阿司匹林和吲哚美辛抑制胃癌细胞株MGC803细胞增殖实验研究

目的 非甾体类抗感染药(nonsteroid anti-inflammatory drugs,NSAIDs)以其抗感染和抗风湿的作用广泛应用于临床,近年来,NSAIDs对多种肿瘤的防治作用被广泛关注.本研究探讨NSAIDs阿司匹林(aspirin,ASP)和吲哚美辛(indomethacin,Indo)抑制胃癌细胞增殖的作用和机制.方法 MTT法检测2、4、8、10 mmol/L ASP以及200、400、800、1 000 μmol/L Indo对MGC803细胞增殖活性的影响;蛋白质印迹法检测ASP和Indo对MGC803细胞中CRP和IL-6蛋白表达的影响.结果 不同浓度的ASP和Indo对MGC803细胞具有增殖抑制作用,其中8 mmol/L ASP组和800μmol/L Indo组细胞的增殖抑制最明显,8 mmol/L ASP抑制率为(70.5±1.3)％,与2、4 mmol/L的(18.8±1.1)％和(59.5±1.7)％比较,差异有统计学意义,P＜0.01;800 μmol/L Indo抑制率为(79.9±1.9)％,与200、400、1 000 μmol/L的(31.5±0.7)％、(49.9±1.6)％和(59.0±1.0)％比较,差异有统计学意义,P＜0.01.并且8 mmol/LASP组和800 μmol/L Indo组对MGC803细胞的增殖抑制还具有时间效应,作用48 h的抑制效果明显,8 mmol/L ASP 48 h抑制率为(83.9±1.6)％,与24 h的(69.5±2.1)％比较,差异有统计学意义,P＜0.05;800 μmol/L Indo 48 h抑制率为(82.4±1.4)％,与24、72、96 h的(71.8±1.6)％、(72.8±1.6)％和(70.0±1.8)％比较,差异有统计学意义,P＜0.05.MGC803细胞高表达CRP和IL-6,并且ASP和Indo能下调MGC803细胞CRP和IL-6蛋白的表达水平,8 mmol/L ASP、800 μmol/L Indo下调CRP的表达分别达79.0％和88.9％,下调IL-6的表达分别达49.8％和61.0％.结论 NSAIDs ASP和Indo对胃癌MGC803细胞具有增殖抑制作用,并能下调MGC803细胞中CRP和IL-6的表达.     

Adinbitor对人胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的作用

目的探讨Adinbitor对人胃癌MGC803细胞生长及凋亡的作用。方法应用Adinbitor作用于体外培养的人胃癌MGC803细胞,采用MTT比色法分析其对MGC803细胞生长的影响;采用相差显微镜、苏木精-伊红（HE）和Hoechst染色观察不同浓度的Adinbitor诱导MGC803细胞凋亡的形态变化。结果Adinbitor可呈剂量依赖性方式抑制MGC803细胞的增殖,其抑制MGC803细胞增殖的ID50为3.52μmol/L。Adinbito诱导的MGC803细胞凋亡实验,显示出细胞凋亡的典型的形态学特征,如胞间连丝消失,细胞皱缩成团,胞内出现空泡等现象,而且随Adinbitor浓度的增加,凋亡现象越明显。结论Adinbitor对人胃癌MGC803细胞生长具有抑制作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

维甲酸对胃癌细胞生长抑制及凋亡的诱导作用

目的:研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人胃低分化黏液腺癌细胞(MGC80-3)的作用。方法:MTT比色法观察9-cis-RA对MGC80-3细胞株的生长抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33342/PI双荧光染色和DNA凝胶电泳技术分析细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果:9-cis-RA可抑制MGC80-3细胞生长,半数抑制浓度(IC50)为8·07×10-6mol/L;显微镜观察可见细胞凋亡特征性改变;10-5mol/L浓度的9-cis-RA药物作用后96h可明显诱导MGC80-3细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带;流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型亚二倍体凋亡小峰,G0/G1期细胞百分率明显升高,由对照组的(61·5±2·2)%增加到(74·3±4·7)%,F=149·795,P=0·000;同时处于S期的细胞数减少,由对照组的(26·3±1·3)%减少到(17·2±1·4)%,F=143·936,P=0·000。细胞周期出现G1期阻滞。结论:9-cis-RA对MGC80-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

