表达TIPE2腺病毒载体的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响

目的结肠癌的发生与结肠慢性炎症密切相关。TIPE2(tumor necrosis factor-α-induced protein 8-like 2)是一种炎症和免疫平衡的调节因子。本实验旨在构建表达TIPE2的腺病毒载体,并初步观察其对结肠癌细胞增殖的影响。方法将TIPE2-cDNA定向克隆至转移质粒pShuttle-CMV多克隆位点,然后与病毒骨架质粒pAdc68重组,在HEK293细胞中包装成完整病毒并复制扩增、纯化,获得表达TIPE2的重组腺病毒载体,命名为Adc68-TIPE2。实时荧光定量PCR及Western blot检测病毒感染后TIPE2在结肠癌细胞系HT29及SW620中的表达,MTT法检测TIPE2对结肠癌细胞增殖的影响。结果重组腺病毒载体Adc68-TIPE2构建成功。病毒感染后TIPE2可在结肠癌细胞系HT29及SW620中高效表达。以不同浓度Adc68-TIPE2(分别为108 vp/ml、109 vp/ml、1010 vp/ml)感染HT29及SW620细胞48 h后,HT29细胞的增殖率分别为93%、71%、14%。与空载体相比差异有统计学意义(P<0.05);SW620增殖率分别为89%、53%、10%。与空载体相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功构建表达TIPE2的腺病毒载体Adc68-TIPE2,Adc68-TIPE2可抑制结肠癌细胞增殖。     

槲皮素对人结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用

目的:观察槲皮素对体外培养的人结肠癌SW480细胞的增殖抑制作用。方法:观察不同浓度(5、10、20、40、80、160μmol/L)的槲皮素及50mg/L的5-Fu(阳性对照组)在不同时间(24、48、72h)对SW480细胞增殖的影响。运用细胞计数试剂盒检测法(CCK-8)检测槲皮素对SW480细胞生长的影响;光学显微镜和电子显微镜下观察槲皮素处理后SW480细胞形态结构的变化;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析槲皮素对SW480细胞的细胞周期分布及凋亡率的影响。结果:CCK-8法检测显示槲皮素对SW480细胞的增殖有抑制作用,其抑制作用随着作用浓度的增加和作用时间的延长而增强(P<0.05);经槲皮素处理的SW480细胞与阳性对照组比较,呈明显凋亡状态;PI染色FCM分析发现槲皮素以浓度依赖方式诱导SW480细胞G2/M期细胞累积,且细胞凋亡率随药物浓度增加而增加(P<0.05)。结论:槲皮素对人结肠癌SW480细胞的增殖有抑制作用,且能诱导SW480细胞凋亡,是一种高效低毒的药物。     

苦参碱对人结肠癌细胞株HT-29肝转移潜能的抑制作用

目的研究苦参碱对人结肠癌细胞株HT-29肝转移能力的影响,并探讨其机制。方法HT-29细胞体外培养,以0、0.125、0.25、0.5mg/ml不同浓度苦参碱进行预处理48h后,采用半定量RT-PCR检测各组培养细胞乙酰肝素酶(Heparanase,HPSE)mRNA表达的变化,应用细胞黏附实验检测细胞黏附能力的改变,Transwell小室检测体外侵袭能力的变化;建立结肠癌肝转移模型,腹腔内注射不同浓度的苦参碱,6周后,处死裸鼠,计数肝转移率和肝转移结节数。结果与对照组比较,随着苦参碱浓度的增加,各浓度苦参碱处理组HT-29细胞HPSE mRNA的表达和细胞黏附侵袭能力均受到明显的抑制(P<0.01),各组转移率及转移鼠肝转移结节数目依次下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论苦参碱可以抑制结肠癌肝转移,且抑制作用呈剂量依赖性。机制可能与通过下调HT-29细胞HPSE mRNA的表达进而使结肠癌细胞黏附侵袭力降低有关。     

