三氧化二砷对胃癌细胞侵袭转移和血管生成的抑制作用

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3)对胃癌细胞侵袭转移及血管形成的影响 ,并初步探讨其作用机制。方法　运用 MTT法观察 As2 O3对人胃癌细胞系 SGC- 790 1细胞粘附能力的影响 ;用 Boyden Chamber膜侵袭系统 ,观察 As2 O3对 SGC- 790 1游走和侵袭的影响以及诱导内皮细胞形成新生血管的影响 ;免疫细胞化学观察 As2 O3对SGC- 790 1细胞 TGF-β1 表达的影响。结果　 As2 O3作用后 ,SGC- 790 1细胞黏贴率降低 (P<0 .0 5 ) ,游走穿膜细胞数(6 8± 2 )或侵袭穿膜细胞数 (2 7± 5 )均明显低于对照组 (114± 7、6 0± 4 ,P<0 .0 1) ,诱导内皮细胞形成管腔数 (10 4±1.84 )及长度 (12 7± 4 .5 5 )均低于对照组 (16 9± 3.4 5、2 6 1± 6 .2 8,P<0 .0 5 ) ,As2 O3能降低 TGF-β1 的表达。结论　As2 O3能有效抑制胃癌侵袭转移及血管形成。其作用机制可能与通过降低 TGF-β1 的表达 ,抑制胃癌细胞异质粘附、运动能力及血管生成有关     

血管生成拟态研究进展

血管生成拟态(VM)是近年来发现的一种与经典的肿瘤血管生成途径完全不同、不依赖机体内皮细胞的全新肿瘤微循环模式.它描述了在高度侵袭性肿瘤组织中通过肿瘤细胞的自身变形和基质重塑形成类似血管样的通道,通过这种结构有利于肿瘤组织获取营养、侵袭和转移.血管生成拟态的提出为肿瘤研究和治疗提供了新思路.     

血管生成拟态研究进展

血管生成拟态(VM)是近年来发现的一种与经典的肿瘤血管生成途径完全不同、不依赖机体内皮细胞的全新肿瘤微循环模式.它描述了在高度侵袭性肿瘤组织中通过肿瘤细胞的自身变形和基质重塑形成类似血管样的通道,通过这种结构有利于肿瘤组织获取营养、侵袭和转移.血管生成拟态的提出为肿瘤研究和治疗提供了新思路.     

肾包膜下移植瘤模型应用于肿瘤新生血管生成的研究

[目的]观察胃癌肾包膜下移植瘤模型是否适用于血管生成方面的研究.[方法]建立昆明种小鼠癌细胞接种的肾包膜下移植瘤模型后饲养6天,处死.PAS染色证实肿瘤细胞存活,通过HE染色及免疫组化法观察种植肿瘤区域有无血管生成.[结果]实验动物全部存活,PAS染色表明模型建立成功,肿瘤种植区域无血管生成.[结论]使用癌细胞接种的肾包膜下移植瘤模型较适用于研究癌细胞的分化与凋亡,不适于新生血管生成的研究.     

肥大细胞与肿瘤血管生成

肥大细胞(MC)是起源于骨髓,定居于组织的免疫细胞.肿瘤可以通过干细胞因子(SCF)及其在肥大细胞上的受体c-kit来介导对MC的募集.MC在肿瘤部位的数量和分布与肿瘤的生长、血管新生密切相关.MC可以通过释放血管生成因子介导血管新生,促进肿瘤的进展.     

肿瘤血管生成拟态

血管生成拟态(VM）是近几年来在许多肿瘤中发现的一种全新的肿瘤内血管生成模式，即高度侵袭性肿瘤细胞通过自身变形和基质重塑产生血管样通道而达到自身血液供应的方式，现就其形态特点、分子机制、研究意义等作一综述。     

