软骨肉瘤细胞PTHrP和Sox9及Bcl-2基因表达及其相互作用的研究

目的：研究PTHrP、Sox9和Bcl-2基因在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中的相互作用机制。方法：小干扰siRNA阻断PTHrP后,分别检测肿瘤细胞中Sox9、Bcl-2和Col2α1的mRNA及蛋白表达。结果：PTHrP基因被干扰后,PTHrP基因的mRNA及蛋白表达降低,Sox9、Bcl-2和Col2α1的mRNA及蛋白表达都受到抑制;而PTHrP基因的干扰作用去除,Sox9、Bcl-2和Col2α1的mRNA及蛋白表达抑制作用也消失。结论：PTHrP基因在肿瘤细胞的抑制引起Sox9、Bcl-2和Col2α1肿瘤相关基因的抑制,提示PTHrP基因是Sox9、Bcl-2和Col2α1肿瘤相关基因的上游基因。     

软骨肉瘤细胞Caspase-3表达及其与相关基因相互作用的研究

目的:研究肿瘤基因Caspase-3与PTHrP和Sox9在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中的相互作用机制。方法:小干扰siRNA分别阻断PTHrP和Sox9后,检测肿瘤细胞中Caspase-3的mRNA和蛋白表达。结果:PTHrP基因被干扰后,Caspase-3的mRNA表达增加了57.7%,蛋白的表达增加了57.1%;Sox9基因被干扰之后,Caspase-3的mRNA表达增加了47.4%,蛋白的表达增加了48.2%。结论:肿瘤基因Caspase-3在软骨肉瘤细胞中的表达与软骨肉瘤相关基因PTHrP和Sox9有关,可能是位于PTHrP和Sox9的下游基因。     

软骨肉瘤相关基因Sox9(siRNA)表达质粒的构建鉴定以及对肿瘤细胞生长和凋亡的影响

目的利用小干扰阻断目的基因的原理将构建的目的基因Sox9的pSilencer3,1-H1 neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒转染人体软骨内瘤细胞HTB-94,观察目的基因被阻断后肿瘤细胞目的基因的表达、肿瘤细胞生长和凋亡所受到的影响.方法设计并合成Sox9(siRNA),鉴定后将其转染HTB-94肿瘤细胞,观察肿瘤细胞的Sox9基因的mRNA和蛋白表达的变化.以及被转染肿瘤细胞的生长曲线和肿瘤细胞凋亡的情况.结果Sox9(siRNA)的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致.被转染的HTB-94 Sox9基因的mRNA的表达量下降了35.4%,蛋白的表达量下降了31.3%;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞24h和96h的光吸收值分别为0.146 0.037和0.412±0.036,而正常对照细胞组两个同样时间段的光吸收值分别为0.152±0.0367和0.607±0.029.其中细胞生长增殖速度的差异为32.0%,肿瘤细胞的生长明显受到抑制;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞的干扰组细胞凋亡率为39.2%;而未经干扰的HTB-94肿瘤细胞的细胞凋亡率为0.1%.结论经过设计合成的Sox9(siRNA)表达质粒可以稳定转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞,被Sox9(siRNA)表达质粒转染的人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞Sox9基因的mRNA和蛋白的表达都受到抑制,同时肿瘤细胞的生长繁殖也受到明显抑制.肿瘤细胞的凋亡明显增加.     

肝癌细胞内Sox17基因表达水平与细胞迁移、侵袭力的相关性研究

目的:从基因表达水平上探讨肝肿瘤细胞内Sox17的mRNA表达量与细胞迁移、侵袭力的相关性。方法:收集4种肝肿瘤细胞HepG2、MHCC-97L、LM3、SK-Hep-1及一种非肿瘤肝上皮细胞QSG7701,Real-Time PCR法检测细胞内Sox17、CTTN基因的mRNA表达水平,细胞划痕和Transwell小室侵袭实验检测肝肿瘤细胞迁移、侵袭力。对Sox17基因的表达水平与CTTN的表达量及细胞划痕、Transwell小室侵袭的实验结果进行秩相关检验。结果:与非肿瘤细胞相比,肿瘤细胞内Sox17表达水平普遍较低,CTTN的表达水平较高;在4种肝肿瘤细胞中,Sox17基因的表达水平与CTTN的mRNA的表达水平及细胞划痕区域细胞生长速度、Transwell小室穿膜细胞数的统计结果呈负相关,秩相关系数rs=-1。结论:肝肿瘤细胞内Sox17基因的表达水平的高低与细胞的迁移、侵袭力呈负相关。     