RORα激动剂SR1078抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭的作用

摘 要：［目的］ 观察RORα激动剂SR1078对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移与侵袭的影响。［方法］ 实验分为10μmol/L SR1078处理MGC803细胞组与MGC803细胞组。Western blot 与免疫荧光检测RORα表达,MTT检测细胞增殖;细胞划痕和Transwell实验分别检测细胞迁移与侵袭。［结果］ Western blot检测显示,10μmol/L SR1078处理组较对照组RORα蛋白明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光显示,SR1078处理MGC803细胞RORα表达增强。MTT检测显示,10μmol/L SR1078作用MGC803细胞24h、48h、72h、96h后,增殖抑制率分别为37.2%、46.9%、52.7%、68.6%,SR1078可呈时间依赖性抑制MGC803细胞增殖 (P<0.05)。划痕实验显示,10μmol/L SR1078处理组迁移距离(5.74±0.078μm)明显低于对照组 (9.37±0.098μm),差异有统计学意义(P<0.05)。Transwell迁移实验显示,10μmol/L SR1078处理组迁移细胞(80±1.155个)较对照组(103±1.155个)明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。侵袭实验显示,10μmol/L SR1078处理组细胞穿膜细胞(19.67±1.764个)较MGC803细胞（40.67±1.202个）明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。［结论］SR1078可通过上调RORα抑制MGC803细胞增殖与迁移侵袭。     

γ-生育三烯酚对人胃癌细胞转移潜能影响及其机制的探讨

目的:探讨γ-生育三烯酚(γ-T3)对人胃癌细胞(SGC-7901和MGC-803)迁移和侵袭能力的影响。方法:不同浓度的γ-T3对SGC-7901和MGC-803细胞作用24h后,采用CCK-8法、迁移试验、Transwell小室侵袭试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)研究γ-T3对细胞增殖、迁移能力和侵袭能力,以及基质金属酶(MMPs)表达量的影响。结果:CCK-8的结果显示,γ-T3对SGC-7901和MGC-803细胞有抑制作用,并具有剂量-效应关系;体外划痕试验的结果显示,随着药物浓度增加,迁移至划痕区的细胞逐渐减少,60μmol/L组仅有少许细胞迁移至划痕区。在MGC-803细胞中F=25.55,P=0.00;在SGC-7901细胞F=36.15,P=0.00,差异有统计学意义;Transwells小室侵袭实验结果显示,肿瘤细胞侵袭穿透Matrigel胶和Transwell小室微孔膜的能力明显下降,穿膜细胞数目随着药物浓度增加明显减少,在MGC-803细胞中F=23.53,P=0.00;在SGC-7901细胞F=26.00,P=0.00,差异均有统计学意义;ELISA的结果显示,细胞培养上清液中MMP-2和MMP-9分泌量随药物浓度增加而降低。在MGC-803细胞MMP-2中F=62.41,P=0.00;MMP-9中F=314.18,P=0.00。在SGC-7901细胞MMP-2中F=52.58,P=0.00;MMP-9中F=70.00,P=0.00,差异均有统计学意义。结论:γ-T3可显著抑制SGC-7901和MGC-803细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与选择性抑制SGC-7901和MGC-803细胞分泌MMP-2和MMP-9有关。     

罗格列酮诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及其对bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨罗格列酮对人胃癌MGC803细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:吖啶橙(AO)荧光染色和流式细胞仪分析检测细胞凋亡。同时行bax和bcl-2细胞免疫化学染色和定量分析。结果:罗格列酮能诱导MGC803细胞凋亡,且随着浓度增加,其凋亡率逐渐增加。罗格列酮(25μmol/L、50μmol/L)作用于人胃癌MGC803细胞48h后bax表达的光密度值由0·10±0·02分别升至0·42±0·03、0·75±0·04,P=0·000;bcl-2表达的光密度值由0·51±0·02分别降至0·25±0·04、0·12±0·01,P=0·001。结论:罗格列酮能诱导人胃癌MGC803凋亡,其机制可能与bax基因表达上调、bcl-2基因表达下调有关。     

顺铂通过促进死亡受体4在脂筏内聚集增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胃癌MGC803细胞凋亡的作用