β1整合素表达下调对人结肠癌细胞增殖和化疗敏感性影响

目的 观察β1整合素表达下调对人结肠癌HT-29细胞增殖和化疗敏感性的影响.方法 采用反义寡核苷酸（ASODN）技术转染HT-29细胞,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测β1整合素表达下调情况.MTT法检测HT-29细胞相对存活率.给予梯度浓度氟尿嘧啶（5-FU）,计算IC50.结果 实验组β1整合素条带吸光度积分（IAD）值/β-actin条带IAD值的比值及HT-29细胞的存活率与对照组相比显著降低（F=1 630.08,q=72.40,P〈0.01;t=4.37,P〈0.05）.5-FU＋ASODN组HT-29细胞对5-FU的IC50与5-FU组比较显著下降（t′=37.71,P〈0.05）.结论 β1整合素表达下调可抑制结肠癌细胞增殖,增强结肠癌细胞对化疗药物敏感性.     

重组人生长激素对人结肠癌裸鼠原位移植瘤生长的影响

目的通过建立人结肠癌细胞株COLO-320裸鼠原位移植瘤模型,探讨重组人生长激素(rhGH)对移植瘤生长的影响,从而为临床能否应用rhGH提供实验依据。方法经4次传代,将生长稳定的20只荷瘤裸鼠随机分为4组:(1)对照组;(2)rhGH组;(3)羟基喜树碱(HCPT)组;(4)rhGH加HCPT组。接种次日开始给药,连续用药35d后,处死裸鼠,留取移植瘤标本,测定移植瘤体积、重量、凋亡率、细胞周期及增殖指数(PI),常规HE染色,光镜下观察。结果与对照组比较,rh-GH组差异无统计学意义(P>0.05),而HCPT组差异有统计学意义(P<0.001);对照组移植瘤体积、重量、凋亡率及增殖指数分别为(2764.80±120.51)cm3、(2.52±0.10)g、(13.24±0.76)%、(30.14±0.71)%,而HCPT组则分别为(946.6±48.33)cm3、(0.89±0.09)g、(37.13±0.72)%、(15.50±0.74)%;rhGH不影响HCPT的作用(P>0.05)。结论rhGH对人结肠癌细胞株COLO-320移植瘤的生长既无促进作用,亦无抑制作用。     

辣椒素对人结肠癌SW480细胞株增殖作用的影响

目的了解辣椒素对人结肠癌SW480细胞株增殖作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用MTT检测法,观察终浓度100-400μmol/L的辣椒素作用24、48 h对人结肠癌SW480细胞株生长作用的影响;采用流式细胞仪检测400μmol/L辣椒素作用人结肠癌SW480细胞株后其细胞周期变化和凋亡率。结果辣椒素能抑制结肠癌SW480细胞株增殖,呈浓度、时间依赖性。在400μmol/L辣椒素作用下,结肠癌SW480细胞株停滞于G0/G1期。辣椒素作用24、48 h,SW480细胞凋亡率升高（F=8.73、8.10,q=4.86-7.30,P〈0.01）。结论辣椒素抑制SW480细胞增殖,并诱导其凋亡,其机制可能是阻滞细胞周期于G0/G1期。     

三羟基异黄酮对结肠癌细胞增殖的影响

目的:研究三羟基异黄酮在体外对结肠癌细胞株HT-29的作用。方法:三羟基异黄酮作用于10%FCS的PRMI-1640液培养HT-29后,MTT法测定吸光度OD;流式细胞仪测定细胞DNA含量,做细胞周期分析,计算凋亡率,观察其对细胞增殖和凋亡的影响。结果:不同浓度的三羟基异黄酮在不同生长时间均对HT-29细胞增殖有抑制作用(P<0.05);三羟基异黄酮作用于HT-29细胞后,可以观察到G1峰前出现亚G1峰高于对照组(P<0.01),对照组凋亡率为2.54±0.46%,实验组为7.72±0.55%。结论:三羟基异黄酮可以抑制HT-29的增殖,促进其凋亡。     

粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响

目的:通过观察粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响,初步探讨粉防己碱对结肠癌的体外抗肿瘤效应。方法:采用MTT比色法观察粉防己碱对HT-29细胞的增殖抑制效应,利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳及细胞凋亡荧光染色法检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用,以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和BAX表达水平的影响。结果:MTT比色法显示粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖有抑制作用,其抑制效应具有剂量依赖的特点,细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳表明粉防己碱可诱导HT-29细胞凋亡,免疫细胞化学法显示粉防己碱上调BAX基因表达,下调Bcl-2基因表达。结论:粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖的抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

高机械指数超声辐照微泡对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨高机械指数超声造影对结肠癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 体外培养结肠癌细胞株(Lovo细胞).分为对照组、微泡+超声组、单纯超声辐照组和单纯微泡组.使用超声造影剂SonoVue,探头频率1.5 MHz,机械指数1.7进行超声间歇辐照,采用MTT法、流式细胞仪检测细胞周期及凋亡指数.结果 对照组、单纯辐照组及单纯微泡组的增殖能力、细胞周期与凋亡指数无明显差异(P>0.05);微泡+超声组与对照组比较,其增殖能力明显低于对照组(P<0.01),而凋亡指数明显高于对照组(P<0.01).结论 高机械指数超声辐照微泡击破效应对结肠癌细胞的增殖有明显抑制作用,而对结肠癌细胞的凋亡有明显促进作用.     

粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖与凋亡的影响．初步探讨粉防己碱对结肠癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用MTT比色法观察粉防己碱对HT-29细胞的增殖抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳及细胞凋亡荧光染色法检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用．以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bct-2和BAX表达水平的影响。结果：MTT比色法显示粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖有抑制作用。其抑制效应具有剂量依赖的特点，细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳表明粉防己碱可诱导HT-29细胞凋亡，免疫细胞化学法显示粉防己碱上调BAX基因表达．下调Bcl-2基因表达。结论：粉防己碱对人结肠癌细胞株HT-29增殖的抑制效应具有剂量依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关     

巨噬细胞移动抑制因子抑制剂对大肠癌细胞增殖的作用

目的 研究选择性巨噬细胞移动抑制因子(MIF)互变异构酶活性抑制剂ISO-1对大肠癌细胞增殖的影响并探讨其可能机制.方法 不同浓度的ISO-1(0.01～100 μmol/L)作用于人大肠癌细胞Lovo、SW116和鼠大肠癌细胞CT26,对照组以相应浓度的二甲基亚砜处理.采用MTT法观察ISO-1对大肠癌细胞增殖的影响...     

5-氟尿嘧啶诱导人大肠癌多药耐药细胞株及细胞凋亡的实验研究

目的:研究5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导LOVO细胞凋亡,探讨人大肠癌多药耐药机制。方法:用噻唑蓝(MTT)法、光镜及电镜、DNA凝胶电泳和原位DNA末端转移酶标记法,分别对耐药细胞株LOVO/5-FU细胞及敏感细胞株LOVO细胞进行5-FU诱导细胞凋亡的实验研究。结果:LOVO/5-FU细胞存活率明显高于LOVO细胞,光镜和电镜观察凋亡形态学改变,凋亡细胞DNA凝胶电泳可以出现梯形(ladder)凋亡带,LOVO细胞原位DNA末端转移酶标记阳性率高于LOVO/5-FU。结论:(1)5-FU诱导人大肠癌LOVO细胞凋亡,有明显的时间和剂量效应。(2)在相同条件下,耐药细胞株LOVO/5-FU与敏感细胞株LOVO相比,前者凋亡受到抑制。(3)细胞凋亡对研究大肠癌LOVO细胞多药耐药机制,克服化疗产生的多药耐药及逆转多药耐药具有重要的临床价值。     

尼美舒利对人胃癌SGC7901细胞生长及细胞周期分布的影响

目的探讨尼美舒利对体外培养的胃癌细胞生长及细胞周期分布的影响。方法以人胃癌细胞株SGC7901为对象,用放射免疫分析法测定细胞培养上清PGE2水平,体外药物敏感实验（MTT）法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞周期分布变化情况。结果尼美舒利可减少PGE2产生,尼美舒利对人胃癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,尼美舒利可改变胃癌细胞株细胞周期的分布,明显降低其增殖指数。结论尼美舒利可通过抑制环氧合酶-2（COX-2）活性抑制肿瘤细胞的分裂和增殖、阻止细胞周期进展,诱导其凋亡中起重要作用。     