乳腺癌组织COX-2和Bc1-2蛋白表达及其临床意义

目的:探讨乳腺癌组织COX-2和Bc1-2蛋白的表达及其意义.方法:选取102例乳腺癌组织为研究对象,各对应的癌旁组织为对照组,并选取30例正常乳腺组织为正常对照组.采用免疫组化ABC法检测各样本的COX-2和Bc1-2蛋白表达,并时所得数据进行统计分析.结果:COX-2及Be1-2蛋白在乳腺癌组织中的阳性表达均明显高于癌旁组织及正常对照组织,P=0.000.Ⅲ、Ⅳ期患者以及淋巴结转移阳性组COX-2的阳性表达分别高于Ⅰ、Ⅱ期患者和淋巴结转移阴性组,P值分别为0.014和0.001;COX-2表达与患者年龄(P=0.866)、肿瘤大小(P=0.286)及组织学类型(p=0.148)均无相关性.淋巴结转移阳性组Bc1-2的阳性表达明显高于淋巴结转移阴性组,P=0.000;Bc1-2表达与患者年龄(P=0.260)、肿瘤大小(P=0.060)、组织学类型(P=0.170)及TNM分期(P=0.452)均无相关性.乳腺癌组织中OOX-2与Bc1-2表达显著正相关,r=0.659,P=0.01.结论:COX-2与Be1-2在乳腺癌组织中均高度表达且密切相关,两者可能共同促进乳腺癌的发生、发展.     

睾丸肿瘤细胞凋亡相关基因及研究现状

睾丸肿瘤细胞的凋亡是一个多基因参与的复杂过程 ,受HTERT、P53、Bc1_2、MDM_2和C_myc等多种肿瘤相关基因的调控。目前研究发现端酶粒活性与细胞凋亡存在密切关系 ,药物诱导凋亡时端粒酶活性下降 ;大部分的研究也发现P53基因是一种肿瘤抑制基因(TSG) ,对睾丸肿瘤的生长有负性调节作用 ,与细胞凋亡密切相关 ;而在多步骤致癌作用的过程中Bc1_2基因异常表达可能赋予细胞抵抗凋亡信号的能力 ;MDM_2蛋白表达与睾丸肿瘤局部浸润、淋巴结转移及远端转移呈正相关 ;C_myc基因编码的P62蛋白过量表达可能参与正常细胞向恶性肿瘤细胞的转化过程 ,降低其水平可诱导细胞发生凋亡 ;另外 ,Ras、Fas/Fas_L睾丸肿瘤凋亡过程中亦发挥重要作用。     

YC-1对人低氧HepG-2细胞系内HIF-1稳定性及其促靶基因转录活性抑制效应的观察

目的:观察3-(5'-羟甲基-2'-呋喃)-1-苄基吲唑(YC-1)对低氧肝癌HepG-2细胞系缺氧诱导因子-1(HIF-1)稳定性和其促靶基因转录活性的调节作用,以及对细胞增殖活性的影响,探讨将HIF-1作为肿瘤治疗新靶点的可能性.方法:低氧条件下培养肝癌HepG-2细胞,应用RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测不同YC-1作用浓度下HIF-1α及其靶基因mRNA和蛋白产物的表达.MTT检测YC-1时低氧HepG-2细胞恶性增殖力的影响.结果:低氧引起HIF-1α、VEGF和GPI mRNA表达显著增加,与常氧组比较差异有统计学意义,P<0.05.低氧条件下,YC-1以剂量依赖性方式抑制VEGF、GPI mRNA与蛋白表达,与对照组比较差异有统计学意义,P<0.05.低氧条件下,YC-1浓度升高不影响HIF-1α mRNA表达量,却以剂量依赖性方式抑制HIF-1α蛋白表达.低氧条件下,YC-1显著抑制HepG-2细胞生长,且呈现剂量依赖效应.结论:低氧状态下,Yc-1抑制人肝癌HepG-2细胞系内HIF-1稳定性和转录活性,且呈剂量依赖性.YC-1抑制HepG-2细胞生长,且呈现剂量依赖效应.     

