番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用机制

目的探讨番茄红素诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的分子机制。方法体外培养SW480细胞,采用MTT比色实验、流式细胞术、RT-PCR和Westernblot方法,分析番茄红素对SW480细胞的生长增殖作用、对细胞凋亡率的影响及对细胞凋亡相关分子Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达的影响。结果MTT法显示,番茄红素能显著抑制SW480细胞的生长增殖能力,且呈一定的量效与时效关系,24 h的半数抑制浓度(IC50)为1.0 μmol/L;流式细胞仪分析表明,番茄红素呈浓度依赖性诱导SW480细胞凋亡;RT-PCR或Western blot分析表明,SW480细胞经不同浓度番茄红素诱导后,与溶媒组相比,Bcl-2表达逐渐减弱,而Bax,Caspase-9和Caspase-3表达逐渐增强,Bcl-2/Bax比值降低。结论番茄红素对SW480细胞的抑制增殖作用,可能与降低Bcl-2/Bax比值、增加Caspase-9和Caspase-3蛋白表达、诱导细胞凋亡有关。     

染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响

目的:研究染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响.方法:采用MTT比色法测定染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测染料木黄酮对HT-29细胞周期及凋亡的影响.结果:染料木黄酮能够显著抑制HT-29细胞的增殖,且具有浓度依赖性,其半数抑制浓度(IC50)为23μmol/L;染料木黄酮能够引起HT-29细胞发生G0/G1期阻滞,并能够诱导HT-29细胞发生凋亡;western结果显示染料木黄酮作用后Bax表达增强,而Bcl-2表达减弱.结论:染料木黄酮能够诱导人结肠癌HT-29细胞发生周期阻滞和凋亡,从而导致HT-29细胞增殖能力下降.     

结肠癌HT-29细胞中PIDD蛋白的表达及其对细胞耐药性的影响

目的:以结肠癌HT-29细胞株为载体,研究PIDD(p53-induced protein with a death domain)蛋白在结肠癌耐药中的作用机制.方法:构建并转染PIDD基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,用Western印迹法检测其干扰效果.通过MTT比色法检测细胞对化疗药物的敏感性,并用凝胶阻滞分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)法检测核因子NF-κB活性的变化.结果:RNA干扰后给予细胞药物刺激,细胞核中PIDD表达下降,核因子NF-κB活性明显降低,细胞耐药性下降.结论:转染siRNA后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)的敏感性增加,此作用可能与细胞核PIDD复合体减少、核因子NF-κB活性减低及细胞凋亡增多有关.     

RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖、抑制其凋亡的相关研究

目的:探究RNA干扰RhoBTB1基因表达对结肠癌HT29细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用Lipofectamine 2000将siRNA RhoBTB1或siRNA NC转入HT29细胞中，实验分为Control组、转染对照组和siRNA Rho组，噻唑蓝（MTT）和流式细胞术分别检测细胞的的活力和凋亡率，蛋白质印迹法（Western Blot）检测细胞中RhoBTB1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达量。结果:与对照组相比，HT29细胞转染siRNA RhoBTB1后，细胞中RhoBTB1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05），细胞活力显著升高（P<0.05），凋亡率显著降低（P<0.05），Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平明显降低(P<0.05)，Bcl-2蛋白水平显著增加（P<0.05）。结论:RNA干扰RhoBTB1表达促进结肠癌HT29细胞增殖，抑制其凋亡，可能通过调节线粒体凋亡通路相关蛋白的表达量发挥作用。     

戊地昔布对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的 观察戊地昔布（Valdecoxib）对COX-2高表达的人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响。方法 将体外培养HT-29细胞分为正常组（C）、药物处理组（V）及溶剂对照组（S）。采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测COX-2、caspase-3、cleaved caspase-3、Bcl-2、p38 MAPK、p-p38MAPK。结果 与正常组相比,药物处理组细胞凋亡明显增加(P<0.05),cleaved caspase-3和p-p38MAPK表达增高,Bax/Bcl-2比率明显升高(P<0.05)。Valdecoxib干预能够显著促进HT-29细胞凋亡,上调cleaved caspase-3和p-p38 MAPK的表达,增加Bax/Bcl-2比率。 结论 COX-2选择性抑制剂Valdecoxib能够促进HT-29细胞凋亡部分可能是通过激活p38MAPK信号通路而实现的。     

大蒜素联合5-FU对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨大蒜素与5-FU联合应用治疗结肠癌的作用机制。方法 利用HT-29细胞模拟结肠癌,设置空白对照组、大蒜素组(15 μg/mL)、5-FU组(15 μg/mL)和大蒜素+5-FU组(各15 μg/mL)共4组,采用CCK-8法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术观察细胞凋亡情况,Real-time PCR检测mTOR、PTEN、Bcl-2与Bax mRNA表达情况。结果 CCK-8检测结果显示,与空白对照组比较,各用药组均可以抑制HT-29细胞的增殖(P＜0.05)。其中大蒜素+5-FU组的抑制作用最为显著;流式细胞术检测结果显示,各用药组凋亡细胞显著多于空白对照组,大蒜素+5-FU组凋亡细胞最为显著;Real-time PCR结果显示,与空白对照组比较,各用药组Bcl-2、mTOR的mRNA表达量显著降低而Bax、PTEN的mRNA表达量显著升高,大蒜素+5-FU组变化最为显著。结论 大蒜素与5-FU联合应用可以抑制HT29细胞的增殖,促进凋亡,并且大蒜素具有增强5-FU诱导结肠癌细胞凋亡的能力。     

