp65-siRNA组的细胞凋亡率显著增加（P<0.001）。（3）Transwell检测结果显示,空白组、siRNA-NC组、NF-κBp65-siRNA组穿过Transwell小室的细胞数量分别为379.62±10.51、386.86±11.42、89.62±5.73,NF-κBp65-siRNA组的穿膜细胞数量显著少于空白组与siRNA-NC组（P均<0.001）。（4）Western-blot检测显示,与空白组相比,NF-κBp65-siRNA组中p-STAT3、PCNA、MMP-2蛋白的表达量均显著下降（P均<0.05）。［结论］在SGC-790胃癌细胞株中,抑制NF-κBp65表达水平可能通过降低STAT3信号通路活性,抑制细胞增殖并促进凋亡。     

MLN4924促进人肺腺癌细胞株A549凋亡的机制研究

  目的  观察MLN4924对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,探讨MLN4924促进凋亡的作用机制。  方法  不同浓度的MLN4924作用细胞不同时间后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、NF-κB p65及CDT1相对表达量。  结果  MLN4924能够明显抑制A549细胞的增殖,并且具有浓度和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示药物作用后,细胞被阻滞在S期。Western blot结果显示药物作用后细胞内Caspase-3、CDT1蛋白的表达量增加,而NF-κB p65的表达量减少。  结论  MLN4924能够明显抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可阻滞细胞于S期,增加Caspase-3蛋白表达,抑制NF-κB通路的激活。      

甲状腺癌相关信号传导通路的研究进展

摘 要：甲状腺癌发生及发展的过程涉及多种信号传导通路,它们在肿瘤细胞的生长、增殖、凋亡过程中发挥重要作用。目前MAPK、PI3K/AKT、NF-κB信号传导通路为研究较为热门的甲状腺癌相关信号传导通路。全文对MAPK、PI3K/AKT及NF-κB信号传导通路在甲状腺癌中的作用作一综述,以期为甲状腺癌的治疗提供参考。     

Act1分子对骨髓瘤细胞增殖的负调节作用研究

目的:探讨调节因子Act1对骨髓瘤细胞中BAFF(B细胞活化因子)通路的调节作用,进而了解其对骨髓瘤细胞的增殖存活所产生的作用.方法:利用荧光定量PCR的方法测定20例多发性骨髓瘤(MM)病人及20例正常对照者的外周血中的BAFF分子和Act1分子的表达水平;通过小干扰RNA(siRNA)和基因过表达技术构建缺乏和过表达Act1的U266骨髓瘤细胞,利用免疫印迹(Western blot,WB)法测定骨髓瘤细胞在BAFF分子刺激下的NF-κB信号通路活化情况,即磷酸化的IκB(p-IκB)的表达水平.结果:MM病人外周血BAFF和Act1分子的表达水平较对照组均增高(P<0.01),二者之间亦存在相关性;缺乏Act1分子的骨髓瘤细胞IκB磷酸化水平较高,而对照组的细胞IκB磷酸化程度较低,趋势不明显,过表达Act1分子的细胞基本没有磷酸化的发生.结论:Act1分子在多发性骨髓瘤的发生发展中发挥重要作用,其作用是通过对BAFF分子刺激下NF-κB信号通路的负调节作用而发挥的,使其可能成为抑制骨髓瘤细胞增殖的作用靶点.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275在体外抑制胃癌细胞的实验研究

背景与目的:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors,HDACis)对于很多肿瘤细胞具有选择性的诱导凋亡及分化作用,而对正常细胞的细胞毒性作用很低,这一选择性杀伤作用使HDACis成为目前抗肿瘤分子靶向药物的研究热点.本文研究了HDACis MS-275对人胃癌细胞SGC-7901、人胃黏膜正常细胞GES-1和张氏肝细胞(CHANG-LIVER)的选择性作用及机制,为HDACis的临床应用提供了理论依据.方法:不同终浓度MS-275处理SGC-7901细胞、GES-1和张氏肝细胞,用WST-1方法检测药物对细胞的生长抑制作用;AnnexinV、PI双标流式细胞术检测MS-275对肿瘤细胞SGC-7901和正常细胞的选择性杀伤作用;TUNEL染色观察肿瘤细胞核内凋亡情况.结果:MS-275对胃癌细胞SGC-7901具有明显的生长抑制作用,并且这种作用具有时间及剂量依赖性;MS-275的杀伤作用具有选择性,对正常细胞GES-1和张氏肝细胞并不表现出促凋亡作用;TUNEL染色证明MS-275能诱导SGC-7901细胞核内发生DNA断裂,是细胞发生凋亡的重要指标.结论:MS-275具有体外选择性杀伤胃癌细胞的作用,对正常细胞没有明显的杀伤作用,有希望成为新一代的胃癌临床治疗的肿瘤分子靶向药物.     