凋亡抑制蛋白基因Livin及肿瘤转移相关基因在肺癌组织中的表达及其与肺癌临床特征的关系分析

目的 分析凋亡抑制蛋白基因Livin及肿瘤转移相关基因在肺癌组织中的表达及其与肺癌临床特征的关系.方法 选取确诊并治疗的肺癌患者392例,采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测392例肺癌组织中的Livin、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、趋化因子受体-4(CXCR4)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达水平.同时选取306例肺癌患者癌旁正常肺组织、297例肺部良性病变患者的肺部良性病变组织,采用RT-PCR检测Livin、SDF-1、CXCR4、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达水平.结果 肺癌组织中Livin、Livinα、Livinβ、SDF-1、CXCR4、MMP-2、MMP-9的阳性表达率均高于癌旁正常肺组织和肺部良性病变组织(P﹤0.05);肺癌组织中Livinα表达水平为(0.35±0.09),高于Livinβ的(0.28±0.05)(P﹤0.05).结论 肿瘤组织中的Livin、SDF-1、CXCR4、MMP-2、MMP-9表达水平较高,Livinα和化疗有密切关系,Livinβ和肿瘤位置有相关性,MMP-9与肿瘤是否发生转移有密切关系.     

HIF干扰表达载体psilencer3.0-HIF-α siRNA的构建和鉴定

背景与目的：肾透明细胞癌是最常见的肾实质恶性肿瘤．生物学行为极为复杂，对放疗和化疗均不敏感。研究发现缺氧诱导因子HIF-α（和HIF-2α与肾透明细胞癌发生发展过程存在相关性．．本研究拟通过RNA干扰的方法构建psiletwer3．0-H1F-αsiRNA重组质粒，从而为进一步探讨HIF在肾细胞癌发生发展中的功能提供有效的工具。方法：设计并化学合成编码HIF-1α和HIF-2αsiRNA的DNA片段，通过基因重组的方法将其构建进siRNA的表达载体。采用实时定量PCR和Western blot检测构建成功的siRNA表达载体在mRNA及蛋白水平对目标基因表达的抑制。结果：786-0细胞转染psilem、er3．0-HIF-1αsiRNA和psilencer3．0-HIF-2α后，HIF-1α和HIF-2α的mRNA表达的抑制率分别达到r82．1％和87．4％；OS—RC-2细胞转染psilelwer3．0-HIF-1αsiRNA和psilencer3．0-HIF-2α后．抑制率分别达到了91．2％和81．2％。在786-0细胞和OS—RC-2细胞中转染HIF-1α干扰质粒和HIF-2α干扰质粒的实验组蛋白表达量较空白对照均有不同程度的减低、结论：构建成功的siRNA表达载体可以有效抑制目标基因HIF-1和HIF乏在mRNA硬蛋白水平的表达.     

ING4对缺氧状态下血管内皮细胞增殖、迁移及HIF-1α表达的抑制作用

目的:在缺氧状态下,观察ING4对血管内皮细胞增殖、迁移及血管形成相关因子VEGF、MMP-2、MMP-9活性的影响,并探讨ING4对HIF-1α的调控作用。方法:人脐静脉内皮细胞HUVECs体外培养,构建ING4质粒及干扰RNA转染至HUVECs,应用CoCl2处理细胞模拟缺氧环境,MTT法检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移,Real time PCR及Western blot实验检测血管形成相关因子VEGF、MMP-2、MMP-9、HIF-1α及其靶基因AK3的mRNA及蛋白表达水平。结果:MTT及Transwell实验结果显示在缺氧状态下,转染ING4质粒能够抑制人脐静脉内皮细胞株HUVECs的增殖及迁移,而转染ING4 siRNA则能够促进HUVECs增殖及迁移,Real time PCR及Western blot实验结果显示转染ING4质粒能够抑制血管形成相关因子VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白的表达水平,并且能够抑制HIF-1α及其靶基因AK3的表达水平。结论:在缺氧状态下,ING4能够通过抑制血管内皮细胞的增殖及迁移能力,下调血管形成相关因子VEGF、MMP-2、MMP-9的表达水平,进而抑制新血管形成,其机制可能与ING4能够下调缺氧状态下HIF-1α及其靶基因AK3的表达水平有关。