目的 探讨顺铂影响胃癌细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的机制.方法 以顺铂和TRAIL单独及联合作用MGC803细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测caspase-8和caspase-3的蛋白表达,免疫荧光显微技术观察脂筏和死亡受体4(DR4)的分布.以50 mg/L的制霉菌素预处理MGC803细胞1 h,之后加入顺铂和TRAIL,观察细胞凋亡的变化.结果 100 μg/L TRAIL作用MGC803细胞24 h,增殖抑制率为(8.51±3.45)%,细胞凋亡率为(3.26±0.89)%.8.49 mg/L顺铂作用MGC803细胞24 h,增殖抑制率为(52.58±4.57)%,细胞凋亡率为(23.10±3.41)%.100 μg/L TRAIL和8.49 mg/L顺铂联合作用时,细胞增殖抑制率提高至(76.43±5.35)%,细胞凋亡率提高到(42.56±4.11)%,均高于相同浓度顺铂和TRAIL单独作用组(P＜0.05).同时检测到caspase-8和caspase-3的裂解.TRAIL未引起明显的脂筏和DR4聚集,而顺铂明显促进了DR4在聚集脂筏内的定位.50 mg/L制霉菌素处理MGC803细胞24 h,细胞凋亡率为(3.66±0.52)%.经制霉菌素预处理后,顺铂作用下MGC803细胞的凋亡率为(22.76±2.97)%,与未经制霉菌素预处理组[(25.74±3.28)%]差异无统计学意义(P=0.248);而顺铂和TRAIL联合作用下细胞凋亡率为(31.52±3.99)%,与未经制霉菌素预处理组[(43.16±4.26)%]差异有统计学意义(P＜0.001).结论 顺铂通过促进死亡受体在脂筏聚集增强了TRAIL诱导的胃癌MGC803细胞凋亡.

Abstract：

Objective Gastric cancer cells are insensitive to tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL). To sensitize gastric cancer cells to TRAIL, we treated gastric cancer MGC803 cells with TRAIL and cisplatin. Methods Cell proliferation was measured using MTT assay. Cell apoptosis was determined by flow cytometry. Expression of proteins was analyzed by Western blot. The distribution of lipid rafts and death receptors was analyzed by immunofluorescence microscopy. MGC803 cells were pretreated with 50 mg/L nystatin for 1 h, and followed by the treatment of cisplatin and TRAIL. Results 100 μg/L TRAIL resulted in (8.51±3.45)% inhibition of cell proliferation and caused (3.26±0.89)% cell apoptosis in MGC803 cells. Compared with the treatment with cisplatin alone, treatment with TRAIL (100 μg/L) and cisplatin (8.49 mg/L, IC50 dose of 24 h) led to a dramatic increase in both inhibition of cell proliferation [(52.58±4.57)% vs. (76.43±5.35)%, P＜0.05]and cell apoptosis [(23. 10±3. 41)% vs. (42.56±4.11)%, P＜0.05]. Moreover, cleavage of caspase-8 and caspase-3 was detected. TRAIL (100 μg/L) did not induce obvious lipid rafts aggregation and death receptor 4 (DR4) clustering, while cisplatin (8.49 mg/L) significantly promoted the localization of DR4 in aggregated lipid rafts. Pretreatment with 50 mg/L nystatin, a cholesterol-sequestering agent, triggered (3.66±0.52)% cell apoptosis after 24 h. Pretreatment with nystatin for 1 h before the addition of 8.49 mg/L cisplatin for 24 h caused a decreased tendency to cell apoptosis [(25.74±3.28)% vs. (22.76±2.97)%]. While, pretreatment with nystatin before the addition of cisplatin and TRAIL, the proportion of apoptotic cells decreased from (43. 16±4.26)% to (31.52 ± 3.99)% (P＜0.05). Conclusion Cisplatin enhances TRAIL-induced apoptosis in gastric cancer MGC803 cells through clustering death receptors into lipid rafts.     

整合素-β1、PKC与胶质瘤细胞骨架结构改变及侵袭性的实验研究

目的:探讨整合素β1(β1-integrin)、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)与细胞骨架结构改变的关系及其对人脑胶质瘤细胞的生物学行为的影响和作用机制.方法:以U251胶质母细胞瘤细胞为研究模型,应用抗Inβ1抗体抑制内源性Inβ1作用,应用PKC激活剂PMA、PKC抑制剂Calphostin C干扰PKC的功能,通过细胞黏附实验、迁移实验和体外侵袭实验,检测及PKC对人恶性胶质瘤细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响.通过免疫荧光化学染色结合激光共聚焦显微镜和扫描电镜方法,观察细胞微丝F-actin和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)等骨架蛋白数量、分布和细胞表面伪足情况,比较整合素β1、PKC对微丝、GFAP等骨架蛋白的影响.结果:PKC激活剂PMA增加U251MG细胞在FN上的黏附能力(P<0.05),但PKC抑制剂Calphostin C 及抗整合素β1抗体对细胞黏附能力无明显影响.PKC激活剂PMA增加U251MG细胞在FN的运动、迁移能力(P<0.01),PKC抑制剂Calphostin C及抗整合素β1抗体减弱U251MG细胞在FN上的运动、迁移能力(P<0.01).PMA可促进U251MG细胞的体外侵袭能力(P<0.01),Calphostin C及抗整合素β1抗体可减弱此作用(P<0.01).U251MG细胞内可见散在的微丝结构,在PKC激活剂PMA 处理的细胞内,难以见到清晰的细胞微丝骨架,并常见大量絮团状的F-actin小体,但对GFAP的表达和结构并无影响.PKC抑制剂Calphostin C使微丝沿细胞膜成簇状排列,而抗整合素β1抗体可使细胞内F-actin微丝形成束状纤维(应力纤维),粗壮而密集,且GFAP表达增强.扫描电镜观察显示,加入PMA后,U251细胞表面的伪足数量明显增加,而PKC抑制剂Calphostin C及抗整合素β1抗体处理的细胞内,伪足数量明显减少,甚至消失.结论:整合素β1与FN协同作用,可改变U251MG细胞微丝骨架结构、数量和排列分布,以及细胞表面伪足结构和数量,从而影响肿瘤细胞的运动、迁移及体外侵袭能力,激活PKC信号通路是其作用途径之一.PKC参与了FN介导的细胞黏附作用,但整合素β1受体与FN介导的细胞黏附关系不密切.PKC参与了整合素β1受体与FN相互作用所介导的细胞运动迁移及体外侵袭作用.     