三氧化二砷及人参皂甙对兔肝VX2肿瘤抗血管生成作用的比较

目的:比较三氧化二砷(As2O3)及人参皂甙(Rg3)对兔肝VX2肿瘤血管生成的作用。方法:复制兔肝VX2肿瘤模型24只,随机分为As2O3组、Rg3组及空白对照组各8只,As2O3组连续1周耳缘静脉注射用药,Rg3组连续1周灌服参一胶囊,空白对照组仅给予药物载体溶质作为对照。测量肿瘤瘤质量,应用免疫组化检测瘤组织中的微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)的表达。并采静脉血检测肝功能。结果:As2O3组和Rg3组肿瘤瘤质量显著低于对照组,P值分别为0.013和0.033;As2O3组及Rg3组的MVD表达明显低于对照组,P值分别为0.006和0.003;VEGF表达也明显低于对照组,P值分别为0.049和0.021。As2O3组及Rg3组MVD及VEGF比较差异无统计学意义,P>0.05。结论:As2O3及Rg3均可抑制兔肝VX2肿瘤生长,对肿瘤血管生成具有抑制作用,两者对肿瘤血管的抑制作用无差异。     

牛蒡子苷元对肿瘤血管生成抑制作用的观察

目的:观察牛蒡子苷元(ARG)对裸鼠体内、体外肿瘤血管生成的影响,并探讨其作用机制。方法:利用人肝癌SMMC-7721细胞进行体内、外实验。体外实验分别采用RT-PCR、细胞免疫组化检测ARG作用前后SMMC-7721细胞中血管内皮生长因子(VEGF)基因及蛋白的表达;体内实验建立裸鼠SMMC-7721细胞肺转移瘤模型,成瘤后ARG干预,第30天取出肿瘤组织,免疫组化检测裸鼠瘤体CD34标记的血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。结果:VEGF mRNA表达量经ARG及5-FU作用后,阴性对照组、3个药物组及阳性对照组依次为1.01±0.03、0.92±0.02、0.81±0.15、0.72±0.03和0.82±0.26;实验组VEGF蛋白表达率为44.16%,明显低于对照组的82.13%。ARG作用后VEGF mRNA及蛋白表达水平下降,P<0.05。裸鼠SMMC-7721细胞肺转移瘤的MVD减少,空白对照组、药物组和5-FU组裸鼠MVD值分别为39.43±3.31、19.29±2.06和21.57±2.82,P<0.01。结论:ARG通过下调裸鼠VEGF mRNA及蛋白的表达,抑制裸鼠SMMC-7721细胞肺转移瘤的血管生成。     

自噬与肿瘤血管生成

自噬调节的分子机制十分复杂,常从多个层面影响肿瘤的发生发展,已成为病理学研究的热点.血管生成包括病理性血管生成和生理性血管生成,肿瘤组织中的新生血管为不断浸润生长的原发肿瘤提供营养,与肿瘤的发展和转移密切相关.通过调节内皮细胞的自噬可以直接影响血管生成过程,为肿瘤治疗提供了新的方向.     

索拉非尼联合三氧化二砷治疗晚期原发性肝癌的临床研究

目的:观察索拉非尼联合三氧化二砷治疗原发性肝癌的临床疗效、生活质量和不良反应。方法:对2014年1月至2017年1月期间于我院确诊的57例晚期原发性肝癌患者的相关临床资料进行回顾性分析。索拉非尼（0.4 g,口服,2次/日）联合三氧化砷（10 mg,静滴,1次/日,连用2周停1周为1周期,共2周期）的30例患者视为观察组;口服索拉非尼（0.4 g,口服,2次/日）单药的27例患者为对照组。观察临床获益率、疾病进展时间和不良反应发生率。结果:观察组和对照组的临床获益率、生活质量改善率、甲胎蛋白（AFP）下降率分别为73.33%、63.33%、66.67%,48.15%、37.04%、40.74%,观察组的近期疗效显著优于对照组（P<0.05）。观察组与对照组中位TTP分别为5.6个月、3.7个月,差异有统计学意义。两组主要不良反应为手足皮肤反应、疲乏、腹泻、高血压、肝功异常、恶心、骨髓抑制,两组差异无统计学意义（P>0.05）。观察组出现心电图异常1例、轻度末梢神经毒性（四肢轻度麻木）1例,均自行缓解,未影响治疗,且发生率均为3.33%,无统计学意义（P>0.05）。结论:索拉非尼联合三氧化二砷一线治疗晚期原发性肝癌患者可能是一种有效且耐受良好的治疗策略,可能延迟索拉非尼的耐药时间,还需大规模多中心的临床随机对照实验证实。     