银杏叶提取物通过调控NF-κB信号通路抑制神经胶质瘤U87细胞增殖和侵袭

[目的]评价银杏叶提取物(EGb761)对神经胶质瘤U87细胞的生长与侵袭的影响,并进一步分析EGb761对U87细胞作用的分子机制。[方法]体外培养人神经胶质瘤U87细胞,给予不同浓度(0、100、200、400mg/L)银杏叶提取物干预(24h、48h、72h)后,采用CCK-8技术检测EGb761对U87细胞增殖的影响。Transwell小室和流式细胞凋亡技术分析EGb761对U87细胞侵袭和凋亡的影响;Western blot检测EGb761处理后U87细胞内NF-κB与cyclin D1、 iNOS和COX-2蛋白的表达变化。[结果]银杏叶提取物可有效抑制神经胶质瘤U87细胞的增殖和侵袭,促进细胞凋亡;Western blot提示EGb761干预的U87细胞内NF-κB与cyclin D1、 iNOS、COX-2蛋白的表达均明显下调。[结论] EGb761抑制神经胶质瘤U87细胞的生长增殖和侵袭能力,其可能是通过NF-κB信号通路而发挥抗肿瘤作用的。     

沉默HOXC10基因促进骨肉瘤MG-63细胞凋亡及其机制

目的:探讨沉默同源框C10（Homeobox C10,HOXC10）基因表达对骨肉瘤细胞MG-63细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法:采用脂质体转染法将特异性针对HOXC10基因的shRNA转入骨肉瘤MG-63细胞（HOXC10-shRNA组）,同时以转染Scramble-shRNA作为对照组（Scramble-shRNA组）,分别应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测HOXC10 mRNA及蛋白的表达水平。转染处理后,分别采用CCK-8法及FCM法检测骨肉瘤MG-63细胞的增殖抑制率及凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测HOXC10、ATM和核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB)及凋亡相关蛋白Survivin和Caspase-3的表达水平。结果:HOXC10-shRNA转入MG-63细胞后,HOXC10 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调（P均<0.05）。与Scramble-shRNA组细胞活力（0.95±0.12）%和凋亡率（4.35±0.52）%相比,HOXC10-shRNA组细胞活力（0.38±0.06）%明显下降,细胞凋亡率为（18.19±3.76）%明显升高（P均<0.05）;ATM/NF-κB信号通路中相关蛋白ATM、NF-κB及Survivin的表达水平均明显下调（P均<0.05）,而Caspase-3表达明显上调（P<0.05）。结论:沉默HOXC10基因表达后可抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与调控ATM/NF-κB信号通路的活化相关。     

金丝桃苷诱导人胃癌细胞MKN-45凋亡及其机制北大核心CSCD

目的探讨金丝桃苷(hyperoside,Hyp)对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响及其机制。方法体外培养MKN-45细胞,对照组不加药物,实验组分别加入不同浓度Hyp(12.5、25、50、100、200μg/ml)作用24、48 h,MTT法检测Hyp对细胞增殖的影响并筛选适宜药物浓度;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;Western blot法分析NF-κB P65、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果 Hyp可明显抑制MKN-45细胞的增殖,阻滞细胞于G0/G1期并促进其凋亡,Western blot结果显示,随着药物浓度的增高,Hyp可使NF-κB P65、Bcl-2蛋白表达降低,casepase-3、Bax蛋白表达增高。结论金丝桃苷可抑制MKN-45细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与该药物阻断细胞周期,抑制NF-κB通路,下调NF-κB P65、Bcl-2蛋白,上调casepase-3、Bax蛋白有关。