曲格列酮对前列腺癌PC-3细胞转移潜能影响分子机制探讨

目的：探讨曲格列酮对人前列腺癌PC-3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法：PC-3细胞经不同浓度曲格列酮（0、1×10-6、1×10-5和1×10-4 mol/L）处理后,采用MTT法检测各组细胞增殖水平;细胞划痕实验和细胞侵袭试验检测侵袭及迁移能力的改变;蛋白质印迹法检测细胞Id1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平。结果：MTT检测显示,不同浓度曲格列酮对PC-3细胞抑制作用明显,并呈浓度和时间依赖性,P〈0.001。细胞划痕实验显示,PC-3细胞经不同浓度曲格列酮作用后,1×10-6 mol/L组细胞迁移率为（70.67±10.42）%,1×10-5 mol/L组为（49.00±6.00）%,1×10-4 mol/L组为（20.33±5.05）%,明显低于对照组的（80.5±6.86）%,差异有统计学意义,P〈0.01,且呈显著剂量依赖关系,F=78.57,P〈0.001。细胞体外侵袭实验显示,1×10-6 mol/L组穿越Transwell滤膜的PC-3细胞数为85.17±15.28,1×10-5 mol/L组为70.33±7.63,1×10-4 mol/L组为52.50±8.87,明显低于对照组的137.67±15.09,差异有统计学意义,P〈0.001,且呈显著剂量依赖关系,F=53.99,P〈0.001。细胞体外迁移实验显示,1×10-6 mol/L组迁移至Transwell下室的细胞数为88.83±17.02,1×10-5 mol/L组为71.67±9.44,1×10-4 mol/L组为54.50±9.35,明显低于对照组的142.00±17.40,差异有统计学意义,P〈0.001,且呈显著剂量依赖关系,F=44.72,P〈0.001。蛋白质印迹法检测结果显示,对照组Id1蛋白相对表达量为12.67±7.23,1×10-6 mol/L组为24.67±6.51,1×10-5 mol/L组为36.67±6.11,1×10-4 mol/L组为49.33±4.93;对照组MMP-2蛋白相对表达量为9.00±4.36,1×10-6 mol/L组为25.33±8.62,1×10-5 mol/L组为42.00±7.55,1×10-4 mol/L组为58.67±12.06;对照组MMP-9蛋白相对表达量为13.00±3.61,1×10-6 mol/L组为25.67±6.43,1×10-5 mol/L组为38.33±8.96,1×10-4 mol/L组为53.67±6.43。曲格列酮显著下调PC-3细胞Id1、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,P值均〈0.05。结论：曲格列酮能有效抑制PC-3细胞增殖与侵袭迁移,同时下调Id1、M     

Adinbitor对B16黑色素瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响

目的探讨Adinbitor对B16黑色素瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法 MTT法检测Adinbitor对B16黑色素瘤细胞增殖的影响;双苯并咪唑(Hoechst33258,Ho)染色法观察Adinbitor作用于B16黑色素瘤细胞后细胞形态的改变;结晶紫染色法和聚碳酸酯膜浸润试验观察其对黑色素瘤细胞体外黏附以及迁移的影响。结果 Adinbitor可呈剂量依赖性方式抑制B16黑色素瘤细胞的增殖,其抑制B16黑色素瘤细胞增殖的ID50为2.68μmol/L。Adinbitor可明显诱导黑色素瘤细胞凋亡,并且剂量依赖性地抑制瘤细胞的黏附和迁移(P<0.01)。结论 Adinbitor在体外能够显著降低黑色素瘤细胞的黏附及迁移能力,有效地抑制黑色素瘤细胞的增殖,同时促进细胞凋亡。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。