还氧化酶2在大肠癌中表达的临床意义

目的了解还氧化酶2（Cyclooxygenase 2，Cox-2）在大肠肿瘤中表达的意义。方法手术切除的84例结直肠癌组织、部分癌旁组织和正常组织，通过免疫组织化学方法检测Cox-2的表达，并分析其表达与肿瘤临床病理学及生存时间的相关性。结果在大肠癌组织中Cox-2的阳性表达明显高于癌旁组织和正常黏膜的表达，且差异有统计学意义（Χ^2=24．36，P〈0．05）。Cox-2的表达与大肠癌的浸润深度、淋巴结转移及远处转移密切相关，且差异均有统计学意义（Χ^2分别=4．56、3．93和6．63，P均〈0．05）。Cox-2阳性表达的患者比阴性表达患者生存时间短，差别有统计学意义（Χ^2=4．45，P〈0．05）。结论Cox-2在大肠癌中的表达与肿瘤临床病理学及预后相关。     

艾塞那肽对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

目的:研究艾塞那肽对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及涉及的信号通路。方法:艾塞那肽以不同浓度、时间作用于人乳腺癌MCF-7细胞,MTT法测细胞数目,流式细胞仪测定细胞周期,Western blot测细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,Erk1/2)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)磷酸化程度。结果:艾塞那肽1、10 nmol/L作用24、48 h或100、1 000 nmol/L作用24、48、72、96 h,MCF-7细胞数目减少,但差异无统计学意义,艾塞那肽1、10 nmol/L作用72、96 h,MCF-7细胞数目较对照组明显减少(P<0.05)。艾塞那肽10 nmol/L作用96 h,S+G2/M期细胞数目减少(P<0.05),同时出现Erk1/2磷酸化程度下降、Akt磷酸化程度升高,但差异无统计学意义。结论:艾塞那肽1、10 nmol/L作用MCF-7细胞72、96 h,抑制细胞增殖,该作用未涉及Erk和PI3K/Akt信号通路。     

卡莫司汀对人脑肿瘤干细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨卡莫司汀(BCNU)对人脑肿瘤干细胞在细胞增殖及细胞周期方面的影响。方法:取初发的室管膜瘤手术切除标本1例,取材后制备为单细胞,分别接种于无血清培养基获得肿瘤干细胞,接种于含血清培养基获得肿瘤细胞。不同浓度的BCNU作用于细胞72h后,MTT法检测细胞在体外对BCNU的敏感性,并用终浓度为0.01μg/mL的BCNU作用细胞不同的时间段,通过流式细胞仪检测BCNU对细胞周期的影响。结果:(1)MTT显示,BCNU能抑制肿瘤干细胞及肿瘤细胞的生长,其对肿瘤干细胞(IC50=0.157μg/mL)的抑制略低于对肿瘤细胞(IC50=0.072μg/mL)(P<0.05)。(2)细胞周期方面,与阴性对照比较,两类细胞均表现为随药物作用时间的延长,S期细胞比例增高,并伴有凋亡细胞的增多,但肿瘤干细胞的改变(24h)出现晚于肿瘤细胞(6h)。结论:BCNU对体外培养的脑肿瘤干细胞生长有明显的抑制作用,作用机制可能为通过干扰S期DNA的合成起作用;与脑肿瘤细胞相比,脑肿瘤干细胞在MTT及细胞周期的检测中,均表现出对BCNU有一定的耐药性。     

Doxycycline inhibits cell proliferation and invasive potential: combination therapy with cyclooxygenase-2 inhibitor in human colorectal cancer cells