As2O3 对ACC-2移植瘤血管生成的影响

目的研究三氧化二砷（As2O3）对人腺样囊性癌ACC-2裸鼠移植瘤生长及血管生成的抑制作用,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法通过建立ACC-2裸鼠移植瘤模型,将28只荷瘤鼠随机分为4组：阴性对照组（生理盐水即NS）、阳性对照组[5-Fu10mg／（kg·d）]、低剂量组[As2O3．5mg／（kg·d）]、高剂量组[As2O3 5．0mg／（kg·d）]。连续经腹腔注射用药10天。测量肿瘤的体积和重量,采用HE染色光镜观察,免疫组织化学法检测VEGF、MVD的表达并进行统计学分析。结果高、低剂量As2O3组移植瘤的瘤体积、瘤重均低于两对照组（Ns组和5-Fu组）,且高剂量As2O3组抑瘤最明显,瘤体积抑制率为52．17％,瘤重抑制率为56．04％（P〈0．01）。在移植瘤表面,与两对照组相比,高、低剂量As2O3组血管密度减小,管径变细。高、低剂量As2O3组抑制移植瘤VEGF的表达、降低MVD值,高剂量As2O3组抑制作用最明显。与两对照组比较以及高、低剂量As2O3组之间比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论As2O3对人腺样囊性癌ACC-2裸鼠移植瘤及血管生成有明显抑制作用,其作用机制可能为降低VEGF表达及MVD值,此抑制作用与剂量有关。     

Ad．VEGF．siRNA抑制荷人骨肉瘤裸鼠血管生成的形态学研究

背景与目的：血管内皮生长因子是骨肉瘤血管形成重要的促进因子,本研究通过抗血管生成方法,观察其抑制荷人骨肉瘤裸鼠血管生成的形态学表现。方法：取4～8周龄的Balb／c裸鼠作为实验动物,人骨肉瘤细胞株MG63皮下接种法构建骨肉瘤的动物模型。建模成功后将荷人骨肉瘤的裸鼠随机分为3组,每组15只。A组使用自行构建的Ad—VEGF-siRNA干扰新生血管形成;B、C组分别使用等剂量的Ad-EGFP或PBS作为对照。实验维持19d,药物使用后隔日测量肿瘤体积和体重．绘制肿瘤生长曲线：采用常规HE染色、VEGF和CD31相关抗原免疫组化染色观察各组肿瘤标本：各组随机抽取一个标本在透射电镜下观察仿血管发生的超微结构。结果：实验结束时,A组裸鼠瘤体体积为（0．31±0．18）cm^3,重量为（0．75±0．21）g,微血管密度（microvessed density,MVD）为5．79±0．34,VEGF表达为235228．09±123244．41,B、C照组裸鼠瘤体积分别为（1．21±1．29）cm^3、（1．43±0．95）cm^3;瘤重分别为（1．19±0．27）g、（1．19±0．35）g;MVD分别为11．00±0．68、10．42±0．10：VEGF表达分别为9641992．40±90479．62、981298．00±213590．50。A组肿瘤体积、重量、MVD和VEGF表达均显著低于B、C组。MVD和VEGF呈正相关关系,相关系数为0．9989。Ad-VEGF—siRNA组仿血管发生数量1．4000±0．5477,明显小于Ad—EGFP和PBS对照组。透射电镜可见肿瘤细胞形成的仿血管。结论：通过宏观和微观的形态学观察,证实Ad—VEGF-siRNA介导的以VEGF为靶向的抗血管生成能够抑制荷人骨肉瘤裸鼠的血管生成。     