IP6对结肠癌裸鼠皮下移植瘤细胞生长抑制及其机制的探讨

目的:研究肌醇六磷酸(IP6)对HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用.方法:建立HT-29细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组(生理盐水组)、低剂量IP6组和高剂量IP6组,用药20 d后处死小鼠.比较各组抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,透射电镜观察移植瘤细胞形体变化,TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况,并运用RT-PCR、蛋白质印迹法检测移植瘤Bcl-2及Bax基因和蛋白的表达.结果:IP6组出现典型凋亡现象,PCR及蛋白检测也显示IP6可显著上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05);在移植瘤质量和体积方面,用药组与对照组差异无统计意义,P＞0.05,但用药组移植瘤呈现下降趋势.结论:IP6可能通过促进细胞凋亡而起到抑制和延缓肿瘤生长的作用,其机制可能与上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关.     

RNAi沉默RON基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和耐药性的抑制作用

目的:探讨RNAi沉默酪氨酸激酶受体RON(recepteur d'origine nantais)基因对人结肠癌HT-29细胞侵袭和对抗肿瘤药物敏感性的影响.方法:构建RON基因的RNAi慢病毒载体Lv-RON-siRNA.Real-time PCR和Western blotting检测RON基因的沉默效率及RON蛋白表达水平;Transwell侵袭实验和ATP-TCA(ATP-tumor chemosensitivity assay)检测RON基因对HT-29细胞侵袭和对药物敏感性的影响.结果:慢病毒载体Lv-RON-siRNA感染HT-29细胞对RON基因的沉默效果达到70％.Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞侵袭力较对照组明显降低(0.97±0.072 vs 1.29±0.076,P＜0.05).Lv-RON-siRNA感染后,HT-29细胞对5-氟尿嘧啶(5-fluorouraci,5-FU)的IC90值和IC50值分别为(14.28 ±1.34)、(8.93±1.20) μg/ml,顺铂(cisplatin,DDP)的IC90值和IC50值分别为(1.91±0.22)、(0.64±0.07) μg/ml,均明显低于对照组(P＜0.01).结论:沉默RON基因表达能抑制HT-29细胞的侵袭力,提高细胞对5-FU和DDP的敏感性.     

RNA干扰沉默MIF基因对HeLa细胞生长、迁移和黏附性的影响

目的:探讨巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor, MIF)对宫颈癌HeLa细胞生长、迁移和黏附能力的影响.方法:通过反转录病毒载体介导RNA干扰,获得稳定抑制MIF表达的HeLa细胞株.Western印迹法检测MIF蛋白沉默效果以及FAK、ICAM-1、Bax和Bcl-2蛋白表达情况.观察HeLa细胞生长状态的变化,采用迁移实验、黏附实验和软琼脂糖克隆形成实验检测MIF对HeLa细胞迁移和黏附能力的影响.通过裸鼠成瘤实验观察沉默MIF基因后HeLa细胞的成瘤效果.肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor α,TNF-α)和放线菌酮(cycloheximide,CHX)诱导细胞凋亡后,FCM法检测沉默MIF基因对HeLa细胞凋亡的影响.结果:构建获得稳定抑制MIF蛋白表达的HeLa-pSUPER-MIF细胞株.MIF基因沉默后细胞生长减慢,迁移能力和黏附功能减弱;HeLa细胞中FAK、ICAM-1的表达量减少,无法在裸鼠中形成肿瘤;同时能减少TNF-α 和CHX诱导的细胞凋亡,并且使Bax表达量下降.结论:MIF通过影响HeLa细胞中FAK、ICAM-1的表达,促进肿瘤细胞生长,增加肿瘤细胞的迁移和黏附能力,因此MIF可能是肿瘤形成过程中的重要因子.     

蛋白激酶C在结肠癌多细胞耐药中的实验研究

目的：探讨蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）在结肠癌细胞多细胞耐药中的作用。方法：采用体外三维细胞培养的方法,通过应用不同剂量PKC抑制剂Staurosporine（SP）对三维（3D）培养结肠癌HT-29细胞药物敏感性、核因子-κB（NF-κB）活性及PKC活性的影响的研究,探讨PKC在结肠癌细胞群集耐药中的作用。结果：3D培养结肠癌细胞中PKC、NF-κB活性较二维（2D）培养细胞明显增高,氟尿嘧啶（5-FU）的药物敏感性降低;SP不同浓度处理HT-29球形细胞可抑制其PKC及NF-κB活性,对5-FU的药物敏感性增加,在一定浓度范围内,随着SP浓度的增加,抑制作用逐渐增强,存在量效关系。结论：PKC在结肠癌细胞群集耐药中有一定作用,抑制PKC活性,可增加结肠癌球形细胞对5-FU的敏感性。