Matrix metalloproteinases (MMPs) and cyclooxygenase (COX) enzymes play pivotal roles in the metastatic process of colorectal cancers. Inhibition of both MMPs and COX could be an attractive option for the inhibition of cell growth and invasion. Two human colorectal cancer cell lines, LS174T and HT29, were challenged with MMP inhibitor (doxycycline), selective COX-2 inhibitor (NS-398), or a combination of these agents to evaluate cancer cell proliferation and invasion. Dose-dependent growth inhibition was observed in both cell lines when they were treated with a single therapy. These effects were not related to MMP-2 or MMP-9 expression potential of the cell lines. Doxycycline (10 microg/mL) induced G(0)/G(1) arrest, and 20 microg/mL provoked annexin V positivity and up-regulated caspase-3 activity in HT29 cells. However, 20 microg/mL doxycycline caused no distinct apoptotic change in LS174T cells. Although MMP expression was not inhibited by 5 to 10 microg/mL doxycycline or 50 to 100 micromol/L NS-398, MMPs' activities were down-regulated by these concentrations. Cellular invasion was noticed in LS174T cells, but their capacity for invasion was diminished by these inhibitors. The antiproliferative and antiinvasive effects of the combination therapy were more pronounced. Doxycycline (5 microg/mL) with 50 micromol/L NS-398 inhibited cell proliferation and doxycycline (5 microg/mL) with 100 micromol/L NS-398 attenuated MMP expression and activity, as well as capacity for invasion, compared with single therapy. These data suggest that combination therapy consisting of an MMP inhibitor with a COX-2 inhibitor is an attractive approach to the treatment of colorectal cancers. The use of this treatment regimen for chemoprevention or treatment of colorectal cancers should be considered in future clinical trials.     

沉默RAGE对人卵巢癌细胞株增殖、凋亡能力及周期分布的影响

目的 研究沉默晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycosylation end products,RAGE)对人卵巢癌细胞株增殖、凋亡能力及周期分布的影响.方法 人上皮性卵巢癌SKOV-3细胞经过慢病毒载体构建,分为空白组、过表达组和沉默组.进行细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期实验,We...     

Her-2、P53和Ki-67在结直肠癌中的表达及意义

目的 探讨Her-2、P53和Ki-67在结直肠癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化EnVision法检测68例结直肠癌及40例癌旁黏膜组织中Her-2、P53、Ki-67蛋白的表达情况,并分析其与结直肠癌临床病理特征的关系.结果 Her-2、P53及Ki-67蛋白在结直肠癌及癌旁黏膜组织中的过表达率分别为22.1%、50.0%、82.4%和2.5%、2.5%、25.0%,Her-2、P53及Ki-67过表达在结直肠癌和癌旁黏膜组织之间的差异有统计学意义(P＜0.01).在结直肠癌中,Her-2蛋白的过表达与结直肠癌发病年龄、民族有关(P＜0.05);P53与结直肠癌的发生部位、淋巴结转移数目有关(P＜0.05).结直肠癌中Her-2蛋白和P53、Ki-67蛋白的表达无显著关系(P＞0.05).结论 Her-2、P53及Ki-67蛋白可作为评价结直肠癌发生、发展的生物学指标,P53可作为筛选高危转移患者的有效指标.     

9-顺式-维甲酸联合8-cl-cAMP对人肺癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。方法:应用MTT法检测9-cis-RA和8-cl-cAMP分别以及联合对H460和H292细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术分析9-cis-RA和8-cl-cAMP对H460和H292细胞的凋亡诱导作用;应用RT-PCR法检测Fas、FasL基因的表达以及应用比色法测定caspase-3的活性。结果:9-cis-RA明显抑制H460细胞的生长并诱导其凋亡,H292细胞对9-cis-RA不敏感。9-cis-RA联合8-cl-cAMP明显抑制H292细胞生长,且诱导其凋亡。9-cis-RA联合8-cl-cAMP作用后,H460细胞FasmRNA表达水平较单药组提高;H292细胞FasmRNA的表达也有提高,说明二者联合对Fas的转录具有协同作用。在FasmRNA表达水平提高时,caspase-3的活性明显提高,二者具有显著相关性。结论:H460和H292细胞对9-cis-RA的敏感性不同,9-cis-RA联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和凋亡诱导具有协同作用;且Fas参与了...