蜂毒素对人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤生长及肿瘤血管生成的影响

背景与目的:蜂毒素体外抗骨肉瘤、白血病及宫颈癌的研究已有报道.我们先前的实验发现蜂毒素能够抑制人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖,并诱导其凋亡.本研究拟探讨蜂毒素在裸小鼠体内的抗肝癌作用及其对肿瘤血管生成的影响.方法:建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:生理盐水对照组(10 ml/kg)、阳性对照组(沙利度胺,200 mg/kg)、蜂毒素低剂量组(40 μg/kg)、蜂毒素中剂量组(60 μg/kg)和蜂毒素高剂量组(80 μg/kg).测量各组裸鼠肿瘤体积,观察蜂毒素的体内抗肿瘤作用.光镜下观察肿瘤组织及瘤内血管形态.采用免疫组织化学SABC法检测微血管密度(microvessel density,MVD)及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和核转录因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)蛋白表达.应用实时荧光定量PCR法检测BEL-7402细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达.结果:蜂毒素低、中、高剂量组裸鼠肿瘤相对体积(V/V0)分别为4.42±0.58、3.47±0.97和3.06±1.23,与生理盐水对照组(V/V0为9.06±1.45)相比,蜂毒素处理组肿瘤体积明显缩小(P＜0.01).与生理盐水对照组MVD(16.50±2.35)比较,蜂毒素低、中、高剂量组肿瘤组织MVD(11.33±1.86、9.17±1.17和6.67±1.21)明显降低(P＜0.01).显微镜下可见蜂毒素各剂量组肿瘤组织呈片状坏死,肿瘤间质内可见肿瘤血管,并有血管破坏现象.蜂毒素低、中、高剂量组肿瘤组织VEGF(2.59±0.27、2.61±0.17和1.55±0.22)、bFGF(2.45±0.78、2.27±0.36和2.10±0.27)及NF-κB(2.79±0.29、2.71±0.66和2.26±0.56)阳性表达指数均低于生理盐水对照组(3.80±0.60、4.43±0.34和4.98±0.63)(P＜0.01).实时荧光定量PCR检测显示,蜂毒素能够抑制BEL-7402细胞VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达.结论:蜂毒素能够明显抑制人肝癌BEL-7402细胞裸鼠移植瘤的生长,影响NF-κB表达、下调VEGF和bFGF的表达、抑制肝癌血管生成可能是其抗肿瘤作用的重要机理之一.     

三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇（TNP-470）对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法：人肝癌转移模型（HCC）-LCI—D20原位移植瘤裸鼠32只，随机分4组（每组8只）给药：As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水（Ns）对照组，给药21天后，对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度（MVD）、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果：As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组（P〈0．05）；计算两药相互作用系数（CDI）值：瘤重CDI（0．95）〈1，体积CDI（0．89）〈1，两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达；TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达，对移植瘤VEGF的表达无影响；联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达，抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义；各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组（P〈0．05）。结论：As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生，能有效抑制移植瘤生长。     

三氧化二砷联合TNP-470对裸鼠人肝癌移植瘤的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)联合烟曲霉的提取物烟曲霉醇(TNP-470)对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响及其作用机制。方法:人肝癌转移模型(HCC)-LCI-D20原位移植瘤裸鼠32只,随机分4组(每组8只)给药:As2O3联合TNP-470组、As2O3组、TNP-470组、生理盐水(NS)对照组,给药21天后,对裸鼠移植瘤大小、肿瘤微血管密度(MVD)、免疫组化、透射电镜结果进行观察。结果:As2O3组、TNP-470组及联合组的平均瘤重及平均瘤体积均低于对照组(P<0.05);计算两药相互作用系数(CDI)值:瘤重CDI(0.95)<1,体积CDI(0.89)<1,两药有协同抑制移植瘤生长的作用。As2O3组抑制移植瘤VEGF、EGFR的表达;TNP-470组抑制移植瘤EGFR的表达,对移植瘤VEGF的表达无影响;联合组明显抑制移植瘤EGFR的表达,抑制移植瘤VEGF的表达作用等同As2O3组。裸鼠原位移植瘤的光镜、电镜下观察结果有意义;各用药组裸鼠原位移植瘤的MVD值均低于对照组(P<0.05)。结论:As2O3联合TNP-470协同抑制裸鼠人肝癌移植瘤的血管新生,能有效抑制移植瘤生长。     

RNA interference against urokinase in hepatocellular carcinoma xenografts in nude mice.

The serine protease urokinase-type plasminogen activator (u-PA) is overexpressed in hepatocellular carcinoma (HCC) and its expression level is inversely correlated with the patients' survival. The purpose of this study was to examine the effects of vector-based RNA interference (RNAi) of u-PA on the growth of human HCC xenografts in nude mice in order to investigate the role of u-PA in human HCC. Our results showed that the subcutaneous injection of small interfering RNAs (siRNA) u-PA SKHep1C3 stable transfected cells (pS siRNA u-PA) led to a growth delay in xenograft development, compared to those generated from empty vector; the molecular characterization of nodules (carried out by PCR, RT-PCR and immunohistochemical analysis) revealed the presence of plasmid DNA, the u-PA gene expression knockdown, at both mRNA and protein levels, giving evidence of a long-term and target-specific inhibition by vector-based RNAi 11 weeks after cell inoculation. We further studied the effects of u-PA down modulation on extracellular matrix (ECM) proteins evaluating the expression and organization of fibronectin (FN; one of the main ECM proteins). Immunohistochemical and immunofluorescence analysis of FN revealed FN fibrils in pS siRNA u-PA xenografts and in pS siRNA u-PA cells, thus identifying the FN fibril organization as a downstream effect of u-PA knockdown in this system.     

奥曲肽致裸鼠肝癌原位移植瘤坏死的实验研究

背景与目的：生长抑素类似物奥曲肽可抑制肝癌的生长,但能否使其坏死、获得更好的抗肿瘤效果呢？本研究旨在观察奥曲肽在体内、外对肝癌细胞株HepG2的作用,探讨其致肿瘤坏死的机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝法检测体外HepG2细胞的增殖,建立裸鼠肝癌HepG2细胞原位移植瘤模型．奥曲肽组裸鼠皮下注射奥曲肽100μg／（kg·d）;对照组皮下注射相同体积的生理盐水,连续用药8周。组织学评估肿瘤坏死程度,免疫组化检测移植瘤中血管内皮生长因子（VEGF）的表达,Western blot和免疫组化检测生长抑素受体2（SSTR2）的表达。结果：奥曲肽（0．1—1000nmol/L）作用24h,不影响HepG2细胞增殖。奥曲肽组裸鼠肝癌移植瘤重[（7．15±2．96）g]高于对照组[（4．21±3．11）g],移植瘤坏死体积[（81．86％±0．05）％]大于对照组[（43．75±0．06）％],两组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。与对照组明显不同的是．奥曲肽组移植瘤中未见VEGF表达。两组移植瘤组织血窦中SSTR2表达无显著性差异（P〉0．05）。结论：在肝癌细胞活跃增殖条件下,奥曲肽通过移植瘤血窦中SSTR2介导,仅仅抑制肿瘤血管生成,可致裸鼠肝癌显著坏死的良好效应。     

The growth-inhibitory and apoptosis-inducing effect of deferoxamine combined with arsenic trioxide on HL-60 xenografts in nude mice

Objective

The aim of this study is to investigate the growth-inhibitory and apoptosis-inducing effect of deferoxamine (DFO) combined with arsenic trioxide (ATO) on the human HL-60 xenografts in nude mice and its mechanism.

Method

The highly tumorigenic leukemia cell line HL-60 cells were inoculated subcutaneously into nude mice to establish a human leukemia xenograft model. The HL-60 xenograft nude mice models were randomly divided into four groups: control (Normal saline, NS), 50 mg/kg DFO, 3 mg/kg ATO, the combined treatment (50 mg/kg DFO + 1.5 mg/kg ATO) once HL-60 cells were inoculated. Tumor sizes, growth curves, inhibitory rates, cell apoptosis, and the expression of apoptosis related markers were measured to evaluate the tumor growth.

Results

Xenografted tumors were observed in all nude mice since the 5th day of inoculation. The inhibitory rates of tumor weight were 2.67%, 10.69%, and 25.57% in DFO, ATO and combination therapy groups, respectively. The combination of DFO with ATO induces significantly more tumor cell apoptosis than either agent alone (p < 0.05). The expression of NF-κBp65 and survivin proteins decreased significantly while the expression of Caspase-3 and Bax increased in the combination therapy group (p < 0.05). Double immunofluorescence for Caspase-3 and NFκBp65 demonstrated an inverse relationship between Caspase-3-positive areas and NFκBp65-positive areas, as well as the co-localization of Bax and survivin in xenografted tumor cells.

Conclusions

Combination of DFO and ATO has synergistic effects on tumor growth inhibition and apoptosis-inducing in vivo with no significant side effects. The DFO and ATO can up-regulate the expression of Caspase-3 and Bax, and down-regulate the expression of NF-κBp65 and survivin, especially for their combination.     

Sorafenib combined with cryoablation to treat unresectable hepatocellular carcinoma

Objective  

To evaluate the efficacy and tolerability of sorafenib combined with cryoablation in treating unresectable hepatocellular carcinoma (HCC).